Atividade de alcaloides inibidores da acetilcolinesterase no tratamento da doença de Alzheimer: uma revisão sistemática / Activity of Acetylcholinesterase inhibitor Alkaloids in the treatment of Alzheimer's Disease: a systematic review

Objetivo: descrever a atividade de inibição da enzima acetilcolinesterase (AChE), por meio de ativos extraídos de alcaloides naturais. Metodologia: este estudo se configura como uma revisão sistemática da literatura, no período de janeiro de 2015 a setembro de 2021, nas bases de dados PUBMED, LILACS e SCIENCE DIRECT, com os descritores Acetylcholinesterase; Alzheimer; Alkaloids. As informações obtidas foram tabuladas para avaliação dos alcaloides inibidores da acetilcolinesterase. Resultados: de 563 artigos encontrados, 17 foram utilizados. Dois deles relataram a atividade de alcaloides inibidores da AChE por meio de ensaios clínicos, enquanto os demais a realizaram por testes in vitro. De 160 substâncias estudadas, 48 apresentaram atividade anticolinesterásica, as quais foram avaliadas de acordo com a sua concentração inibitória média (IC50). Discussão: a eficiência dos alcaloides como inibidores da AChE, provavelmente está relacionada com sua carga positiva no pH do organismo e sua boa biodisponibilidade, tendo como consequência uma atividade duradoura in vivo, em comparação com os medicamentos sintéticos. Conclusão: no presente estudo, foi possível observar uma grande diversidade de substâncias alcalóidicas antiAChE. Contudo, torna-se necessária a realização de mais ensaios in vivo e in vitro para a constatação efetiva da atividade dessas moléculas.

Objective: describe the activity of the enzyme Acetylcholinesterase (AChE) through natural actives extracted from alkaloids. Methodology: this study is a systematic literature review, from January 2015 to September 2021, in the PUBMED, LILACS, and SCIENCE DIRECT databases, with the descriptors Acetylcholinesterase; Alzheimer's; Alkaloids. The information obtained was tabulated for the evaluation of Acetylcholinesterase inhibitor alkaloids. Results: of 563 articles found, 17 were used. Two of them reported the activity of AChE-inhibiting Alkaloids through clinical trials, while the others performed it through in vitro tests. Of 160 substances studied, 48 showed anticholinesterase activity, which was evaluated according to their mean inhibitory concentration (IC50). Discussion: the efficiency of Alkaloids as AChE inhibitors is probably related to their positive charge on the body's pH and their good bioavailability, resulting in a long-lasting activity in vivo compared to synthetic drugs. Conclusion: in the present study, it was possible to observe a great diversity of antiAChE alkaloid substances. However, it is necessary to carry out more in vivo and in vitro tests to verify the effective activity of these molecules.

Métodos de extração, estabilidade e biodisponibilidade da guanitoxina em cultivos de Sphaeropermopsis torques-reginae analisadas por espectrometria de massas / Methods of extraction, stability, and bioavailability of guanitoxin in Sphaeropermopsis torques-reginae cultures analyzed by mass spectrometry

A guanitoxina (GNT) é uma neurotoxina produzida por algumas cepas de cianobactérias dos gêneros Dolichospermum e Sphaerospermopsis>. A GNT é o único organofosforado natural, capaz de causar a morte de animais selvagens e domésticos devido à inibição irreversível da acetilcolinesterase. Apesar de sua alta toxicidade, o diagnóstico da GNT em amostras biológicas ainda é um grande desafio. A dificuldade para sua detecção está diretamente ligada à sua instabilidade em altas temperaturas e pH alcalino, tornando difícil seu monitoramento em corpos d'água. Por isso, esta pesquisa objetivou estudar a estabilidade e biodisponibilidade da GNT em amostras aquosas, com intuito de obter mais informações sobre a natureza química e biológica dessa potente neurotoxina. Para realizar este estudo, a cepa ITEP-24 (S. torques-reginae) produtora de GNT foi cultivada em laboratório sob condições controladas, para obter biomassa para os experimentos de extração, semi-isolamento, estabilidade, ensaio in vitro e identificação por LC-MS/MS. Primeiramente foram realizados testes de extração da GNT partir de células liofilizadas da cepa ITEP-24 utilizando água, metanol e etanol em pH ácido. Depois utilizou-se dois métodos de extração em fase sólida (SPE) com cartuchos preenchidos com fases estacionarias C18 em fase reversa e sílica gel em fase normal, com objetivo de avaliar qual método de SPE seria melhor para extrair e concentrar a GNT. Nós também testamos métodos para lisar as células com sondas de ultrassom, misturador e centrifugação. Além dos métodos de extração, nós avaliamos a estabilidade da toxina em diferentes temperaturas, para isso a biomassa seca contendo a GNT ficou condicionada a 4 °C, 23 °C, -20 °C, -80 °C durantes seis meses, e análises de identificação foram realizadas dentro período de 150 dias em uma sequência de 30 dias. A estabilidade da toxina foi analisada também a partir de extrações em soluções com diferentes valores de pH (1,5; 3,0; 5,0; 7,0; 8,5; 10,5) e temperatura (23 ºC e 37 ºC). Depois, analisou-se a biodisponibilidade da GNT em células frescas da linhagem ITEP-24 através de teste de dissolução in vitro. O objetivo deste teste foi avaliar a liberação da toxina intracelular em meio simulado do conteúdo gástrica e intestinal com e sem enzimas digestivas para compreender e estimar a disponibilidade da GNT in vivo. Os resultados de todos experimentos descritos neste estudo, foram obtidos a partir de análises por cromatografia líquida de interação hidrofílica (HILIC) acoplado ao espectrômetro de massas do tipo triplo quadrupolo LC-QqQ-MS/MS utilizando as transições 253>58, 253>159 e 159>58 [M+H]+ utilizando coluna com fase estacionária zwitteriônica (ZIC). A identificação da GNT foi realizada também por cromatografia líquida acoplada ao espectrômetro de massas de alta resolução (LC-HR-QTOF-MS) com coluna Luna C18, Hydro-RP C18 e ZIC-HILIC. Dos protocolos de extração testados, a combinação de metanol/água (70:30 v/v) com ácido acético (0.3%) extraiu maior quantidade relativa da GNT a partir de células frescas e liofilizadas da cepa ITEP-24 e a concentração da toxina foi maior em amostras de células frescas. Em relação aos métodos de lise celular, as extrações realizadas em sonda de ultrassom com banho-maria e centrifugação por 1h foram estatisticamente significantes para liberar a toxina intracelular. Não houve diferença significativa entre os testes de SPE, no entanto, a semipurificação da toxina foi melhor com cartucho preenchido com sílica gel em fase normal e adaptação desse método em coluna aberta permitiu obter uma fração enriquecida com GNT. A GNT mostrou ser mais estável em pH ácido, sendo o pH 3,0 o melhor para manter e extrair a toxina em amostras aquosas e a toxina intracelular presente em células secas podem degradar em temperatura de 23 °C por um período de 150 dias mesmo em solução com pH 3,0. Durante os testes de extração e purificação foi observado também a degradação da toxina em processos de secagem e ressuspensão. As análises realizadas no LC-HR-QTOF-MS com diferentes métodos cromatográficos possibilitou a identificação da GNT, porém o método realizado com coluna ZIC-HILIC mostrou melhor resolução cromatográfica dos picos relativos m/z e tempo de retenção de toxina. Os resultados obtidos nos testes de dissolução in vitro mostraram que a GNT fica mais disponível no simulado gástrico com e sem a enzima pepsina, mas também pode ser absorvida no intestino. Portanto, o teste de dissolução in vitro pode ser uma ferramenta útil para a avaliação de risco de cianotoxinas in vivo, devido ao seu potencial de monitorar qualitativa e quantitativamente substâncias dissolvidas em fluidos gastrointestinais. Os resultados apresentados neste estudo fornecem informações valiosas para uma melhor compreensão da estabilidade e biodisponibilidade do GNT. Além disso, os métodos apresentados neste estudo podem ser úteis para diversas aplicações projetadas para identificar a toxina em amostras ambientais, bem como orientações para procedimentos de purificação da GNT

