Análise do manejo cirúrgico de pacientes com câncer cervical recidivado após radioterapia e quimioterapia / Analysis of the surgical management of patients with recurrent cervical cancer after radiotherapy and chemotherapy

RESUMO Objetivos: Analisar os resultados de morbidade e sobrevida após cirurgias curativas e paliativas em pacientes com câncer cervical recidivado após tratamento primário com radioterapia e quimioterapia. Outro objetivo foi avaliar os fatores associados aos procedimentos curativos e não curativos. Métodos: Coorte retrospectiva de pacientes submetidos à cirurgias curativas e paliativas, entre janeiro de 2011 a dezembro de 2017, em um centro de alta complexidade em oncolologia. O desfecho da morbidade foi relatado de acordo com a classificação de Clavien-Dindo e a análise de sobrevida foi realizada pelo método de Kaplan-Meir. Para avaliar os fatores associados aos procedimentos, foi realizada análise univariada pelo teste U de Mann-Whitney. Resultados: Foram realizadas duas histerectomias radicais, três exenterações pélvicas com intenção curativa e cinco exenterações pélvicas paliativas. No grupo curativo, houve complicações maiores em 40% dos casos, e o tempo mediano de sobrevida foi 16 meses. No grupo paliativo, houve complicações maiores em 60% dos casos, e o tempo mediano de sobrevida foi 5 meses. Estadiamento avançado (p=0,02), sintomas (p=0,04), tamanho do tumor maior que cinco centímetros (p=0,04) e mais de três órgãos envolvidos (p=0,003) foram fatores significativamente associados a cirurgia não curativa. Conclusões: As taxas de morbidade foram maiores no grupo paliativo, e o tempo mediano de sobrevida foi menor no grupo paliativo do que no grupo curativo, entretanto esta diferença na sobrevida não teve significância estatística. Estádio avançado, sintomas, tamanho tumoral e número de órgãos envolvidos são fatores que devem ser levados em consideração na indicação de resgate cirúrgico.

ABSTRACT Objectives: To analyze the results of morbidity and survival after curative and palliative surgery in recurrent cervical cancer patients who underwent chemoradiation as their primary treatment. Another goal was to assess the factors associated with curative and non-curative procedures. Methods: This was a retrospective cohort consisting of patients undergoing surgery curative and palliative from January 2011 to December 2017 at a high complexity oncology center. Outcome of morbidity was reported according to the Clavien-Dindo classification, and survival analysis was carried out using the Kaplan-Meir method. To assess the factors associated with the procedures, a univariate analysis using the Mann-Whitney U test was performed. Results: Two radical hysterectomies, three pelvic exenterations with curative intent, and five palliatives pelvic exenterations were performed. In the curative group, there were major complications in 40% of the cases, and the median survival time was 16 months. In the palliative group, there were major complications in 60% of the cases, and the median survival time was 5 months. Advanced staging (p-value= 0.02), symptoms (p-value=0.04), tumor size greater than five centimeters (p-value=0.04), and more than three organs involved (p-value=0.003) were factors significantly associated with non-curative surgery. Conclusions: The morbidity rates of this study were higher in palliative group, and the median survival time was lower in the palliative group than the curative group, but this difference in survival was not statistically significant. Advanced stage, symptoms, tumor size and number of organs involved are factors that should be taken into consideration when indicating surgical salvage.

Transvaginal ultrasound in deep endometriosis: pictorial essay / Ultrassonografia transvaginal na endometriose profunda: ensaio iconográfico

Abstract Endometriosis is characterized by the presence of endometrial tissue outside the uterus. When endometrial implants penetrate more than 5 mm into the peritoneum, the condition is referred to as deep pelvic endometriosis. Although laparoscopy is the gold standard test to establish a diagnosis of deep endometriosis, transvaginal ultrasound represents an alternative that can contribute to detection of the disease, because it is an accessible, low-cost, noninvasive examination that allows preoperative planning in cases requiring surgical treatment. However, in clinical practice, transvaginal ultrasound is still not widely used as the first-line examination in suspected cases of endometriosis. This essay describes the findings of deep endometriosis on transvaginal ultrasound, in order to disseminate knowledge of the utility of the technique for the diagnosis of this disease.

Resumo A endometriose é caracterizada pela presença de tecido endometrial fora do útero. Quando os implantes endometriais penetram mais de 5 mm no peritônio, são definidos como endometriose pélvica profunda. O exame padrão ouro para estabelecer seu diagnóstico é a laparoscopia, mas a ultrassonografia transvaginal pode contribuir na detecção da doença, por ser um exame acessível, de menor custo, não invasivo e por possibilitar o planejamento pré-operatório nos casos em que é necessário o tratamento cirúrgico. Entretanto, este método como primeiro exame a ser solicitado na suspeita de endometriose precisa ser mais considerado na prática clínica. Este ensaio descreve os achados da endometriose profunda na ultrassonografia transvaginal, com o intuito de difundir a importância da técnica para o diagnóstico dessa doença.

Clinical features, socio-demographic profile and ultrasound findings in women with endometriosis symptoms / Características clínicas, perfil sociodemográfico e achados ecográficos em mulheres com sintomas de endometriose

