Fatores associados à infecção pelo vírus da estomatite vesicular em equídeos no estado do Rio Grande do Norte, Brasil / Factors associated with infection by the vesicular stomatitis virus in equines in the state of Rio Grande do Norte, Brazil

Objetivou-se investigar a presença do Vírus da Estomatite Vesicular (VEV) e seus fatores de risco para ocorrência e disseminação da enfermidade em equídeos das mesorregiões Leste e Oeste Potiguar do estado do Rio Grande do Norte, Brasil. Foram analisadas pela técnica de virusneutralização, 809 amostras sanguíneas de equídeos provenientes de noventa propriedades de dezesseis municípios Potiguares durante os meses de julho de 2018 a fevereiro de 2019. Os fatores de riscos associados ao VEV foram avaliados por meio de questionário epidemiológico e os dados submetidos a análise estatística no programa IBM SPSS Statistics versão 21.0 com nível de confiança de 95%. Posteriormente, todas as variáveis estatisticamente significantes foram submetidas a análise de regressão de Poisson. A soroprevalência de anticorpos anti-VEV foi 24,6% (199/809), sendo 3,2% (13/402) de soropositivos na mesorregião Leste e 45,7% (186/407) na do Oeste Potiguar. Com relação aos sorotipos, observou-se uma prevalência de 3,8% (31/809) e 24,5% (198/809) para Indiana 2 e 3 respectivamente, com 15,1% (30/198) de coinfecção. Equídeos criados na mesorregião Oeste, em propriedades que não realizam quarentena e onde os animais enfermos são mantidos no rebanho, foram consideradas fatores predisponentes a infecção pelo VEV. Esses resultados demonstram a circulação do VEV em equídeos no Rio Grande do Norte, com destaque ao Oeste Potiguar, e sendo necessário a aplicação de medidas sanitárias que impeçam introdução e disseminação do vírus ente as espécies susceptíveis, principalmente em condições climáticas favoráveis para a sua manutenção, no ambiente de criação e pastagens.

This study aimed to investigate the presence of Vesicular stomatitis virus (VSV) and risk factors for its occurrence and dissemination in equines from the Eastern and Western mesoregions of the state of Rio Grande do Norte, Brazil. Blood samples were analyzed, by Serum Virus Neutralization Assay, from 809 animals belonging to 90 properties distributed in sixteen municipalities from July 2018 to February 2019. Risk factors were assessed using an epidemiological questionnaire. Data were submitted to statistical analysis using the software IBM SPSS Statistics, version 21.0 with a 95% confidence level. Also, all statistically significant variables were subjected to Poisson regression analysis. The occurrence of anti-VSV antibodies was 24.6% (199/809) with 3.2% (13/402) and 45.7% (186/407) of seropositivity in the Western and Eastern mesoregion, respectively. Regarding serotypes, there were an occurrence of 3.8% (31/809) and 24.5% (198/809) for Indiana 2 and 3, respectively, and 15.1% (30/198) of co-infection for both. Equines kept of the Western mesoregion, on properties that do not quarantine, and where sick animals are kept in the herd, were considered risk factors for LVV infection. These results demonstrate the presence of VSV in equines in Rio Grande do Norte, with emphasis on Oeste Potiguar, and that sanitary measures must be adopted to prevent the introduction and viral spreading among susceptible species, especially due to favorable climatic conditions for the maintenance of VSV in the breeding and pasture environment.

Fatores associados à infecção pelo vírus da estomatite vesicular em equídeos no estado do Rio Grande do Norte, Brasil / Factors associated with infection by the vesicular stomatitis virus in equines in the state of Rio Grande do Norte, Brazil

