Detection of Hemotropic Mycoplasma sp. in white-eared opossums (Didelphis albiventris) from Southern Brazil / Detecção de Mycoplasma sp. hemotrópico em gambás-de-orelha-branca (Didelphis albiventris) no Sul do Brasil

Abstract Opossums are marsupials from the New World of the genus Didelphis and known as synanthropic animals due to their proximity with human beings. To date, 'Candidatus Mycoplasma haemodidelphis' has been solely found infecting the North American opossum (Didelphis virginiana). Accordingly, the aim of this study was to screen eight white-eared opossums (Didelphis albiventris) from a public park in Maringa city, Paraná State, southern Brazil, for hemoplasma infection. Blood samples were taken from caudal venipuncture, and DNA was extracted and further screened by a pan-hemoplasma PCR assay. Seven out of eight (87.50%; CI 95%: 47.35-99.68%) white-eared opossums were positive for Mycoplasma spp. Sequencing of the 16S rRNA fragment showed 98,97% identity with 'Ca. M. haemodidelphis' detected in the USA. Three out of eight (37.50%; CI 95%: 8.52-75.51%) white-eared opossums were infested by Amblyomma dubitatum ticks. This is the first report on detection of a potentially novel hemotropic Mycoplasma sp. infecting opossums from South America.

Resumo Gambás são marsupiais do Novo Mundo, pertencentes ao gênero Didelphis, e considerados animais sinantrópicos devido à sua proximidade com seres humanos. Atualmente, a espécie 'Candidatus Mycoplasma haemodidelphis' só foi encontrada infectando gambá norte americano (Didelphis virginiana). O objetivo do presente estudo foi detectar a infecção por hemoplasmas em oito gambás-de-orelha-branca (Didelphis albiventris) capturados em um parque público da cidade de Maringá, no Estado do Paraná, sul do Brasil. Amostras de sangue foram coletadas por venopunção caudal para a extração do DNA e posterior análise pela PCR para espécies de hemoplasmas. Sete de oito animais (87,50%; CI 95%: 47,35-99,68%) foram considerados positivos para Mycoplasma spp. O sequenciamento do fragmento do gene 16S rRNA obtido apresentou 98.97% de similaridade com sequências de 'Ca. M. haemodidelphis' detectadas nos Estados Unidos. Três gambás (37,50%; CI 95%: 8,52-75,51%) estavam infestados por carrapatos da espécie Amblyomma dubitatum. Esse é o primeiro relato de detecção de uma potencial nova espécie de Mycoplasma hemotrópico infectando gambás na América do Sul.

First study of Cryptosporidium spp. occurrence in eared doves (Zenaida auriculata) / Primeiro estudo de ocorrência de Cryptosporidium spp. em pomba-de-bando (Zenaida auriculata)

Abstract Cryptosporidium is a protozoan parasite with a wide range of hosts, including humans. However, only a few Cryptosporidium species have been described in birds (C. meleagridis, C. baileyi, C. galli and C. avium). The aim of this study was to investigate the occurrence of Cryptosporidium spp. in feces of eared doves (Zenaida auriculata), followed by molecular characterization of the parasite. A total of 196 animals of both sexes were trap-captured; the animals were culled and the intestinal contents were collected for DNA extraction. After extraction, a nested-PCR (nPCR), which amplifies a fragment of the 18S rRNA gene of Cryptosporidium spp., was performed. The amplicons obtained were purified and sequenced. PCR analysis revealed that 30 animals (15.3%) were positive for Cryptosporidium spp. There was no significant sex-dependent enrichment of Cryptosporidium occurrence (p > 0.05). Only 15 out of the 30 positive samples were successfully sequenced and their species determined, of which, 13 (86.7%) and 2 (13.3%) were C. meleagridis and C. galli, respectively. Herein, we present for the first time a molecular characterization of Cryptosporidium from feces of eared doves (Z. auriculata) and propose that these birds are a potential source of C. meleagridis infection in humans.

Resumo Cryptosporidium é um protozoário com uma grande variedade de hospedeiros, incluindo os seres humanos. No entanto, poucas espécies têm sido descritas em aves (Cryptosporidium meleagridis, C. baileyi, C. galli e C. avium). O objetivo do presente estudo foi investigar a ocorrência de Cryptosporidium spp. em fezes de pombas-de-bando (Zenaida auriculata), e realizar a caracterização molecular dos isolados. Um total de 196 animais de ambos os sexos foram capturados, eutanasiados e o conteúdo intestinal recolhido para extração de DNA. Após a extração, realizou-se uma nested-PCR (nPCR), que amplifica um fragmento do gene 18S rRNA do Cryptosporidium spp.. Os fragmentos obtidos foram purificados e encaminhados para sequenciamento. Os resultados da n-PCR revelaram 30 animais (15.3%) positivos para Cryptosporidium spp.. Quanto ao sexo dos animais não foram observadas diferenças estatísticas significativas (p > 0.05). Somente 15 de 30 amostras positivas foram sequenciadas com sucesso e as espécies determinadas, das quais, 13 (86.7%) e 2 (13.3%) foram C. meleagridis e C. galli, respectivamente. Esse é o primeiro estudo com caracterização molecular de Cryptosporidium de fezes de pombas-de-bando (Z. auriculata), e propõe serem esses animais potenciais fonte de infecção de C. meleagridis para humanos.

Theileria sp. in water buffaloes from Maranhão State, northeastern Brazil / Theileria sp. em búfalos do Estado do Maranhão, nordeste do Brasil

Abstract Anaplasma marginale and piroplasm species are widespread among Brazilian cattle herds. Both of these tick-borne pathogens hamper livestock production and cause a significant economic impact. Although buffaloes have demonstrated a high level of adaptability, data on tick-borne pathogens are scarcely reported in Brazil. Thus, the aim of this study was to screen water buffaloes from the state of Maranhão for piroplasm and A. marginale occurrence using PCR assays. All samples were negative for A. marginale. One of the 287 (0.35%) water buffaloes tested was positive for Theileria sp. Sequencing of the 18S rDNA fragment (356 bp) showed that the Theileria sp. identified was closely related to the T. buffeli /orientalis group. Future studies on the clinical signs of infection and the main vector in this country are needed.

