Detection of Brucella abortus DNA in illegal cheese from São Paulo and Minas Gerais and differentiation of B19 vaccinal strain by means of the polymerase chain reaction (PCR)

A total of 192 samples of illegal cheese from different regions of the states of São Paulo and Minas Gerais, Brazil, were analyzed for the isolation and detection of Brucella spp. DNA by means of microbiological culture and polymerase chain reaction (PCR), respectively. Samples that yielded positive results were submitted to the analysis of the occurrence of Brucella abortus (biovars 1, 2 e 4), as well as to the differentiation of DNA in B19 vaccinal strain or Brucella abortus field strain using PCR. Although the microorganism was not isolated from any sample, PCR detected 37 positive samples (19.27 percent) using genus-specific primers. From these, all (100 percent) were Brucella abortus. Differentiation of the strain showed that 30/37 samples (81.08 percent) were vaccinal strain B19 and seven (18.92 percent) were Brucella abortus field strains. Results showed that diagnostic sensitivity of PCR was greater than that of microbiological culture. The standardization of the reaction for the differentiation of vaccinal and field strains enabled the analysis of all samples positive for Brucella abortus. It is, therefore, a reliable method, also applicable to natural infections caused by the microrganism.

Foram analisadas 192 amostras de queijo clandestinas provenientes de várias regiões do Estado de São Paulo e Minas Gerais, Brasil, para isolamento e detecção de DNA de Brucella spp. através das técnicas de cultivo microbiológico e reação da polimerase em cadeia (PCR), respectivamente. Para as amostras positivas foi pesquisada a ocorrência da espécie Brucella abortus (biovares 1, 2 e 4), além da diferenciação do DNA em cepa vacinal B19 ou de campo por PCR. Não foi possível isolar o microrganismo de nenhuma amostra, porém, na PCR, 37 amostras (19,27 por cento) foram positivas na reação com primers gênero específicos e destas, todas (100 por cento) foram comprovadas como sendo Brucella abortus. A diferenciação da cepa revelou que 30/37 amostras (81,08 por cento) eram cepa vacinal B19 e sete (18,92 por cento) eram cepas de Brucella abortus de campo. Os resultados mostraram uma maior sensibilidade diagnóstica da PCR em relação ao cultivo microbiológico, e a padronização da reação de diferenciação da cepa em vacinal ou campo permitiu que todas as amostras positivas para Brucella abortus fossem analisadas, sendo uma metodologia confiável e aplicável a infecções naturais pelo microrganismo.

Isolation and characterization of selenate resistant mutants of acremonium chrysogenum

Mutantes incapazes de converter o sulfato extracelular em sulfito foram isolados utilizando o análogo tóxico selenato. De 28 mutantes isolados, apenas 3 foram sensíveis ao cromato, provavelmente apresentando lesäo no gene que codifica a ATP sulfurilase. Os demais foram resistentes ao cromato e devem conter lesäo no gene sB ou também no gene sC. A metionina elevou os níveis de resistência ao selenato e a frequencia de mutantes espontâneos obtida em meio contendo este aminoácido foi maior (entre 2,42 x 18,04 x 10ð6 dez elevadoa menos seis) do que a obtida no meio sem a adiçäo de qualquer fonte intencional de enxofre (entre 0,71 x 10-6 dez elevado a menos seis e 5,0 x ao elevado a menos seis). A linhagem original e os mutantes foram capazes de crescer, mesmo depois de quatro etapas de inóculo, fato que pode ser explicado pela existência de traços do referido elemento no meio e/ou a presença de um sistema eficiente de estocagem intracelular. A produçäo de celafosporina C foi estudada e a análise dos dados revelou que näo hove diferença sgnificativa entre os níveis produzidos pelos mutantes e os produzidos pela linhagem original

Parasexual analysis of Aspergillus awamori by using intraspecific diploids and interspecific hybrids with A. niger

Mutantes auxotróficos, morfológicos e resistente foram isolados de Aspergillus awamori, linhagem NRRL 3112, e usados para análise genética via ciclo parassexual. Resultados indicam um mínino de quatro grupos de ligaçäo para esta espécie. Hibridos interespecíficos com Aspergillus niger foram obtidos apenas após fusäo de protoplastos e, a análise de segregantes sugere que: 1) análise genética pode ser feita pois há confirmaçäo de grupos de ligaçäo detectados por diplóides intraespecificos; II) associaçäo no mesmo grupo de ligaçäo de marcas de A. awamori e, III) homologia de grupos de ligaçäo entre as duas espécies que permitiu a ocorrência de permuta mitótica. Estas sugestöes foram consideradas como indicaçöes da proximidade filogenética entre estas espécies