Objetivou-se investigar a presença do Vírus da Estomatite Vesicular (VEV) e seus fatores de risco para ocorrência e disseminação da enfermidade em equídeos das mesorregiões Leste e Oeste Potiguar do estado do Rio Grande do Norte, Brasil. Foram analisadas pela técnica de virusneutralização, 809 amostras sanguíneas de equídeos provenientes de noventa propriedades de dezesseis municípios Potiguares durante os meses de julho de 2018 a fevereiro de 2019. Os fatores de riscos associados ao VEV foram avaliados por meio de questionário epidemiológico e os dados submetidos a análise estatística no programa IBM SPSS Statistics versão 21.0 com nível de confiança de 95%. Posteriormente, todas as variáveis estatisticamente significantes foram submetidas a análise de regressão de Poisson. A soroprevalência de anticorpos anti-VEV foi 24,6% (199/809), sendo 3,2% (13/402) de soropositivos na mesorregião Leste e 45,7% (186/407) na do Oeste Potiguar. Com relação aos sorotipos, observou-se uma prevalência de 3,8% (31/809) e 24,5% (198/809) para Indiana 2 e 3 respectivamente, com 15,1% (30/198) de coinfecção. Equídeos criados na mesorregião Oeste, em propriedades que não realizam quarentena e onde os animais enfermos são mantidos no rebanho, foram consideradas fatores predisponentes a infecção pelo VEV. Esses resultados demonstram a circulação do VEV em equídeos no Rio Grande do Norte, com destaque ao Oeste Potiguar, e sendo necessário a aplicação de medidas sanitárias que impeçam introdução e disseminação do vírus ente as espécies susceptíveis, principalmente em condições climáticas favoráveis para a sua manutenção, no ambiente de criação e pastagens.

This study aimed to investigate the presence of Vesicular stomatitis virus (VSV) and risk factors for its occurrence and dissemination in equines from the Eastern and Western mesoregions of the state of Rio Grande do Norte, Brazil. Blood samples were analyzed, by Serum Virus Neutralization Assay, from 809 animals belonging to 90 properties distributed in sixteen municipalities from July 2018 to February 2019. Risk factors were assessed using an epidemiological questionnaire. Data were submitted to statistical analysis using the software IBM SPSS Statistics, version 21.0 with a 95% confidence level. Also, all statistically significant variables were subjected to Poisson regression analysis. The occurrence of anti-VSV antibodies was 24.6% (199/809) with 3.2% (13/402) and 45.7% (186/407) of seropositivity in the Western and Eastern mesoregion, respectively. Regarding serotypes, there were an occurrence of 3.8% (31/809) and 24.5% (198/809) for Indiana 2 and 3, respectively, and 15.1% (30/198) of co-infection for both. Equines kept of the Western mesoregion, on properties that do not quarantine, and where sick animals are kept in the herd, were considered risk factors for LVV infection. These results demonstrate the presence of VSV in equines in Rio Grande do Norte, with emphasis on Oeste Potiguar, and that sanitary measures must be adopted to prevent the introduction and viral spreading among susceptible species, especially due to favorable climatic conditions for the maintenance of VSV in the breeding and pasture environment.

Seroprevalence of zika virus in a cattle flock

The present research evaluated the seroprevalence of anti-zika virus (anti-ZIKV) antibodies by virus neutralization test (VNT) in 529 bovines from Andradina city, São Paulo state, Brazil. The reading was performed in an inverted optical microscope, considering reagents when the antibodies were capable to neutralize the ZIKV. Of the 529 samples, 53 (10.01%) were reagents. The animals were healthy at the time of collection. The samples were collected in February 2018, a favorable period for the multiplication of the vector and the highest risk of disease transmission. None of the animals showed anti-bovine viral diarrhea virus (anti-BVDV) antibodies, ruling out a possible cross-reaction, reinforcing the possible contact of the bovine with the ZIKV. In the herd, 88 pregnant females were evaluated; of these, 12 cows were reactive, with no history of reproductive problems or fetal malformations. This is the first research on the seroprevalence of ZIKV in cattle in Brazil, and studies should continue to evaluate cattle as a possible host of this arbovirus and its possible consequences for unique health and agribusiness.

A experiência brasileira na erradicação da febre aftosa e o emprego do sistema I-ELISA 3ABC/EITB para certificação sanitária de bovinos e bubalinos / The Brazilian experience in the eradication of foot-and-mouth disease and the use of I-ELISA 3ABC/EITB system for sanitary certification of bovine and buffaloes