Resumo Anaplasma marginale e espécies de piroplasma são amplamente distribuídas no rebanho bovino brasileiro. Ambos os patógenos transmitidos por carrapatos dificultam a produção pecuária e causam um impacto econômico significativo. Embora os búfalos tenham demonstrado um alto nível de adaptabilidade, dados sobre patógenos transmitidos por carrapatos são raramente relatados no Brasil. Assim, o objetivo deste estudo foi investigar búfalos do estado do Maranhão para piroplasmas e A. marginale utilizando-se a técnica da PCR. Todas as amostras foram negativas para A. marginale . Um dos 287 (0,35%) búfalos testados foi positivo para Theileria sp. O sequenciamento de um fragmento do gene 18S rDNA (356 pb) demonstrou que Theileria sp. identificado estava relacionada ao grupo T. buffeli/orientalis . Estudos futuros sobre os sinais clínicos de infecção e o principal vetor neste país são necessários.

Cryptosporidium occurrence in ruminants from the North Pioneer mesoregion of Paraná, Brazil / Ocorrência de Cryptosporidium em ruminantes da mesorregião norte pioneiro do Estado do Paraná, Brasil

Abstract The aim of this study was to investigate the occurrence of Cryptosporidium in cattle and sheep from the North Pioneer mesoregion of the state of Paraná. For this, 317 stool samples were collected from cattle and sheep on 16 properties in six municipalities in the North Pioneer mesoregion of Paraná. For detection of Cryptosporidium species, molecular analysis was performed using nested-PCR techniques targeting the 18S rRNA gene. Of the 37 beef cows and 115 calves analyzed, four (10.8%) and 14 (12.2%), respectively, were positive for Cryptosporidium. Of the 12 cows and 52 calves, one (8.3%) and 14 (26.9%), respectively, were positive for Cryptosporidium; and of the 42 ewes and 59 lambs, six (14.3%) and 12 (20.3%), respectively were positive for Cryptosporidium. Cattle (15.3%) and sheep (17.8%) were both susceptible to infection. All the properties of the municipalities of Assaí, Ibaiti and, Leópolis presented infected animals. The study showed that Cryptosporidium occurs in most municipalities assessed, that dairy calves had a higher risk (Odds Ratio=2,66, p-value=0,018) for infection than beef calves, and that sheep are just as susceptible to infection as are cattle, and that further Cryptosporidium studies are developed.

Resumo O objetivo deste estudo foi investigar a ocorrência de Cryptosporidium em bovinos e ovinos da mesorregião norte pioneiro do Estado do Paraná. Para tanto, 317 amostras de fezes destes ruminantes foram colhidas de 16 propriedades de seis municípios do Norte Pioneiro do Paraná. Para detecção de Cryptosporidium spp foi realizada análise molecular pela Técnica de nested-PCR direcionada ao gene 18S rRNA. Das 37 vacas de corte e 115 bezerros de corte analisados, quatro (10,8%) e 14 (12,2%) foram respectivamente positivos para Cryptosporidium . Das 12 vacas e 52 bezerros de leite, um (8,3%) e 14 (26,9%) foram positivos para Cryptosporidium e das 42 ovelhas e 59 cordeiros avaliados, seis (14,3%) e 12 (20,3%) amostras estavam positivas para Cryptosporidium, respectivamente. Bovinos (15,3%) e ovinos (17,8%) foram igualmente suscetíveis à infecção. Todas as propriedades dos municípios de Assaí, Ibaiti e Leópolis apresentaram animais infectados. Este estudo demonstrou que Cryptosporidium ocorre na maioria dos municípios avaliados, sendo que os bezerros de leite apresentam maior risco (Razão de chances=2,66, p-value=0,018) à infecção que os bezerros de corte e que os ovinos são tão suscetíveis à infecção quanto os bovinos e por isso, estudos nesta espécie animal devem ser mais desenvolvidos.

Prevalence of Eimeria spp. in calves from dairy farms in northern Paraná state, Brazil / Prevalência de Eimeria spp. em bezerros de propriedades leiteiras do norte do estado do Paraná, Brasil

Abstract Bovine coccidiosis is a disease of major importance in cattle herds across the world. The disorder mainly affects young calves, and E. bovis and E. zuernii are considered the most pathogenic species of the genus, however, E. alabamensis have been described in grazing calves. In this study, the prevalence of Eimeria spp. was evaluated in calves on dairy farms in the northern region of the state of Paraná, Brazil. Four hundred calves on 44 dairy farms were tested for the presence of coccidian oocysts. The positives were re-examined and the oocysts were morphometrically analyzed for species identification. All the farms were contaminated and 205 animals (51.25%) presented Eimeria spp. oocysts. Among these, 146 animals (71.22%) were co-infected by two or more species of coccidia. Ten species of Eimeria were identified: E. bovis (in 30.25% of the positive samples), E. alabamensis (26.75%), E. zuernii (22.00%), E. ellipsoidalis (18.50%), E. auburnensis (13.75%), E. canadensis (8.00%), E. cylindrica (7.25%), E. subspherica (5.00%), E. bukidnonensis (3.00%) and E. brasiliensis (0.75%). This study demonstrates the high prevalence of Eimeria spp. in the northern region of Paraná, Brazil, and detection for the first time in our region the pathogenic species E. alabamensis.

Resumo A coccidiose bovina é uma doença de grande importância em rebanhos ao redor do mundo. A desordem afeta principalmente bezerros jovens, e E. bovis e E. zuernii consideradas as espécies mais patogênicas deste gênero, causando grave enterite em animais infectados. No entanto, casos de E. alabamensis foram descritos em bezerros mantidos a pasto. No presente estudo, a prevalência de Eimeria spp. foi avaliada em bezerros de gado leiteiro da região norte do estado do Paraná, Brasil. Quatrocentos bezerros foram amostrados e testados para a presença de oocistos de coccídios. Os positivos foram re-examinados e os oocistos analisados morfologicamente para identificação da espécie. Todas as fazendas estavam contaminadas e 205 (51,25%) animais apresentaram oocistos de Eimeria spp. Destes, 146 (71,22%) animais estava co-infectados por duas ou mais espécies de coccídio. Dez espécies de Eimeria foram identificadas: E. bovis (30,25% de amostras positivas), E. alabamensis (26,75%), E. zuernii (22,00%), E. ellipsoidalis (18,50%), E. auburnensis (13,75%), E. canadensis (8,10%), E. cylindrica (8,00%), E. subspherica (5,00%), E. bukidnonensis (3,00%) e E. brasiliensis (0,75%). Este estudo demonstra a alta prevalência de Eimeria spp. na região norte do estado do Paraná, Brasil, e a detecção, pela primeira vez, de E. alabamensis.

