Proposal of an iELISA for Mycoplasma bovis diagnosis in dairy cattle and associated risk factors / [Proposta de um iELISA para diagnóstico de Mycoplasma bovis em bovinos leiteiros e fatores de risco associados]

Mycoplasma bovis is a highly contagious agent associated with several pathologies in cattle. The detection of reactive antibodies to M. bovis by Indirect Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (iELISA) identifies if there was an exposure to the microorganism. The current study aimed to optimize an iELISA from M. bovis total cell antigen, applying it to bovine serum samples, and to evaluate risk factors. Serum samples were obtained from 400 cows from 17 herds from Southeast Brazil. In the optimization of iELISA, the following was established: 2 µg/mL of antigen, sera dilution 1:300, and conjugate dilution 1:15000. The frequency was 62.3% (249/400) of reactive animals and 100% (17/17) of reactive herds. Risk factors were: herds with more than 100 animals (OR= 3.1; CI= 95%); Holstein breed (OR= 72.5; CI= 95%); cows (OR= 29.7; CI= 95%); intensive breeding system (OR= 3.3; CI= 95%); associated small ruminant production (OR= 4.4; CI= 95%); milk production above 500L (OR= 2.9; CI= 95%); no quarantine (OR= 1.5; CI= 95%); mechanical milking (OR= 5.5; CI= 95%) and cases of mastitis (OR= 5.5; CI= 95%). The proposed iELISA was able to detect antibodies reactive to M. bovis in bovine serum. Knowledge of these risk factors can assist in the implementation of prophylactic measures.(AU)

Mycoplasma bovis é um agente altamente contagioso relacionado a várias patologias em bovinos. A detecção de anticorpos reativos a M. bovis por Ensaio de Imunoadsorção Enzimática Indireto (iELISA) identifica se houve exposição ao microrganismo. O presente estudo teve como objetivo otimizar um iELISA de antígeno celular total de M. bovis, aplicando-o a amostras de soro bovino, bem como avaliar fatores de risco. Amostras de soro foram obtidas de 400 vacas de 17 rebanhos da Região Sudeste do Brasil. Na otimização do iELISA foram obtidos: 2µg/mL de antígeno, diluição dos soros 1:300 e do conjugado 1:15000. A frequência de animais reativos foi de 62,3% (249/400) e de 100% (17/17) para os rebanhos. Os fatores de risco foram: rebanhos com mais de 100 animais (OR= 3,1; IC= 95%); raça Holandesa (OR= 72,5;IC= 95%); vacas (OR= 29,7;IC= 95%); sistema intensivo (OR= 3,3; C= 95%); produção de pequenos ruminantes (OR= 4,4;IC=95%); produção de leite acima de 500L (OR= 2,9;IC= 95%); sem quarentena (OR= 1,5;IC= 95%); ordenha mecânica (OR= 5,5;IC= 95%) e casos de mastite (OR= 5,5;IC= 95%). O iELISA proposto foi capaz de detectar anticorpos reativos a M. bovis no soro bovino. O conhecimento desses fatores de risco pode auxiliar na implementação de medidas profiláticas.(AU)

Efeito da temperatura das amostras de leite na concentração de cálcio solúvel e de beta-caseína: interferência no teste de estabilidade frente ao etanol / Effect of milk sample temperature on the concentration of soluble calcium and beta-casein: interference with the ethanol stability test

O objetivo deste trabalho foi avaliar a variação do perfil proteico e do cálcio solúvel na coagulação do leite pelo etanol nas temperaturas de 4ºC, 10ºC, 15ºC e 20ºC. Amostras de leite de 61 animais foram avaliadas quanto à estabilidade ao etanol nas concentrações de 66 a 92 por cento (v/v) nas temperaturas de 4ºC, 10ºC, 15ºC e 20ºC. Três amostras, após 24 horas de armazenamento a 4ºC, foram ultracentrifugadas em quadruplicata (40.000 x g) a 4ºC e a 20ºC, respectivamente, por 60 minutos. Em seguida, o sobrenadante foi retirado e submetido à análise do cálcio solúvel pela técnica via úmida (digestão nitroperclórica) e leitura em espectrofotômetro de absorção atômica. O perfil proteico foi analisado pela técnica de eletroforese capilar empregando kit específico para determinação proteica. Os resultados mostraram uma correlação positiva entre o aumento da temperatura das amostras e a estabilidade do leite frente às diferentes concentrações de etanol. A porcentagem de cálcio solúvel no sobrenadante após ultracentrifugação foi maior nas amostras tratadas a 4ºC (P<0,05). As amostras ultracentrifugadas na temperatura de 4ºC apresentaram quantidades superiores de β-caseína no sobrenadante em comparação com as amostras tratadas a 20ºC. O abaixamento da temperatura favoreceu a migração da β-caseína e do cálcio coloidal para a fase solúvel do leite, o que possivelmente favoreceu o aumento da instabilidade das amostras no teste do etanol. Os resultados sugerem que a temperatura ideal para a realização de teste de estabilidade do leite frente ao etanol deveria ser de 21ºC...