AIMS: To describe clinical and socio-demographic features, as well as transvaginal ultrasound results, of women with endometriosis symptoms. METHODS: A prospective cross-sectional study included patients who had at least one of the following symptoms: dyspareunia, dysmenorrhea, chronic pelvic pain, infertility, and urinary or bowel cyclic symptoms. The sample comprised women treated in a private gynecology clinic located in a small city in southern Brazil, from March to November 2016. All the participants, after signed an informed consent, were subjected to clinical anamnesis, transvaginal ultrasound with bowel preparation, and examination for the CA-125 antigen serum level. Association between two qualitative variables was assessed through Pearson's Chi-Square or Fisher's exact tests. Mean values of quantitative variables were compared through the two-tailed Student's t-test for independent samples. Significance level was set as p<0.05. RESULTS: A total of 85 women, aged 18-49 years, participated in the study. Most were married (75.3%), with children (51.8%), showed no family history of endometriosis (89.4%), had no knowledge about endometriosis (77.6%) and completed high school (43.5%). Ultrasound findings suggested endometriosis in 25 (29.4%) women. Dysmenorrhea was the most prevalent symptom (88.2%), followed by dyspareunia (61.2%). In comparison to those without ultrasound signs, the patients whose ultrasound findings suggested endometriosis had an older age (37.16±6.83 years vs. 30.37±6.80 years, p<0.001) and a longer duration of symptoms (9.06±6.49 years vs. 5.27±4.79 years, p=0.004). In addition, they presented higher mean serum CA-125 antigen levels (50.07±54.05 U/mL vs. 17.71±14.09 U/mL, p=0.011). Endometriosiscompatible lesions were mainly found in the ovaries (60%) and in the rectosigmoid region (52%). The disease was confirmed in the nine cases that were subjected to videolaparoscopy. CONCLUSIONS: Transvaginal ultrasound confirmed endometriosis in about one third of symptomatic patients, who were older, had symptoms for a longer time, and had higher serum CA-125 antigen levels in comparison to those without endometriosis diagnosis based on transvaginal ultrasound. Ovaries and rectosigmoid region were the sites with the highest frequency of ultrasound signs of endometriosis.

OBJETIVOS: Descrever características clínicas e sociodemográficas, bem como resultados de ultrassonografia transvaginal, de mulheres com sintomas de endometriose. MÉTODOS: Um estudo transversal prospectivo incluiu pacientes que apresentaram pelo menos um dos seguintes sintomas: dispareunia, dismenorreia, dor pélvica crônica, infertilidade e sintomas urinários ou intestinais cíclicos. A amostra foi composta por mulheres atendidas em clínica privada de ginecologia, localizada em uma pequena cidade do sul do Brasil, de março a novembro de 2016. Todas as participantes, após assinatura do termo de consentimento livre e esclarecido, foram submetidas a anamnese clínica, ultrassonografia transvaginal com preparo intestinal e análise do nível sérico do antígeno CA-125. A associação entre duas variáveis qualitativas foi avaliada pelos testes Qui-Quadrado de Pearson ou Exato de Fisher. Os valores médios das variáveis quantitativas foram comparados através do teste t de Student bicaudal para amostras independentes. O nível de significância foi estabelecido como p<0,05. RESULTADOS: Um total de 85 mulheres, com idade entre 18 e 49 anos, participou do estudo. A maioria era casada (75,3%), com filhos (51,8%), não apresentava história familiar de endometriose (89,4%), não tinha conhecimento sobre endometriose (77,6%) e tinha ensino médio completo (43,5%). Achados ultrassonográficos sugeriram endometriose em 25 (29,4%) mulheres. A dismenorreia foi o sintoma mais prevalente (88,2%), seguida pela dispareunia (61,2%). Em comparação com aquelas sem sinais ultrassonográficos, as pacientes cujos achados ultrassonográficos sugeriram endometriose tinham idade mais avançada (37,16±6,83 anos vs. 30,37±6,8 anos, p<0,001) e maior duração dos sintomas (9,06±6,49 anos vs. 5,27±4,79 anos, p=0,004). Além disso, apresentaram níveis séricos de antígeno CA-125 mais elevados (50,07±54,05 U/mL vs. 17,71±14,09 U/mL, p=0,011). Lesões compatíveis com endometriose foram encontradas principalmente nos ovários (60%) e na região retossigmoide (52%). A doença foi confirmada nos nove casos que foram submetidos a videolaparoscopia. CONCLUSÕES: A ultrassonografia transvaginal confirmou a endometriose em cerca de um terço das pacientes sintomáticas, que eram mais velhas, apresentavam sintomas por mais tempo e tinham níveis mais altos de antígeno CA-125 sérico, em comparação àquelas sem diagnóstico de endometriose com base na ultrassonografia transvaginal. Ovários e região retossigmoide foram os locais com maior frequência de sinais ultrassonográficos de endometriose.

Screening anal cancer in women living with HIV/AIDS / Rastreamento do câncer anal em mulheres vivendo com HIV/AIDS

ABSTRACT Aim: Addressing the main methodologies published in the scientific literature and used to screen anal cancer in women living with HIV/AIDS. Methodology: The current study is an integrative literature review applied to articles published between 2013 and 2017 in databases such as PUBMED, EBSCO and LILACS. Results: Eight studies were selected to compose the current review after the inclusion and exclusion criteria were applied. All the articles had evidence level IV. Anal cytology and the DNA-HPV test were the methodologies prevailing in the studies. The number of participants in the studies ranged from 35 to 863, and all the studies involved women living with HIV/AIDS. The aim of most of the herein reviewed studies was to assess the prevalence of anal cytologic changes or HPV infection in women living with HIV/AIDS (WLHA). Conclusion: Studies have pointed out that there is concern about high anal cancer and anal HPV infection rates. They also highlighted the importance of the screening procedure for anal cancer prevention through cytology associated, or not, with molecular HPV detection methods.

RESUMO Objetivo: Abordar as principais metodologias que podem ser utilizadas para o rastreamento do câncer anal em mulheres vivendo com HIV/AIDS, que têm sido publicadas atualmente na literatura científica. Metodologia: Trata-se de uma revisão integrativa de literatura, realizada através de pesquisa de artigos nas bases de dados PUBMED, EBSCO e LILACS, publicados entre os anos de 2013 a 2017. Resultados: A partir da aplicação dos critérios de inclusão e exclusão, foram selecionados oito estudos para compor essa revisão. Todos possuíam nível de evidência IV. As metodologias que predominaram nos estudos foram a citologia anal e o teste DNA-HPV. O número de participantes nos estudos variou de 35 até 863, e todos envolveram mulheres vivendo com HIV/AIDS. A maioria tinha o objetivo de avaliar a prevalência de alterações citológicas anais ou infecção pelo HPV em mulheres vivendo com HIV/AIDS. Conclusão: Os estudos apontaram que há uma preocupação com os altos índices de câncer anal e infecção anal por HPV. Também registram a importância do rastreamento para prevenção do câncer anal, através da citologia associada ou não a métodos moleculares de detecção do HPV.