Molecular epidemiology of Anaplasma platys, Ehrlichia canis and Babesia vogeli in stray dogs in Paraná, Brazil / Epidemiologia molecular de Anaplasma platys, Ehrlichia canis e Babesia vogeli em cães não domiciliados do Paraná

Hemoparasitic infections are tick-borne diseases, which affect animals and humans. Considering the importance of canine hemoparasitic infections in veterinary clinics, this study aimed to determine the occurrence of Anaplasma platys, Ehrlichia canis and Babesia vogeli in blood samples from 182 dogs not domiciled in the city of Pato Branco, southwestern region of Paraná State, Brazil, using polymerase chain reaction (PCR). The prevalence of A. platys and B. vogeli was 32.9% and 10.9% respectively, and A. platys infection prevailed (p<0.001). The number of dogs positive for A. platys was larger in Winter (p<0.05). All blood samples were negative for E. canis. In the dogs, infestation by Amblyomma cajennense predominated over that by Rhipicephalus sanguineus (p<0.001); but there was no significant association between PCR and the variables presence of ticks, sex and age. Dogs infected by A. platys and B. vogeli showed thrombocytopenia, lymphopenia and leukocytosis; but there was no correlation between such hematological changes and infection by hemoparasites. This appears to be the first molecular study that demonstrates the existence of A. platys and B. vogeli in dogs from the southwestern region of Paraná.(AU)

As hemoparasitoses são enfermidades transmitidas por carrapatos que afetam os animais e os humanos. Considerando a importância das hemoparasitoses caninas na clínica médica veterinária, este estudo objetivou determinar a ocorrência de Anaplasma platys, Ehrlichia canis e Babesia vogeli em amostras de sangue de 182 cães não domiciliados do município de Pato Branco, região sudoeste paranaense, Brasil, utilizando a reação em cadeia da polimerase (PCR). A prevalência de A. platys e B. vogeli foi de 32,9% e 10.9%, respectivamente, predominando a infecção por A. platys (p<0,001). Constatou-se um maior número de cães positivos para A. platys no período do inverno (p<0.05). Todas as amostras de sangue foram negativas para E. canis. Nos cães, a infestação por Amblyomma cajennense prevaleceu sobre a infestação por Rhipicephalus sanguineus (p<0,001), mas não foi observada associação significativa entre a PCR e as variáveis presença de carrapatos, sexo e idade. Cães infectados por A. platys e B. vogeli apresentaram trombocitopenia, linfopenia e leucocitose, porém não houve correlação destas alterações hematológicas com a infecção pelos hemoparasitas. Este é o primeiro estudo molecular que demonstra a existência de A. platys e de B. vogeli em cães da região sudoeste paranaense.(AU)

Serosurvey of Borrelia in dogs, horses, and humans exposed to ticks in a rural settlement of southern Brazil / Soroprevalência e fatores associados a Borrelia em cães, equinos e humanos expostos a carrapatos em um assentamento rural do sul do Brasil

Abstract The aims of the present study were to serosurvey dogs, horses, and humans highly exposed to tick bites for anti-Borrelia burgdorferi s.l. antibodies, identify tick species present, and determine risk factors associated with seropositivity in a rural settlement of Paraná State, southern Brazil. Eighty-seven residents were sampled, along with their 83 dogs and 18 horses, and individual questionnaires were administered. Immunofluorescence antibody test (IFAT) was performed on serum samples and positive samples were subjected to western blot (WB) analysis. Anti-B. burgdorferi antibodies were found in 4/87 (4.6%) humans, 26/83 (31.3%) dogs, and 7/18 (38.9%) horses by IFAT, with 4/4 humans also positive by WB. Ticks identified were mostly from dogs and included 45/67 Rhipicephalus sanguineus, 21/67 Amblyomma ovale, and 1/67 A. cajennense sensu lato. All (34/34) horse ticks were identified as A. cajennense s.l.. No significant association was found when age, gender, or presence of ticks was correlated to seropositivity to Borrelia sp. In conclusion, although anti-Borrelia antibodies have been found in dogs, horses and their owners from the rural settlement, the lack of isolation, molecular characterization, absence of competent vectors and the low specificity of the commercial WB kit used herein may have impaired risk factor analysis.

Resumo Os objetivos do presente estudo foram realizar um levantamento sorológico de cães, cavalos e humanos altamente expostos a picadas de carrapatos para anticorpos anti-B. burgdorferi s.l., identificar as espécies de carrapatos presentes, e determinar os fatores de risco associados a soropositividade em um assentamento rural do Estado do Paraná, sul do Brasil. Oitenta e sete residentes foram amostrados junto com seus respectivos 83 cães e 118 cavalos e questionários individuais foram aplicados. O teste de imunofluorescência indireta (IFI) foi realizado nas amostras sorológicas e as positivas foram submetidas a análise por western blot (WB). Anticorpos anti-B. burgdorferi foram detectados em 4/87 (4,6%) humanos, 26/83 (31,3%) cães e 7/18 (38,9%) cavalos pela IFI, com 4/4 humanos também positivos pelo WB. Os carrapatos identificados foram em sua maioria de cães e incluíram 45/67 Rhipicephalus sanguineus, 21/67 Amblyomma ovale e 1/67 A. cajennense sensu lato. Todos (34/34) carrapatos dos cavalos foram identificados como A. cajennense s.l.. Não foram observadas diferenças estatísticas entre idade, sexo ou presença de carrapatos e soropositividade para Borrelia sp. Em conclusão, embora anticorpos anti-Borrelia tenham sido encontrados em cães, equinos e seus proprietários do assentamento rural, a ausência de isolamento, caracterização molecular, ausência de vetores competentes e baixa especificidade do kit comercial de WB utilizado podem ter limitado a análise de fatores de risco.

