Research of Salmonella spp. and evaluation of pathogenicity, cytotoxicity of Escherichia coli isolates proceeding from sparrows (Passer domesticus) / Pesquisa de Salmonella spp. e avaliação da patogenicidade, citotoxidade de isolados de Escherichia coli procedentes de pardais (Passer domesticus)

The aim of this study was to research the occurrence of Salmonella spp. and Escherichia coli in feces samples of sparrows, as well as to identify the pathogenicity, cytotoxicity and sensitivity profile of the isolates to antimicrobial use. Two hundred and twenty eight sparrows were captured in eight farms. The in vitro pathogenicity test was performed by the isolates culture on congo red-magnesium oxalate Agar, whilst the in vivo pathogenicity test was performed in one day-old chicks. In order to study the cytotoxic effects of indicators, samples were inoculated into Vero cells. The results obtained for Escherichia coli isolation confirmed the presence of this microorganism in 30 (13.2%) of the evaluated samples. Out of those isolates, 10 (33.3%) presented the capacity of absorbing ongo red. As for in vivo pathogenicity a 68.0% of mortality rate of the evaluated samples was observed. Out of 20 isolates tested for cytotoxin production, none of them presented cytotoxic effect in the Vero cells. The Salmonella spp was isolated only in one sample (0.04%), and it was identified as Salmonella enterica subspecies houtenae. Results obtained through this research indicate the need for new studies to identify other virulence factors of E. coli samples and to delineate the phylogenetic profile of the isolates in order to establish a relation with colibacillosis outbreaks in chickens and broilers in the studied region, as well as to analyze the critical points in the aviculture productive chain to identify the source of Salmonella enterica subspecies houtenae.

Objetivou-se com este estudo pesquisar a ocorrência de Salmonella spp. e Escherichia coli em amostras de fezes de pardais, além de avaliar a patogenicidade, citotoxicidade e perfil de sensibilidade dos isolados frente a antimicrobianos. Foram capturados 228 pardais em oito granjas. O teste de patogenicidade in vitro foi realizado por meio do cultivo dos isolados em ágar oxalato de magnésio acrescido de vermelho de congo, enquanto o teste de patogenicidade in vivo foi realizado em pintos de um dia. Para o estudo dos indicadores dos efeitos citotóxicos, as amostras foram inoculadas em células Vero. Os resultados obtidos quanto ao isolamento de Escherichia coli confirmaram a presença deste microorganismo em 30 (13,2%) amostras analisadas. Destes isolados, dez (33,3%) apresentaram capacidade de absorção do vermelho congo. Quanto à patogenicidade in vivo observou-se uma taxa de mortalidade de 68,0% das amostras analisadas. Dos 20 isolados testados quanto à produção de citotoxina, nenhum apresentou efeito citotóxico nas células Vero. Obteve-se o isolamento de Salmonella spp. em apenas uma amostra (0,04%), sendo tipificada em Salmonella enterica subespécie houtenae. Os resultados obtidos nesta pesquisa indicam a necessidade da realização de novos estudos para identificar outros fatores de virulência das amostras de E. coli e traçar o perfil filogenético dos isolados para estabelecer uma relação com surtos de colibacilose em galinhas e frango de corte na região estudada, além de analisar os pontos críticos na cadeia produtiva da avicultura para identificar a origem da Salmonella enterica subespécie houtenae.

Resistência antimicrobiana e perfil plasmidial de Escherichia coli isolada de frangos de corte e poedeiras comerciais no Estado de Pernambuco / Antimicrobial resistance and plasmidial profile of Escherichia coli strain isolated from broilers and commercial layers in the state of Pernambuco, Brazil

