Molecular characteristics of polysulfated fractions from the green seaweed Caulerpa cupressoides and actions on thrombin generation in vitro

Caulerpa cupressoides produces sulfated polysaccharides (Cc-SPs) with serpin-dependent anticoagulant effect, but their actions on thrombin generation (TG) are unknown. This study aimed to partially characterize Cc-SPs and examine their potential as modulators of TG. Infrared analysis characterized extract containing three ulvan fractions (Cc-SP1, -SP2 and -SP3) separated by DEAEcellulose chromatography, with differences in the relative proportions of sulfate (10.99-18.38%) and total sugars (46.59-51.12%), without presenting proteins. Charge density patterns and nonSPs varying from 8 to > 100 kDa on agarose and polyacrylamide gel electrophoresis by sequential staining with toluidine blue and stains-all were also confirmed by gel permeation chromatography. The molecular weight of Cc-SP2 was not altered after treatment with 0.4 M HCl up to 5 h. Only Cc-SP2 altered the activated partial thromboplastin time (15 ± 0.3 IU) vs. heparin (193 IU) and abolished at high concentrations (> 4.1 μg) TG by intrinsic pathway in 60-fold diluted human plasma, while at 4.1 μg attenuated TG by 33.87% delaying the lag phase (32 min.) vs. control (28 min.). Cc-SP2 induced concentration-dependent TG in system without cephalin. Heparin abolished TG at 4.15-fold lower amount, but did not stimulate TG. Therefore, Cc-SPs express dual effects on thrombosis in vitro.

Extraction, physical-chemical characterization and in vitro inhibitorypotential of thrombin generation of crude sulfated polysaccharides from Brazilian tropical seaweeds / Extração, caracterização físico-química e potencial inibitório in vitro da geração detrombina de polissacarídeos sulfatados brutos de algas marinhas tropicais brasileiras

The biotechnological value of macroalgae for screening assays of thrombin generation-TG using sulfated polysaccharides-SPs as substitutes to heparin has been poorly explored. Five Brazilian species of macroalgae (Gracilaria birdiae, Acanthophora muscoides, Halymenia sp., Caulerpa cupressoides and C. racemosa) wereanalyzed and compared for their abundance, physical-chemical characteristics and in vitro anticoagulant assays of activated partial thromboplastin time-APTT, prothrombin time-PT and TG. Papain extraction yielded (p 100 kDa. These procedures,combined with the use of Stains-All, also indicated nonSPs. APTTs ranged from 2.81 (A. muscoides) to 21.30 IU(Halymenia sp.) vs. heparin (193 IU), and were dependent on sulfation of the crude SPs. PT was not altered. Withrespect to TG assay, crude SPs modified concentration-dependent and independently from molecular mass TGby both intrinsic/extrinsic pathways in 60-fold diluted human plasma, with total intrinsic inactivation using crudeSPs from A. muscoides in parallel to heparin (p < 0.05). Thrombosis in vitro is differentially modulated by distinctcrude SPs from Brazilian seaweeds.

O valor biotecnológico das macroalgas para ensaios de varredura de geração de trombina-GT pouco tem sido explorado usando polissacarídeos sulfatados-PSs como substitutos à heparina. Foramanalisadas e comparadas cinco espécies brasileiras de macroalgas (Gracilaria birdiae, Acanthophora muscoides, Halymenia sp., Caulerpa cupressoides e C. racemosa) quanto à abundância, às característicasfísico-químicas e os ensaios anticoagulantes in vitro de tempo de tromboplastina parcial ativada-TTPA, aotempo de protrombina-TP e a GT. A extração com papaína rendeu (p 100 kDa. Esses procedimentos,combinados ao uso de azul de toluidina/Stains-All, indicaram também polissacarídeos-não sulfatados. OsTTPAs foram dependentes da sulfatação dos PSs brutos e variaram de 2,81 (A. muscoides) a 21,30 UI (Halymenia sp.) vs. heparina (193 UI). O TP não foi alterado. Com respeito ao ensaio de GT, os PSs brutos modificaram, dependente de concentração e independentemente de massa molecular, GT pelas viasintrínseca/extrínseca no plasma humano diluído 60 vezes, com inativação intrínseca total usando PSs brutosde A. muscoides em paralelo à heparina (p < 0,05). A trombose in vitro é modulada diferencialmente porPSs brutos distintos de algas marinhas brasileiras.

