Comparación de métodos de extracción de ADN de Giardia spp. medidos por PCR convencional / Comparison of methods of DNA extraction from Giardia spp. measured by conventional PCR

RESUMEN Objetivos . Comparar diferentes métodos de extracción de ADN a partir de quistes y trofozoítos de Giardia spp. mediante la técnica de reacción en cadena de la polimerasa (PCR) convencional. Materiales y métodos. Se aislaron quistes de Giardia spp. a partir de 65 muestras coprológicas procedentes de hospitales de referencia nacional, obteniéndose una carga promedio de 5x104 parásitos. Asimismo, se cultivaron trofozoítos de Giardia intestinalis (ATCC® 30957™) obteniéndose una carga parasitaria de 5x106. Se compararon once métodos de extracción para quistes y seis para trofozoítos. La concentración y pureza del ADN extraído se determinó por espectrofotometría y el rendimiento de la extracción se evaluó mediante la amplificación de los genes beta giardina (bg) y glutamato deshidrogenasa (gdh) por PCR semi-anidada. Resultados. Se observó que el método I mostró la mayor concentración de ADN a partir de quistes (12,24 ng/µL), pureza (1,4) y mejor rendimiento (100% amplificación bg, 60% gdh) en comparación con los otros métodos evaluados. En el caso de los trofozoítos el método que no tuvo pretratamientos presentó la mayor concentración de ADN, pureza y rendimiento (26,56 ng/µL; 1,85; 100% amplificación bg y gdh). Conclusiones. Los pretratamientos mecánicos, de choque térmico y enzimáticos son necesarios para la ruptura de la pared quística de Giardia spp., siendo el marcador molecular bg de mayor rendimiento para detección de ADN de quistes. Los trofozoítos no requieren pretratamientos para lograr resultados satisfactorios. Se cuenta con una metodología reproducible para la extracción de ADN de Giardia spp. a partir de cualquier estadio evolutivo.

ABSTRACT Objectives. To compare different methods of DNA extraction from cysts and trophozoites of Giardia spp. using the conventional polymerase chain reaction (PCR) technique. Materials and Methods. Cysts of Giardia spp. were isolated from 65 coprological samples from national reference hospitals, obtaining an average load of 5x104 parasites. In addition, Giardia intestinalis trophozoites (ATCC® 30957™) were cultured obtaining a 5x106 parasitic load. Eleven extraction methods for cysts and six for trophozoites were compared. The concentration and purity of the extracted DNA were determined by spectrophotometry and the extraction yield was assessed by amplification of the ß-giardin (bg) and glutamate dehydrogenase (gdh) genes with a semi nested PCR assay. Results. It was observed that method 1 showed the highest concentration of DNA from cysts (12.24 ng/µL), purity (1.4) and best performance (bg: 100% amplification; gdh: 60% amplification) compared to the other methods evaluated. In the case of trophozoites, the method without pre treatment showed the highest level of DNA concentration, purity, and yield (26.56 ng/µL; 1.85; 100% amplification of bg and gdh, respectively). Conclusions . Mechanical, thermal shock, and enzymatic pre-treatments are necessary for the rupture of the cystic wall of Giardia spp. making it the highest-yielding bg molecular marker for detecting cyst DNA. Trophozoites do not require pre-treatment to achieve satisfactory results. A reproducible methodology for the extraction of DNA from Giardia spp. from any evolutionary stage is available.

Evaluación de métodos de concentración y purificación de Giardia spp. a partir de muestras coprológicas / Evaluation of methods of concentration and purification of Giardia spp. from coprological samples

RESUMEN El objetivo del estudio fue comparar diferentes métodos de concentración para recuperar la mayor cantidad de quistes de Giardia spp. a partir de muestras coprológicas. Se analizaron 100 muestras procedentes de hospitales de referencia nacional y se aplicaron cuatro métodos parasitológicos: concentración por sedimentación espontánea en tubo (TSET), Faust, gradiente de sucrosa de una fase y gradiente de sucrosa de dos fases. Se encontró que el método de gradiente de sucrosa de dos fases alcanzó resultados significativamente mejores en concentración de quistes (121 903 quistes/ml) y cantidad de detritos (6%), en comparación con los métodos de Faust (35 355 quistes/ml), concentración por sedimentación espontánea en tubo (20,145 quistes/ml) y gradiente de sucrosa de una fase (18 702 quistes/ml). Se concluye que el método más eficaz para la concentración y purificación de quistes de Giardia spp. a partir de muestras coprológicas es el método de gradiente de sucrosa de dos fases, lo que facilitaría los cultivos in vitro de Giardia spp.

ABSTRACT The aim of this study was to compare different methods of concentration to recover the largest number of Giardia spp. cysts from coprological samples. One hundred (100) samples from national reference hospitals were analyzed and four parasitological methods were applied: spontaneous tube sedimentation concentration (TSET), Faust, single-phase sucrose gradient, and two-phase sucrose gradient. The two-phase sucrose gradient method was found to achieve significantly better results in cyst concentration (121,903 cysts/ml) and amount of debris (6%), compared to Faust methods (35,355 cysts/ml), spontaneous tube sedimentation concentration (20,145 cysts/ml), and single-phase sucrose gradient (18,702 cysts/ml). It is concluded that the most effective method for the concentration and purification of Giardia spp. cysts from coprological samples is the two-phase sucrose gradient method, which would facilitate in vitro culture of Giardia spp.