Guanitoxin (GNT) is a neurotoxin produced by some strains of cyanobacteria of the genus Dolichospermum and Sphaerospermopsis. GNT is the only natural organophosphate, capable of causing the death of animals from wild and domestic animals due to irreversible inhibition of acetylcholinesterase. Despite its high toxicity, the diagnosis of GNT in biological samples is still a significant challenge. The difficulty in its detection is directly linked to its instability at high temperatures and alkaline pH, making it difficult to monitor in bodies of water. Therefore, this research aimed to study the stability and bioavailability of GNT in aqueous samples to provide more information about the chemical and biological nature of this molecule. The strain ITEP-24 (S. torques-reginae) producing GNT was grown in the laboratory under controlled conditions to obtain biomass for the extraction, semi-isolation, stability, in vitro tests, and toxin identification by LC-MS/MS. Firstly, tests were carried out to extract GNT from lyophilized cells strain ITEP-24 using water, methanol, and ethanol at acidic pH and, two SPE methods in cartridges with stationary phases of C18 reverse phase and normal phase gel silica, to evaluate which would be better to extract and concentrate the GNT. We also tested different methods of cell lysis, such as ultrasound probes, mixers, and centrifugation. In addition to the extraction methods, the stability of the toxin was evaluated at different temperatures, for this, the dry biomass containing the toxin was conditioned at 4 °C, 23 °C, -20 °C, -80 °C for 150 days and analysis of the identification of the GNT was carried out within that period in a sequence of 30 days. The toxin stability was also analyzed from extractions in solutions with different pH values (1.5; 3.0; 5.0; 7.0; 8.5; 10.5) and temperature (23 ºC and 37 ºC). In addition, we performed dissolution tests with fresh cells of the ITEP-24 strain to evaluate the bioavailability of GNT in simulated gastric and intestinal fluids with and without digestive enzymes to understand and estimate the availability of GNT in vivo. The results of all experiments described in this study were obtained from analyzes by hydrophilic interaction liquid chromatography (HILIC) coupled to the LC-QqQ-MS/MS triple quadrupole mass spectrometer using the transitions m/z 253> 58, m/z 253> 159 and m/z 159> 58 [M + H]+ using a column with the zwitterionic stationary phase (ZIC). Liquid chromatography coupled to the high-resolution mass spectrometer (LC-HR-QTOF-MS) with Luna column C18, Hydro-RP C18, and ZIC-HILIC carried out the identification of the GNT. From the extraction protocols tested, the combination of methanol/water (70:30 v/v) with acetic acid (0.3%) extracted a greater relative amount of GNT from fresh and lyophilized ITEP-24 cells, and the concentration of the toxin is higher previously fresh. Concerning cellular methods, the ultrasound probe with a water bath and centrifugation for 1h ware statistically significant to release the intracellular toxin. There was no significant difference between the SPE tests. However, the semi-purification of the toxin was better with a cartridge filled with gel silica in the normal phase and adaptation of this method in an open column allowed to obtain a fraction enriched with GNT. GNT was more stable at acid pH, with pH 3.0 being the best to maintain and the intracellular toxin present in dry cells can degrade at a temperature at 23 °C for 150 days even in pH 3.0 solution. The toxin can also hydrolyze in the drying and resuspension processes. The analyzes carried out in LC-HR-QTOF-MS with different chromatographic methods made it possible to identify the GNT itself, however, the ZIC-HILIC column method showed excellent chromatographic resolution of the relative m/z peaks and toxin retention time. The results obtained in the in vitro dissolution tests showed that GNT is more available in the gastric simulation with and without the enzyme pepsin, but it can also be absorbed in the intestine. Thus, in vitro dissolution tests can be used as a useful tool for the risk assessment of cyanotoxins in vivo due to their potential to qualitatively and quantitatively monitor substances dissolved in gastrointestinal fluids. The results presented in this study provide valuable information for a better understanding of the stability and bioavailability of GNT. Besides, the methods presented in this study can be useful for various applications designed to identify the toxin in environmental samples, as well as guidance on procedures for purifying GNT

