RESUMO
The use of quantitative real time polymerase chain reaction (qPCR) for herpesvirus detection has improved the sensitivity and specificity of diagnosis, as it is able to detect shedding episodes in the absence of clinical lesions and diagnose clinical specimens that have low viral loads. With an aim to improve the detection and quantification of herpesvirus by qPCR, synthetic standard curves for human herpesvirus 1 and 2 (HHV-1 and HHV-2) targeting regions gD and gG, respectively, were designed and evaluated. The results show that synthetic curves can replace DNA standard curves in diagnostic herpes qPCR.
Assuntos
Humanos , Herpesvirus Humano 2/genética , Herpesvirus Humano 1/genética , Herpes Simples/virologia , DNA Viral/genética , Sensibilidade e Especificidade , Carga Viral , Reação em Cadeia da Polimerase em Tempo Real , Herpes Simples/diagnósticoRESUMO
A família Herpesviridae abriga um grande número de vírus que infectam animais e o homem. Nove herpesvirus foram identificados que possuem o homem como hospedeiro primßrio e descritos através da anßlise filogenética foram classificados em trêssubfamília: Alfaherpesvirinae, Betaherpesvirinae e Gamaherpesvirinae. A família Herpesviridae agrupa vírus de genoma DNA e que estão associados a infecções latentes e a manifestações clínicas recorrentes. As infecções por herpesvírus podem se manifestar de forma assintomßtica ou sintomßtica, podendo causar diferentes síndromes clínicas. Estes vírus normalmente são benigno, sendo o aparecimento de lesões nas mucosas a forma mais comum da doença, podendo causar doenças neurológicas severas principalmente em pacientes imunocomprometidos. A incidência e severidade podem ser exacerbadas entre indivíduos imunocomprometidos. A presente tese é composta por três manuscritos, sendo dois trabalhos publicados e um submetido. Estes estudos se propuseram a padronizar métodos de silenciamento gênico, otimizar e comparar métodos para o diagnóstico e realizar a caracterização genotípica do herpes simples tipo1 (HSV-1) e herpesvírus humano tipo 6 (HHV-6). Os estudos foram realizados em paciente imunocomprometidos do estado do Rio de Janeiro...
The Herpesviridae family has a large number of virus widespread in animals andhuman. Nine herpesvirus are identified that have humans as their primary host anddescribed by phylogenetic analysis were classified into three subfamily:Alfaherpesvirinae, Betaherpesvirinae and Gammaherpesvirinae. The familyHerpesviridae is family of DNA virus and that are associated with latent infections andrecurrent clinical manifestations. Herpesvirus infections can manifest themselves inasymptomatic or symptomatic form, may cause different clinical syndromes. Theseviruses are usually benign and the appearance of mucosal lesions are more common, butsevere neurological diseases can occurred especially in immunocompromised patients. The incidence and severity may be exacerbated among immunocompromisedindividuals. This thesis consists of three manuscripts, two published papers andsubmitted. These studies set out to standardize methods of gene silencing, optimize andcompare methods for the diagnosis and the genotypic characterization of herpes simplextype 1 (HSV-1) and human herpesvirus type 6 (HHV-6)...
Assuntos
Humanos , Herpes Simples , Herpesvirus Humano 1 , Infecções por Roseolovirus , Hepatite , HIVRESUMO
O vírus da herpes simples é uma importante causa de morbidade, especialmente em pacientes imunossuprimidos. O vírus herpes [simplex] tipo 1 (HSV1) é um patógeno humano pertencente à família Herpesviridae, subfamília Alphaherpesvirinae. O HSV1 infecta a mucosa oral e provoca a maioria das formas de herpes não genital, embora também possa infectar a mucosa genital em humanos. Os objetivos deste estudo foram otimizar a reação de PCR em tempo real para auxiliar o diagnostico, detecção e quantificação do HSV1 em pacientes imunodeprimidos; e avaliar o uso do RNA de interferência (siRNA) para inibia a replicação do vírus HSV1 in vitro, como uma alternativa para terapia antiviral. Para o diagnostico do HSV1 foram analisadas 27 amostras de pacientes; amostras de saliva e raspado da lesão (swab) de 6 pacientes com lesões características da infecção pelo HSV1 e 21 amostras de pacientes infectados com o HSV1 e HIV (vírus da imunodeficiência humana). Para o estudo do silenciamento do HSV1, três seqüências específicas de siRNA foram avaliadas (seqüência 1, 2 e 3) como uma estratégia contra o gene UL 39 do HSV1. Este gene é uma subunidade da ribonucleotídeo redutase, que tem a função de catalisar o passo limitante na síntese do deoxiribonucleotídeos necessários para a síntese do DNA. Nos pacientes infectados com o HSV1, todas as amostras foram positivas na detecção do HSV, DNA por PCR em tempo real e [em 70 porcento] destas amostras foi possível o isolamento viral. Entre os pacientes infectados com HIV, 90,48 porcento foram positivas para anti HSV e a co infecção HIV, HSV foi detectada em 100 porcento das amostras estudadas por PCR em tempo real. Os resultados mostraram que o PCR em tempo real foi eficiente na detecção e quantificação do HSV1 em diferentes tipos de amostras, e os níveis de carga viral variaram entre 10 elevado ao quadrado menos 10 elevado ao quadrado. Foi [demostrado] que a melhor concentração de siRNA utilizada para inibir o gene unidade de litro 39 do HSV1 foi estabelecido em 10 unidade miligrama através da curva dose-dependentes com as três seqüências inibindo a replicação viral, no entanto a seqüência 1 foi capaz de inibir até 99 porcento da replicação da cepa KOS e da amostra de isolado viral de um paciente infectado com HSV1. Os resultados demonstraram que o PCR em tempo real fornece resultados rápidos, com excelente sensibilidade e especificidade, e isso é especialmente importante para o diagnostico em pacientes imunodeprimidos. As seqüências de siRNA analisadas foram eficazes na inibição da replicação do HSV1 in vitro, porém outras investigações sobre os possíveis efeitos benéficos do siRNA in vivo são necessários.