RESUMO
ABSTRACT: Methicillin resistance in the Staphylococcus intermedius group (SIG) has emerged in small animal practice. Methicillin-resistant SIG (MRSIG) members have been implicated as causes of infections in both companion animals and humans. Staphylococcal cassette chromosome mec (SCCmec) elements carry the mecA/C genes, which encode for the transpeptidase PBP2a (PBP2') responsible for β-lactam antibiotic resistance in staphylococci. This study examined the SCCmec types of MRSIG isolates from different clinical specimens of dogs that exhibited methicillin MIC ≥ 0.5 μg/mL by an automated identification and susceptibility system in a Center for Veterinary Diagnostics in São Paulo, Brazil. Susceptibility to methicillin was determined by broth microdilution testing, and Oxoid® M.I.C.Evaluator® strips. PBP2a production was detected using a latex agglutination assay. SCCmec typing was performed according to the International Working Group on the Classification of Staphylococcal Cassette Chromosome Elements (IWG-SCC) guidelines. SCCmec type II (2A), SCCmec type III (3A), composite SCC structures consisting of a class A mec gene complex in addition to multiple ccr gene complexes, and non-typable SCCmec elements were reported in these MRSIG isolates. SCCmec type variants differing from those so far acknowledged by IWG-SCC were found, indicating new rearrangements in the genetic context of mecA in these canine MRSIG isolates.
RESUMO: A resistência à meticilina no grupo Staphylococcus intermedius (GSI) tem aumentado na clínica de pequenos animais. Membros GSI resistentes à meticilina (GSIRM) têm sido causas de infecções tanto em animais de companhia e humanos. Cassetes cromossômicos estafilocócicos mec (SCCmec) carregam os genes mecA/C, que codificam a transpeptidase PBP2a (PBP2') responsável pela resistência aos antibióticos β-lactâmicos em estafilococos. Nosso objetivo foi investigar os elementos SCCmec de GSIRM isolados de diferentes amostras clínicas de cães que exibiram CIM de meticilina ≥ 0,5 μg/mL por meio de um sistema automatizado em um Centro Veterinário de Diagnósticos em São Paulo, Brasil. A sensibilidade à meticilina foi determinada por meio do teste de microdiluição em caldo e fitas Oxoid® M.I.C.Evaluator®. A produção de PBP2a foi detectada usando um ensaio de aglutinação de látex. A tipagem dos elementos SCCmec foi realizada de acordo com as diretrizes do International Working Group on the Classification of Staphylococcal Cassette Chromosome Elements (IWG-SCC). SCCmec tipo II (2A), SCCmec tipo III (3A), SCC compostos de um complexo mec de classe A com múltiplos complexos ccr, e elementos SCCmec não tipáveis foram encontrados nesses isolados GSIRM. Variantes que diferem dos elementos SCCmec reconhecidos até o momento pelo IWG-SCC foram encontradas, indicando novos rearranjos no contexto genético de mecA nesses isolados GSIRM caninos.
RESUMO
Fifty-two Staphylococcus aureus recovered from papillary ostium and milk samples collected from cows with subclinical mastitis and milking environments in three small dairy herds located in southeastern Brazil were subjected to PCR identification based on the thermonuclease (nuc) gene. All the strains were submitted to in vitro antimicrobial susceptibility testing, and we investigated the sequence types (STs), agr groups (I-IV), virulence genes encoding for Microbial Surface Components Recognizing Adhesive Matrix Molecules (MSCRAMMs), biofilm-associated proteins, bi-component toxins, pyrogenic toxin superantigens, and enterotoxins. Screening for oxacillin resistance (2-6 µg/ml oxacillin), beta-lactamase activity assays, and PCR for the mecA/mecC genes detected 26 methicillin-susceptible S. aureus(MSSA) and 26 mec-independent oxacillin-nonsusceptible S. aureus (MIONSA). While MSSA isolates were found to be susceptible to all antimicrobial agents tested, or only resistant to penicillin and ampicillin, MIONSA isolates were multidrug-resistant. ST126-agr group II MSSA isolates were prevalent in milk (n=14) and carried a broad set of virulence genes (clfA, clfB, eno, fnbA, fiB, icaA, icaD, lukED, hla, and hlb), as well as the ST126-agr group II MIONSA isolated from milking liners (n=1), which also carried the eta gene. ST1-agr group III MIONSA isolates (n=4) were found in papillary ostium and milk, but most MIONSA isolates (n=21), which were identified in both papillary ostium and milking liners, were agr-negative and assigned to ST126. The agr-negative and agr group III lineages showed a low potential for virulence. Studies on the characterization of bovine-associated MSSA/MIONSA are essential to reduce S. aureus mastitis to prevent economic losses in dairy production and also to monitor the zoonotic potential of these pathogens associated with invasive infections and treatment failures in healthcare.
Cinquenta e dois isolados de Staphylococcus aureus obtidos de amostras colhidas do óstio papilar, do leite de vacas com mastite subclínica e do ambiente de ordenha em três fazendas de rebanhos leiteiros localizadas no sudeste do Brasil foram identificados por PCR para o gene da termonuclease (nuc). Todos os isolados foram testados para sensibilidade a antimicrobianos e foram investigados os sequence types (STs), grupos agr (I-IV) e genes de virulência que codificam Microbial Surface Components Recognizing Adhesive Matrix Molecules (MSCRAMMs), proteínas associadas a biofilme, toxinas bi-componentes, toxinas pirogênicas com propriedades de superantígenos e enterotoxinas. Triagem para detecção de resistência à oxacilina (2-6 µg/ml oxacilina), ensaios de atividade de enzimas beta-lactamases e PCR para os genes mecA/mecC detectaram 26 estirpes de S. aureus sensíveis à meticilina (methicillin-susceptible S. aureus, MSSA) e 26 estirpes de S. aureus mec-negativas não sensíveis à meticilina (mec-independent oxacillin-nonsusceptible S. aureus, MIONSA). Enquanto os isolados MSSA foram sensíveis a todos os agentes antimicrobianos testados, ou apenas resistentes à penicilina e ampicilina, os isolados MIONSA foram multirresistentes. MSSA ST126-agr grupo II foram prevalentes no leite (n= 14) e apresentaram um amplo conjunto de genes de virulência (clfA, clfB, eno, fnbA, fiB, icaA, icaD, lukED, hla e hlb), assim como o isolado MIONSA ST126-agr grupo II proveniente de um insuflador (n= 1), o qual também apresentou o gene eta. MIONSA ST1-agr grupo III (n= 4) foram identificados no óstio papilar e leite, mas a maioria dos isolados MIONSA (n= 21), encontrados em óstios papilares e insufladores, foram agr-negativos e pertenceram ao ST126. As linhagens agr-negativas e agr grupo III apresentaram baixo potencial de virulência. Estudos sobre a caracterização de MSSA/MIONSA associados a bovinos são essenciais para a redução da mastite causada por S. aureus e de perdas econômicas na produção leiteira e, também, para o monitoramento do potencial zoonótico desses patógenos associados a infecções invasivas e falhas de tratamento em ambientes hospitalares.