Efeitos dos agrotóxicos na saúde do agricultor familiar dos municípios de Capitólio e Pimenta - Minas Gerais: avaliação de biomarcadores colinesterase eritrocitárias e plasmática / Effects of pesticides on the health of family farmers in the cities of Capitólio and Pimenta - Minas Gerais: evaluation of erythrocyte and plasma cholinesterase biomarkers

O Brasil é o maior consumidor global de agrotóxico tendo como consequência intoxicações de um grande número de trabalhadores, com altos gastos com a saúde e prejuízos ambientais. Objetivo geral: avaliar os efeitos do uso de agrotóxicos sobre a saúde de trabalhadores atuantes na agricultura familiar. Método: estudo transversal, analítico e comparativo entre o Grupo (1) composto por 80 trabalhadores rurais atuantes na agricultura familiar, expostos diretamente a agrotóxicos e o Grupo (2) composto por 60 usuários dos Programas de Saúde da Família (PSF) dos municípios de Capitólio e Pimenta - Minas Gerais - não diretamente expostos a agrotóxicos sendo o grupo controle por meio da análise de biomarcadores colinesterase eritrocitária e plasmática. Resultados: dos 140 participantes deste estudo, a maioria (51,2%) não referiu problemas de saúde e tratamento medicamentoso, 6,3% deles, expostos a agrotóxicos, referiram intoxicações e 42,5% relataram terem algum sinal e/ou sintoma de intoxicação com predominância (33,8%) para a dor de cabeça. O biomarcador colinesterase eritrocitária apresentou normalidade em 63,8% dos trabalhadores rurais e 36,2% com alteração na butirilcolinesterase. Conclusão: a butirilcolinesterase encontrada em 1/3 dos participantes expostos a agrotóxicos correlacionam-se à presença dos sintomas dor de cabeça e irritabilidade/nervosismo. Existe, portanto, a necessidade da educação e capacitação dos agricultores no uso de agrotóxicos para limitar níveis de exposição e efeitos nocivos à saúde para prevenir, diagnosticar e tratar possíveis disfunções causadas por esses produtos químicos

Brazil is the largest global consumer of pesticides, resulting in the intoxication of a large number of workers, with high expenditures on health and environmental damage. General objective: to evaluate the effects of the use of pesticides on the health of rural workers working in family farming in terms of intoxication through the evaluation of the erythrocyte and plasma cholinesterase biomarkers. Method: cross-sectional, analytical and comparative study between Group (1) of rural workers working in family farming, directly exposed to pesticides and Group (2) of users of Family Health Programs (PSF), in the municipalities of Capitólio and Pimenta - Minas Gerais State (Brazil) - not directly exposed to pesticides, being a control group through the analysis of biomarkers. Results: in this study of 140 participants, the most of them did not report health problems and drug treatment, 6.3% of participants, exposed to pesticides, reported poisoning and 42.5% reported having any signs and/or symptoms of intoxication with predominance for headache. The erythrocyte cholinesterase biomarker showed normality in 63.8% rural workers and 36.2% with alteration in butyrylcholinesterase. Conclusion: butyrylcholinesterase alteration was proven in 36.2% of participants exposed to pesticides and these results correlate with the presence of headache and irritability/nervousness symptoms. There is, therefore, a need for education and training of farmers to limit levels of exposure and harmful health effects to prevent, diagnose and treat possible dysfunctions caused by these chemicals applied to agriculture

Efeitos dos agrotóxicos na saúde do agricultor familiar dos municípios de Capitólio e Pimenta - Minas Gerais: avaliação de biomarcadores colinesterase eritrocitárias e plasmática / Effects of pesticides on the health of family farmers in the cities of Capitólio and Pimenta - Minas Gerais: evaluation of erythrocyte and plasma cholinesterase biomarkers

portuguêsO Brasil é o maior consumidor global de agrotóxico tendo como consequência intoxicações de um grande número de trabalhadores, com altos gastos com a saúde e prejuízos ambientais. Objetivo geral: avaliar os efeitos do uso de agrotóxicos sobre a saúde de trabalhadores atuantes na agricultura familiar. Método: estudo transversal, analítico e comparativo entre o Grupo (1) composto por 80 trabalhadores rurais atuantes na agricultura familiar, expostos diretamente a agrotóxicos e o Grupo (2) composto por 60 usuários dos Programas de Saúde da Família (PSF) dos municípios de Capitólio e Pimenta - Minas Gerais - não diretamente expostos a agrotóxicos sendo o grupo controle por meio da análise de biomarcadores colinesterase eritrocitária e plasmática. Resultados: dos 140 participantes deste estudo, a maioria (51,2%) não referiu problemas de saúde e tratamento medicamentoso, 6,3% deles, expostos a agrotóxicos, referiram intoxicações e 42,5% relataram terem algum sinal e/ou sintoma de intoxicação com predominância (33,8%) para a dor de cabeça. O biomarcador colinesterase eritrocitária apresentou normalidade em 63,8% dos trabalhadores rurais e 36,2% com alteração na butirilcolinesterase. Conclusão: a butirilcolinesterase encontrada em 1/3 dos participantes expostos a agrotóxicos correlacionam-se à presença dos sintomas dor de cabeça e irritabilidade/nervosismo. Existe, portanto, a necessidade da educação e capacitação dos agricultores no uso de agrotóxicos para limitar níveis de exposição e efeitos nocivos à saúde para prevenir, diagnosticar e tratar possíveis disfunções causadas por esses produtos químicos