The aim of this study was to evaluate the variation in protein profile and soluble calcium in milk coagulation by ethanol at 4ºC, 10ºC, 15ºC and 20ºC. Milk samples from 61 dairy cows were evaluated for stability of ethanol concentrations from 66 to 92 percent (v/v) at temperatures of 4°C, 10°C, 15°C and 20°C. Three samples were ultracentrifuged (40,000 x g) after 24 hours of storage at 4°C and 20°C, respectively, for 60 minutes. Their supernatants were removed and subjected to analyses of soluble calcium through nitro-perchloric digestion and atomic absorption spectrophotometry. The protein profiles were determined by capillary electrophoresis using a specific kit for protein determination. The results showed a positive correlation between the increase in temperature of the samples and the stability of milk against various concentrations of ethanol. The percentage of soluble calcium in the supernatant after centrifugation was higher in samples treated at 4°C (P<0.05). The samples ultracentrifuged at 4°C showed higher amounts of β-casein in the supernatant compared with samples stored at 20°C. The lowering of the temperature favored the migration of β-casein and colloidal calcium to the soluble phase of milk, which may also have favored the instability of milk in the ethanol test. According to the results, the milk sample temperature for the ethanol stability test should be 21ºC...

Variação da contagem de células somáticas em vacas leiteiras de acordo com patógenos da mastite / Somatic cell counts variation in dairy cows according to mastitis pathogens

Avaliou-se o efeito de patógenos da mastite sobre a contagem de células somáticas (CCS) em leite. Foram coletadas 3.987 amostras de leite de 2.657 animais oriundos de 24 rebanhos leiteiros localizados nos estados do Rio de Janeiro e Minas Gerais. As amostras de leite foram usadas para CCS e identificação de patógenos da mastite. Estatísticas descritivas, teste T para amostras independentes e modelo linear generalizado foram usados para análise dos dados. O modelo linear generalizado identificou os efeitos de rebanho, animal dentro de rebanho, ordem de parto, estação do ano e infecção intramamária causada por Streptococcus agalactiae e Streptococcus spp. que não S. agalactiae como significativos na variação da CCS. O efeito de animal dentro de rebanho foi maior que o efeito de rebanho. S. agalactiae foi o patógeno responsável pelo maior aumento da CCS em vacas e apresentou em média 1.520.000 células/mL. Foi observado efeito específico dos patógenos na variação da CCS.

The influence of mastitis pathogens on variation of milk somatic cell count (SCC) was evaluated. Three thousand nine hundred eighty-seven milk samples were colected from 2,657 dairy cows in 24 herds located in the states of Minas Gerais and Rio de Janeiro. The milk samples were used to SCC and identification of mastitis pathogens. Descriptive statistics, T test for independent samples, and generalized linear model were used to data analysis. The generalized linear model identified the effects of herd, animal within herd, parity, year season, intramammary infection, and infection caused by Streptococcus agalactiae and Streptococcus spp. except S. agalactiae as significant on SCC variation. The effect of animal within herd was higher than the effect of herd. S. agalactiae was the pathogen responsible for higher SCC increasing and presented the average of 1,520,000 cells/mL. The specific effect on SCC variation was observed in the study.

Fatores de risco para mastite subclínica em vacas leiteiras / Risk factors for subclinical mastitis in dairy cows

Os fatores de risco para mastite subclínica (CCS > 200.000 células/ml) foram estudados em 2.657 vacas, de 24 rebanhos de Minas Gerais. Cada rebanho foi visitado três vezes entre novembro de 2005 e junho de 2006. Amostras de leite (n=3.987) de vacas em lactação foram examinadas para contagem de células somáticas (CCS), e um questionário foi aplicado para obtenção de dados dos animais e do manejo do rebanho. Os valores para a média, mediana e desvio-padrão da CCS foram 608.000, 219.000 e 967.000 células/ml, respectivamente. Os fatores de risco para mastite subclínica foram: animais com a base do úbere junto ou abaixo do jarrete, rachaduras ou fissuras nas partes de borracha do equipamento de ordenha, inadequação das teteiras, deficiência de limpeza dos pulsadores, falta de treinamento dos ordenhadores, não-utilização de diagnóstico microbiológico para mastite, imersão do conjunto de teteiras em solução desinfetante entre a ordenha de animais distintos, e inserção total da cânula de antibiótico nos tetos na secagem da vaca. A alta variação da CCS (608.000± 967.000 células/ml) sugere que outros fatores, como o número de quartos mamários infectados e os patógenos envolvidos, podem ter influenciado os resultados. A metodologia utilizada não permitiu identificar todos os fatores que poderiam aumentar a CCS. Contudo, os resultados são úteis para aprimorar os programas de controle da mastite.

