Atividade colagenolítica e degradação da matriz extracelular pelo Trypanosoma cruzi / Activity colagenolítica and degradation of the extracellular matrix by Trypanosoma cruzi

O presente estudo foi desenvolvido para determinar se o T. cruzi elaborava enzimas capazes de degradar os principais componentes da matriz extracelular. Como fonte de enzimas foram utilizados extratos celulares das formas epimastigotas e tripomastigotas, da cepa Tulahuen do T. cruzi. Os extratos celulares foram preparados a partir das referidas formas do parasito, utilizando-se o processo físico de congelamento e descongelamento repetidos, para o rompimento das células. Colágeno tipo I, in natura e termodesnaturado, colágeno tipo IV, laminina e fibronectina foram utilizados como substratos protéicos. Todas as reações foram realizadas em pH fisiológico. A análise quantitativa das enzimas foi realizada utilizando-se gelatina como substrato. A atividade enzimática quantitativa foi determinada utilizando-se o corante Sirius red em solução saturada de ácido pícrico e as proteínas quantificadas pela análise colorimétrica, com a leitura feita a 540 nm. A análise qualitativa, dos produtos de degradação proteolítica dos componentes da matriz extracelular, foi feita utilizando-se eletroforese em gel de poliacrilamida¬SDS. Zimogramas foram realizados utilizando-se gel em poliacrilamida¬SDS, co-polimerizada com gelatina. Realizou-se a purificação parcial das enzimas utilizando-se precipitação dos extratos brutos com sulfato de amônio a 75 por cento e a seguir filtração em coluna de HPLC e con-A agarose. Tentativas de fracionamento das enzimas em coluna de HPLC mostrou pelo menos três atividades proteolíticas distintas, com pesos moleculares aproximados de 69 kD, 55 kD e 50 kD. As frações obtidas desta etapa foram analisadas quanto à atividade enzimática. Embora as atividades proteolíticas contra colágeno tipo IV, laminina e fibronectina estivessem presentes, a colagenase tipo I foi perdida. Todas as atividades enzimáticas estiveram presentes em ambas as formas, epimastigotas e tripomastigotas do T. cruzi. A análise dos meios de cultura de ambas as formas epimastigotas e tripomastigotas não evidenciou qualquer atividade proteolítica, sugerindo que estas enzimas possam estar localizadas na membrana plasmática do parasito. Sendo o T. cruzi um parasito intracelular, é necessário que passe pelo tecido conjuntivo antes de penetrar nas células do hospedeiro. Enzimas proteolíticas podem ajudá-Io nesta passagem, destruindo a matriz extracelular. Desta forma, estas enzimas, não só podem desempenhar papel importante na invasão tecidual pelo parasito, assim como na patogênese da cardiopatia chagásica. As enzimas elaboradas pelo parasito poderiam lesar diretamente a matriz, na fase aguda para a forma crônica.

Fístulas vasculares centrais na infância: análise de onze casos e consideraçöes sobre o diagnóstico diferencial / Central vascular fistula in chilren: analysis of 11 cases and considerations about the differential diagnosis

El clásico soplo continuo "en maquinaria" sobre el borde esternal izquierdo superior es la manifestación típica en un niño con conducto arterial persistente (CAP). Sin embargo, en algunos pacientes el soplo puede ser difásico o escuchado sobre un área atípica, tales como el medioprecordio o sobre el dorso. En estas circunstancias, defectos más raros deben ser considerados en el diagnóstico diferencial. Esta comunicación presenta algunas de estas posibilidades. Once niños son admitidos para estudio con soplos atípicos continuos o difásicos. Después del examen físico, pruebas no invasivas y cateterismo cardíaco, son establecidos los siguientes diagnósticos: fístula coronaria (cuatro pacientes); fístula aortoventricular izquierda (uno); defecto septal aortopulmonar (tres); fístula arteriovenosa sistémica (tres). Siete pacientes fueron sometidos a tratamiento quirúrgico. Basados en el análisis de estos casos, se deduce que el encuentro de un niño con soplo continuo atípico o difásico nos autoriza a un estudio angiocardiográfico para un diagnóstico más exacto