Brazil is the largest global consumer of pesticides, resulting in the intoxication of a large number of workers, with high expenditures on health and environmental damage. General objective: to evaluate the effects of the use of pesticides on the health of rural workers working in family farming in terms of intoxication through the evaluation of the erythrocyte and plasma cholinesterase biomarkers. Method: cross-sectional, analytical and comparative study between Group (1) of rural workers working in family farming, directly exposed to pesticides and Group (2) of users of Family Health Programs (PSF), in the municipalities of Capitólio and Pimenta - Minas Gerais State (Brazil) - not directly exposed to pesticides, being a control group through the analysis of biomarkers. Results: in this study of 140 participants, the most of them did not report health problems and drug treatment, 6.3% of participants, exposed to pesticides, reported poisoning and 42.5% reported having any signs and/or symptoms of intoxication with predominance for headache. The erythrocyte cholinesterase biomarker showed normality in 63.8% rural workers and 36.2% with alteration in butyrylcholinesterase. Conclusion: butyrylcholinesterase alteration was proven in 36.2% of participants exposed to pesticides and these results correlate with the presence of headache and irritability/nervousness symptoms. There is, therefore, a need for education and training of farmers to limit levels of exposure and harmful health effects to prevent, diagnose and treat possible dysfunctions caused by these chemicals applied to agriculture

Effects of essential oils on native and recombinant acetylcholinesterases of Rhipicephalus microplus / Efeito de óleos essenciais sobre acetilcolinesterases nativa e recombinante de Rhipicephalus microplus

Abstract This study reports the action of essential oils (EO) from five plants on the activity of native and recombinant acetylcholinesterases (AChE) from Rhipicephalus microplus. Enzyme activity of native susceptible AChE extract (S.AChE), native resistant AChE extract (R.AChE), and recombinant enzyme (rBmAChE1) was determined. An acetylcholinesterase inhibition test was used to verify the effect of the EO on enzyme activity. EO from Eucalyptus globulus, Citrus aurantifolia, Citrus aurantium var.dulcis inhibited the activity of S.AChE and R.AChE. Oils from the two Citrus species inhibited S.AChE and R.AChE in a similar way while showing greater inhibition on R.AChE. The oil from E. globulus inhibited native AChE, but no difference was observed between the S.AChE and R.AChE; however, 71% inhibition for the rBmAChE1 was recorded. Mentha piperita oil also inhibited S.AChE and R.AChE, but there was significant inhibition at the highest concentration tested. Cymbopogon winterianus oil did not inhibit AChE. Further studies are warranted with the oils from the two Citrus species that inhibited R.AChE because of the problem with R. microplus resistant to organophosphates, which target AChE. C. winterianus oil can be used against R. microplus populations that are resistant to organophosphates because its acaricidal properties act by mechanism(s) other than AChE inhibition.

Resumo Este estudo relata a ação de óleos essenciais de cinco plantas na atividade de acetilcolinesterases (AChE) nativas e recombinantes de Rhipicephalus microplus. A atividade enzimática do extrato de acetilcolinesterase nativa suscetível (S.AChE) e resistente (R.AChE) e da enzima recombinante (rBmAChE1) foi determinada. Um teste de inibição da AChE foi utilizado, para verificar o efeito dos óleos essenciais sobre a atividade enzimática. Óleos essenciais de Eucalyptus globulus, Citrus aurantifolia, Citrus aurantium var. dulcis inibiram a atividade de S.AChE e R.AChE. Os óleos das duas espécies de Citrus inibiram S.AChE e R.AChE de maneira semelhante, mas mostraram maior inibição sobre R.AChE. O óleo de E. globulus inibiu a AChE nativa, mas sem diferença entre a S.AChE e a R.AChE; no entanto, 71% de inibição para rBmAChE1 foi observada. O óleo de Mentha piperita também inibiu S.AChE e R.AChE, mas houve inibição significativa apenas nas concentrações mais altas testadas. O óleo de Cymbopogon winterianus não inibiu a AChE. Estudos adicionais são necessários com os óleos das duas espécies de Citrus que inibiram a R.AchE, devido ao problema de R. microplus resistente aos organofosforados ter como alvo AChE. O óleo de C. winterianus pode ser usado contra populações de R. microplus, que são resistentes a organofosforados, porque suas propriedades acaricidas agem por mecanismos diferentes.

Biocidal potential of Eugenia pyriformis essential oil in the control of Rhipicephalus (Boophilus) microplus in the free-living cycle / Potencial biocida do óleo essencial de Eugenia pyriformis Cambess no controle de Rhipicephalus (Boophilus) microplus no ciclo de vida livre

Brazil has one of the largest commercial cattle herds in the world, which naturally coexist with an enormous number of parasitic species. Southern cattle tick, Rhipicephalus (Boophilus) microplus, is among these species, interfering with animal productivity and causing losses to the beef and dairy cattle sector. The use of chemical acaricides in the control of this mite has resulted in the emergence of resistant populations. In this sense, alternative control measures using plants as sources of botanical acaricides have shown to be effective. Eugenia pyriformis Cambess is a Brazilian plant with antioxidant and antimicrobial activity; however, there are no reports on its acaricidal activity in the literature. The present study aimed to evaluate the acaricidal and larvicidal potential of E. pyriformis leaf essential oil (EO) on southern cattle tick at different stages of the reproductive cycle. E. pyriformis leaves were collected and dried, and had their EO extracted by hydrodistillation (3h) using a modified Clevenger apparatus. Chemical analysis was performed by gas chromatography coupled with mass spectrometry (GC/MS), and 32 compounds belonging to the sesquiterpene class were identified: hydrocarbons (17.98%) and oxygenated forms (81.96%), with spathulenol (43.65%) and caryophyllene oxide (12.17%) as the most common. The EO was evaluated by the Adult Immersion Test at the concentrations (500.00 to 3.12mg/mL) in which the following parameters were measured: mortality of females (%), hatchability of eggs (%), and product efficiency (%). Larvae were assessed by the Larval Packet Test at concentrations ranging from 25.00 to 0.00004mg/mL. Lethal concentrations (LC) required for killing 50 and 99.9% of adult females and larvae were determined using Probit analysis. LC50 and LC99.9 of EO were 0.06 and 24.60mg/mL and 1,208.80 and 2,538mg/mL for larvae and adult females, respectively. Action of the EO in the free-living cycle of R. (B.) microplus larvae was another parameter assessed. To this end, the larvae were deposited in pots containing Brachiaria decumbens and, after migration to the leaf apex, a solution containing LC99.9 (24.60mg/mL) of the EO was sprayed. After 24h, 72.25% of the larvae had died, indicating stability of the EO when subjected to uncontrolled temperature and humidity conditions. The mechanism of action through which the EO killed the larvae and adult females was investigated by the Bioautographic Method, which showed inhibition of 3.15mg/mL of the EO on the acetylcholinesterase (AChE) enzyme. The results found in the present experiment indicate that E. pyriformis essential oil is an alternative in the control of southern cattle tick in the larval (parasitic) and free-living cycle (non-parasitic) stages under field conditions.(AU)