A vacinação contra febre aftosa é ferramenta eficaz para erradicação e prevenção da doença, contudo, a presença de proteínas não capsidais (PNC) na vacina, produzidas durante a multiplicação viral, tem sido o principal problema, visto que sua presença dificulta as ações de vigilância, cuja busca se baseia na detecção de anticorpos contra essas proteínas para diferenciar animal vacinado de infectado. Por esse motivo, o Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento publicou em 2008 a Instrução Normativa nº 50 (IN 50), que incluiu no controle da qualidade da vacina a pesquisa de anticorpos contra as PNC, para avaliar a retirada dessas proteínas. Considerando a interferência vacinal, objetivou-se avaliar a frequência de bovinos reagentes às PNC, analisada pelo sistema I-ELISA 3ABC/EITB, no Laboratório de Viroses de Bovídeos do Instituto Biológico de São Paulo, no período de 2002 a 2012. Dos 34.705 bovinos examinados, observou-se que a proporção de reagentes às PNC aumentou com a idade, evidenciando aumento da frequência de reagentes em animais que receberam maior número de vacinações, indicando interferência da vacinação na resposta às proteínas. Quando comparados antes e após a publicação da IN 50, observa-se diminuição da reatividade, com redução, em 2010, de quase a metade em relação a 2007, e ainda maior quando comparado com o período 2002 a 2006. Isso demonstra a efetividade da purificação da vacina em resposta ao cumprimento da IN 50, embora permaneça alguma sororreatividade em bovinos com múltiplas vacinações. O sistema I-ELISA 3ABC/EITB demonstrou ser uma ótima ferramenta para impedir a movimentação de possíveis portadores do vírus oriundos de rebanhos vacinados, desde que seja considerado todo o contexto sanitário e epidemiológico.(AU)

Vaccination against foot-and-mouth disease is an effective tool for eradication and prevention of this disease. However, the presence of non-capsidal proteins (NCP) in the vaccine, produced during viral replication, has been the main problem, since their presence hamper the vigilance as its relies on the detection of antibodies against NCP to differentiate vaccinated from infected animals. Therefore, the Brazilian Ministry of Agriculture, Livestock and Supply published the Normative Instruction 50 (IN 50) that included the detection of antibodies against the NCP to evaluate the removal of these proteins. Considering the vaccine interference, this paper aimed to evaluate the frequency of reagents to NCP, analyzed by I-ELISA 3ABC/EITB system in the Laboratory of Bovine Viruses (LVB), Biological Institute (IB), São Paulo, SP, Brazil, from 2002 to 2012. Of the 34,705 cattle examined, it was observed that the proportion of reagents to NCP increased with age, indicating increased frequency of reagents in animals that received more vaccines, showing interference of proteins in response to vaccination. When compared before and after the publication of IN 50, there was decreased reactivity, with reduction in 2010, of nearly half compared to 2007, and even higher when compared with 2002 to 2006. This shows the effectiveness of the purification of the vaccine in response to the implementation of IN 50, although it remains some seroreactivity in cattle with multiple vaccinations. The I-ELISA 3ABC/EITB system proved to be a great tool to prevent the movement of possible carriers of the virus derived from vaccinated herds, provided that all sanitary and epidemiological context are taken in consideration.(AU)

Occurrence of seropositive sheep (Ovis aries) to bovine leukemia virus in Brazil / Ocorrência de ovinos (Ovis aries) soropositivos ao vírus da leucemia bovina no Brasil

Occurrence of seropositive sheep (Ovis aries) to Bovine Leukemia Virus (BLV) by agar-gel immunodiffusion test (AGID) using the antigen gp51 was surveyed for the period 2005-2007. Samples were collected from sheep in the Brazilian states of Rio Grande do Sul, Paraná, São Paulo, Pernambuco, Maranhão, Pará, Bahia, Mato Grosso, Rondônia, and Acre. Two of 35 (5.7%) flocks were seropositive to BLV, and the rate of seropositive animals was 0.077% (two of 2,592). The two seropositive sheep were female, one 13-month old Santa Inês breed and other of unknown age and breed, both from the state of São Paulo. Distribution of BLV in the ovine population studied proved to be a rare event in Brazil.

A ocorrência de ovinos sororreagentes ao vírus da Leucemia Bovina (VLB) pelo teste de imunodifusão em gel de ágar (IDGA) utilizando o antígeno gp51 foi avaliada no período de 2005-2007, em diferentes regiões do Brasil. Amostras foram colhidas de ovinos dos Estados do Rio Grande do Sul, Paraná, São Paulo, Pernambuco, Maranhão, Pará, Bahia, Mato Grosso, Rondônia e Acre. Duas em 35 cabanhas (5,7%) e dois em 2592 ovinos (0,077%) foram soropositivos. Os únicos animais com anticorpos contra o VLB eram fêmeas, uma com 13 meses de idade e da raça Santa Inês e a outra não se conhecia a idade e raça, ambas provenientes do Estado de São Paulo. A distribuição da soropositividade na população estudada demonstrou ser rara a infecção pelo VLB em ovinos no Brasil.

