Thermotolerance of Histoplasma capsulatum at 40 °C predominates among clinical isolates from different Latin American regions

ABSTRACT The yeast phase of 22 Histoplasma capsulatum clinical isolates from Mexico, Argentina, Colombia, and Guatemala and three reference strains, one from Panama and two from the United States of America (USA), were screened for thermosensitivity characteristics using different analyses. Growth curves at 0, 3, 6, 12, 24, and 30 h of incubation at 37 and 40 °C, the growth inhibition percentage at 40 °C, and the doubling time at 37 and 40 °C were determined for all yeasts studied. Most of the isolates examined exhibited thermotolerant phenotypes at 40 °C, whereas a thermosensitive phenotype at 40 °C was only detected in the Downs reference strain from the USA. Growth inhibition values lower than 33.8% supported the predominance of the thermotolerant phenotype at 40 °C. The doubling time means found for the different isolates were 5.14 h ± 1.47 h at 37 °C and 5.55 h ± 1.87 h at 40 °C. This is the first report to underscore the predominance of thermotolerant and delayed doubling time phenotypes in H. capsulatum clinical isolates from different regions of Latin America.

Multiplex polymerase chain reaction as an improved method for screening Histoplasma capsulatum mating types

Histoplasmosis is a systemic mycosis infection caused by Histoplasma capsulatum, a heterothallic ascomycete. The sexual reproduction of this fungus is regulated by the mating type (MAT1) locus that contains MAT1-1 and MAT1-2 idiomorphs, which were identified by uniplex polymerase chain reaction (PCR). This study aimed to optimise single-step multiplex PCR for the accurate detection of the distinct mating types of H. capsulatum. Among the 26 isolates tested, 20 had MAT1-1 genotype, while six showed MAT1-2 genotype, in agreement with the uniplex PCR results. These results suggest that multiplex PCR is a fast and specific tool for screening H. capsulatum mating types.

Biological activity of the mite Sancassania sp. (Acari: Acaridae) from bat guano associated with the pathogenic fungus Histoplasma capsulatum

Mites and the mammal pathogenic fungus Histoplasma capsulatum are the major components of bat guano microbiota. Interactions between mites and H. capsulatum were evaluated under laboratory conditions. Acarid mites, mainly Sancassania sp., were the most abundant microarthropod in the sampled guano of the Mexican bat Tadarida brasiliensis mexicana and, based on its morphology, Sancassania sp. was similar to the cosmopolitan species Sancassania sphaerogaster. The mycophagous and vectoring activities of this mite were tested for H. capsulatum and two other fungal species, Sporothrix schenckii (pathogenic) and Aspergillus sclerotiorum (non-pathogenic). S. ca. sphaerogaster was able to reproduce in H. capsulatum and S. schenckii colonies, multiplying in great numbers under controlled fungal mycelial-phase culture conditions. H. capsulatum colonies were completely destroyed after 14 days of in vitro interaction with mites. In contrast, S. ca. sphaerogaster did not reproduce in A. sclerotiorum cultures. S. ca. sphaerogaster was found vectoring H. capsulatum, but not the two other fungal species studied.

The interaction between Histoplasma capsulatum cell wall carbohydrates and host components: relevance in the immunomodulatory role of histoplasmosis

Histoplasma capsulatum is an intracellular fungal pathogen that causes respiratory and systemic disease by proliferating within phagocytic cells. The binding of H. capsulatum to phagocytes may be mediated by the pathogen's cell wall carbohydrates, glucans, which consist of glucose homo and hetero-polymers and whose glycosydic linkage types differ between the yeast and mycelial phases. The ±-1,3-glucan is considered relevant for H. capsulatum virulence, whereas the ²-1,3-glucan is antigenic and participates in the modulation of the host immune response. H. capsulatum cell wall components with lectin-like activity seem to interact with the host cell surface, while host membrane lectin-like receptors can recognize a particular fungal carbohydrate ligand. This review emphasizes the relevance of the main H. capsulatum and host carbohydrate-driven interactions that allow for binding and internalization of the fungal cell into phagocytes and its subsequent avoidance of intracellular elimination.

