Comparison of microscopic agglutination test and indirect elisa in the diagnosis of bovine leptospirosis / Comparação da soroaglutinação microscópica e elisa indireto para o diagnóstico da leptospirose bovina

The objective of this research was to compare the results obtained by the Microscopic Agglutination Test (MAT) and indirect ELISA using outer membrane proteins (OMP) of the serovar Hardjo as antigen (ELISA/OMP-Hardjo). Ninety-three samples of blood serum from 3 to 6-year-old cattle of both sexes with no history of vaccination for leptospirosis were used. To perform the MAT, live cultures of 14 Leptospira serovars representing 11 serogroups of L. interrogans were used as antigen. Outer membrane proteins (OMP) of the serovar Hardjo (ELISAOMP/ Hardjo) were used as the ELISA antigen. Of the 93 samples tested by MAT, 37 (40%) were positive. None of the samples testing positive in the MAT were negative in the ELISA. Sensitivity was 100% and specificity 64%. A comparison of the MAT and ELISA-OMP/Hardjo tests showed 78% agreement and the Kappa index was 0.58 (p<0.0001). The ELISA-OMP/Hardjo proved to be a sensitive test for the diagnosis of bovine leptospirosis, indicating its potential use as a screening test and for epidemiological studies. The titration results obtained by MAT and by optical density (OD) in the ELISA-OMP/Hardjo test showed a positive correlation, and as the antibody titers in the MAT increased, so did the OD in ELISA, demonstrating the correspondence between the tests evaluated here.

O objetivo desta pesquisa foi comparar os resultados obtidos pela Soroaglutinação Microscópica (SAM) e pelo ELISA indireto empregando proteínas de membrana externa (PME) do sorovar Hardjo como antígeno (ELISA/PME-Hardjo). Utilizou-se 93 amostras de soro sanguíneo de bovinos de ambos os sexos com idade entre três a seis anos e sem histórico de vacinação para leptospirose. Para a realização da SAM utilizou-se como antígeno culturas vivas de 14 sorovares de Leptospira, representando 11 sorogrupos de L. interrogans. Empregou-se como antígeno do ELISA, proteínas de membrana externa (PME) do sorovar Hardjo (ELISA-PME/Hardjo). Das 93 amostras testadas na SAM, 37 (40%) foram positivas. Já o ELISA-PME/Hardjo identificou 57 (62%) positivas e 36 (38%) negativas. Nenhuma amostra positiva na SAM foi negativa no ELISA. A sensibilidade foi de 100% e especificidade 64%. A comparação dos testes de SAM e ELISA-PME/Hardjo demonstrou concordância de 78% e índice Kappa de 0,58 (p<0,0001). O ELISAPME/ Hardjo revelou-se como um teste sensível para o diagnóstico da leptospirose bovina, indicando seu uso potencial como exame de triagem e para estudos epidemiológicos. A correlação dos resultados obtidos pela titulação na SAM e DO no ELISA-PME/Hardjo foi positiva, sendo que a medida que os títulos de anticorpos na SAM aumentaram, a DO no ELISA também aumentou, demonstrando haver correspondência entre os exames avaliados.

Padronização e validação de elisa indireto para o diagnóstico da leptospirose bovina / Standardization and validation of elisa for diagnosis of bovine leptospirosis

A leptospirose é uma zoonose que causa sérios danos à saúde dos animais. Por se tratar de uma das doenças de maior impacto econômico, o correto diagnóstico e vigilância epidemiológica são fundamentais para o controle da infecção. Objetivou-se padronizar e validar o teste de ELISA indireto empregando proteínas de membrana externa (PME) do sorovar Hardjo como antígeno (ELISA-PME/Hardjo), tendo o teste de Soroaglutinação Microscópica (SAM) como referência. O ELISA-PME/Hardjo foi padronizado utilizando-se amostras de soro de 15 bovinos positivos e 15 negativos no exame de SAM. A PME/Hardjo foi avaliada nas concentrações de 0,35 µg/µL, 0,17 µg/µL, 0,08 µg/µL e 0,04 µg/µL. As amostras de soro foram testadas nas diluições 1:50, 1:100, 1:500 e 1:1000, e o conjugado anti IgG 1:5000 e 1:10000. A validação do teste foi feita utilizando-se 218 amostras de soro bovino. A padronização do ELISA-PME/Hardjo indicou que a melhor concentração protéica para sensibilização da placa foi de 0,08 µg/µL, diluição do anticorpo primário 1:50 e do conjugado anti-IgG 1:5000. Das 218 amostras submetidas ao teste de SAM, 86 (39%) foram positivas, e 132 (61%) negativas. Já o ELISA-PME/Hardjo identificou 121 (55%) amostras positivas e 97 (45%) negativas. A sensibilidade foi de 100% e especificidade 73%. A comparação dos testes de SAM e ELISA demonstrou concordância de 0,83% e índice Kappa de 0,68 (p<0,0001). O ELISA-PME/Hardjo mostrou ser um teste sensível, indicando seu uso potencial como exame de triagem no diagnóstico da leptospirose bovina.

Leptospirosis is a zoonotic disease that causes serious health risks to animals. It is a disease of high economic impact, therefore the correct diagnosis and surveillance are essential to control infection. The aim of this study was to standardize and validate an indirect ELISA using outer membrane proteins (OMPs) of serovar Hardjo as the antigen of the test (ELISA-OMP/Hardjo), using the microscopic agglutination test (MAT) as a reference. The ELISAOMP/Hardjo was standardized using 15 serum samples from positive animals and 15 negative in the MAT. The OMP / Hardjo was evaluated at concentrations of 0.35 µg / µL, 0.17 µg / µL, 0.08 µg / µL and 0.04 µg / µL. Serum samples were tested at dilutions 1:50, 1:100, 1:500, 1:1000, and anti IgG conjugate in 1:5000 and 1:10000. The validation of the test was performed using 218 serum samples. The standardization of ELISA-OMP/Hardjo indicated that the best protein concentration for sensitization of the plate was 0.08 µg / µL, 1:50 dilution of primary antibody and conjugated anti-IgG 1:5000. Of the 218 samples tested in MAT, 86 (39%) were positive and 132 (61%) negative. ELISA-OMP/Hardjo already identified 121 (55%) positive samples and 97 (45%) negative. The sensitivity was 100% and specificity 73%. Comparison of MAT and ELISA tests showed concordance of 0.83% and Kappa of 0.68 (p <0.0001). The ELISA-OMP/Hardjo proved to be a sensitive test, indicating its potential as a screening tool in the diagnosis of bovine leptospirosis.