Molecular investigation of hemotropic mycoplasms in human beings, dogs and horses in a rural settlement in Southern Brazil / Investigação molecular de espécies de micoplasmas hemotrópicos em cães, equinos e humanos de um assentamento rural do Sul do Brasil

SUMMARYThe aims of this study were to determine the prevalence of hemoplasmas in a rural Brazilian settlement's population of human beings, their dogs and horses, highly exposed to tick bites; to identify the tick species parasitizing dogs and horses, and analyze factors associated with their infection. Blood samples from 132 dogs, 16 horses and 100 humans were screened using a pan-hemoplasma SYBR green real-time PCR assay followed by a species-specific TaqMan real-time PCR. A total of 59/132 (44.7%) dog samples were positive for hemoplasmas (21 Mycoplasma haemocanisalone, 12 ' CandidatusMycoplasma haematoparvum' alone and 21 both). Only 1/100 (1.0%) human sample was positive by qPCR SYBR green, with no successful amplification of 16S rRNA or 23 rRNA genes despite multiple attempts. All horse samples were negative. Dogs >1 year of age were more likely to be positive for hemoplasmas ( p= 0.0014). In conclusion, although canine hemoplasma infection was highly prevalent, cross-species hemoplasma transmission was not observed, and therefore may not frequently occur despite overexposure of agents and vectors.

RESUMOOs objetivos deste estudo foram determinar a prevalência de hemoplasmas numa população restrita de cães, equinos e humanos altamente expostos a picadas de carrapatos em assentamento rural brasileiro; identificar as espécies de carrapatos parasitando cães e equinos, e analisar os fatores associados à infecção. Amostras de sangue de 132 cães, 16 cavalos e 100 humanos foram avaliadas utilizando um protocolo pan-hemoplasma em PCR quantitativas em tempo real (qPCR) com SYBR green, seguido de qPCR TaqMan espécie-específicos. Cinquenta e nove/132 (44,7%) cães foram positivos para hemoplasmas (21 Mycoplasma haemocanis, 12 ' Candidatus Mycoplasmahaematoparvum' e 21 para ambos). Uma amostra humana do total de 100 (1%) foi positiva pelo qPCR SYBR green, mas os genes 16S rRNA ou 23S rRNA não foram amplificados com sucesso, apesar de inúmeras tentativas. Todas as amostras de cavalos foram negativas. Cães > 1 ano apresentaram mais chance de serem positivos para hemoplasmas ( p= 0,0014). Concluindo, embora infecções por hemoplasmas caninos sejam altamente prevalentes, a transmissão de hemoplasmas entre espécies não foi observada, e desta forma podem não ocorrer de forma frequente apesar da alta exposição aos agentes e vetores.

Borrelia burgdorferi sensu lato in humans in a rural area of Paraná State, Brazil

This study describes the detection of Borrelia garinii and Borrelia burgdorferi sensu stricto (s.s.) in Brazilian individuals using PCR and DNA sequencing. Our results suggest that these species are emerging pathogens in this country, and additional studies are necessary to determine the epidemiological characteristics of this disease in Brazil.

Genetic characterization of Toxoplasma gondii isolates from eared doves (Zenaida auriculata) in Brazil / Caracterização genética de isolados de Toxoplasma gondii de pombos (Zenaida auriculata) no Brasil

Eared doves (Zenaida auriculata), which are common in urban, rural and wild areas in many regions of Brazil, are frequently prey for domestic cats. Therefore Toxoplasma gondii isolates obtained from doves may reflect greater environmental diversity than those from other hosts. The aim of the present study was to evaluate T. gondii seroprevalence, isolate and genotype strains from Z. auriculata. Serum and tissue samples were collected from 206 doves for use in the modified agglutination test (MAT) and mouse bioassay. The prevalence of T. gondii antibodies in the doves was 22.3% (46/206), with titers ranging from 16 to 4096, and T. gondii strains were isolated from 12 of these doves. Five genotypes were detected by means of PCR-RFLP, including ToxoDB genotypes #1, #6, #17 and #65, and one genotype that had not previously been described (ToxoDB#182). This was the first report on isolation of T. gondii from Z. auriculata. This study confirmed the genetic diversity of T. gondii isolates and the existence of clonal type II (ToxoDB genotype #1) in Brazil.

Pombos silvestres (Zenaida auriculata), comuns em áreas urbanas, rurais e selvagens em muitas regiões do Brasil, são frequentemente predados por gatos domésticos. Sendo assim, os isolados de T. gondii obtidos de pombos podem refletir uma maior diversidade ambiental do que os outros hospedeiros. O objetivo do presente estudo foi avaliar a soroprevalência, isolar e genotipar T. gondii de Z. auriculata. Amostras de soro e tecido foram coletadas de 206 pombos para o teste de aglutinação modificado (MAT) e o bioensaio em camundongos. A prevalência de anticorpos contra T. gondii em pombos foi 22,3% (46/206), com títulos variando de 16 a 4096, e T. gondii foi isolado de 12 pombos. Cinco genótipos foram detectados por PCR-RFLP, incluindo os genótipos ToxoDB #1, #6, #17, #65 e um genótipo não descrito anteriormente (ToxoDB#182). Esse é o primeiro relato de isolamento de T. gondii de Z. auriculata. Este estudo também confirmou a diversidade dos isolados de T. gondii e a presença de tipo clonal II (ToxoDB #1) no Brasil.

Occurrence of gastrointestinal and renal helminths in Zenaida auriculata (Des Murs, 1847) trap-captured from Brazil / Ocorrência de helmintos gastrintestinais e renais em Zenaida auriculata (Des Murs, 1847) capturados no Brasil

This study aimed to determine the prevalence of gastrointestinal and renal helminths from naturally infected Zenaida auriculata captured in Londrina, Paraná State. Two hundred and one Eared doves were trapped and the gastrointestinal and renal helminths were collected and identified according to morphological structures. One hundred and sixteen (57.71%) doves were parasitized by helminths with specific prevalences for Ornithostrongylus quadriradiatus in 50 doves (24.88%), Ascaridia columbae in 47 (23.38%), Paratanaisia bragai and P. confusa in 34 (16.92%),Tetrameres fissispina in 17 (8.46%), Synhimantus nasuta in 14 (6.47%), Brachylaima mazzantii in 4 (1.99%) and Raillietina allomyodes in 2 doves (1.00%). Seventy four/201 (37.00%) birds were infected with only one species, and 96/201 (48.00%) pigeons were infected with nematodes. The association between different classes of helminths occurred in 40/201 (20.00%) animals. The results showed statistically differences between the presence of nematode (p = 0.00001) and trematode species (p ≤ 0.05) in the doves, and there was an association between the local of capture and the presence of trematodes and A. columbae (p ≤ 0.05). This study is the first to report the infection of Z. auriculata from Brazil with O. quadriradiatus, A. columbae, T. fissispina, S. nasuta, R. allomyodes, P. bragai and P. confusa.

