Efeito de moduladores da diferenciação celular no processo de resistência simultânea a múltiplas drogas

A resistência às drogas quimioterapêuticas é um dos maiores problemas no tratamento de câncer. Um tipo de resistência às drogas - resistência a múltiplas drogas (MDR) está associado com a super-expressão de uma glicoproteína de membrana denominada glicoproteína P (Pgp), a qual usa energia de ATP para bombear drogas anti-cancerígenas para fora das células. A resistência MDR pode ser revertida por uma série de agentes, incluindo-se agentes de diferenciação celular, mas o mecanismo exato de ação, ainda não foi estabelecido. O propósito deste estudo foi comparar a linhagem celular resistente a múltiplas drogas, originada da linhagem celular K562 e selecionada por sua resistência à vincristina (LUCENA-K562), com outras duas linhagens celulares sensíveis: a linhagem parental K562 (eritroleucemia) e HCT 116 (adenocarcinoma de cólon), a fim de analisar a relação entre a expressão de glicoproteína P e a modulação da diferenciação celular foram medidas, usndo-se testes in vitro. O aspecto básico foi a medida de mudanças na expressão de Pgp, do antígeno carcinoembriônico (CEA) (imunocitoquímica), conteúdo de hemoglobina (coloração de benzidina) e efluxo de rodamina 123 (análises de citometria de fluxo e de microscopia de fluorescência)...

Resistance to physical therapy drugs is a major problem in the treatment of cancer. One type of drug resistance - multidrug resistance (MDR) is associated with overexpression of a membrane glycoprotein called the P-glycoprotein (Pgp), which uses ATP energy for pumping anti-cancer drugs out of cells. MDR resistance can be reversed by a variety of agents, including cell differentiation agents, but the exact mechanism of action has not yet been established. The purpose of this study was to compare the cell line resistant to multiple drugs, originated from the cell line K562 and selected for its resistance to vincristine (LUCENA-K562), with two other sensitive cell lines: parental lineage K562 (erythroleukemia) and HCT 116 ( colon adenocarcinoma), in order to examine the relationship between the expression of P-glycoprotein and modulation of cellular differentiation was measured in vitro tests are usndo. The basic aspect is a measure of changes in the expression of Pgp, carcinoembryonic antigen (CEA) (immunocytochemistry), content of hemoglobin (benzidine staining) and efflux of rhodamine 123 (analysis of flow cytometry and fluorescence microscopy) .. .

Diferenciação celular in vitro em leucemias humanas em função da resposta ao diéster de forbol (TPA) e ácido retinóico

O efeito do TPA (12-0-tetradecanoilforbol-13-acetado) e AR (ácido retinóico) foi testado nas linhagens celulares HL-60 (leucemia promielocítica aguda), K562 (eritroleucemia) e células de pacientes com vários tipos de leucemias (11 casos de leucemia linfóide aguda-LLA, 2 casos de leucemia linfocítica crônicas-LLC e 19 casos de leucemia mielóide aguda-LMA-M1 a M7). A exposição ao TPA induziu diferentes mudanças nas células leucêmicas. Em todos os casos estudados, as células linfóides permaneceram com leucemia mielóide, aderiram ao substrato, enquanto que as células linfóides, permaneceram em suspensão, permitindo distinguir blastos mielóide de linfóides. A única exceção foi um caso de LLC, com células que se tornaram aderentes e mostraram características do tipo tricoleucemia. Além disso, houve um aumento de fagocitose, após tratamento com TPA, permitindo não somente distinguir mielóide de linfóide, pois a maioria das células mielóides são fagocítica, mas também caracterizar a leucemia tipo M7, sendo a única com atividade fagocítica negativa. Subtipos de leucemia mielóide puderam ser discriminados através da produção de lisozima após exposição ao TPA: M4 e M5, sendo os únicos que apresentaram tal aumento. Um outro parâmetro considerado baseou-se em que todas as células mielóides estudadas apresentaram um aumento de células esterase positiva depois do tratamento com TPA, com exceção das células M1, que eram negativas e assim permaneceram independente de qualquer tratamento. Foi demonstrado que TPA e AR podem levar a dois caminhos diferentes de diferenciação: a linhagem granulocítica e monocíticas, que foram favorecidas pelo AR e TPA, respesctivamente. Essa capacidade de diferenciação em duas vias foi característica de células de leucemia M3. O presente trabalho mostrou a utilidade de se usar diferentes indutores e testes funcionais (juntamente com a morfologia e a citoquímica), com a finalidade de elucidar a natureza das células leucêmicas

The effect of TPA (12-0-tetradecanoilpgorbol-13-acetate) and RA (retinoic acid) was tested on the cell lines HL-60 (acute promyelocytic leukaemia), K562 (erythroleukaemia) and cells from patients with several kinds of leukaemia (11 cases of acute lymphocytic leukaemis ALL, 2 chronic lymphocytic leukaemia-CLL and 19 acute myeloid leukaemia-M1 to M7). Esposure to TPA induced different changes in the leukaemia cells studied. In all cases examined, cells from patients with proven myeloid leukaemia became adherent to the substrate, while lymphoid leukaemia cells remained in suspension allowing to distinguish lymphoid from myeloid blast. The only exception was one case of with cells that became adherent and showed characteristics of hairy cell leukaemia. Furthermore, increased phagocytosis following TPA exposure permitted not only to distinguish myelois from lymphoid, as most myeloid cells were phagocytic, but also to characterize M7 as this was only myeloid leukaemia negative for phagocytosis. Further discrimination between the subtypes of myeloid leukaemia could be obtained through increased lysozyme production after TPA; M4 and M5 being the only ones to show an increase. All the myeloid cells studied had an increase of esterase positive cells after TPA with the exception of M1 cells that were negative before and remained as such after treatment. On the other hand, in agreement with the results of other authors, it was demonstrated that TPA and RA can lead to two independent ways of differentiation. Granulocytic-like lineag and monocytic-like cells being favoures by RA and TPA respectively. This capacity to differentiate into two pathways was a characteristic of M3 cells. The present results showed the usefulness of using differentiation inducers and functional tests toghether with morphology and cytochemistry to elucidate the nature of leukaemic cells

Estabelecimento de um método "in vitro" de controle biológico de agentes antineoplásicos em uso no Instituto Nacional de Câncer

O objetivo do presente trabalho foi desenvolver um método capaz de verificar a eficácia, a nível biológico, das drogas antineoplásicas, que näo necessitem de metabolismo prévio para sua açäo e que atualmente estäo sendo usadas no Instituto Nacional de Câncer (INCa). O princípio de ensaio foi baseado na medida de inibiçäo da proliferaçäo celular da linhagem K562 e de células ativadas por fitohemaglutinina (PHA), usando-se como marcador a incorporaçäo no DNA de timidina tritiada. Conclui-se que esse ensaio näo é adequado para testar a atividade antitumoral do Methotrexate, mas pode ser extremamente sensível para os estudos com derivados da Vinca