Structure analysis of capsid protein of Porcine circovirus type 2 from pigs with systemic disease

Abstract Economic losses with high mortality rate associated with Porcine circovirus type 2 (PCV2) is reported worldwide. PCV2 commercial vaccine was introduced in 2006 in U.S. and in 2008 in Brazil. Although PCV2 vaccines have been widely used, cases of PCV2 systemic disease have been reported in the last years. Eleven nursery or fattening pigs suffering from PCV2 systemic disease were selected from eight PCV2-vaccinated farms with historical records of PCV2 systemic disease in Southern Brazil. PCV2 genomes were amplified and sequenced from lymph node samples of selected pigs. The comparison among the ORF2 amino acid sequences of PCV2 isolates revealed three amino acid substitutions in the positions F57I, N178S and A190T, respectively. Using molecular modeling, a structural model for the capsid protein of PCV2 was built. Afterwards, the mutated residues positions were identified in the model. The structural analysis of the mutated residues showed that the external residue 190 is close to an important predicted region for antibodies recognition. Therefore, changes in the viral protein conformation might lead to an inefficient antibody binding and this could be a relevant mechanism underlying the recent vaccine failures observed in swine farms in Brazil.

Lesão anal por papilomavírus humano em mulher vivendo com HIV/aids / Anal lesion caused by human papillomavirus in a woman living with HIV/AIDS

OBJETIVOS: Descrever um caso de lesão anal causada por infecção pelo papilomavírus humano em uma mulher vivendo com HIV/aids. DESCRIÇÃO DO CASO: Mulher de 35 anos, diagnosticada há cinco anos com HIV, relatou prurido e sangramento anal, dor ao defecar e visualização de pequenas verrugas na região perianal. Atendida em um serviço de atenção especializada, foi submetida a exame clínico com inspeção visual, o qual revelou condiloma na região perianal. O exame histopatológico confirmou a presença de displasia de grau moderado a acentuado associado a alterações compatíveis com infecção pelo papilomavírus humano. A paciente foi encaminhada para exérese da lesão. No início dos sintomas, a paciente ainda não fazia uso da terapia antirretroviral e apresentava a maior carga viral do HIV de seu histórico laboratorial, com 2.951 cópias/ml. Também havia passado por estresse emocional e estava com infecções genitais recorrentes pelo vírus Herpes simplex. Esses fatores podem ter contribuído para o desenvolvimento do condiloma anal. CONCLUSÕES: A possibilidade de que a infecção pelo HIV possa alterar a história da infecção pelo HPV alerta para que nessas situações sejam adotadas estratégias rigorosas de rastreamento através do exame citológico, tanto do colo do útero como da região anal.

AIMS: To describe a case of anal lesion caused by human papillomavirus (HPV) infection in a woman living with HIV/AIDS. CASE DESCRIPTION: A 35-year-old woman, diagnosed with HIV five years ago, reported pruritus ani, anal bleeding, painful defecation, and presence of small warts in the perianal region. The patient was seen at a specialized care center and was subjected to clinical examination with visual inspection, which revealed perianal condyloma. Histopathological examination confirmed the presence of moderate to severe dysplasia associated with HPV-compatible changes. The anal lesion was excised. At the onset of the symptoms, the patient was not on antiretroviral therapy and her HIV viral load was at its highest (2,951 copies/mL) compared with her previous laboratory tests. She had gone through emotional stress and presented with recurrent genital herpes simplex virus infections. These factors may have predisposed her to the development of anal condyloma. CONCLUSIONS: Since HIV infection may alter the history of HPV infection, it is important that screening strategies include cytological analysis of both the cervix and the anal region.

Orientações para o diagnóstico de influenza em suínos / Guidelines for diagnosis of swine influenza

Este trabalho descreve a colheita adequada de amostras, as técnicas/procedimentos disponíveis para o diagnóstico de influenza A em suínos, assim como os resultados e suas respectivas interpretações, para auxiliar médicos veterinários de campo na identificação dessa doença. Em suínos vivos, as amostras adequadas são: secreção nasal, fluido oral e sangue (soro). Para suínos mortos, colher preferencialmente amostras de pulmão com consolidação cranioventral. Secreção nasal e fragmentos de pulmão refrigerado são utilizados para detectar partícula viral viável (isolamento viral - IV) ou ácido nucleico viral (RT-PCR convencional e RT-PCR em tempo real). As amostras não devem ser congeladas, pois o vírus é inativado a -20°C. A caracterização molecular dos isolados é feita pela análise filogenética obtida pelo sequenciamento de DNA. O soro é utilizado para a detecção de anticorpos (Acs) por meio do teste da inibição da hemaglutinação e ELISA. O fluido oral pode ser utilizado para detecção de anticorpo (ELISA) ou de vírus. Fragmentos de pulmão fixados em formol a 10% são examinados microscopicamente para identificar pneumonia broncointersticial e para detecção de antígeno viral pela imuno-histoquímica (IHQ). Para o sucesso do diagnóstico, as amostras devem ser colhidas de suínos que estão preferencialmente na fase aguda da doença, para aumentar as chances de detecção viral. As melhores opções para o diagnóstico de influenza A em suínos vivos são RT-PCR e isolamento viral de amostras de swab nasal ou fluido oral. Pulmão para análise por RT-PCR, isolamento viral ou IHQ é a amostra de escolha em suínos mortos. Testes sorológicos têm valor diagnóstico limitado e são utilizados apenas para determinar o estado imune do rebanho, não indicando doença clínica, pois os Acs são detectados 7-10 dias pós-infecção (fase subaguda). O diagnóstico de influenza é importante para avaliar o envolvimento desse agente no complexo de doença respiratória suína. Além disso, o isolamento do vírus influenza é essencial para o monitoramento dos principais subtipos circulantes em uma determinada região ou país, assim como para a detecção de novos rearranjos virais, já que influenza é considerada uma zoonose.