O Brasil dispõe de um dos maiores rebanhos bovinos comerciais do mundo, sendo natural que junto a esse rebanho, coexista uma enorme quantidade de espécies parasitárias; dentre estes o carrapato Rhipicephalus (Boophilus) microplus que interfere na produtividade animal, causando prejuízos à pecuária de corte e leite. A utilização de acaricidas químicos no controle deste ácaro tem causado o surgimento de populações resistentes e neste sentido, controles alternativos utilizando plantas como fontes de acaricidas botânicos têm se mostrado eficazes. Eugenia pyriformis Cambess é uma planta brasileira com atividades antioxidante e antimicrobiana, entretanto não há relatos da atividade acaricida. O objetivo do presente estudo consistiu na avaliação do potencial acaricida e larvicida do óleo essencial das folhas de E. pyriformis sobre o carrapato bovino nos diferentes estágios do ciclo reprodutivo. As folhas foram coletadas, secas e o OE extraído por hidrodestilação (3 horas) em aparelho Clevenger modificado. A análise química foi realizada por cromatografia gasosa acoplada à espectrometria de massas (CG/EM) sendo identificados 32 compostos, pertencentes à classe sesquiterpenos: hidrocarbonetos (17.98%) e oxigenados (81.96%); tendo como majoritários o spathulenol (43,65%) e caryophylene oxide (12,17%). O OE foi avaliado pelo teste de imersão de adultos nas concentrações (500,00 a 3,12mg/mL) onde foram mensurados os parâmetros: mortalidade das fêmeas (%), eclodibilidade dos ovos (%) e eficiência do produto (%). As larvas foram avaliadas pelo teste de imersão larval (Larval Packet Test) nas concentrações que variaram de 25,00 a 0,00004mg/mL. Foram determinadas as concentrações letais (CLs) necessárias para matar 50 e 99,9% das fêmeas adultas e das larvas utilizando a análise de Probitos. As CL50 e CL99,9 do OE foram (0,06 e 24,60mg/mL) para as larvas e (1.208,80 e 2.538mg/mL) para as fêmeas adultas, respectivamente. Outro parâmetro avaliado em nossa pesquisa foi mensurar a ação do OE no ciclo de vida livre das larvas de R.(B.) microplus; onde as larvas foram depositadas em vasos com Brachiaria decumbens e após migração destas para o ápice das folhas, foi aspergido solução contendo a CL99,9 (24,60mg/mL) do OE. Após 24 horas, 72,25% das larvas morreram indicando que houve estabilidade do OE quando submetido a condições de temperatura e umidade não controladas. O mecanismo de ação pelo qual o OE matou as larvas e fêmeas adultas foi investigado pelo método bioautográfico, indicando uma inibição de 3,15mg/mL do óleo essencial sobre a enzima acetilcolinesterase (AChE). Os resultados encontrados no presente experimento indicaram que o óleo essencial de E. pyriformis é uma alternativa no controle do carrapato bovino no estágio larval (parasitário) e no ciclo de vida livre (estágio não parasitário) em condições de campo.(AU)

Schinus terebinthifolius essential oil and fractions in the control of Aedes aegypti / Schinus terebinthifolius óleo essencial e frações no controle do Aedes aegypti

Several technologies have been developed to controlAedes aegypti, mainly studies on isolated plant molecules. The Schinus terebinthifolius (Raddi) (Anacardiaceae), popularly known as pink pepper is a plant widely used in reforestation of degraded areas and its fruits are used as condiments. The objective of this work was to investigate the potential of essential oils (EOs) and fractions (FRs) obtained from fresh fruits and leaves of S. terebinthifolius. The EOs were obtained by hydrodistillation (2 hours), fractionated on a chromatographic column using as the stationary phase silica gel 60 (0.063-0.2mm), mobile phases: n-hexane, dichloromethane, ethyl acetate and methanol and chemically evaluated by gas chromatography coupled to mass spectrometer (GC/MS). EOs and FRs were tested against larvae of the third stage and pupae of Ae. aegypti by Immersion Test at concentrations ranging from 500.00 to 0.003 mg mL-1 (v/v). The hexane FRs obtained from fruits and leaves were the ones that showed the greatest activity on the larvae (LC99.9= 0.60 mg mL-1 and LC99.9 0.64 mg mL-1, respectively) and pupae (LC99,9 = 2.51 mg mL-1 and 2.61 mg mL-1, respectively). These results were confirmed by the anticholinesterase activity where the hexane (fruit and leaf) FRs presented the highest inhibitory potential on the acetylcholinesterase enzyme (0.156 mg mL-1 and 0.312 mg mL-1, respectively), suggesting the likely mechanism of action. The larvicidal potential can be explained by the presence of the major compounds bicyclogermacrene and germacrene D in the hexane FRs, indicating in this way that they may replace or even act in synergisms with conventional chemical larvicides. In this way the present study opens the field for new researches, aiming the development of products with the compounds bicyclogermacrene and germacrene D, as an alternative in the control of this culicide.