Embora existam linhagens de Escherichia coli não patogênicas para aves, muitas outras possuem a capacidade de causar sérios danos à saúde das mesmas, sendo capazes de ocasionar diferentes tipos de processos infecciosos. As linhagens patogênicas são denominadas Avian Pathogenic Escherichia coli (APEC), possuindo genes relacionados ao processo de patogênese em epissomos (plasmídios) ou no cromossomo. A presença de plasmídios, contendo genes de resistência a antibióticos em linhagens aviárias, patogênicas ou não, indicam a possibilidade de transferência gênica lateral entre diferentes tipos de linhagens facilitando também a transferência de genes de patogenicidade ou virulência. Objetivou-se com este estudo avaliar o perfil de sensibilidade a antibióticos (13) de diferentes amostras (35) de E. coli isoladas de aves comerciais do Estado de Pernambuco apresentando, ou não, sinais clínicos de processos infecciosos e correlacionar esta resistência com a presença de plasmídios. Os testes utilizados demonstraram que 94,28% dos isolados foram resistentes a três ou mais antibióticos, com a lincomicina apresentando o maior percentual de resistência (100%). Na Concentração Inibitória Mínima (CIM) observou-se multirresistência a vários antimicrobianos. A presença de plasmídios foi detecada em 80,0% (28/35) dos isolados, com 16 isolados apresentando plasmídios com peso molecular aproximado de 88 MDa. Também foi verificada a presença de linhagens apresentando plasmídios de vários tamanhos. Concluiu-se que isolados de E. coli resistentes a antimicrobianos utilizados na avicultura estão presentes no Estado de Pernambuco, tanto em frangos de corte quanto em poedeiras comerciais. A presença de plasmídios detectados na maioria dos isolados pode estar associada à resistência aos antimicrobianos e sugere a presença de possíveis genes relacionados à patogenicidade. Monitorar a resistência a antibióticos em bactérias isoladas de animais torna-se um fator determinante para eleição e êxito do tratamento, bem como a possibilidade de eliminação daquelas que possuem plasmídios para se evitar a transferência de genes relacionados à patogenicidade.

Although exist poultry non-pathogenic Escherichia coli strains, many others have capacity to impose serious damages to this birds, being able to cause different infectious diseases. Pathogenic strains are termed Avian pathogenic Escherichia coli (APEC) strains. APEC strains harbor chromossomal and plasmid pathogenicity-related genes. The presence of resistance plasmids in avian E. coli strains could facilitate horizontal tranfer of virulence gene between pathogenic and non pathogenic strains. The aim of this paper was to determine the resistance level to 13 different antibacterial drugs of avian E. coli strains (35) isolated from commercial poultry of Pernambuco State, Brazil, and to correlate the detected resistance level to the presence of plasmids. The results show that 94.28% of strains were resistant to at least three different antibacterial drugs with the highest percentage to lincomycin. The Minimal Inibitory Concentration (MIC) showed that multi- resistance to various antibacterial drugs was present in these strains. Plasmids of several sizes, including plasmids of approximately 88Mda were detected in most of the studied strains. The results herein obtained suggest that the high resistance level observed could be due to the presence of plasmids, what could facilitate the transfer of pathogenicity related genes among pathogenic and non pathogenic strains; it is necessary to take a constant survey on the resistance level to antimicrobial drugs of avian E. coli strains to reach a better control of APEC strains and avoid transfer of pathogenicity related genes between strains.

Molecular typing and biological characteristics of Pseudomonas aeruginosa isolated from cystic fibrosis patients in Brazil

The present study had as objective to evaluate the genotypic diversity and biological characteristics, such as hemolysin, protease, elastase of 56 clinical strains of Pseudomonas aeruginosa isolated from 13 cystic fibrosis (CF) patients attending at the School Hospital of Campinas State University (UNICAMP), Brazil. Genotypic diversity has been determined by Ribotyping (RT) and the pattern of the enterobacterial repetitive intergenic consensus PCR (ERIC-PCR) of each strain. The production of elastase was significantly different only among mucoid and nonmucoid isolates. Joint results obtained by (RT) and ERIC-PCR methods were able to discriminate all strains isolated from both the same and different patients. Additionally, we observed four strain clusters with low diversity. The most infective strains were located in just two clusters. These results suggest that either there is a strong selection towards a specific genotype or that specific isolates could be responsible for the initial and subsequent colonization processes. More studies are necessary to know if these conclusions can be generalized for the general CF population.

Typing of avian pathogenic Escherichia coli strains by REP-PCR

A técnica de REP (Repetitive extragenic palindrome)-PCR foi utilizada para avaliar a variabilidade genética de 49 amostras de Escherichia coli patogênicas para aves (APEC), isoladas de aves de corte (frangos) em diferentes surtos de septicemia (n=24), síndrome da cabeça inchada (n=14) e onfalite (n=11). Trinta amostras comensais, isoladas de frangos sem sinais de doença, foram utilizadas como controle. A análise do perfil eletroforético obtido por reação de REP-PCR utilizando DNA purificado das amostras evidenciou a amplificação de 0 a 15 bandas de DNA com pesos moleculares variando entre 100 pb e 6.1 Kb. A análise deste padrão permitiu a construção de um dendrograma demonstrando o agrupamento das 79 amostras em 49 perfis distintos. Embora a técnica de REP-PCR tenha apresentado grande poder discriminatório, as amostras patogênicas e não patogênicas não foram discriminadas entre si assim como não foi observado o agrupamento de amostras causadoras do mesmo tipo de doença. Por outro lado, demonstramos recentemente que outras técnicas tais como ERIC-PCR e a análise de isoenzimas foram eficientes quando utilizadas para esta mesma finalidade. Concluindo, REP-PCR parece não ser uma técnica eficiente e universal para discriminar entre amostras APEC. Porém, a estrutura clonal populacional obtida com o uso de REP-PCR não deve ser desprezada, particularmente se considerarmos que os mecanismos de patogenicidade de APEC ainda não são completamente conhecidos.