Actualidades inmunológicas y moleculares sobre la epidemiología de la histoplasmosis en Morelos, México / Molecular and immunologic updates on the epidemiology of histoplasmosis in the state of Morelos, Mexico

El objetivo del presente trabajo fue analizar y actualizar los datos de distribución de la micosis sistémica histoplasmosis, en el estado de Morelos. Con base en los estudios inmunoepidemiológicos, las actividades ocupacionales de la población rural expuesta a riesgo de infección y los resultados preliminares de epidemiología molecular, que han aportado hallazgos sobre el polimorfismo genético y la dispersión del agente etiológico en la naturaleza, se reunieron datos que permitirán proponer criterios de prevalencia de la enfermedad y trazar un mapa epidemiológico de Morelos.

Levaduras asociadas con el hábitat natural de Histoplasma capsulatum en Guerrero, México / Yeasts associated to natural habitat of Histoplasma capsulatum in Guerrero, Mexico

Objetivo: En el presente trabajo, primero que sobre el tema se ha realizado en México, se registran las especies de levaduras encontradas en diferentes sustratos colectados en espacios cerrados y abiertos (que representan los nichos ecológicos en que se desarrolla Histoplasma capsulatum var. capsulatum). Material y métodos: Los sustratos a partir de los cuales se hizo el aislamiento de levaduras se obtuvieron en distintas localidades de los municipios de Quechultenango y Olinalá, en el estado de Guerrero. Resultados y discusión: De guano de murciélago muestreado en grutas y cuevas se aislaron Candida Catenulata, C. ciferrii, C famata, C. guillermondii y Rhodotorula spp.; del suelo de una mina únicamente se aisló C. ciferril. Las especies C. albicans, C. ciferrii y C. tropicalis se aislaron de suelo con excretas de gallináceas, y C. famata, Cryptococcus albidus var. albidus, Trichosporon beigelii t Trichosporon spp. de suelo con excretas de gallo. Del intestino de murciélagos insectívoros únicamente se aisló C. famata, y, de murciélagos polinívoros C. lipolytica, Cr. abidus var. albidus y Trichosporon spp. De cada una de estas especies se mencionan sus características distintivas, así como los diferentes ambientes y sustratos de los cuales han sido aisladas

Hongos filamentosos asociados con el hábitat natural de Histoplasma capsulatum en Guerrero, México / Filamentous fungi associated to natural habitat of Histoplasma capsulatum in Guerrero, Mexico

Objetivo: Se determinaron los hongos filamentosos asociados a los ambientes y sustratos de donde se ha aislado Histoplasma capsulatum, a partir de muestras de guano e intestino de murciélagos, así como de excretas de aves de corral Material y métodos: Las muestras procedieron de varias grutas y otras localidades de Guerrero, México, principalmentes de juxtlahuaca y Olinalá. Resultados y discusión: Del guano de murciélago se aislaron, además de H. capsulatum, ascomicetas como Aphanoascus fulvescens, Gymnascella citrina, Gymnoascus dankaliensis (Onygenales) y Cheatomidium fimeti (Sordariales); Hongos conidiales, como Aspergillus flavo-furcatis, A. terreus, A. terreus var. aureus, varias especies no determinadas de Penicillium, Malbranchea aurantiaca y Sporothrix sp. De las excretas de gallo de pelea se aisló Phoma sp. Del intestino de murciélagos insectívoros, hematófagos, nectarívoros y frugívoros se aislaron varias especies de hongos conidiales, como Aspergillus candidus, A. flavofurcatis, A. sulphureus, A. sydowii, A. terreus, A. versicolor, Apergillus sp., M. aurantiaca, Gliomastis murorum y Scopulariopsis sp.; y sólo un ascomicete, Ch. fimeti. Se comentan ciertas propiedades biológicas de los hongos encontrados, la mayoría de ellos registrados por primera vez por estos sustratos y ambientes en México

I. El murciélago como reservorio y responsable de la dispersión de Histoplasma capsulatum en la naturaleza. II. Papel de los marcadores moleculares del hongo aislado de murciélagos infectados / I. Bats as reservoirs and responsible of histoplasma capsulatum spreading in nature. II. the role of molecular markers of the fungus isolated from infected bats