This article is intended to describe the adequate sample collection, the laboratory procedures/techniques, the expected results and their interpretation for diagnosis of influenza infection in swine, serving as a support for field veterinarians. In live pigs, the samples to be taken are nasal secretions, oral fluids and blood. For dead pigs, preference should be given to samples of cranioventral lung consolidation. Nasal discharge and chilled lung fragments are used for detection of virus (virus isolation - VI) or viral nucleic acids (conventional RT-PCR and real-time RT-PCR). Samples should not be frozen, because the virus is inactivated at -20°C. Molecular characterization of isolates is performed by phylogenetic analysis of gene sequences obtained by DNA sequencing. Serum is used for the detection of antibodies using hemagglutination inhibition (HI) test and ELISA. Oral fluid may be used for either antibody (ELISA) or viral detection. Fragments of lung fixed in 10% formaldehyde are used for histopathological analysis to identify bronchointerstitial pneumonia, and for immunohistochemistry (IHC) for antigens. For a successful diagnosis, sampling should be preferably performed in the acute phase of the disease to improve chances of virus detection. The best options to perform the diagnosis of influenza A in a swine herd are RT-PCR and VI from nasal swabs or oral fluid in live pigs and/or lung tissue for RT-PCR, VI or IHC in dead pigs. Serological tests are of very limited diagnostic value and are useful only to determine the immune status of the herd, not indicating clinical disease, because antibodies are detected after 7-10 days post infection (subacute phase). The diagnosis of influenza is important to evaluate the involvement of this agent in the complex of respiratory diseases in pigs. Furthermore, the isolation of influenza virus is essential for monitoring the main subtypes circulating in a given region or country, as well as for the detection of potential new viral reassortants, because influenza is considered a zoonosis.

Interstitial nephritis of slaughtered pigs in the State of Mato Grosso, Brazil / Nefrite intersticial em suínos abatidos no Estado de Mato Grosso

This study evaluated histological lesions in kidney samples from pigs with nephritis in two slaughterhouses in the State of Mato Grosso, Brazil. Four hundred samples were subjected to histology, anti-porcine circovirus type 2 (PCV2) immunohistochemistry (IHC), anti-Leptospira sp. immunofluorescence (IF), and polymerase chain reaction (PCR) for PCV2, porcine parvovirus (PPV), and Torque teno virus type 1 and 2 (TTV1, TTV2) detection. Histological lesions were found in 81% of the samples, and mononuclear interstitial nephritis was the most frequent lesion (77.50%). A follicular pattern was observed in 40.97% of the interstitial nephritis lesions. PCV2, PPV, TTV1, and TTV2 were identified in the kidneys by PCR in 27.25%, 28.50%, 94%, and 87.5% of the samples, respectively. Leptospira sp. was not detected through IF. Infection by PCV2 (PCR) and the presence of histological lesions (P=0.008) and giant cells (P=0.0016) were significantly associated. An association was observed between the TTV2-TTV1 co-infection (P<0.0001) and the risk for pathogenesis. These findings indicated that PCV2, PPV, TTV1, and TTV2 were widely distributed among pigs in the local farms and that the presence of these agents should be considered in the differential diagnosis of kidneys with interstitial nephritis in pigs.

O propósito desse estudo foi avaliar as lesões histológicas observadas em rins condenados por nefrite pelo Serviço de Inspeção Federal, em dois frigoríficos de Mato Grosso, Brasil. Foram coletados 400 rins condenados por nefrite e submetidos aos exames de histologia, imuno-histoquímica (IHC) para Circovirus suíno Tipo 2 (PCV2), imunofluorescência direta (IF) para Leptospira sp. e reação em cadeia pela polimerase (PCR) para detecção de PCV2, Parvovirus suíno (PPV) e Torque teno vírus Tipo 1 e 2 (TTV1 e TTV2). Foram observadas lesões histológicas em 81% das amostras, sendo nefrite intersticial mononuclear a mais freqüente (77,50%). Das lesões de nefrite intersticial encontradas, 40,97% apresentaram padrão folicular. Através da PCR foi observada ampla distribuição dos agentes (PCV2, PPV, TTV1 e TTV2) nas propriedades e municípios, com ocorrência de 27,25%, 28,50%, 94% e 87,50%, respectivamente. Leptospira sp. não foi detectada através da IF. Houve associação significativa da infecção do PCV2 com presença de lesão histológica (P=0,008) e de células gigantes (P=0,0016). Também houve associação entre a co-infecção TTV2 e TTV1 (P<0,0001). Esses achados indicam que os vírus PCV2, PPV, TTV1 e TTV2 devem ser considerados no diagnóstico diferencial de rins com nefrite intersticial em suínos.

A rapid and reliable method for the clonal isolation of Acanthamoeba from environmental samples

Acanthamoeba are abundant in a wide range of environments, and some species are responsible for cutaneous infections, keratitis, and granulomatous amoebic encephalitis (GAE). The conventional detection and isolation of amoeba from clinical and environmental samples involves sampling and culture on non-nutrient Ágar medium. Although efficient, this system requires several transfers in order to eliminate contaminants, and is not appropriate for the isolation of individual amoeba from samples with a biodiverse community. In this study we propose an alternative method for the isolation of monocystic clones of Acanthamoeba. The propose method involves sampling, enrichment, encystment induction, and direct cysts micromanipulation and culture on Ágar plates.

Isolation and characterization of a pandemic H1N1 influenza virus in pigs in Brazil / Isolamento e caracterização do vírus da influenza pandêmico H1N1 em suínos no Brasil

Influenza A virus (IAV) infections are endemic in pork producing countries around the world. The emergence of the pandemic 2009 human H1N1 influenza A virus (pH1N1) raised questions about the occurrence of this virus in Brazilian swine population. During a 2009-2010 swine influenza virus research project at Embrapa Swine and Poultry (CNPSA), an outbreak of a highly transmissible H1N1 influenza A virus disease was detected in a pig herd in Santa Catarina State, Brazil. The virus caused a mild disease in growing pigs and sows without mortality. Three clinically affected piglets were euthanized. Gross lesions included mild to moderate consolidation of cranioventral areas of the lung. Microscopically, the lesions were characterized by necrotizing obliterative bronchiolitis and bronchointerstitial pneumonia. Immunohistochemistry using a monoclonal antibody against type A influenza virus nucleoprotein revealed positive staining in the nuclei of the bronchiolar epithelial cells. Lung tissue from three piglets and nasal swabs from five sows and four piglets were positive for influenza A by RT-PCR. Influenza virus was isolated from one lung, later confirmed by the hemagglutination test (HA titer 1:128) and RT-PCR. Sequence analyses of Hemmaglutinin (HA) and Matrix (M) genes revealed that the virus was consistent with the pandemic (A/H1N1) 2009 influenza virus strain that circulated in humans. This is the first report of an outbreak of pandemic A/H1N1 influenza virus in pigs in Brazil.