In the present study the repetitive extragenic palindromic (REP) polymerase chain reaction (PCR) technique was used to establish the clonal variability of 49 avian Escherichia coli (APEC) strains isolated from different outbreak cases of septicemia (n=24), swollen head syndrome (n=14) and omphalitis (n=11). Thirty commensal strains isolated from poultry with no signs of these illnesses were used as control strains. The purified DNA of these strains produced electrophoretic profiles ranging from 0 to 15 bands with molecular sizes varying from 100 bp to 6.1 kb, allowing the grouping of the 79 strains into a dendrogram containing 49 REP-types. Although REP-PCR showed good discriminating power it was not able to group the strains either into specific pathogenic classes or to differentiate between pathogenic and non-pathogenic strains. On the contrary, we recently demonstrated that other techniques such as ERIC-PCR and isoenzyme profiles are appropriate to discriminate between commensal and APEC strains and also to group these strains into specific pathogenic classes. In conclusion, REP-PCR seems to be a technique neither efficient nor universal for APEC strains discrimination. However, the population clonal structure obtained with the use of REP-PCR must not be ignored particularly if one takes into account that the APEC pathogenic mechanisms are not completely understood yet.

Sorotipagem de amostras de Streptococcus suis isoladas de suínos em granjas dos Estados de Säo Paulo, Minas Gerais e Paraná / Serotyping of Streptococcus suis strains isolated from pigs in the States of Säo Paulo, Minas Gerais e Paraná, Brazil

Infecçöes causadas por Streptococcus suis säo muito comuns em países onde a indústria de carne suína é desenvolvida. Estas infecçöes estäo relacionadas a casos clínicos de broncopneumonia, meningite, artrite, pericardite, miocardite, endocardite, poliserosite fibrinosa, septicemia, rinite e aborto. Esta bactéria também foi descrita como patógeno de ruminantes e humanos. No Brasil há evidências clínicas da existência de processos infecciosos causados por S. suis afetando mais de 50 por cento das granjas em Estados como Säo Paulo, Minas Gerais e Paraná. No presente estudo foram isoladas 51 amostras de S. suis de granjas do Estados acima referidos, coletadas de diferentes casos clínicos como septicemia, meningite, artrite e pneumonia, tendo sido obtidas ou em cultura pura ou como patógeno de maior predominância nos tecidos de suínos. Este material foi semeado em Columbia ágar sangue adicionado de 5 por cento de sangue bovino e incubado a 37°C por 24 horas. Para a identificaçäo bioquímica as colônias que apresentavam a-hemólise, bem como as amostras padräo, foram submetidas a testes convencionais para a confirmaçäo da espécie S. suis, tais como: hidrólise de arginina, teste de Voges-Proskauer, e produçäo de ácido a partir de vários carboidratos (inulina, salicina, trealose, lactose, sacarose, sorbitol, manitol e glicerol). As amostras também foram testadas para habilidade de crescimento em meio de TSA com 6,5 por cento de NaCl e para a produçäo de amilase. Todas as amostras que fizeram parte desta pesquisa foram testadas pelo sistema Api 20 Strep para confirmaçäo dos resultados obtidos nos testes convencionais. Para a sorotipagem foram produzidos antissoros de 1 a 8. Outras amostras näo pertencentes a estes sorotipos também foram sorotipadas. O antissoro produzido em coelhos foi titulado pelo teste de aglutinaçäo em tubo com 2-mercaptoetanol e pelo teste de reaçäo capsular e, quando adequados, foram usados no teste de co-aglutinaçäo, para a sorotipagem das amostras de S. suis. A sorotipagem das 51 amostras isoladas mostraram os seguintes resultados: 30 (58,8 por cento) foram classificadas como sorotipo 2, 11 (21,6 por cento) das amostras como sorotipo 3, sete (13,72 por cento) como sorotipo 7, duas (3,92 por cento) como sorotipo 1 e uma amostra como pertencente ao sorotipo14 (1,96 por cento). Este é o primeiro relato do isolamento de um grande número de amostras de S. suis no Brasil, de casos típicos de processos infecciosos causados por esta bactéria