O objetivo deste estudo foi determinar a prevalência de helmintos gastrintestinais e renais de Zenaida auriculata naturalmente infectados capturados em Londrina, Paraná. Duzentos e um pombos-de-bando foram capturados e os helmintos gastrintestinais e renais foram coletados e identificados de acordo com as estruturas morfológicas. Cento e dezesseis (57,71%) pombos estavam parasitados por helmintos com as seguintes prevalências: Ornithostrongylus quadriradiatus em 50 pombos (24,88%), seguido por Ascaridia columbae em 47 (23,38%), Paratanaisia bragai e P. confusa em 34 (16,92%), Tetrameres fissispina em 17 (8,46%), Synhimantus nasuta em 14 (6,47%), Brachylaima mazzantii em 4 (1,99%) e Raillietina allomyodes em 2 pombos (1,00%). Setenta e quatro/201 (37,00%) aves apresentaram-se infectadas por apenas uma espécie, e 96/201 (48,00%) pombos com nematodas. A associação entre diferentes classes de helmintos ocorreu em 40/201 (20,00%) animais. Os resultados mostraram diferenças estatísticas entre a presença de nematodas (p = 0,00001) e trematodas (p ≤ 0,05) em pombos, e houve associação entre o local de captura e a presença de trematodas e A. columbae (p ≤ 0,05). Este trabalho é o primeiro a relatar a infecção de Z. auriculata no Brasil com O. quadriradiatus, A. columbae, T. fissispina, S. nasuta, R. allomyodes, P. bragaie P. confusa.

SEROLOGICAL SURVEY OF Ehrlichia SPECIES IN DOGS, HORSES AND HUMANS: ZOONOTIC SCENERY IN A RURAL SETTLEMENT FROM SOUTHERN BRAZIL / Investigação sorológica de espécies de Ehrlichia em cães, equinos e humanos de um assentamento rural do sul do Brasil

SUMMARY The aims of this study were to determine the seroprevalence of Ehrlichia spp. and risk factors for exposure in a restricted population of dogs, horses, and humans highly exposed to tick bites in a Brazilian rural settlement using a commercial ELISA rapid test and two indirect immunofluorescent assays (IFA) with E. canis and E. chaffeensis crude antigens. Serum samples from 132 dogs, 16 horses and 100 humans were used. Fifty-six out of 132 (42.4%) dogs were seropositive for E. canis. Dogs > one year were more likely to be seropositive for E. canis than dogs ≤ one year (p = 0.0051). Ten/16 (62.5%) and 8/16 (50%) horses were seropositive by the commercial ELISA and IFA, respectively. Five out of 100 (5%) humans were seropositive for E. canis and E. chaffeensis. Rhipicephalus sanguineus (n = 291, 97.98%) on dogs and Amblyomma cajennense (n = 25, 96.15%) on horses were the most common ticks found. In conclusion, anti-Ehrlichia spp. antibodies were found in horses; however, the lack of a molecular characterization precludes any conclusion regarding the agent involved. Additionally, the higher seroprevalence of E. canis in dogs and the evidence of anti-Ehrlichia spp. antibodies in humans suggest that human cases of ehrlichiosis in Brazil might be caused by E. canis, or other closely related species. .

RESUMO Objetivou-se determinar a soroprevalência de Ehrlichia spp. e os fatores de risco associados a exposição em uma população restrita de cães, cavalos e humanos altamente expostos a picadas de carrapatos em um assentamento rural brasileiro utilizando um teste comercial de ELISA rápido e dois testes de imunofluorescência indireta (IFI) com antígenos brutos de E. canis e E. chaffeensis. Amostras de soro de 132 cães, 16 cavalos e 100 humanos foram utilizadas. Cinquenta e seis/132 (42,4%) cães foram soropositivos para E. canis. Cães > um ano apresentaram mais chance de serem soropositivos para E. canis do que cães ≤ um ano (p = 0,0051). Dez/16 (62,5%) e 8/16 (50%) cavalos foram soropositivos pelo ELISA comercial e IFI, respectivamente. Cinco/100 (5%) humanos foram soropositivos para E. canis e E. chaffeensis. Rhipicephalus sanguineus (n = 291, 97,98%) nos cães e A. cajennense (n = 25, 96,15%) nos cavalos foram os carrapatos mais encontrados. Concluindo, anticorpos anti-Ehrlichia spp. foram encontrados em cavalos; entretanto, a ausência de uma caracterização molecular impede qualquer conclusão sobre agente envolvido. Além disso, a alta soroprevalência de E. canis em cães e a evidência de anticorpos anti-Ehrlichia sp. em humanos, sugere que os casos de erliquiose humana no Brasil possam ser causados por E. canis ou outra espécie intimamente relacionada. .

First record of Borrelia burgdorferi B31 strain in Dermacentor nitens ticks in the northern region of Parana (Brazil)

The aim of this study was to investigate the presence of DNA of Borrelia burgdorferi sensu lato (s.l.) in ticks that feed on horses used for animal traction in rural Jataizinho, Parana, Brazil. Between February and June 2008, a total of 224 ticks was collected of which 75% were identified as Dermacentor nitens and 25% as Amblyomma cajenense. To amplify B. burgdorferi s.l. DNA, the intergenic space region (ISR) between the 5S (rrf) 23S (rrl) rRNA genes was used as targets for nested-PCR. Two ticks of the D. nitens species were positive for B. burgdorferi s.l. Both species showed a fragment of 184 bp, but the sequencing revealed 99.9% homology with the B. burgdorferi sensu stricto (s.s.) strain B31. These results showed, for the first time, the presence of spirochete DNA infecting ticks that parasitize horses used for animal traction, in the rural municipality mentioned. In conclusion, this study opens up promising prospects for determining the infection rate of B. burgdorferi s.s. genospecies or other species in the equine population, as well as the impact of the infection rate on Lyme disease in the state of Parana.