A infecção causada pelo vírus Influenza A (IAV) é endêmica em suínos no mundo inteiro. O surgimento da pandemia de influenza humana pelo vírus A/H1N1 (pH1N1) em 2009 levantou dúvidas sobre a ocorrência deste vírus em suínos no Brasil. Durante o desenvolvimento de um projeto de pesquisa do vírus de influenza suína em 2009-2010, na Embrapa Suínos e Aves (CNPSA), foi detectado em um rebanho de suínos em Santa Catarina, Brasil, um surto de influenza altamente transmissível causado pelo subtipo viral H1N1. Este vírus causou uma doença leve em suínos em crescimento e em fêmeas adultas, sem mortalidade. Tres leitões clinicamente afetados foram eutanasiados. As lesões macroscópicas incluiam consolidação leve a moderada das áreas cranioventrais do pulmão. Microscopicamente, as lesões foram caracterizadas por bronquiolite necrosante obliterativa e pneumonia broncointersticial. A imunohistoquímica, utilizando um anticorpo monoclonal contra a nucleoproteína do vírus influenza A, revelou marcação positiva no núcleo das células epiteliais bronquiolares. O tecido pulmonar de três leitões e os suabes nasais de cinco fêmeas e quatro leitões foram positivos para influenza A pela RT-PCR. O vírus influenza foi isolado de um pulmão, mais tarde sendo confirmado pelo teste de hemaglutinação (título HA 1:128) e por RT-PCR. A análise das seqüências de nucleotídeos dos genes da hemaglutinina (HA) e proteína da matriz (M) revelou que o vírus isolado foi consistente com o vírus pandêmico A/H1N1/2009 que circulou em humanos no mesmo período. Este é o primeiro relato de um surto de influenza causado pelo vírus pandêmico A/H1N1 em suínos no Brasil.

Diagnóstico e genotipagem do vírus da pseudoraiva por nested-PCR e análise de restrição enzimática / Diagnosis and genotyping of pseudorabies virus by nested-PCR and restriction enzyme analysis

A pseudoraiva (PR) é uma enfermidade viral responsável por consideráveis perdas econômicas na indústria de suínos. O vírus da pseudoraiva (PrV) apresenta apenas um sorotipo, mas, por análise de restrição enzimática, foi classificado em quatro genótipos denominados I, II, III e IV. Os métodos usados para genotipagem dependem do isolamento do vírus, da purificação do DNA viral, da restrição enzimática do genoma completo e da visualização após eletroforese. O objetivo deste trabalho foi estabelecer um método mais rápido e sensível para detectar e genotipar o PrV por nested-PCR e análise de restrição enzimática. Vinte isolados do PrV das regiões Sul e Sudeste do Brasil e a estirpe padrão Shope foram replicadas em células PK-15 e submetidas à nested-PCR para o gene da glicoproteína E. Além desses vírus previamente isolados, foram avaliadas 75 amostras clínicas de cérebro de suíno em um total de 25 animais positivos para a PR no isolamento e na soroneutralização viral e 50 amostras negativas provenientes de animais negativos na soroneutralização viral e de granjas sem histórico de PR. Todas as amostras clínicas tiveram resultados compatíveis com o isolamento e a soroneutralização, e a totalidade das amostras positivas foi classificada como genótipo II. A sensibilidade analítica da nested-PCR foi de 10-1,3 TCID50 mL-1. A combinação da nested-PCR e da restrição enzimática foi capaz de detectar e genotipar o vírus com resultados em um a dois dias, sendo mais rápida que os métodos convencionais de restrição do genoma completo que podem demorar até sete dias.

Pseudorabies is a disease caused by Suid herpesvirus 1 (PrV) and is responsible for considerable economic losses in the swine industry. The PrV has only one serotype, but based on RFLP (restriction fragment length polymorphism) the virus was divided into four genotypes named I, II, III, IV. The classical methods for PrV genotyping usually require virus isolation, DNA purification enzyme restriction analysis and a long electrophoresis. The aim of this research was to describe a faster and more sensitive method to detect and genotype PrV based on nested-PCR and restriction enzyme analysis. Twenty PrV isolates from south and southeast regions of Brazil, and the standard strain Shope were grown in PK-15 cells and submitted to PCR for glycoprotein E gene amplification. Additionally were tested 75 clinical samples (swine brain), with 25 positives for virus isolation and seroneutralization, and 50 negatives from a flock free PR with negative results in seroneutralization test. There was 100 percent of agreement between results of nested-PCR and virus isolation and seroneutralization and all samples detected were classified as genotype II. The nested-PCR, combined with restriction enzyme analysis, was able to detect and genotype PrV in 1-2 days with a sensitivity of 10-1,3 TCID50 mL-1. It was faster than classical methods described in the literature that require at least 7 days to be completed.