Objetivo: El presente trabajo refiere datos acerca de los aislamientos positivos y caracterización de cepas de Histoplasma capsulatum en murciélagos infectados y capturados en los estados de Guerrero, Morelos y Oaxaca: Pteronotus parnellii; P. dauyi; Myotis californicus; Mormoops megalophylla; Natalus stramineus; Artibeus hirsutus; Leptonycteris nivalis y L. Curasoae. Aportaciones sobre el aislamiento del hongo en murciélagos infectados: Para el estado de Oaxaca se aportan nuevos registros de infección de murciélagos por H. capsulatum en P. parnellii, P. dauyi y L. curasoae, siendo las dos últimas especies nuevos registros para el mundo. Los datos indican un alto riesgo de infección en murciélagos que utilizan cuevas con bóvedas bajas, relieve accidentado y abundantes depósitos de guano. Polimorfismo genético de H. capsulatum aislado de murciélagos infectados: Se analizaron los patrones polimórficos del DNA del hongo aislado de doce mulciélagos infectados, capaturados en Guerrero y Morelos, utilizando el polimirfismo del DNA amplificado al azar por la reacción en cadena de la polimerasa (RAPD-PCR), método conocido por su alta sensibilidad. Se encontraron dos patrones polimórficos diferentes en los doce aislados de H. capsulatum obtenidos de murciélagos infectados, que podrían representar marcadores moleculares del hongo para las áreas geografícas estudiadas, además de asociarse con los desplazamientos de los murciélagos en estas áreas. Conclusiones: Se sugiere el papel de los murciélagos como reservorios y responsables de la dispersión de H. capsulatum en la naturaleza, en relación al uso de refugios permanentes (cuevas), a su hábitos alimentarios, y sus desplazamientos y migraciones

Infección natural por Histoplasma capsulatum en animales silvestres / Natural infection by Histoplasma capsulatum in wild animals

Objetivo: El presente trabajo sintetiza la información obtenida a la fecha sobre aislamiento, infección y enfermedad por Histoplasma capsulatum en fauna silvestre. Registros en mamíferos silvestres: Se ha reportado infección en varias especies correspondientes a 30 géneros, 12 familias y seis órdenes de mamíferos silvestres, 37 de las especies citadas pertenecen al orden Chiroptera (murciélagos)

Tipificación de aislados clínicos de Histoplasma capsulatum por métodos fenotípicos y genotípicos / Typing of Histoplasma capsulatum clinical isolates by phenotype and genotype methods

Objetivo: El presente trabajo plantea el estudio fenotípico y genotípico de cinco aislados de Histoplasma capsulatum obtenidos de pacientes mexicanos con hostoplasmosis asociada a síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA), con procedencia geográfica bien establecida. Material y métodos: Se utilizaron para relacionar estos aislados clínicos, electrofóresis en geles de poliacrilamida dodecil sulfato de sodio (SDS-PAGE) y electroinmunotransferencia (EIT) para la fenotipificacion, y el polimorfismo del DNA amplificado al azar por la reacción en cadena de la polimerasa (RAPD-PCR) para la genotificación. Las relaciones enter los patrones electoforéticos y polimórficos de todos los aislado se procesaron en el programa SPSS/PC+ versión 2.3. Resultados y discusión: Por SDS-PAGE se observó que todos los aislados se relacionaron en un 86 por ciento. Por EIT se evidenció que todos los aislados revelaron tres bandas de 43, 28 y 18 kDa con suero inmune específico. Por RAPD-PCR, cuatro aislados se relacionaro en 94 por ciento y el último (EH-319) presentó 77 por ciento de relación con los anteriores. Conclusión: El análisis por RAPD.PCR permitió discriminar ligeras diferencias entre los aislados de pacientes mexicanos con histoplasmosis asociada a SIDA, en comparación con los métodos de caracterizacion fenotípica (SDS-PAGE y EIT)

Genotipificación de cepas de Histoplasma Capsulatum aisladas de pacientes con histoplasmosis asociada al SIDA, mediante el polimorfismo en la longitud de los fragmentos de restricción / Genotypic characterization of Histoplasma capsulatum isolates from AIDS associated-histoplasmosis-patients by using restriction fragment langth polymorphysms (RFLP)