Immune response of calves inoculated with proteins of Anaplasma marginale bound to an immunostimulant complex / Resposta imune de bezerros inoculados com proteínas de Anaplasma marginale ligadas a um complexo imunoestimulante

Despite our current knowledge of the immunology, pathology, and genetics of Anaplasma marginale, prevention in cattle is currently based on old standbys, including live attenuated vaccines, antibiotic treatment, and maintaining enzootic stability in cattle herds. In the present study, we evaluated the use of an immunostimulant complex (ISCOMATRIX) adjuvant, associated with a pool of recombinant major surface proteins (rMSP1a, rMSP1b, rMSP4 and rMSP5) to improve the humoral immune response triggered in calves mainly by IgG2. Ten calves were divided in three groups: 4 calves were inoculated with the ISCOMATRIX/rMSPs (G1); 2 calves were inoculated with ISCOMATRIX adjuvant (G2); and 4 calves received saline (G3). Three inoculations were administered at 21-day intervals. In G1, the calves showed significant increases in total IgG, IgG1 and IgG2 levels 21 days after the second inoculation, compared to the control group (p < 0.05), and G1 calves remained above the cut-off value 28 days after the third inoculation (p < 0.05). The post-immunized sera from calves in G1 reacted specifically for each of the rMSPs used. In conclusion, the ISCOMATRIX/rMSPs induced antigen-specific seroconversion in calves. Therefore, additional testing to explore the protection induced by rMSPs, both alone and in conjunction with proteins previously identified as subdominant epitopes, is warranted.

Apesar dos avanços da imunologia, patologia e genética de Anaplasma marginale, a prevenção em bovinos ainda é baseada nas vacinas vivas atenuadas, na terapia com antibiótico e estabilidade enzoótica dos rebanhos bovinos. No presente estudo, avaliou-se o uso de um complexo imunoestimulante (ISCOMATRIX), associado às proteínas recombinantes de superfície (rMSP1a, rMSP1b, rMSP4 e rMSP5) para melhorar a resposta imune humoral desencadeada em bezerros, principalmente por IgG2. Dez animais foram divididos em três grupos: 4 bezerros foram inoculados com o ISCOMATRIX/rMSPs (G1), 2 bezerros foram inoculados com ISCOMATRIX adjuvante (G2) e 4 bezerros receberam salina (G3). Três doses vacinais foram administradas em intervalos de 21 dias. No G1, os bezerros apresentaram aumentos significativos nos níveis de IgG total, IgG1 e IgG2 21 dias após a segunda inoculação, em comparação com o grupo de controle (p <0,05). Nos bezerros do G1 esses níveis de anticorpos permaneceram acima do ponto de corte 28 dias após a terceira inoculação (p < 0,05). Os soros pós-imunização de bezerros do G1 reagiram especificamente com cada uma das rMSPs utilizadas. Em conclusão, o ISCOMATRIX/rMSPs induziu soroconversão antígeno-específica em bezerros. Portanto, se justifica a realização de ensaios adicionais para explorar a proteção induzida pela rMSPs, tanto sozinhas como em conjunto com novas proteínas identificadas com epítopos subdominantes.

Serosurvey of tick-borne pathogens in dogs from urban and rural areas from Parana State, Brazil / Avaliação sorológica de patógenos transmitidos por carrapatos em cães urbanos e rurais do estado do Paraná, Brasil

Considering the zoonotic potential of tick-borne disease (TBD) agents and the fact that dogs may act as sentinels for human infection, the aim of the present study was to determine the seroprevalence of TBD agents and risk factors for exposure in two different canine populations from Parana State, Southern Brazil. A total of 138 dog serum samples from urban (UA) (n=68) and rural (RA) (n=70) areas were tested with commercial ELISA rapid test forAnaplasma phagocytophilum, Ehrlichia canisand Borrelia burgdorferi antibodies and indirect immunofluorescence assay (IFAT) for Babesia vogeli. An overall of 92∕138 (66.7%) dogs, being 62∕68 (91.2%) from UA and 30∕70 (42.9%) from RA, were seropositive for at least one TBD agent. From the total number of dogs, sixty-two were positive for E. canis (44.9%), 19 (13.8%) for A. phagocytophilum, and 64 (46.4%) for B. vogeli. Anti-B. burgdorferi antibodies were not detected. Dogs from UA showed a higher percentage of tick infestation (p = 0.0135) and were highly associated with seropositivity to E. canis (p = 0.000005), A. phagocytophilum (p = 0.0001), and B. vogeli (p = 0.0012). In summary, the findings indicate that dogs from urban areas present higher potential risk exposure to TBD pathogens than those from rural areas.

Considerando o potencial zoonótico das doenças transmitidas por carrapatos (DTCs) e que os cães podem atuar como sentinelas para infecções em humanos, os objetivos deste estudo foram determinar a soroprevalência de agentes das DTCs e fatores de risco para a exposição em duas diferentes populações caninas do Estado do Paraná, região Sul do Brasil. Um total de 138 amostras de soro de cães de área urbana (AU) (n = 68) e rural (AR) (n = 70) foram testadas utilizando um teste de ELISA comercial rápido para detecção de anticorpos contra Anaplasma phagocytophilum, Ehrlichia canis e Borrelia burgdorferi e imunofluorescência indireta (IFI) para Babesia vogeli. Um total de 92∕138 (66,7%) cães, sendo 62∕68 (91,2%) da AU e 30∕70 (42,9%) da AR, foram soropositivos para pelo menos um agente. Do número total de amostras, sessenta e duas (44,9%) foram positivas para E. canis, 19 (13,8%) para A. phagocytophilum e 64 (46,4%) para B. canis vogeli. Anticorpos anti-B. burgdorferi não foram detectados. Os cães da AU apresentaram o maior percentual de infestação por carrapatos (p = 0,0135) e foram altamente associados com a positividade para E. canis (p = 0,000005), A. phagocytophilum (p = 0,0001) e B. vogeli (p = 0,0012). Em resumo, nossos achados indicam que cães de áreas urbanas têm um maior risco potencial de exposição a agentes patogênicos das DTCs comparados aos das áreas rurais.