This study was carried out to identify risk factors for subclinical mastitis (SCC > 200,000 cells/ml). A total of 2,657 lactating cows from 24 herds in the State of Minas Gerais, Brazil, were included in the study. Each farm was visited three times in an 8-month period from November 2005 to June 2006. At each visit, all milking cows were examined for clinical mastitis by a single observer. A total of 3,987 milk samples were examined for somatic cell counts (SCC). The mean, median, and standard deviation values for SCC were, respectively, 608,000, 219,000, and 967,000 cells/ml. Risk factors for subclinical mastitis were: udder positioned at the same height or below the hock, presence of cracks or fissures in the rubber parts of the milking machine, inadequacy of teat cups, infrequent and unsuitable scheme for cleaning the pulsators, milkers unable to operate the milking equipments, no information about the mastitis pathogens present in the herd, immersion of teat cups in disinfectant solution between milkings, and total insertion of cannula in teats during antibiotic treatment. The high variation of the SCC values (608,000± 967,000 cells/ml) suggests that other factors such as number of infected mammary quarters and pathogens involved could have influenced the results. The used methodology did not allow to identify all risk factors that increase SCC. Therefore, the results can also be used to improve the currently mastitis control programs adopted by those herds.

Qualidade microbiológica do leite refrigerado nas fazendas / Microbiological quality of refrigerated milk on farms

Avaliaram-se a qualidade microbiológica do leite obtido mecanicamente e refrigerado durante 48 horas, em 24 rebanhos, e a associação entre a contaminação microbiana e os procedimentos de higienização dos equipamentos de ordenha e armazenamento do leite. Os procedimentos de higiene foram avaliados in loco com auxilio de questionários. Foram realizadas a contagem padrão em placas, a contagem de coliformes totais e a pesquisa de Staphylococcus aureus e Streptococcus agalactiae. No leite de 14 rebanhos, foram pesquisadas Salmonella spp. e Listeria monocytogenes. As médias geométricas da contagem padrão foram <1,0×10(6) UFC/ml em 20 rebanhos, e <7,5×10(5) UFC/ml em 19. Onze rebanhos apresentaram contagem média de <1,0×10(5) UFC/ml. Contagens médias de coliformes >10³ UFC/ml foram verificadas em sete rebanhos. S. aureus e S. agalactiae foram isolados em 22 e 12 dos 24 rebanhos, respectivamente, e não foram encontradas Salmonella spp. e L. monocytogenes. O uso de detergentes alcalino e ácido, mais o de sanitizante foi associado (P<0,05) à contagem padrão <1,0×10(5), e o emprego de apenas um ou de nenhum produto foi associado a contagens >5×10(5) UFC/ml.

The effect of bulk tank and milking machine cleaning procedures (determined from a questionnaire) on bacterial contamination of 48-hour refrigerated milk was examined in 24 herds. Milk samples were analyzed for standard plate count (SPC) and for total coliform, Staphylococcus aureus and Streptococcus agalactiae contamination. Milk samples from 14 herds were cultured for Salmonella and Listeria monocytogenes. Geometrical means of SPC were <1.0×10(6) UFC/ml in 20 herds, <7.5×10(5) UFC/ml in 19 herds and <1.0×10(5) UFC/ml in 11 herds. Geometrical means >10³ UFC/ml of total coliforms were observed in seven herds. S. aureus and S. agalactiae were found in 22 and 12 herds, respectively. Salmonella and L. monocytogenes were not found in any of the samples. The use of alkaline and acid detergents plus sanitizing was associated (P<0.05) with SPC <1.0×10(5), and the use of either alkoline or acid detergent or sanitizing or no chemical product was associated with SPC >5.0×10(5) UFC/ml.