Introducción: La histoplasmosis es una de las más importantes micosis asociada al síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA) en México. En este trabajo se efectuó la caracterización genotípica por el polimorfismo en la longitud de los fragmentos de restricción (RFLP) del DNA total de 31 cepas de Histoplasma capsulatum de pacientes con histoplasmosis asociada a SIDA, y su comparación con cepas de referencia de México, Panamá y Estados Unidos de America (EUA). Material y métodos: Las cepas fueron plenamente identificadas como H. capsulatum mediante su morfología colonial y microscópica, conversión de micelio a levadura y repoducción de exoantígenos probados por inmunodifusión con sueros específicos. El DNA total de las cepas fue obtenido a partir de micelio a levadura y producción de exoantígenos probados por inmunodifusión con sueros específicos. El DNA total de las cepas fue obtenido a partir de micelio macerado con nitrógeno líquido e incubado en presencia de proteinasa K y dodecilsulfato de sodio. El DNA fue diferido con la enzima HaeIII y los productos separados por electroforesis en agarosa y teñidos con bromuro de etidio. Utilizando el programa SPSS/PC+ se construyó un dendrograma a fin de establecer las relaciones polimórficas entre las cepas. Resultados y discusión: Las cepas formaron 10 grupos según sus perfiles de RFLP, obsevándose dos perfiles principales A y C con 33.3 y 29.1 por ciento de las cepas, respectivamente. Los perfiles restantes estuvieron representados por cepas únicas, a excepción del perfil J con dos cepas que mostraron un patrón similar al de la cepa Downs (clase 1, de EUA), No se encontró ningún perfil semejante a los de las cepas prevalentes en EUA o Panamá. El dendrograma mostró una relación de 85 por ciento entre las cepas de los perfiles de mayor prevalencia (A y C) asimismo del perfil J, además de las cepas Downs y FLs1 de los EUA. Los demás aislados con perfiles únicos se relacionaron en un 75 por ciento con las otras cepas

Fagocitosis opsónica de Histoplasma capsulatum / Opsonic phagocytosis of Histoplasma capsulatum

Objetivo: El presente trabajo hace una breve revisión de la escasa literatura existente sobre el papel que desempeñan los receptores Fcç participan en la fagocitosis de levaduras del hongo Histoplasma capsulatum por fagocitos humanos y murinos. Conclusiones: Resultados de diferentes ensayos sugieren que los receptores Fcç participan en la etapa de internalización, aunque parecen no ser los receptores preferenciales para la entrada del hongo a las células fagocíticas murinas

Fagocitosis no opsónica, lectinofagocitosis de Histoplasma capsulatum / Lactinophagocytosis of Histoplasma capsulatum

Objetivo: En este artículo se revisan algunos aspectos relevantes de la fagocitosis no opsónica de microorganismos intracelulares con especial énfasis en Histoplasma capsulatum, considerando que la participación de los mecanismos no opsónicos influyen en el destino final de los microorganismos dentro de los fagocitos. Introducción: Numerosos microorganismos intracelulares invaden y sobreviven en el interior de las células fagocíticas gracias a los medios utilizados para su internalización así como a la presencia de moléculas de superficie o productos metabólicos que neutralizan o inhiben los mecanismos microbicidas propios de los fagocitos del huésped. Participación de moléculas glicosiladas, de integrinas, y de otras moléculas, en la invasión de microorganismos al macrófago: La internalización de los microorganismos a través de los receptores independientes de opsoninas de los macrófagos generalmente facilita a la invasión de éstos, ya que algunos receptores no activan el metabolismo oxidativo, de ahí que el reconocimiento, entre la célula a ser infectada y el microorganismo, mediaso por carbohidratos y estructuras tipo lectinas constituye uno de los mecanismos de invasión más exitosos. Conclusión: El conocer estas alternativas de invasión favorecería entender mejor la patogénesis de muchas enfermedades intracelulares que representan importantes problemas de salud, como la histoplasmosis, la tuberculosis y la leishmaniasis, entre otras

Inmunolocalización del complejo polisacárido-proteína en ultraestructuras de la fase micelial y levaduriforme de Histoplasma capsulatum / Immunolocalization of the polysaccharide-protein complex (PPCD-Histo) in the Histoplasma capsulatum mycelium and yeast phase ultrastructures