Occurrence of Ehrlichia canis and Anaplasma platys in household dogs from northern Parana / Ocorrência de Ehrlichia canis e Anaplasma platys em cães domiciliados da região norte do Paraná

Canine monocytic ehrlichiosis caused primarily by Ehrlichia canis and canine thrombocytic anaplasmosis induced by Anaplasma platys are important emerging zoonotic tick-borne diseases of dogs. There is evidence that these pathogens can also affect humans. This study evaluated the presence of E. canis and A. platys in blood samples collected from 256 domiciled dogs in the municipality of Jataizinho, located in north region of the State of Parana, Brazil, by PCR assay. The occurrence of E. canis and A. platys was 16.4% (42/256) and 19.4% (49/256), respectively; while 5.47% (14/256) of the dogs evaluated were co-infected by these two organisms. The presence of E. canis and A. platys was not significantly associated with the variables evaluated (sex, age, outdoor access, and presence of ticks during blood collection). Infection of dogs by E. canis was associated with anemia and thrombocytopenia, while infection induced by A. platys was related only to thrombocytopenia. Canine monocytic ehrlichiosis and canine thrombocytic anaplasmosis should be included in the differential diagnoses when these hematological alterations are observed during routine laboratory evaluation of dogs.(AU)

Erliquiose monocítica canina, causada principalmente por Ehrlichia canis, e anaplasmose trombocítica canina, devida a infecção com Anaplasma platys, são importantes doenças transmitidas por carrapatos que acometem os cães, com evidências que podem também acometer o homem. O presente estudo avaliou a ocorrência desses agentes em amostras de sangue de 256 cães domiciliados na cidade de Jataizinho, na região Norte do Paraná, Brasil, utilizando a técnica da Reação em Cadeia da Polimerase (PCR). A ocorrência de E. canis e A. platys foi de 16,4% (42/256) e 19,4% (49/256), respectivamente, com 5,47% (14/256) dos animais apresentando coinfecção. Não foi observada associação significativa com as variáveis sexo, idade, acesso à rua e presença de carrapatos no momento da coleta de sangue. A infecção por E. canis teve relação com anemia e com trombocitopenia, enquanto a infecção por A. platys apresentou relação apenas com trombocitopenia. Com base nos resultados obtidos, reforçou-se a necessidade de que erliquiose e anaplasmose canina devem estar entre os diagnósticos diferenciais, quando da detecção de anemia e trombocitopenia em exames laboratoriais.(AU)

Study of infection by Rickettsiae of the spotted fever group in humans and ticks in an urban park located in the City of Londrina, State of Paraná, Brazil / Estudo da infecção por Rickettsias do grupo da febre maculosa em humanos e carrapatos de um parque urbano na Cidade de Londrina, Estado do Paraná

INTRODUCTION: Spotted fevers are emerging zoonoses caused by Rickettsia species in the spotted fever group (SFG). Rickettsia rickettsii is the main etiologic agent of Brazilian spotted fever (BSF) and it is transmitted by Amblyomma spp. ticks. METHODS: The study aimed to investigate SFG rickettsiae in the Arthur Thomas Municipal Park in Londrina, PR, by collecting free-living ticks and ticks from capybaras and blood samples from personnel working in these areas. Samples from A. dubitatum and A. cajennense were submitted for PCR in pools to analyze the Rickettsia spp. gltA (citrate synthase gene). RESULTS: All the pools analyzed were negative. Human sera were tested by indirect immunofluorescence assay with R. rickettsii and R. parkeri as antigens. Among the 34 sera analyzed, seven (20.6 percent) were reactive for R. rickettsii: four of these had endpoint titers equal to 64, 2 titers were 128 and 1 titer was 256. None of the samples were reactive for R. parkeri. An epidemiological questionnaire was applied to the park staff, but no statistically significant associations were identified. CONCLUSIONS: The serological studies suggest the presence of Rickettsiae related to SFG that could be infecting the human population studied; however, analysis of the ticks collected was unable to determine which species may be involved in transmission to humans.

INTRODUÇÃO: A febre maculosa é uma zoonose emergente causada por espécies de Rickettsia do grupo febre maculosa (GFM). Rickettsia rickettsii é o principal agente etiológico da febre maculosa brasileira (FMB) e é transmitida por Amblyomma spp. MÉTODOS: Com o objetivo de obter informações sobre GFM Rickettsiae no Parque Municipal Arthur Thomas em Londrina, PR, carrapatos de vida livre e de capivaras foram coletados, assim como amostras de sangue das pessoas que trabalham no parque. A. dubitatum e A. cajennense foram submetidos à PCR em pools para analises de Rickettsia spp. gltA (citrate synthase gene). RESULTADOS: Todos os pools de carrapatos analizados foram negativos. Soros de humanos foram testados pela imunofluorescência indireta com antigenos de R. rickettsii e R. parkeri. Entre os 34 soros analisados, 7 (20,6 por cento) foram positivos para R. rickettsii. Destes, quatro apresentaram títulos iguais a 64, dois iguais a 128 e um, igual a 256, mas nenhum soro reagiu com R. parkeri. Não houve nenhuma associação, estatisticamente significante, entre as variáveis analisadas no questionário epidemiológico fornecido às pessoas que participaram da pesquisa. CONCLUSÕES: Os estudos sorológicos sugerem a presença de alguma Rickettsiae relacionada ao GFM que poderiam estar infectando a população humana estudada. Entretanto, as análises dos carrapatos foram inconclusivas para determinar qual espécie poderia estar envolvida na transmissão para os humanos.

Use of a Mycoplasma suis-PCR protocol for screening a population of captive peccaries (Tayassu tajacu and Tayassu pecari) / Uso de um protocolo de PCR para a detecção de Mycoplasma suis para avaliação de uma população de catetos e queixadas de cativeiro (Tayassu tajacu and Tayassu pecari)

Mycoplasma suis is a hemotropic bacteria of red blood cells and the causative agent of swine eperythrozoonosis. Diagnosis of infection may be reached by direct examination of blood smears; however, the use of polymerase chain reaction (PCR) of the 16S RNA gene of M. suis improves the sensitivity and specificity of detection. The aim of this study was to screen peccaries (Tayassu tajacu and T. pecari) for M. suis infection using a specific conventional PCR. A total of 28 blood samples from captive collared and white-lipped peccaries were collected, DNA extracted and a specific M. suis PCR assay performed. All samples were negatives by both blood smear examination and PCR testing. To verify the presence of amplifiable DNA, PCR for beta-actin gene was performed in all samples. This study was part of an active surveillance program, which is crucial for monitoring animal health status, particularly in wildlife species.