Ocorrência de anticorpos anti-Neospora caninum em cães da microrregião da Serra de Botucatu, Estado de São Paulo, Brasil / Occurrence of antibodies anti-Neospora caninum in dogs of Botucatu range Micro region, State of São Paulo, Brazil

Neosporose é uma enfermidade parasitária causada pelo protozoário Neospora caninum reconhecido como importante causa de abortamento bovino e neuropatia canina. Considerando o isolamento de N. caninum e a sorologia freqüente em bovinos em nossa região, os objetivos do presente trabalho foram avaliar a ocorrência de anticorpos anti-N. caninum em cães da Microrregião da Serra de Botucatu, Estado de SãoPaulo, e sua associação ao sexo, idade e procedência quanto à zona urbana (exclusivamente cidade), rural (somente chácaras e sítios) e peri-urbana (acesso à zona urbana e rural) dos cães estudados. Foram analisados 963 cães, com ou sem raça definida, de ambos os sexos e diferentes idades, sem apresentação de qualquer sintomatologia clínica. Os animais foram selecionados aleatoriamente durante a campanha de vacinação anti-rábica da microrregião da Serra de Botucatu, no período de maio a setembro de 1998. O soro obtido dos animais foi avaliado por meio da Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI) utilizando como antígeno a cepa padrão NC-1 deN. caninum. Observaram-se 245 animais reagentes (25,4 por cento de positividade), sendo 161 (27,5 por cento) machos e, 84 (22,3 por cento) fêmeas. Dos animais de zona urbana, rural e mista 223 (25,8 por cento),11(16,9 por cento) e 11(33,3 por cento), respectivamente, foram reagentes à prova de RIFI. Todos os 11 municípios apresentaram cães soropositivos com valores de ocorrência que variaram de 8,9 por cento a 53,5 por cento. Observou-se percentual de positividade menor em cães até um ano (16,2 por cento) quando comparados àqueles entre 1 a 4 anos e superior a 4 anos (28,4 por cento e 28,0 por cento, respectivamente) que não apresentaram diferença entre si. Os resultados obtidos caracterizaram soropositividade para N. caninum em cães pertencentes a todos os municípios da Microrregião da Serra de Botucatu evidenciando a ampla distribuição do agente na região.

Neosporosis is a parasitic disease caused by a protozoon Neospora caninum, which is recognized as an important cause of bovine abortion and canine neuropathy. Considering the isolation of N. caninum and the frequent serology in bovines of our region, the objectives of the present trial were to evaluate the occurrence of antibodies anti -N. caninum in dogs of the Botucatu range micro region, in the State of São Paulo, and its association with gender, age and origin (urban area - exclusively from the city; rural area - only farms and cottages; and periurban area - access to the urban and rural areas) of the dogs studied. A total of 963 dogs of defined breeds or non-defined breeds, of both genders and different ages, showing no clinical symptoms, were analyzed. Animals were randomly selected during the anti-rabies vaccination campaign in the region, from May to September 1998. Serum samples obtained from the animals were evaluated by means of the Indirect Fluorescent Antibody Test (IFAT) using as antigen N. caninum, standard strain NC-1. A total of 245 animals were reagent (25.4 percent positive results), with 161 (27.5 percent) males and 84 (22.3 percent) females. According to the origin - urban, rural and periurban areas - 223 (25.8 percent), 11(16.9 percent) and 11(33.3 percent) dogs were, respectively, reagent to the IFAT. All of the 11 cities in this region presented seropositive dogs with occurrence rates ranging from 53.5 to 8.9 percent. The lower positive percentage was observed in dogs below 1 year old (16.2 percent) when compared with animals from 1 to 4 years old and more than 4 years old (28.4 percent and 28.0 percent respectively), which did not present any differences between them. Results obtained characterized the seropositivity for N. caninum in dogs from all Municipalities in the Botucatu micro region showing the wide distribution of the agent in the region.

