RESUMO
A partir do fluido ascítico de camundongo, contendo o anticorpo monoclonal anti-CEA 4C11, subclasse IgG2a, doado pelo Instituto Ludwig/Brasil, desenvolveu-se procedimentos imunoquímicos objetivando a: separaçäo da imunoglobulina IgG2a, clivagem pepsínica da IgG2a para obtençäo de fragmentos bivalentes e monitoraçäo por eletroforese de gel de poliacrilamida na presença de dodecil sulfato de sódio, como uma metodologia preliminar indispensável ao alcance de um reagente imunológico adequado ao uso clínico
Assuntos
Animais , Camundongos , Imunoglobulina G/isolamento & purificação , Anticorpos Monoclonais/isolamento & purificação , Eletroforese em Gel de Poliacrilamida , Camundongos Endogâmicos BALB C , Química FarmacêuticaRESUMO
O objetivo deste estudo é a análise de um sistema adequado para a iodaçäo de anticorpos monoclonais, rápido, simples, eficiente e reprodutivo, próprio aos laboratórios radiofarmacêuticos. É importante lembrar que os anticorpos säo moléculas bioquímicas sensíveis, sujeitas durante a iodaçäo à perda da atividade que é essencial ao seu modo de açäo, especialmente a habilidade de ligaçäo específica ao antígeno. O advento de agentes de iodaçäo em fase sólida, conduziu a uma série de técnicas de iodaçäo, branda, útil oara marcaçäo de material biológico sensível. O agente mais largamente usado é o Iodogen (1,3,4,6 tetracloro 3a,6a difenilglicoluril). Anti-CEA 4C IgG2a,K (preparado no Instituto Ludwig de Pesquisa sobre o Câncer-Säo Paulo-Brasil) é usado, após a purificaçäo em Proteína A-Sepharose, como modelo para avaliar a metodologia do Iodogen. Elaborou-se um sistema de cromatografia miniaturizada também rápido, simples, eficiente para determinar a eficiência de marcaçäo, incorporaçäo do iodo na imunoglobulina e a pureza radioquímica do 131I-anti-CEA
Assuntos
Anticorpos Monoclonais/efeitos da radiação , Radioisótopos do IodoRESUMO
Descrevemos um método simples para a medida de insulina livre, total e C-peptídep em diabéticos insulino-dependentes com anticorpos antiinsulina circulantes. Insulina livre e C-peptídeo säo extraídos do plasma com uma soluçäo de PEG 25// (polietileno glicol, Carbowax 6000). Insulina total é extraida do plasma com soluçäo de PEG 25// após dissociaçäo do complexo antígemo-anticorpo com HCl diluído. Alíqutoas dos extratos säo usadas nos sistemas de radioimunoensaio para insulina e C-peptídeo. A concentraçäo em amostras de plasma de indivíduos normais e diabéticos tratados com clorpropamida (CP), insulina e C-peptídeo foram determinados sem extraçäo prévia