Erradicação da doença de Aujeszky em Santa Catarina: importância da condição sanitária das leitoas de reposição / Aujeszky's diasease eradication in Santa Catarina State: relevance of sanitary status of replacement gilts

A doença de Aujeszky (DA) é uma infecção causada por um herpesvírus, o vírus da DA (VDA), primariamente em suínos. Esta doença está presente no Estado de Santa Catarina (SC) desde 1984. Devido ao impacto da DA no mercado exportador de carne suína, no comércio de reprodutores e nas perdas de produtividade, um programa de erradicação, financiado por uma parceria entre a indústria e a associação de produtores tem tido sucesso em eliminar gradualmente a DA de rebanhos suínos de SC. O último caso de DA no estado foi identificado em julho de 2004. Durante o processo de despovoamento/repovoamento, foi detectado um rebanho suíno positivo para o VDA localizado no oeste de SC. Estudos de rastreabilidade da origem daqueles animais indicaram que a fonte era uma granja que distribuía reprodutores ilegalmente sem certificação sanitária. Este suinocultor mantinha um sistema de integração que incluía 40 diferentes produtores para quem eram comercializados reprodutores e/ou suínos para terminação. Testes de soroprevalência detectaram anticorpos anti-VDA em 12 daqueles rebanhos. Devido a sua localização dentro do raio de 2,5km do foco inicial, uma outra granja, onde havia uma central de inseminação artificial que distribuía sêmen suíno para outras 5 granjas do mesmo proprietário, foi testada e também resultou positiva. Os objetivos deste artigo são descrever as condições sanitárias frente ao VDA naquelas granjas que receberam suínos ou sêmen suíno daqueles suinocultores, as medidas para controlar e eliminar o VDA dos rebanhos positivos e a situação atual decorrente deste trabalho. Além disso, o artigo busca alertar que medidas de vigilância ativa e normas sanitárias para comércio e distribuição de material genético devem ser seguidas, caso contrário, a DA pode recrudescer e tornar-se fora de controle como ocorria antes do início deste programa.

Aujeszky's disease (AD) is an herpesvirus infection, caused by the pseudorabies virus (PRV), primarily in swine and present in Santa Catarina State (SC) since 1984. Due to the impacts of AD in the pork export, breeder's trade and productivity losses, an eradication program, financed by industry and swine producers association, has successfully eradicated the AD of swine herds in SC State. The last case of AD in the State was identified in July of 2004. During the depopulation/repopulation process, a PRV positive swine herd located in the west region of SC State was detected. Traceability studies of the origin of those animals indicated that the source was a swine farm which illegally distributed breeders without sanitary certification. This swine producer maintained an integration system which included 40 different producers, to whom were commercialized breeders and/or finishers. Serum-prevalence tests detected PRV antibodies in 12 of those herds. Due to the location into the 2.5km of radius from the initial outbreak, another swine farm, which had an artificial insemination center that distributed swine semen to another 5 herds of the same owner was tested positive as well. The objectives of this paper are to describe the sanitary status related to AD on the farms which have received pigs or swine semen from these swine producers, the measures to control and eliminate ADV from positive herds and the outcome of this work. Beyond that, to alert that measures of active surveillance and sanitary rules for commerce and distribution of genetic materials must be properly fulfilled, otherwise, AD can reactivate and become out of control as occurred before the eradication program.

Transmission of porcine circovirus 2 (PCV2) by semen and viral distribution in different piglet tissues

Porcine circovirus infections are caused by the porcine circovirus 2 (PCV2). Among six different clinical manifestations involving respiratory, enteric, nervous and reproductive signs, the postweaning multisystemic wasting syndrome (PMWS) is the most important and studied disease. However, reproductive failures associated with PCV2 have been increasingly reported. Some studies have shown the possible contamination of sows by semen of PCV2 positive boars. In order to investigate the transmission of PCV2 by contaminated semen and its ability to infect the sow and piglets, 20 PCV2 negative sows were inseminated, 10 with negative boar semen and 10 with previously nested-PCR tested positive boar semen. The sows were weekly monitored and blood samples were collected. Based on the results, 4 out 20 sows were selected (1 sow was PCR negative and inseminated with a negative semen, 2 sows were PCR negative and inseminated with a positive semen and 1 sow was PCR negative and inseminated with a positive semen, but became PCR positive around the 30 days of pregnancy). After weaning, 12 male piglets, 3 of each sow, were selected and maintained under isolation. In order to investigate which organs harbored the virus, the young pigs were necropsied around 9 months of age. Samples of serum collected monthly were tested by immunocitochemistry (ICC), and all 12 pigs serum converted. Samples of lymphoid, systemic and reproductive organs were analyzed by nested-PCR and immunohistochemistry (IHC). Evaluation of the samples by nested-PCR, revealed that several tissues were positive in 10 of 12 pigs, mainly the lymph nodes, bone marrow and spleen. Various samples were positive by IHC in 8 of 12 piglets, being the lymph nodes, tonsils and bulbourethral glands the most frequently positive. Thus, the results of testing different samples, in the 3 tests (ICC, nested-PCR and IHC) were complementary. These results show that PCV2 transmission through semen to the sows...

Cloning and expression of Aujeszky's disease virus glycoprotein E (gE) in a baculovirus system

Aujeszky' s disease (AD) is an infectious disease causing important economic losses to the swine industry worldwide. The disease is caused by an alpha-herpesvirus, Aujeszky' s disease virus (ADV), an enveloped virus with a double stranded linear DNA genome. The ADV genome encodes 11 glycoproteins, which are major targets for the immune system of the host in response to the infection. The glycoprotein E (gE) is a non-essential protein and deletion of the gE gene has been used for the production of marker vaccines. Aiming to develop molecular reagents for the production of a gE specific ELISA test, the gE gene was amplified by PCR, cloned and expressed into a baculovirus expression system. The recombinant DNA vector pFastBac-gE-ADV was used for site-specific transposition into the recombinant baculovirus (bacmid). Colonies with recombinant bacmid-pFastBac-gE-ADV were selected by antibiotic and color selection and the presence of the gE gene was confirmed by PCR. The recombinant bacmid-pFastBac-gE-ADV was cotransfected in insect Trichoplusia ni and the presence of the recombinant DNA and gE protein were detected by PCR, SDS-PAGE and Western blotting, respectively.