Prevalência de anticorpos contra agentes virais e bacterianos em eqüídeos do município de Monte Negro, Rondônia, Amazônia ocidental brasileira / Seroprevalence of viral and bacterial agents in equids from Monte Negro municipality, State of Rondônia. brazilian western Amazon

Foram examinados 176 eqüídeos (15 muares e 161 eqüinos) do município de Monte Negro, Rondônia, Amazônia Ocidental Brasileira, frente a agentes virais e bacterianos. A amostra correspondeu ao total de eqüídeos no município, considerando um nível de confiança de 99%, prevalência esperada de 50% e erro padrão de 10%. As infecções virais foram investigadas pelas provas de Imunodifusão em gel de Agar (Anemia Infecciosa Eqüina - AIE), Inibição da hemaglutinação (Influenza eqüina tipos 1 e 2 - IE-1 e 2) e Soroneutralização em cultura celular (Arterite Viral Eqüina - AVE, Herpesvírus Eqüino tipo 1 - HVE1, Estomatite Vesicular - EV e Encefalomielite Eqüina do Leste - EEE, do Oeste - WEE e Venezuela - VEE). Para o diagnóstico da leptospirose, foi utilizada a prova de Soroaglutinação Microscópica (SAM); para o diagnóstico da brucelose, o teste do Antígeno Acidificado Tamponado (AAT) foi utilizado como teste de triagem e as provas de Soroaglutinação Lenta em Tubos (SLT) e 2- mercaptoetanol como testes diagnósticos. Foram constatados 9,6% dos eqüídeos reativos para AIE, 22,7% para HVE1, 19,9% para IE- 1, 42,0% para IE-2, 21,0% para EEE, 11,3% para VEE, 3,4% para Brucella spp. e 91,4% para Leptospira spp. Os sorovares de leptospira mais freqüentes foram Bratislava (10,5%), Icterohaemorrhagiae (8,7%) e Autumnalis (8,7%) nos eqüinos e Patoc (26,6%) nos muares. Não foram encontrados animais com anticorpos contra AVE, EV e WEE.

Sera from 174 equidaes (15 mules and 161 equines) of Monte Negro municipality, Rondônia State were analyzed against viral and bacterial agents. The serum sample corresponded the total equid population in the municipality considering a confidence interval of 99%, expected prevalence of 50% and absolute desired of 10%. For the viral agents, sera were tested by the Agar Gel Immunodiffusion Test (Equine Infection Anemia - EIA), Inhibition Haemagglutination Test (Equine Influenza 1 and 2 - EI - 1 and 2), and Virusneutralizating Tests (Equine Viral Arteritis - EVA, Equine Herpesvirus 1 - EHV1, Vesicular Stomatitis - VS, Equine Encephalitis Eastern - EEE, Western - WEE and Venezuelan VEE). The diagnosis for brucellosis was made by Agglutination Tests and the Microscopic Agglutination Test was used for leptospirosis. The results showed positivity of 9.6% for EIA, 22.7% for HVE1, 19.9% for IE-1, 42.0% for IE-2, 21.0% for EEE, 11.3% for VEE, 3.4% for brucellosis, and 91.4% for leptospirosis. The most frequent serovars detected were Bratislava (10.5%), Icterohaemorrhagiae (8.7%), Autumnalis (8.7%) for equines and Patoc (26.6%) for mules. No one of the examined samples reacted to EVA, VS, or WEE.

Pesquisa de anticorpos contra o vírus da Estomatite Vesicular em bovinos de corte criados na região de Araçatuba, Estado de São Paulo, Brasil em 2000 / Vesicular Stomatitis: Serological Survey in beef cattle from region of Araçatuba, São Paulo State, Brazil in 2000

No ano de 2000 foram pesquisadas 1099 amostras de soro de bovinos de corte, adultos, pertencentes à seis rebanhos situados nos municípios de Auriflama, Gastão Vidigal,, Magda, Santo Antônio do Aracanguá, Sebastianópolis do Sul e Turiúba, região de Araçatuba. A técnica empregada para a dosagem de anticorpos para o vírus da Estomatite Vesicular foi a soroneutralização em microplacas, utilizando a cepa Indiana 1 Costa Rica/72 com título de 10(6,0) DICT50/50mL. As células utilizadas foram as da linhagem de Rim de Macaco Verde Africano (VERO-CCL 81), provenientes do American Type Cell Colection (ATCC). O título de anticorpos de cada amostra de soro, foi calculado como a recíproca da maior diluição do soro expresso em log10, que protegeu 100,00 por cento da monocamada celular. Foram consideradas positivas as amostras com título superior a 1,6 log10 (1/40). Das 1099 amostras de soro analisadas, 28 (2,50 por cento) foram positivas ao vírus da Estomatite Vesicular tipo Indiana 1, com títulos de anticorpos variando de 1,9 à 2,8. Com exceção do rebanho situado no município de Turiúba, nos outros cinco foram encontrados animais reagentes ao vírus. Esta avaliação mostrou que houve circulação do vírus da Estomatite Vesicular nestes rebanhos provocando resposta humoral. Sendo assim é necessário a realização de estudos para se determinar o sítio de permanência do vírus.

