Diagnóstico molecular – passado, presente e futuro / Molecular diagnosis – past, present and future

Este artigo consiste em uma descrição dos fatos históricos relacionados ao diagnóstico molecular, das técnicas disponíveis e do que se espera para o futuro do setor. Inicialmente, foram abordados as descobertas e os avanços originados dentro dos laboratórios de pesquisa das universidades, onde, efetivamente, nasceram as técnicas de análise de ácidos nucleicos. Posteriormente foi descrita a evolução que estas técnicas vêm sofrendo ao longo do tempo até se chegar ao formato atual, passando pela biologiamolecular manual e automatizada, abrangendo, basicamente, a PCR e a PCR tempo real. Além disso, foram discutidas e descritas brevemente outras técnicas de amplificação de ácidos nucleicos, amplificação de sinal e microarranjos. Por fim, foi apresentado um resumo das principais expectativas em relação ao diagnóstico molecular, considerando seu crescimento, o mercado de análises clínicas e as novas áreas e abordagens.

This article is a description of historical events related to molecular diagnosis, the techniques used today, and what thehope for the future of this segment is. First, we turn back to discoveries and advances originated within the research laboratory inside the universities, where the nucleic acid analysis techniques were born and we describe the progress that they have suffered until the current format. Otherwise, this is a brief history from manual molecular biology to automated molecular biology coveringmainly PCR, real time PCR. Moreover, we discuss briefly about other techniques for nucleic acid amplification, signal amplification and microarrays. Finally, we make a summary of the main expectations for the molecular diagnosis covering growth, market, new areas and approaches.

Allele-specific PCR assay to genotype SNP rs7903146 in TCF7L2 gene for rapid screening of diabetes susceptibility / Ensaio de PCR alelo-específico para genotipar o SNP rs7903146 no gene TCF7L2 para rápida triagem de suscetibilidade ao diabetes

OBJECTIVE: The aim of the present study is to validate a rapid and simple allele-specific PCR that genotypes TCF7/L2 rs7903146 (C/T) polymorphism with standard PCR instruments. METHODS: Two forward primers with variations in their 3' nucleotides were designed in such a way that each was specific for one of the two variants. They were combined with a common reverse primer into two PCR reactions. Specific amplification indicates the presence of the allele. One hundred and four DNA samples were genotyped by this method. To evaluate the assay, the polymorphism spanning region of 63 DNA samples representing the three possible genotypes was sequenced. RESULTS: The rs7903146 allele assignments derived from the allele-specific PCR were in complete agreement with sequencing. CONCLUSIONS: The assay described here is a suitable strategy for the TCF7/L2 rs7903146 (C/T) genotyping also allowing rapid and reliable identification.

OBJETIVO: O objetivo deste estudo foi validar um método de PCR alelo-específico, rápido e simples, para genotipagem do polimorfismo rs7903146 (C/T) no gene TCF7/L2 utilizando equipamentos convencionais. MÉTODOS: Dois primers forward com variações nos seus nucleotídeos 3' foram desenhados de forma que cada um fosse específico para uma das variantes. Eles foram combinados com um primer reverso comum em duas reações de PCR. A amplificação de tamanho específico indica a presença do alelo. Cento e quatro amostras de DNA foram genotipadas por esse método. Para validar o ensaio, uma amostragem representativa dos três possíveis genótipos (63 amostras) teve a região contendo o polimorfismo seqüenciada. RESULTADOS: A genotipagem do polimorfismo rs7903146 derivada da PCR alelo-específica estava em completa concordância com o sequenciamento. CONCLUSÕES: O ensaio aqui descrito é uma estratégia adequada para a genotipagem do polimorfismo rs7903146 (C/T) do gene TCF7/L2 e permite identificação alélica rápida e precisa.