A doença de Aujeszky (DA) é uma enfermidade infecto-contagiosa que causa grandes perdas econômicas ao produtor e à agroindústria suinícola em todo o mundo. É causada pelo vírus da doença de Aujeszky (VDA), um alfaherpesvírus envelopado com genoma DNA de fita dupla e linear. O genoma do VDA codifica 11 glicoproteínas, as quais são os maiores alvos do sistema imune do hospedeiro em resposta a infecção. A glicoproteína E (gE) é uma proteína não essencial e a deleção do gene da gE é muito utilizada para a produção de vacinas com marcadores. Com o objetivo de desenvolver insumos moleculares para a produção de um teste de ELISA específico para gE do VDA, a seqüência do gene da gE foi amplificada, clonada e expressa no sistema de expressão em baculovírus. O produto da amplificação foi clonado no vetor pGem®-T Easy e subclonado no plasmídeo de expressão pFastBac™1. O DNA recombinante pFastBac-gE-VDA foi usado para a transposição sítio-específica no baculovírus recombinante (bacmid). Após seleção por antibióticos e cor, as colônias com o recombinante bacmid-pFastBac-gE-VDA foram selecionadas e a presença do gene da gE foi confirmada por PCR. O DNA recombinante viral, bacmid-pFastBac-gE-VDA, foi usado para cotransfecção de células de inseto Trichoplusia ni e a presença do recombinante e a proteína gE foi determinada por PCR, por SDS-PAGE e Western blotting, respectivamente.

Identificação do circovírus suíno tipo 2 por reação em cadeia da polimerase e por imunoistoquímica em tecidos suínos arquivados desde 1988 no Brasil / Identification of porcine circovirus type 2 by polymerase chain reaction and immunohistochemistry on archived porcine tissues since 1988 in Brazil

A síndrome multissistêmica do definhamento dos suínos (SMDS) é uma doença de importância econômica causada pelo circovírus suíno tipo 2 (PCV2). Uma pesquisa retrospectiva foi realizada em amostras de órgãos de suínos fixados em blocos de parafina arquivados, que haviam sido submetidos à Embrapa Suínos e Aves entre 1985 e 1998 para o diagnóstico histopatológico. Vinte e cinco casos foram selecionados com base nas lesões histológicas características da SMDS, tais como linfoadenopatia, pneumonia intersticial, hepatite e nefrite intersticial. A presença de PCV2 nos cortes histológicos foi pesquisada por reação em cadeia da polimerase interna (nested-PCR), na qual utilizou-se primers específicos para a seqüência da ORF2 do PCV2 e também por imunoistoquímica, utilizando um anticorpo monoclonal específico para o capsídeo do PCV2. O DNA viral e os antígenos específicos do PCV2 foram detectados em amostras de tecidos de dois dos 25 casos analisados, sendo um desses datado de 1988. Esses resultados indicam que o PCV2 já estava presente no Brasil desde 1988.

Postweaning multisystemic wasting syndrome (PMWS) is of economical importance a disease caused by porcine circovirus type 2 (PCV2). A retrospective investigation was performed on paraffin-embedded organs samples from swine submitted to Embrapa Swine and Poultry Research Center between 1985 and 1998 for histopathologic diagnosis. A total of 25 cases were chosen from the archival collection of the Animal Health Laboratory at Embrapa Swine and Poultry based on characteristic pathological lesions of PMWS, such as lymphadenopathy, interstitial pneumonia, hepatitis and interstitial nephritis. The sections were investigated by nested-PCR (polymerase chain reaction) which used specific primers for the ORF2 sequence of the PCV2 and by immunohistochemistry using a monoclonal antibody specific for PCV2 capsid antigen. Virus specific DNA and antigen were detected in tissue samples of two out of 25 analyzed cases. The earliest positive sample originated from 1988. These results indicate that PCV2 is present in Brazil since 1988.

Caracterization of Aujeszky's disease virus isolated from South Brazil in the last twenty years by restriction enzyme analysis

Aujeszky's disease virus (ADV) belongs to Herpesviridae family and is an important etiological agent which infects pigs causing economic losses in swine producing countries worldwide and international trade restrictions to products of swine origin. An eradication program for ADV was established in Santa Catarina State since 2001. The last outbreak was reported in July 2004 and since then none has been reported. The disease has been controlled with the use of a genetic modified vaccine and elimination of seropositives. Aiming the characterization of ADV isolated in the South of Brazil in the last twenty years (1983-2003), a retrospective study based on the genomic analysis of the isolates through a digestion of viral genomic DNA with restriction enzyme Bam HI was done. Thirty-seven ADV samples isolated from swine from the States of Santa Catarina, Parana and Rio Grande do Sul were analyzed. These isolates were compared to the reference strains NIA-4, Bartha and Begonia. The most predominant genomic arrangement was type II found in 33 samples isolated in Santa Catarina State and in one isolate from Rio Grande do Sul State. Genomic arrangement type I, characteristic of vaccine strains was identified in 2 isolates from Parana State and in 1 isolate from Rio Grande do Sul State.

O vírus da doença de Aujeszky (VDA) pertencente à família Herpesviridae é um importante agente etiológico que infecta suínos causando perdas na produção de suínos no mundo inteiro e restrições para o comércio internacional de suínos ou de seus subprodutos. No estado de Santa Catarina, Brasil, foi instituído em 2001 um programa de erradicação da doença de Aujeszky (DA). O último surto da DA foi reportado em julho de 2004 e desde então não foram notificados mais casos. A doença tem sido controlada com o uso de uma vacina geneticamente modificada e eliminação de animais soropositivos para o VDA. Visando caracterizar amostras do VDA isoladas nos últimos vinte anos (1983-2003) na região Sul do Brasil, foi realizado um estudo retrospectivo baseado na análise do genoma dos vírus isolados de acordo com os perfís de restrição apresentados após a digestão do DNA genômico viral com a enzima Bam HI. Foram analisadas trinta e sete amostras isoladas de suínos oriundos dos estados de Santa Catarina, Paraná e Rio Grande do Sul. Os isolados foram comparados com as amostras de referência NIA-4, Bartha e Begônia. O arranjo genômico predominante, encontrado em 33 amostras isoladas em Santa Catarina e em uma isolada no Rio Grande do Sul, foi o do tipo II. O arranjo genômico do tipo I, característico de amostras de vírus vacinal foi identificado em duas amostras isoladas no Paraná e em uma amostra isolada no Rio Grande do Sul.