Introducción: El empleo de un antígeno parcialmente purificado denominado complejo polisacárido-proteína desproinizado de Histoplasma capsulatum (CPPD-Histo), utilizado para discriminar la histoplasmosis de diversas micosis pulmonares y otras enfermedades respiratorias en métodos inmunodiagnósticos de alta sensibilidad, ha sido motivo de estudio desde hace años por nuestro grupo de investigación: Objetivo: En este trabajo se planteó conocer la ubicación celular preferencial del antígeno CPPD-Histo, en las diferentes formas y estructuras de las fases micelial y levaduriforme del hongo. Material y métodos: El estudio se desarrolló mediante inmunolocalización con marcaje de oro coloidal para microscopia electrónica, usando anticuerpos primarios CPPD-Histo específicos. Resultados y discusión: La localización en microscopia electrónica mostró mayor concentración del CPPD-Histo en las zonas de mayor grosor de la capa externa de la pared celular de las proyecciones digitiformes de macroconidios, poco marcaje en pared celular de hifas, y una distribución dispersa de la marca en las levaduras. Conclusión: La pared celular de los macroconidios de la fase micelial del hongo es la estructura fúngica con mayor concentración del antígeno CPPD-Histo

Organización de la colección de cepas de Histoplasma capsulatum del Laboratorio de Inmunología de Hongos, Facultad de Medicina, UNAM / Organization of the Histoplasma capsulatum strains collection from the laboratorio de Inmunologia de Hongos, Facultad de Medicina, UNAM

Objetivo: El presente trabajo muestra la organización, los lineamientos y las particularidades de la colección de cepas de Histoplasma capsulatum del laboratorio de Inmunología de Hongos del Departamento de Microbiología y parasitología, de la Facultad de medicina, UNAM. Características de la colección: Está formada por primoaislamientos del hongo a partir de diversas fuentes y distintas procedencias geográficas dentro de la República Mexicana, además de cepas de la república Mexicana, además de cepas de referencia de otros países, características que destacan el aspecto especial y selecto de esta colección

Histoplasmosis / Histoplasmosis

Ciertas actividades ocupacionales relacionadas con la espeleología, la arqueología la antropología, la geología y la biología, exponen a sus profesionales a reisgos de salud, entre ellos, el de adquirir enfermedades con la histoplasmosis, la cual es la más importante micosis sistémica en el continente americano. Su agente etiológico es el hongo patógeno, Histoplasma capsulatum, que se distribuye en nichos ecológicos especiales donde prevalecen las condiciones propicias para su crecimiento. La infección tiene inicio con la inhalación de microesporas (microconidios) y pequeños fragmentos de hifas, por lo que hay una alta morbilidad entre los individuos que laboran o visitan lugares contaminados. Afecta de modo crítico a algunos tipos de trabajadores rurales, como campesino recolectores de guano, y particularmente peones limpiadores de minas. En México, este parásito ha sido encontrado en recintos cerrados como minas, cuevas, pozos, casa u otras construcciones abandonadas, asimismo en espacios abiertos donde existen excretas de murciélagos o de aves. Los murciélagos son a menudo infectados y constituyen uno de los posibles reservorios del hongo en la naturaleza. Con frecuencia una mayor exposición al hongo se debe a la invasión indebida del hábitat y refugio natural de diferentes especies de animales. En el presente trabajo se recomiendan medidas de seguridad y prevención de la histoplasmosis para individuos cuyas prácticas laborales los exponen a un alto riesgo de infección

Producción de antígenos fúngicos autóctonos en el inmunodiagnóstico de micosis en México / Production of fungal antigens from local strains for the immunodiagnosis of mycoses in Mexico