Efeito da temperatura e do tempo de armazenamento sobre a contagem de células somáticas no leite / Effects of temperature and storage on somatic cell counts in milk

Avaliou-se o efeito da temperatura e do tempo de armazenamento sobre a contagem de células somáticas(CCS). Amostras de leite de 21 vacas, coletadas e armazenadas às temperaturas de 5, 27, 32 e 36°e e analisadas no 1°, 3°, 5°e 7° dia após coleta, foram classificadas em três grupos (células/ml): baixa (236.000 + ou - H64.000), média (624.000+ ou - 356.000) e alta CCS (1.320.000+ ou - 945.000). O delineamento experimental foi o de parcelas subdivididas. As médias da CCS foram iguais (P>0,05) para amostras mantidas à temperatura de 5°C e analisadas entre o primeiro e o sétimo dias após a coleta e para aquelas mantidas às temperaturas 5, 27, 32 e 36°e e analisadas no primeiro dia. Médias diferentes (P<0,05) da CCS foram observadas para amostras mantidas a 27, 32 e 36°e a partir do 5°, 5° e 3° dias, respectivamente. Foram observados decréscimos de 57,6%, 58,5% e 27,9% nos valores iniciais da CCS nas amostras classificadas como baixa, média e alta, respectivamente. Os resultados mostram a necessidade de se encaminhar as amostras de leite para CCS sob refrigeração e de ser feita análise até sete dias após a coleta.

Fatores de risco associados à alta contagem de células somáticas do leite do tanque em rebanhos leiteiros da Zona da Mata de Minas Gerais / Risk factors associated with high bulk milk somatic cell count in dairy herds from Zona da Mata of Minas Gerais, Brazil

Características do rebanho e práticas de manejo associadas à contagem de células somáticas do leite do tanque (CCSLT) foram estudadas em 175 rebanhos envolvidos em programas de acompanhamento entre junho de 2000 e dezembro de 2001. Os dados foram obtidos por meio de aplicação de questionários. Os rebanhos foram classificados em dois grupos de acordo com a média geométrica de seis CCSL T mensais, consecutivas, tendo como referência o valor de 500.000 células/ml. Os métodos estatísticos utilizados foram a análise exploratória dos dados e os modelos logísticos de regressão. Procedimentos relacionados ao controle e à prevenção de mastite foram adotados por pequeno número de rebanhos. O tipo de ordenha (manual, mecânica canalizada e balde-ao-pé), a idade média dos rebanhos, o local de ordenha e a realização de exames dos primeiros jatos de leite não foram associados à alta CCSLT. Os fatores associados à alta CCSLT foram a não adoção de linha de ordenha, a alimentação durante a ordenha e a ausência de anti-sepsia dos tetos após a ordenha.

Distribuiçäo de anticorpos para herpesvírus bovino 1 em rebanhos bovinos / Distribution of antibodies to bovine herpesvirus 1 in cattle herds

A distribuiçäo de anticorpos neutralizantes para o herpesvirus bovino 1 (HVB 1) foi estudada em quatro faixas etárias de bovinos, em 21 rebanhos de leite e de corte. Os resultados da sorologia foram analisados e relacionados com as respostas de questionários aplicados aos responsáveis pelos rebanhos. As taxas de freqüência de anticorpos neutralizantes para o HVB 1 foram comparadas segundo a aptidäo e a faixa etária. Fatores como tipo de manejo e idade dos animais influenciaram na distribuiçäo de anticorpos para o HVB 1

Avaliaçäo de associaçöes e similaridades em epidemiologia veterinária por meio da análise de correspondência / Evaluation of associations and similarities in veterinary epidemiology by correspondence analysis

Chi-square test and correspondence analysis were used to evaluate the relationship between class of milk somatic cells count (0-300,000; 301,000-600,000; and >600,000 cells/ml) and type of milking in data from 87 herds that comprised manual and machine milking. Chi-square test showed no relationship between process of milking and class of milk somatic cells count but the correspondence analysis showed higher relationship between manual milking and class of somatic cells count >600,000 cells/ml in comparison to the other classes of somatic cells count (0-300,000 and 301,000-600,000 cells/ml). The graphic representation of the correspondence analysis (dimension 1) showed similarity of somatic cells count for manual and pipeline milking systems

Formas de exploraçäo do rebanho caprino no Estado do Rio de Janeiro, 1998/2000 / Goat industry in the State of Rio de Janeiro, 1998/2000

Aiming to understanding the goat industry in the State of Rio de Janeiro, from 1998-2000, this study was carried out in 48 goat farms, 72.9 percent of which with an area of less than eight hectares. Also, 62.5 percent of the farms had irregular topography, and 69 percent of them kept Saanen breed in a confined system (93.7 percent). Animals were housed between 16 to 24 hours/day in suspended wooden stalls, and 83.3 percent were dairy goats