Surto de Circovirose (Síndrome Definhante Multissistêmica de Suínos Desmamados) no estado do Rio de Janeiro / Outbreak of Circovirosis (Porcine Postweaning Multisystemic Wasting Syndrome) in the state of Rio de Janeiro, Brazil

Descreve-se o primeiro surto de Síndrome Definhante Multissistêmica de Suínos Desmamados (SDMSD) na Região Sudeste do Brasil, no estado do Rio de Janeiro. A enfermidade que afetou principalmente suínos desmamados com idade em torno de 4 meses, levou a morte pelo menos 14 animais. A granja onde o surto ocorreu, tinha péssimas condições sanitárias e de manejo. Clinicamente, a doença caracterizou-se por má condição corporal, pouco desenvolvimento, tosse, taquipnéia, dispnéia, diarréia, ataxia, tremores após estímulo, decúbito e convulsões, com evolução aguda a subaguda. A necropsia, os achados mais importantes foram um aumento de volume de linfonodos e pulmões não-colapsados, com áreas consolidadas, principalmente nos lobos craniais e porção anterior dos lobos médios. O exame histológico revelou, com maior freqüência, infiltração linfo-histiocítica com células sinciciais em linfonodos, baço, placas de Peyer, rim, pulmão e fígado, depleção ou hiperplasia linfóide, bem como pneumonia bronco-intersticial linfo-histiocitária e áreas de broncopneumonia secundária. O diagnóstico firmou-se pela observação dos sintomas e das lesões histológicas típicas e foi confirmado por exame imunohistoquímico e PCR. O estudo teve por objetivo caracterizar os aspectos epidemiológico e clínico-patológico desse surto, já que a mesma tem causado grandes perdas econômicas, diretas ou indiretas, à suinocultura mundial.

Lack of evidence of porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) infection in domestic swine in Brazil

Este artigo descreve a primeira prevalência de anticorpos e inoculação experimental de amostras suspeitas do vírus da síndrome reprodutiva e respiratória dos suínos (PRRSV) de suínos de rebanhos do Brasil positivos pelo teste de ELISA. Com base na hipótese de que este agente está presente em plantéis de suínos mundialmente, o objetivo deste trabalho foi estabelecer uma metodologia de diagnóstico e também investigar a ocorrência de PRRSV em rebanhos suínos brasileiros. Cinqüenta e quatro granjas, número total de granjas que importaram material genético (suínos vivos e sêmen suíno) de países onde a PRRS era endêmica no período de 1990 a dezembro de 2000, de oito estados brasileiros foram todas incluídas neste estudo. O tamanho da amostragem de soros coletados foi para que se detectasse uma prevalência de 5 por cento, com um nível de confiança de 95 por cento. Um total de 3785 amostras de soro foram testadas para detecção de anticorpos para PRRSV por ELISA. Após a realização dos testes de ELISA, os quais foram realizados utilizando dois kits comerciais, todos os suínos positivos foram retestados sorologicamente, examinados e depois, material adicional foi coletado para detecção viral. O material para isolamento viral foi inoculado em células de cultivo permissíveis e também em suínos (bio-ensaio suíno). Além disso, reação de transcriptase reversa e reação da polimerase em cadeia (RT-PCR) e nested RT-PCR também foram realizadas. Não foi demonstrada a presença de PRRSV ou de RNA de PRRSV por isolamento viral ou RT-PCR (ou nested RT-PCR), respectivamente, em todas as amostras testadas. Além disso, os suínos inoculados com amostras suspeitas de PRRSV não soro-converteram ou produziram lesões características de PRRS no bio-ensaio suíno. Portanto, nossos resultados não indicam evidências da presença de PRRSV nas amostras analisadas dos rebanhos suínos deste estudo.

Vacinas com marcadores antigênicos contra o vírus da rinotraqueíte infecciosa bovina e o vírus da doença de Aujeszky{ review] / Vaccines with antigenic markers against bovine herpesvírus type-1 and pseudorabies vírus: [review]

Vacinas contra o herpes vírus bovino tipo-1 (IBRV, vírus da rinotraqueíte infecciosa) e o herpesvírus suíno (PRV, vírus da doença de Aujeszky) têm sido amplamente utilizadas em vários países para minimizar as perdas associadas à essas infecções. As vacinas tradicionais, no entanto, induzem uma resposta humoral indistinguível da resposta à infecção natural, o que não permite a distinção entre animais vacinados dos infectados naturalmente. Isto tem dificultado o estabelecimento de medidas de controle e erradicação dessas enfermidades. Nos últimos anos, a manipulação genética desses vírus tem permitido a obtenção de mutantes com marcadores antigênicos específicos. A estratégia consiste na deleção de uma ou mais glicoproteínas do envelope viral que não são essenciais para a replicação do vírus e o uso desses mutantes como vacinas. A utilização de um teste sorológico específico para a glicoproteína deletada permite a distinção entre animais vacinados dos infectados com o vírus de campo. A utilização de vacinas com marcadores antigênicos, também chamadas de vacinas diferenciais, tem sido a base de programas de controle e erradicação da doença de Aujeszky em vários países e começa a ser utilizada no controle da rinotraqueíte infecciosa bovina. Este artigo apresenta uma breve revisão sobre as bases moleculares e biológicas das vacinas diferenciais para o IBRV e PRV, assim como possíveis aplicações dessas vacinas no controle dessas enfermidades no Brasil em um futuro próximo.

Vaccination has been widely used to minimize the economic losses caused by bovine herpesvírus type-1 (IBRV) and pseudorabies virus (PR V) infections. The traditional vaccines, however, induce a humoral response that is indistinguishable from that induced by the natural infection. The impossibility of distinction between vaccinated and naturally infected animais has impaired the establishment of control and eradication programs for these diseases. In the last years, the genetic manipulation of infectious agents has allowed the development of mutants that are detective in expression of specific envelope glycoproteins. The strategy consists of deletion of one or more non-essential viral envelope glycoproteins and the use of these mutants as vaccines. By using a serologic test that is specific for the deleted glycoprotein, it is possible to differentiate the vaccinated animais from those that have been naturally infected. The use of these genetically engineered vaccines, also known as marker vaccines, has been the basis for control and eradication programs of Aujeszky's disease in several countries and has recently begun to be utilized for IBRV. This article presents a brief review on the molecular and biological basis of the differential vaccines against IBRV and PRV and the possible applications of such vaccines in the control of these infections in the near future in Brazil.