Avaliaçäo sorológica preliminar da Estomatite Vesicular em bovinos de corte criados na micro-regiäo de General Salgado, Estado de Säo Paulo / Preliminary serologic evaluation of Vesicular Stomatitis Virus in beef cattle of county of General Salgado, Säo Paulo State

Objetivo: Verificar a presença de anticorpos neutralizantes para o vírus de Estomatite Vesicular, em plantéis bovinos criados em regime extensivo, para a produçäo de carne, situados no município de General Salgado, regiäo de Araçatuba, Estado de Säo Paulo. Materiais e Métodos: Foram pesquisadas 1099 amostras de soro de bovinos adultos, pertencentes à 6 propriedades situadas em 6 municípios da micro-regiäo de General Salgado. A técnica empregada para a dosagem de anticorpos para o vírus da Estomatite Vesicular foi a soroneutralizaçäo em microplacas de 96 orifícios, utilizando a cepa Indiana 1 Costa Rica/72 com título de 10.6,0 DICT50/50uL. As células utilizadas foram as da linhagem de Rim de Macaco Verde Africano (VEROCCL 81), provenientes do American Type Cell Colection (ATCC). O título de anticorpos de cada amostra de soro, foi calculado como a recíproca da maior diluiçäo do soro expresso em log10, que protegeu 100 por cento da monocamada celular. Foram consideradas positivas as amostras com título superior a 1,6 log10 (1/40). Resultados: Das 1099 amostras de soro analisadas, 28 (2,6 por cento) foram positivas ao vírus tipo Indiana 1 da Estomatite Vesicular. Em 5 das 6 propriedades avaliadas, foram encontrados animais reagentes ao vírus; em uma das propriedades, situada no município de Turiúba, näo foram encontrados animais reagentes. Conclusöes: Esta avaliaçäo mostrou que anticorpos para o vírus da Estomatite Vesicular nos bovinos criados na micro-regiäo de General Salgado, mesmo sem sinais da doença. Tal fato indica que pode estar ocorrendo uma estimulaçäo antigênica provocando resposta humoral. Sendo assim é necessário a realizaçäo de estudos para se determinar o sítio de permanência do vírus.

Erradicação do herpesvírus bovino - 1 (BHV-1) de um rebanho bovino leiteiro em manejo semi-intensivo / Eradication of Herpesvirus Bovine-1 (BHV-1) from a dairy cattle herd with a semi-intensive management

Com o objetivo de erradicar o BHV-1 de um rebanho bovino leiteiro de alto valor genético sem a utilização de vacina, foi realizado um exame sorológico prévio em 154 animais, onde constatou-se 15,6% de reagentes ao BHV-1. A técnica utilizada foi a soroneutralização em microplacas. Dentre os animais soropositivos, as vacas vazias foram descartadas imediatamente e as prenhes isoladas e descartadas após o parto. Os bezerros apresentaram anticorpos colostrais até os seis meses de idade, motivo pelo qual não foram descartados; nos bezerros de 6 a 12 meses de idade e nas novilhas não foram diagnosticados animais soropositivos. Os animais foram examinados trimestralmente, por 21 meses, seguido de mais duas coletas semestrais. As vacas secas, prenhes e em lactação, soropositivas, revelaram ser a fonte de infecção do BHV-1. A manutenção de rebanho livre é possível, desde que sejam adotadas medidas como a utilização de sêmen livre de BHV-1, realização de quarentena no ingresso de animais e exames sorológicos anuais visando impedir a reintrodução do vírus. Com o conjunto destas medidas adotadas, a fazenda encontra-se há 18 meses livre do BHV-1