Diversas tecnologias têm sido desenvolvidas para o controle do Aedes aegypti, destacando pesquisas com moléculas isoladas de plantas. A Schinus terebinthifolius (Raddi) (Anacardiaceae), conhecida popularmente como pimenta rosa é uma planta muito utilizada no reflorestamento de áreas degradadas e seus frutos são utilizados como condimentos. O objetivo deste trabalho foi investigar o potencial dos óleosessenciais (OEs) e frações (FRs) obtidos dos frutos e folhas frescos de S. terebinthifolius. Os OEs foram obtidos por hidrodestilação (2 horas), fracionados em coluna cromatográfica utilizando como fase estacionária sílica gel 60 (0,063-0,2mm), fases móveis: n-hexano, diclorometano, acetato de etila e metanol e avaliados quimicamente por cromatografia gasosa acoplada à espectrometria de massas (CG/EM). Os OEs e FRs foram testados frente a larvas do terceiro estádio e pupas do Ae. aegypti pelo Teste de Imersão em concentrações que variaram de 500,00 à 0,003 mg/mL (v/v). As FRs hexano obtidas dos frutos e folhas, foram as que apresentaram maior atividade sobre as larvas (CL99,9= 0,60 mg mL-1 e CL99,9 0,64 mg mL-1, respectivamente) e pupas (CL99,9= 2,51mg mL-1 e 2,61 mg mL-1, respectivamente). Estes resultados foram confirmados pela atividade anticolinesterase onde as FRs hexano (fruto e folha), foram as que apresentaram maior potencial inibitório sobre a enzima acetilcolinesterase (0,156 mg mL-1 e 0,312 mg mL-1, respectivamente), sugerindo desta forma o provável mecanismo de ação. O potencial larvicida encontrado pode ser explicado pela presença dos compostos majoritários biciclogermacreno e germacreno D nas FRs hexano, indicando desta forma, queestes possam vir a substituir, ou até mesmo agir em sinergismos com os larvicidas químicos convencionais. Desta forma o presente estudo abre campo para novas pesquisas, visando o desenvolvimento de produtos com os compostos bicyclogermacrene e germacrene D, como alternativa no controle deste culicídeo.

Exposição ambiental/ocupacional aos agrotóxicos em gestantes residentes em um município rural / Environmental/occupational exposure to pesticides of pregnant women living in a countryside municipality / Exposición ambiental/ocupacional a los agrotóxicos en gestantes residentes en un municipio rural

Objective: The study's goal has been to analyze if environmental or occupational exposure to pesticides can produce changes in pregnant women living in a countryside municipality. Methods: The participants of this study were twenty-three pregnant women, who both answered a questionnaire and donated biological material in order to perform Micronucleus (MN) Tests in lymphocytes, oral epithelial cells, and also for measuring the enzyme activity of erythrocyte acetylcholinesterase. Results: Considering the total analyzed samples, the following was found: an average of 8 ± 2.92 MN/1000 oral epithelial cells from urban participants; an average of 6.82 ± 3.43 MN/1000 oral epithelial cells from rural participants; and 100% of the microscope slides contained cells with two MN, which shows high intensity lesions to the DNA. There was found a high frequency of spontaneous abortions (34.8%), greater than in Brazil. Conclusion: The exposure of pregnant women living in a countryside municipality to pesticides may increase the rate of spontaneous abortions, as well as the chances of mutagenic effects

Objetivo: Analisar se a exposição ambiental ou ocupacional aos agrotóxicos causa alterações em gestantes residentes em um município rural. Métodos: Compuseram a amostra 23 gestantes, que responderam a um questionário e doaram amostras biológicas para a realização dos testes de micronúcleos (MN) em linfócitos, em células do epitélio oral, e para a dosagem da atividade da enzima acetilcolinesterase eritrocitária. Resultados: Obteve-se uma média de 8 ± 2,92 MN/1000 células do epitélio oral analisadas em amostras de participantes da zona urbana, 6,82 ± 3,43 MN/1000 de participantes da zona rural, e 100% das lâminas continham células com dois MN, o que demonstra lesões ao DNA de maior intensidade. Encontrou-se uma frequência elevada de casos de abortos espontâneos (34,8%), superior à encontrada no Brasil. Conclusão: A exposição de gestantes residentes em um município rural aos agrotóxicos eleva a taxa de abortos espontâneos, bem como as chances de ocorrência de efeitos mutagênicos

Objetivo: Analizar si la exposición ambiental o ocupacional a los agrotóxicos causa cambios en gestantes residentes en un municipio rural. Métodos: Compusieron la muestra 23 gestantes, que respondieron a un cuestionario y donaron muestras biológicas para la realización de las pruebas de micronúcleos (MN) en linfocitos, en células del epitelio oral, y para la dosificación de la actividad de la enzima acetilcolinesterasa eritrocitaria. Resultados: Se obtuvieron una media de 8 ± 2,92 MN / 1000 células del epitelio oral analizadas en muestras de participantes de la zona urbana, 6,82 ± 3,43 MN / 1000 de participantes de la zona rural, y el 100% de las láminas contenían células con dos MN, lo que demuestra lesiones al ADN de mayor intensidad. Se encontró una frecuencia elevada de casos de abortos espontáneos (34,8%), superior a la encontrada en Brasil. Conclusión: La exposición de gestantes residentes en un municipio rural a los agrotóxicos eleva la tasa de abortos espontáneos, así como las posibilidades de ocurrencia de efectos mutagênicos

Biological screening of extracts from leaf and stem bark of Croton floribundus Spreng. (Euphorbiaceae) / Triagem biológica de extratos das folhas e caules de Croton floribundus Spreng. (Euphorbiaceae)

Abstract This work describes the preliminary evaluation of cytotoxic, antimicrobial, molluscicidal, antioxidant and anticholinesterase activities from leaf (LECF) and stem bark alcoholic extracts (BECF) of the species Croton floribundus Spreng. (Euphorbiaceae), popularly known as capixingui or tapixingui. BECF presented significant toxicity (LC50 = 89.6 μg/ml) in the Artemia salina Leach, 1819 (Crustacea: Branchiopoda) bioassay, whereas LECF did not show activity (LC50 > 1000 μg/ml). From DPPH method, the values of IC50 for the LECF and BECF were 61.2 μg/ml and 62.2 μg/ml, respectively, showing that C. floribundus has an expressive antioxidant activity. Antimicrobial susceptibility was evaluated by microdilution technique and only BECF was active against Staphylococcus aureus (MIC = 39.6 μg/ml). The extracts did not present molluscicidal activity against snail Biomphalaria glabrata Say, 1818 (Gastropoda: Planorbidae). Both extracts revealed the presence of several components with an inhibiting capacity of acetylcholinesterase enzyme on the bioautographic assay. C. floribundus showed to be a promising species considering that it exhibited good biological activity in the most assays performed.