Infestación ocular por plerocercoide de Spirometra mansonoides: primer reporte en el Perú / Ocular infestation by plerocercoid of Spirometra mansonoides: first case report in Perú

La plerocercoidiosis es una zoonosis parasitaria producida por la larva plerocercoide de Spirometra. Esta larva migra por el tejido de la pared intestinal, mediante la ruta subcutánea y puede llegar a diferentes áreas del cuerpo humano como la cabeza, el cerebro y la órbita ocular. Se reporta el caso de un varón de 45 años procedente de la Amazonía peruana, quien presentó ardor asociado con edema y hemorragia conjuntival en el borde ocular externo del ojo derecho, durante once meses. Se observó un helminto localizado en la cavidad orbitaria derecha, el cual se extrajo y por estudios morfológicos e histopatológicos se identificó como Spirometra mansonoides de localización ocular el que se reporta por primera vez en el Perú.

Plerocercoidosis is a parasitic zoonosis caused by plerocercoid larvae of the genus Spirometra. The larvae migrate through the intestinal wall tissue, by subcutaneous route and can reach different areas of the body like the head, the brain and the eye socket. A case is reported of a 45 year-old man from the Peruvian Amazon with burning sensation associated with conjunctival edema and hemorrhage in the outer eye border of the right eye for eleven months. A localized worm in the right orbital cavity was observed, which was extracted. Morphological and histopathological studies identified it as Spirometra mansonoides localized in the eye, which is the first case reported in Perú.

Manual de procedimientos de laboratorio para el diagnóstico de los parásitos intestinales del hombre / Manual of laboratory procedures for the diagnosis of intestinal parasites of man

El documento es una compilación de los métodos evaluados más usados y útiles para el diagnóstico de las enteroparasitosis, que pueden realizarse en la Red nacional de laboratorios en Salud Pública del país, así como en aquellos laboratorios con infraestructura, equipos e instrumental mínimos.

Determinación de indicadores entomológicos y fuentes de alimentación de triatominos en el centro poblado El Ron, distrito de Cajaruro, provinciaa de Utcubamba, Amazonas-Perú / Determination of entomological indicators and feeding patterns of triatomine at the town center El Ron, district Cajaruro, province of Utcubamba, Amazonas-Peru

Panstrongylus herreri (Wygodzinsky, 1948), es considerado uno de los principales vectores de Trypanosoma cruzi, agente causal de la Enfermedad de Chagas en la región nororiental del Perú. Siendo escasos los estudios y/o reportes de indicadores entomológicos de vectores de esta enfermedad en nuestro país. El objetivo del estudio fue determinar la presencia de triatominos, sus indicadores entomológicos y fuentes de alimentación en el centro poblado el Ron, distrito de Cajaruro, provincia de Utcubamba, Amazonas. El diseño del estudio fue descriptivo, de corte transversal. Se realizó un muestreo al 33 por ciento del centro poblado El Ron, siendo investigadas las localidades de: Las Tres Marías, El Ron y San Antonio. Se capturaron 139 especímenes de Panstrongylus herreri, distribuidos en 73 adultos y 66 ninfas de diferentes estadios; 15 ejemplares presentaron infección natural con Trypanosoma cruzi. Los principales indicadores entomológicos analizados fueron: índice de Infestación domiciliaria: 44.0 por ciento, índice tripano triatominico: 10.8 por ciento e índice de colonización: 54.4 por ciento. Los datos obtenidos sugieren que la proporción de infestación domiciliaria y colonización de P. herreri están cerca del 50 por ciento. Asimismo se confirmó que el 10.8 por ciento de los triatominos presentaban infección con T. cruzi. La principal fuente de alimentación encontrada fue el cobayo, 64.6 por ciento, seguida de la fuente de alimentación múltiple humano/cobayo con 62.5 por ciento. Basados en estos hallazgos, es que concluimos que los habitantes de este centro poblado presentan un alto riesgo de infección para la enfermedad de Chagas...

Panstrongylus herreri (Wygodzinsky, 1948) is considered one of the main vectors of Chagas disease in the northeastern region of Peru. There are a few studies or reports of entomological indicators vectors of this disease in our country. The aim of the study was to determine the presence of triatominos, their entomological indicators and the feeding patterns in the town center El Ron, Cajaruro district, province of Utcubamba, Amazonas. The study design was cross-sectional descriptive. Sampling 33 per cent of the population center Ron was performed, being investigated localities: Las Tres Marias, El Ron and San Antonio. 139 Panstrongylus herreri specimens were captured, distributed in 73 adults and 66 nymphs of different stages; 15 specimens showed natural infection with Trypanosoma cruzi. The entomological indicators analyzed were: domiciliary infestation index: 44.0 per cent, trypano-triatominico Index 10.8 per cent and colonization Index, 54.4 per cent. The data obtained suggest that the proportion of house infestation and colonization of P. herreri are about 50 per cent. It was also confirmed that 10.8 per cent of the triatomines were infected with T. cruzi. The main feeding source found was the guinea pig, 64.6 per cent, followed by the source of human/guinea pig feeding multiple, 62.5 per cent. Based on these findings, we conclude that the inhabitants of this town center are at high risk of infection for Chagas disease...