In vitro inactivation of thrombin generation by polysulfated fractions isolated from the tropical coenocytic green seaweed Caulerpa racemosa (Caulerpaceae, Bryopsidales) / Inativação in vitro da geração de trombina por frações polissulfatadas isoladas da macroalga verde cenocítica tropical Caulerpa racemosa (Caulerpaceae; Bryopsidales)

Pharmacological efficacy of Caulerpa racemosa (Chlorophyta) sulfated polysaccharidic (SPs) fractions (F I→III) on models of coagulation and inflammation has been demonstrated, but not their effects on thrombin generation (TG). This study examined fractions for composition and physical-chemical characteristics and in vitro inactivation of TG by F I and F II in 60-fold diluted human plasma using continuous method. Papain-extraction yield of 0.7% revealed F I→III by DEAE-cellulose chromatography, with differences among the relative proportions of sulfate (17.37-24.00%), total sugars (30.03-48.34%) and absence of proteins. Charge density patterns and molecular sizes > 100 kDa of the fractions were verified by both agarose/polyacrylamide analyses, respectively. These electrophoreses combined with toluidine blue/Stains-All also indicated nonSPs. Anticoagulant effects of 4.76 (F I), 12.00 (F II) and 2.32 (F II) IU mg-1 by activated partial thromboplastin time test were recorded against heparin (193 IU mg-1), without changes in prothrombin time. Diluted plasma treated with F I and F II reduced concentration-dependent and sulfation pattern TG by both intrinsic and extrinsic pathways, with 50% inactivation by intrinsic pathway of F II even at 4.1 µg. Heparin abolished TG at least 4-fold lower. Therefore, C. racemosa produces SPs with TG inhibition.

Eficácia farmacológica de frações (F I→III) polissacarídicas sulfatadas (PSs) da Chlorophyta Caulerpa racemosa sobre modelos de coagulação e inflamação tem sido demonstrada, exceto seus efeitos sobre geração de trombina (GT). Examinaram-se frações quanto à composição, características físico-químicas e inativação in vitro de GT por F I e F II, em plasma humano diluído 60 vezes usando método contínuo. Rendimento de extração-papaína (0,7%) revelou, por cromatografia de DEAE -celulose, F I→III com diferenças entre as proporções relativas de sulfato (17,37-24,00%), açúcares totais (30,03-48,34%) e ausência de proteínas. Foram verificados, por ambas as análises agarose/poliacrilamida, graus de densidade de carga e tamanhos moleculares > 100 kDa das frações, respectivamente. Também essas eletroforeses, combinadas com azul de toluidina/Stains-All, indicaram polissacarídeos não sulfatados. Foram registrados, pelo teste do tempo de tromboplastina parcial ativada, efeitos anticoagulantes de 4,76 (F I), 12,00 (F II) e 2,32 (F II) UI mg-1 contra heparina (193 UI mg- 1), porém não modificando tempo de protrombina. Plasma diluído tratado com F I e F II reduziu GT por ambas as vias intrinsíca/extrínsica, dependente de concentração e grau de sulfatação, com F II em 4,1 µg apresentando eficácia de 50% pela via intrínsica. Heparina, quatro vezes menos, aboliu GT. Portanto, C. racemosa produz PSs com inibição de GT.

Purification and characterization of hyaluronic acid from chicken combs / Purificação e caracterização do ácido hialurônico obtido da crista de frango

Hyaluronic acid (HA) is an important macromolecule in medical and pharmaceutical fields. The umbilical cord and the chicken comb are some of the tissues richest in this polysaccharide. The profit from obtaining HA from the combs of slaughtered animals is particularly attractive. This work aimed to extract, purify, and characterize HA. The glycosaminoglycan concentration in the chicken comb was found to be about 15µg of hexuronic acid mg-1 of dry tissue. Fractionation using ion exchange chromatography and subsequent identification of the fractions by agarose gel electrophoresis showed that HA corresponded to 90% of the total amount of extracted glycosaminoglycans.

O ácido hialurônico (AH) é uma importante macromolécula nas áreas médica e farmacêutica. O cordão umbilical e a crista de frango constituem uns dos tecidos mais ricos nesse polissacarídeo. O aproveitamento das cristas dos animais abatidos para a obtenção de HA é particularmente atraente. O presente trabalho teve como objetivo a extração, purificação e caracterização do AH. A concentração de glicosaminoglicanos encontrada na crista de frango foi ao redor de 15µg de ácido hexurônico mg-1 de peso seco. O fracionamento por cromatografia de troca iônica e a subsequente identificação das frações por eletroforese de gel de agarose mostrou que o AH corresponde a 90% do total de glicosaminoglicanos extraídos.