Resumo Este trabalho descreve a avaliação preliminar das atividades citotóxica, antimicrobiana, moluscicida, antioxidante e anticolinesterásica de extratos alcoólicos das folhas (LECF) e das cascas do caule (BECF) da espécie Croton floribundus Spreng. (Euphorbiaceae), popularmente conhecida como capixingui ou tapixingui. No bioensaio com Artemia salina Leach, 1819 (Crustacea: Branchiopoda), BECF apresentou toxicidade significante (LC50 = 89,6 µg/ml), enquanto que LECF não apresentou atividade (LC50 > 1000 µg/ml). A partir do método de DPPH, os valores de IC50 para o LECF e BECF foram 61,2 µg/ml e 62,2 µg/ml, respectivamente, evidenciando que C. floribundus tem uma atividade antioxidante expressiva. A susceptibilidade antimicrobiana foi avaliada pela técnica de microdiluição e apenas BECF foi ativo contra Staphylococcus aureus (MIC = 39,6 mg/ml). Os extratos não apresentaram atividade moluscicida contra o caramujo Biomphalaria glabrata Say, 1818 (Gastropoda: Planorbidae). Ambos os extratos revelaram a presença de componentes com capacidade inibidora da enzima acetilcolinesterase no ensaio bioautográfico. C. floribundus mostrou ser uma espécie promissora considerando que exibiu boa atividade biológica na maioria dos ensaios testados.

Los niveles de acetilcolinesterasa en pacientes con inestabilidad hemodinámica descartan sepsis como causa de choque / The levels of acetylcholinesterase in patients with hemodynamic instability discard sepsis as a cause of shock / Níveis de acetilcolinesterase em pacientes com instabilidade hemodinâmica descartam sepse como causa de choque

Resumen: Introducción: La detección temprana de sepsis es fundamental para disminuir la mortalidad de este padecimiento. Hasta el momento, ninguna escala clínica ni biomarcador ha sido útil en su diagnóstico y detección precoz. Los niveles de actividad de la acetilcolinesterasa se han propuesto como un biomarcador muy prometedor para la detección de sepsis y choque séptico. Objetivo: Estudiar la utilidad de los niveles de acetilcolinesterasa en el diagnóstico de sepsis. Material y métodos: Estudio observacional y prospectivo, en pacientes de la Unidad de Cuidados Intensivos del Hospital San Ángel Inn Universidad con diagnóstico de inestabilidad hemodinámica, clasificados con presencia o no de sepsis, tomándose niveles de acetilcolinesterasa al ingreso. Resultados: Se evaluaron 44 pacientes, 27% con sepsis. Los valores de acetilcolinesterasa tuvieron validez diagnóstica para predecir sepsis (AUC: 0.852 IC 95%: 0.726-0.977, p < 0.001), con un punto de corte de 3,956 U/L, sensibilidad = 81%, especificidad = 75%. El valor de neutrófilos con corte < 74% también tuvo valor predictor de sepsis (AUC: 0,710 IC 95%: 0,512-0,907, p = 0.034) sensibilidad = 75%, especificidad = 75%. Conclusiones: En pacientes con inestabilidad hemodinámica con niveles de acetilcolinesterasa mayores de 4,000 U/L se descarta sepsis como causa de choque.

Abstract: Introduction: Early detection of sepsis is essential to reduce mortality from this condition. So far, no clinical scale or biomarker has been useful in its diagnosis and early detection. Levels of acetylcholinesterase activity have been proposed as a very promising biomarker for the detection of sepsis and septic shock. Objective: To study the usefulness of acetylcholinesterase levels in the diagnosis of sepsis. Material and methods: Observational and prospective study in patients of the Intensive Care Unit of the Hospital San Ángel Inn Universidad with diagnosis of hemodynamic instability, classified with or without sepsis, taking acetylcholinesterase levels at admission. Results: 44 patients were evaluated, 27% with sepsis. The acetylcholinesterase values ​​presented a normal distribution and had diagnostic validity to predict sepsis (AUC: 0.852 95% CI: 0.726-0.977, p < 0.001), with a cut-off value of < 3,956 U/L, sensitivity = 81%, specificity = 75%. The value of neutrophils with a cut < 74% also had a predictive value of sepsis (AUC: 0.710 95% CI: 0.512-0.907, p = 0.034) sensitivity = 75%, specificity = 75%. Conclusions: In patients with hemodynamic instability with acetylcholinesterase levels greater than 4,000 U/L, sepsis is ruled out as the cause of shock.

Resumo: Introdução: A detecção precoce da sepse é fundamental para reduzir a mortalidade desta doença. Até agora nenhuma escala clínica ou biomarcador tem sido útil em seu diagnóstico e detecção precoce. Os níveis de atividade da acetilcolinesterase têm sido propostos como um biomarcador muito promissor para a detecção de sepse e choque séptico. Objetivo: Estudar a utilidade dos níveis de acetilcolinesterase no diagnóstico da sepse. Material e métodos: Estudo observacional e prospectivo, realizado em pacientes da unidade de terapia intensiva do Hospital Universitário San Ángel Inn, com diagnóstico de instabilidade hemodinâmica, classificados com ou sem a presença de sepse, obtendo os níveis de acetilcolinesterase na admissão. Resultados: Foram avaliados 44 pacientes, 27% com sepse. Os valores de acetilcolinesterase apresentaram validade diagnóstica para predizer sepse (AUC: 0.852 IC 95%: 0.726-0.977, p < 0.001), com valor de corte 3956 U/L, sensibilidade = 81%, especificidade = 75%. O valor de neutrófilos com um corte < 74% também teve um valor preditivo de sepsis (AUC: 0.710 IC 95%: 0.512-0.907, p = 0.034) sensibilidade = 75%, especificidade = 75%. Conclusões: Em pacientes com instabilidade hemodinâmica com níveis de acetilcolinesterase superiores a 4,000 U/L a sepse é descartada como causa de choque.