La elaboración de antígenos fúngicos con buena reactividad y especificidad son indispensables para las pruebas inmunológicas que son útiles en el diagnóstico y pronóstico de las enfermedades micóticas. Las diferencias antigénicas de cepas provenientes de diversas regiones plantean la conveniencia de conocer las características morfológicas, antigénicas y moleculares. Este documento presenta datos de antígenos crudos y purificados de Histoplasma capsulatum, Coccidioidis immitis y paracoccidioides brasiliensis que son los de mayor patología en México. Los antígenos crudos de histoplasmina, coccidioidina y paracoccidioidina, constituidos principalmente por moléculas glicoproteínicas, muestran buena reactividad en pruebas de precipitación e intradérmicas. Los purificados (CCPD: complejo polisacárido-proteína desproteinizado) exhiben mayor grado de especificidad que los crudos en pruebas de alta sensibilidad como ELISA y fijación de complemento. Los antígenos crudos son de bajo costo, fácil manejo y rápida detección y son ideales para estudios epidemiológicos; los purificados son ideales para precisar mejor un diagnóstico de micosis

Estrategias del Histoplasma capsulatum para evadir los mecanismos citocidas de los fagocitos / Strategies of Histoplasma capsulatum to circumvent the cytocidal mechanisms of phagocytes

A pesar de que la proliferación de Histoplasma capsulatum dentro de los macrófagos está restringida por el desarrollo de la inmunidad mediada por células, y de que no existe una aparente falla en la capacidad fungicida de los macrófagos, bajo ciertas circunstancias, el H. capsulatum puede desenvolverse en este medio intracelular, el cual provee las condiciones nutricionales para el crecimiento del hongo y además, la posibilidad de acceso a otros órganos por las vías linfáticas y hemáticas. Pese a sucrecimiento intracelular, el medio interno dentro de los fagocitos es complejo y frecuentemente hostil al microorganismo. Los patógenos intracelulares deben superar una serie de obstáculos con el fin de prevenir su posible destrucción. En el presente artículo se revisan las estrategias de H. capsulatum para escapar a las agresiones del hospedero, desde el momento en que el parásito se encuentra sobre la superficie de la células hospedera hasta su sobrevivencia dentro de ésta. Además, se destacan los avences contemporáneos de los mecanismo de escape, utilizados por H. capsulatum, para facilitar su sobrevivencia en el medio ambiente intracelular

Cinética de infección de la línea celular de macrófagos J774.2 con Histoplasma capsulatum: estudio por microscopía electronica / Infection kinetics of the macrophage J774.2 Cell-line with Histoplasma caprulatum

Se estudió la cinética de fagocitosis de levaduras de Histoplasma capsulatum en una línea celular de macrófagos (J774.2), sincronizando el inóculo y la ingestión (internalización) de levaduras a 4-C por 1h, a fin de permitir un mejor contacto de los macrófagos y las levaduras durante la fase de adherencia. La fagocitosis se llevó a cabo a 37-C con diferentes períodos de incubación 0,5,15,30,60min, 3 y 24 h, para determinar el tiempo de internalización de las células levaduriformes a los macrófagos. El seguimineto de la internalización fue realizado por microscopía electrónica de transmisión y de barrido. Se utilizó Mycobacterium tuberculosis como microorganismo de referencia. La fagocitosis de Histoplasma fue retardada en comparación con la del bacilo tuberculoso y los macrófagos (J774.2) internalizaron levaduras en un tiempo aproximado de 15-30 minutos. Mientras H. capsulatum sólo fue observado en el interior del macrófago a partir de los 15 min de fagocitosis, M. tuberculosis fue encontrado desde los 0-5 minutos. Además, a los 60 min aún se observaron levauras adheridas, siendo que los macrófagos infectados con M. tuberculosis presentaron daño y muerte celular. Estos resultados apoyan las diferencias en la internalización de ambos microorganismos

Actividades enzimáticas en levaduras de Histoplasma capsulatum / Enzymatic activities from Histoplasma capsulatum yeasts

Se determinaron actividades enzimáticas en 5 cepas de Histoplasma capsulatum en fase levaduriforme (EH46, EH 50, EH51, EH52, EH53) por el micrométodo del APIZYM. De las 19 enzimas probadas se encontraron actividades de fosfatasa alcalina, esterasa lipasa C8, fosfatasa ácida y fosfoamidasa en todas las cepas estudiadas, mientras que la lipasa C14 y la leucina arilamidasa, sólo se determinaron en 4 cepas. Estas últimas enzimas no aparecieron en la cepa EH53 de alta virulencia