Determinación de la eficacia analgésica de los bloqueos del ganglio estrellado en el alivio del dolor mediado por el sistema nervioso simpático, en pacientes con síndrome doloroso regional complejo del miembro superior / Determination of the analgesic effectiveness of the blockades of the ganglion shattered in the relief of the pain mediated by the nice nervous system, in patient with syndrome painful regional complex of the superior memb

A pesar de que el bloqueo del ganglio estrellado (BGE) es una tecnica que se realiza desde hace aproximadamente un siglo, en los últimos años empieza a aparecer una serie de publicaciones que pone en duda su eficacia para el control del dolor en pacientes con síndrome doloroso regional complejo (SDRC). Las teorías actuales apuntan a que el dolor de estos pacientes tiene diferentes mecanismos fisiopatológicos y que no siempre son mediados por el sistema nervioso simpático, como se consideraba hasta hace algunos años. Sin embargo, los estudios que ponen en duda la eficacia de estos bloqueos, no diferenciaron entre el dolor mediado por el sistema nervioso simpático y el de otras etiologías, además de que incurrieron en errores metodológicos. Durante el período 2002 y 2004 se incluyó un total de 82 pacientes portadores de dolor mediado por el simpático. Estos pacientes se asignaron en forma aleatoria a un grupo, control que recibió tratamiento farmacológico más fisioterapia y un grupo de intervención que tomó el mismo tratamiento anterior más una serie de hasta cinco bloqueos del ganglio estrellado. Se realizó un análisis de sobrevida en el que se encontró que en un periodo de dos meses, 15 pacientes del grupo control y 8 del de intervención habían recaído, siendo estas diferencias estadísticamente significativas...

Factores de riesgo y diagnóstico de salud del adolescente venezolano: estudio piloto / Risk factors and health diagnosis of Venezuelan adolescent: pilot study

El internista venezolano esta trabajando en la definición de su área de trabajo en este grupo poblacional. Conocer los factores de riesgo en general del adolescente. Estudio transversal, multicéntrico de adolescentes que asisten a consulta de medicina interna.Procedimiento: 1) Autorización escrita, 2) Explicación de los objetivos, 3) Encuesta de factores de riesgo, 4) Diagnósticos. El análisis fue descriptivo y comparativo. 75 individuos estudiados; 69 por ciento mujeres. 11 por ciento tenían alteración de la figura paterna; el 27 por ciento habían sufrido repitencia escolar; 64 por ciento no comparte con la familia; 43 por ciento inició la ingesta alcohólica con amigos. La violencia fue: 39 por ciento en el hogar y 55 por ciento fuera del hogar; 43 por ciento eran sexualmente activos; 28 por ciento de las mujeres tenían historia de embarazos, 1 de cada 12 había sido abusado sexualmente; 7 reconocieron el uso de drogas. Se definen áreas de trabajo: la comunicación familiar, educación sexual, historia de abuso sexual, educación antiviolencia y educación preventiva general. Se propone utilizar los resultados del presente estudio para incluir en la historia clínica diaria en forma permanente áreas de orientación para los adolescentes y sus padres

Estudio descriptivo sobre los riesgos percibidos por los usuarios frente a la prestación de los servicios de salud odontológicos en los estratos tres y cuatro de Santafé de Bogotá / Descriptive study on risks perceived by the dental health services users in the three and four strata

El usuario de servicios odontológicos es un usuario de tipo emocional, que identifica fácilmente sus necesidades y deseos insatisfechos odontológicos. Existen dos perfiles psicológicos en los cuales se puede clasificar dicho usuario, el usuarioque posee una conducta impulsiva y el usuario autocontrolado, dichos perfiles son coincidentes con los estratos socioeconómicos, el primero está identificado con el estrato tres y el segundo con el estrato cuatro. El modelo de decisión de consulta de este tipo de usuarios tiene que ver con dos tipos de aprendizaje el condicionamiento clásico, en donde hay una influencia clara de los grupos sociales de referencia, cuyas fuentes principales corresponden a su familia y amigos cercanos; por otro lado la clase social, la subcultura, el nivel económico y el nivel educativo son variables cuadyudantes que determinan el grado de involucramiento que tienen con respecto a los servicios y con respecto a la magnitud con la cual perciben los riesgos. El aprendizaje por condicionamiento operante, retroalimenta el preaprendizaje social y los sesgos atribucionales que los usuarios tienen cuando estan en proceso de evaluación de las diferentes alternativas. Producto de estos dos tipos de aprendizaje, los usuarios perciben diferentes clases de riesgo que afectan sus decisiones. Los más significativos son aquellos que poseen una alta carga de atributos críticos dentro de los cuales están: los psicológicos, los físicos y los funcionales. En menor proporción están aquellos riesgos que poseen atributos sobresalientes, dentro de los cuales se pueden mencionar los económicos, sociales y de tiempo.