Mycoplasma suis é uma bactéria hemotrópica dos eritrócitos e é o agente causador da eperitrozoonose suína. O diagnóstico da infecção pode ser realizado pelo exame direto de esfregaços sanguíneos; entretanto, o uso da reação em cadeia da polimerase (PCR) baseada no gene 16S RNA de M. suis aumenta a sensibilidade e especificidade da detecção. O objetivo deste estudo foi avaliar catetos e queixadas (Tayassu tajacu e T. pecari) para a infecção por M. suis, utilizando PCR convencional específico. Um total de 28 amostras de sangue de catetos e queixadas de cativeiro foram coletadas, o DNA foi extraído e a PCR específica para a detecção de M. suis realizada. Todas as amostras foram negativas pelo esfregaço sanguíneo e PCR. Para verificar a presença de DNA amplificável, PCR para o gene da beta actina foi realizada em todas as amostras. Este estudo foi parte de um programa de vigilância ativa, o qual é crucial para o monitoramento do estado de saúde animal, particularmente em espécies selvagens.

Ehrlichiosis in Brazil / Erliquiose no Brasil

Ehrlichiosis is a disease caused by rickettsial organisms belonging to the genus Ehrlichia. In Brazil, molecular and serological studies have evaluated the occurrence of Ehrlichia species in dogs, cats, wild animals and humans. Ehrlichia canis is the main species found in dogs in Brazil, although E. ewingii infection has been recently suspected in five dogs. Ehrlichia chaffeensis DNA has been detected and characterized in mash deer, whereas E. muris and E. ruminantium have not yet been identified in Brazil. Canine monocytic ehrlichiosis caused by E. canis appears to be highly endemic in several regions of Brazil, however prevalence data are not available for several regions. Ehrlichia canis DNA also has been detected and molecularly characterized in three domestic cats, and antibodies against E. canis were detected in free-ranging Neotropical felids. There is serological evidence suggesting the occurrence of human ehrlichiosis in Brazil but its etiologic agent has not yet been established. Improved molecular diagnostic resources for laboratory testing will allow better identification and characterization of ehrlichial organisms associated with human ehrlichiosis in Brazil.

Erliquiose é uma doença causada por rickettsias pertencentes ao gênero Ehrlichia. No Brasil, estudos sorológicos e moleculares têm avaliado a ocorrência de espécies de Ehrlichia em cães, gatos, animais selvagens e seres humanos. Ehrlichia canis é a principal espécie em cães no Brasil, embora a infecção por E. ewingii tenha, recentemente, despertado suspeita em cinco cães. O DNA de E. chaffeensis foi detectado e caracterizado em cervo-do-pantanal, enquanto que E. muris e E. ruminantium ainda não foram identificadas no Brasil. A erliquiose monocítica canina causada pela E. canis parece ser altamente endêmica em muitas regiões do Brasil, embora dados de prevalência não estejam disponíveis em muitas delas. O DNA de E. canis também foi detectado e caracterizado em três gatos domésticos, enquanto anticorpos contra E. canis foram detectados em felídeos neotropicais de vida livre. Evidências sorológicas sugerem a ocorrência de erliquiose humana no Brasil, entretanto, o agente etiológico ainda não foi identificado. A melhoria do diagnóstico molecular promoverá a identificação e caracterização de espécies associadas à erliquiose humana no Brasil.

Toxoplasma gondii: humoral and cellular immune response of BALB/c mice immunized via intranasal route with rTgROP2 / Toxoplasma gondii: avaliação da resposta imune humoral e celular de camundongos BALB/c imunizados pela via nasal com rTgROP2

TgROP2 is an intracellular protein associated with rhoptries of Toxoplama gondii and an antigen component of a candidate vaccine for toxoplasmosis. The purpose of the present study was to evaluate the efficacy of rTgROP2 to stimulate humoral and cellular immune responses in BALB/c mice via intranasal injection. TgROP2 partial coding sequence was (196-561) amplified by PCR from genomic T. gondii RH strain DNA and cloned into the pTrcHis expression vector. Escherichia coli Rosetta 2 cells transformed with pTrcHis-TgROP2 showed high levels (~1 mg.mL-1) of recombinant protein after 4 hours of IPTG induction. Recombinant TgROP2 exhibited an apparent Mr equal to 54 kDa. In order to test immunogenicity of the recombinant protein, 10 BALB/c mice received 10 µg of rROP2 protein + 10 µg of Quil-A via intranasal injection. Doses were administered at days 0, 21, and 42. Three animals were euthanized and used to evaluate cell-ular immune response on day 62. Five (50 percent) and two (20 percent) out of ten animals produced IgG (DO mean = 0.307; cut-off = 0.240) and IgA (DO mean = 0.133, cut-off = 0.101), respectively, by ELISA on day 62. The proliferation of splenocytes revealed high stimulation index (SI) when co-cultured with 5, 10 and 15 µg.mL-1 of rTgROP2. These results indicate that intranasal immunization with recombinant protein ROP2 plus Quil-A can elicit both cellular and humoral immune responses in BALB/c mice.

TgROP2 é uma proteína localizada nas roptrias do Toxoplasma gondii, sendo um antígeno candidato a componente de uma vacina contra a toxoplasmose. O objetivo do presente estudo foi avaliar a eficácia da TgROP2 recombinante em estimular a resposta imune celular e humoral de camundongos BALB/c após estímulo intranasal. A sequência da TgROP2 foi amplificada pela PCR a partir da cepa RH e clonada em vetor de expressão pTrc-His. Após a transformação em Escherichia coli- Rosetta 2, a pTrcHis-TgROP2 exibiu alto nível de expressão após 4 horas de indução com IPTG. A proteína recombinante apresentou uma massa molecular aparente de aproximadamente 54 kDa. Para avaliar a imunogenicidade dessa proteína recombinante, 10 camundongos receberam, pela via intranasal, 10 µg da rROP2 associado a 10 µg de Quil-A. Três doses foram realizadas nos dias 0, 21 e 42. No dia 62 do experimento, três animais foram eutanasiados para avaliar as respostas imune celular e humoral. Cinco (50 por cento) e dois (20 por cento) dos 10 animais apresentaram níveis de IgG (DO média = 0,307; ponto de corte = 0,240) e IgA (DO média = 0,133; ponto de corte = 0,101) acima do ponto de corte no ELISA no dia 62. A proliferação de esplenócitos revelou altos Índices de Estimulação (SI), quando as células foram cultivadas com 5, 10 e 15 µg.mL-1 de rTgROP2. Os resultados obtidos indicam que a via nasal pode estimular tanto a resposta imune celular como a humoral.