Effect of Sciatic Nerve Transection on acetylcholinesterase activity in spinal cord and skeletal muscles of the bullfrog Lithobates catesbeianus / Efeito da Secção do Nervo Isquiático sobre a atividade da acetilcolinesterase em medula espinal e músculos esqueléticos da rã-touro Lithobates catesbeianus

Abstract Sciatic nerve transection (SNT), a model for studying neuropathic pain, mimics the clinical symptoms of "phantom limb", a pain condition that arises in humans after amputation or transverse spinal lesions. In some vertebrate tissues, this condition decreases acetylcholinesterase (AChE) activity, the enzyme responsible for fast hydrolysis of released acetylcholine in cholinergic synapses. In spinal cord of frog Rana pipiens, this enzyme's activity was not significantly changed in the first days following ventral root transection, another model for studying neuropathic pain. An answerable question is whether SNT decreases AChE activity in spinal cord of frog Lithobates catesbeianus, a species that has been used as a model for studying SNT-induced neuropathic pain. Since each animal model has been created with a specific methodology, and the findings tend to vary widely with slight changes in the method used to induce pain, our study assessed AChE activity 3 and 10 days after complete SNT in lumbosacral spinal cord of adult male bullfrog Lithobates catesbeianus. Because there are time scale differences of motor endplate maturation in rat skeletal muscles, our study also measured the AChE activity in bullfrog tibial posticus (a postural muscle) and gastrocnemius (a typical skeletal muscle that is frequently used to study the motor system) muscles. AChE activity did not show significant changes 3 and 10 days following SNT in spinal cord. Also, no significant change occurred in AChE activity in tibial posticus and gastrocnemius muscles at day 3. However, a significant decrease was found at day 10, with reductions of 18% and 20% in tibial posticus and gastrocnemius, respectively. At present we cannot explain this change in AChE activity. While temporally different, the direction of the change was similar to that described for rats. This similarity indicates that bullfrog is a valid model for investigating AChE activity following SNT.

Resumo A transecção do nervo isquiático (SNT), um modelo para estudar dor neuropática, simula os sintomas clínicos do "membro fantasma", uma condição dolorosa que ocorre nos humanos após amputação ou secção completa da medula espinal. Essa condição muda a atividade da acetilcolinesterase (AChE), a enzima responsável pela rápida hidrólise da acetilcolina liberada nas sinapses colinérgicas, em alguns tecidos de vertebrados. Em medula espinal de rã Rana pipiens, a atividade da AChE não foi significativamente alterada nos primeiros dias após a secção da raiz ventral, outro modelo para o estudo da dor neuropática. Uma questão ainda não respondida é se a SNT diminui a atividade da AChE na medula espinal de rã Lithobates catesbeianus, uma espécie que vem sendo usada como modelo em estudos da dor neuropática induzida por SNT. Como cada modelo animal é criado a partir de metodologia específica, e seus resultados tendem a variar com pequenas mudanças na metodologia de indução da dor, o presente estudo avaliou a atividade da AChE em medula espinal lombossacral de rã-touro Lithobates catesbeianus, adultos, machos, 3 e 10 dias após a completa SNT. Como há diferenças temporais na maturação de placas motoras em músculos esqueléticos de ratos, nosso estudo ainda demonstrou, na rã-touro, os efeitos da SNT sobre a atividade da AChE nos músculos esqueléticos tibial posticus, um músculo postural, e gastrocnêmio, um músculo frequentemente usado em estudos do sistema motor. A atividade da AChE não mudou significativamente na medula espinal aos 3 e 10 dias após a SNT. Nos músculos, a atividade não alterou significativamente aos 3 dias após a lesão, mas reduziu de forma significativa aos 10 dias após a SNT. Aos 10 dias, a diminuição foi 18% no músculo tibial posticus e 20% no gastrocnêmio. No momento, nós não temos explicação para essa mudança na atividade da AChE. Embora temporalmente diferente, o sentido da mudança é similar ao que é descrito em ratos. Esta similaridade torna a rã-touro um modelo válido para se estudar questões ainda não respondidas da SNT sobre a AChE.

Passion fruit and apple: from residues to antioxidant, antimicrobial and anti-Alzheimer's potential / Maracujá e maçã: de resíduos ao potencial antioxidante, antimicrobiano e anti-Alzheimer

ABSTRACT: The waste in the fruit production chain, including the juice and pulp industries, produces large quantities of leftover husks, seeds and bagasse. This volume of waste generates huge environmental and economic impact. The objective of this research was to determine the potential of using residues from passion fruit (Passiflora edulis) and apple (Malus domestica) varieties in the production of functional flours. Passion fruit flour showed greater reduction of DPPH (EC50%: 50.4μg/mL) radicals, showing antioxidant potential, as well as a more efficient inhibition of Staphylococcus aureus (71.3±1.2μg/mL), with a modest; however efficient, inhibition of acetylcholinesterase (10%). All Apple flours were good antioxidants and the fuji apple flour stood out inhibiting Pseudomonas aeruginosa (78.6±3.1μg/mL). All the residues showed potential for use as a functional product either as a source of antioxidants, a natural (antimicrobial) preservative for dry foods or supplementary use by patients with Alzheimer's disease.

RESUMO: O desperdício na cadeia produtiva de frutos, incluindo as indústrias de suco e polpa, produz grandes quantidades de resíduos, como cascas, sementes e bagaços. Esse volume de resíduos gera impacto ambiental e econômico. O objetivo deste trabalho foi determinar o potencial de aproveitamento de resíduos de maracujá (Passiflora edulis) e de variedades de maçã (Malus domestica) na produção de farinhas funcionais. A farinha de maracujá apresentou maior redução de radicais DPPH (EC50%: 50,4μg/mL), demonstrando potencial antioxidante, maior inibição de Staphylococcus aureus (71,3±1,2μg/mL) e da acetilcolinesterase (10%). Todas as farinhas de maçã foram boas antioxidantes e a fuji destacou-se inibindo Pseudomonas aeruginosa (78,6±3,1μg/mL). Todos os resíduos mostraram potencial para aproveitamento como produto funcional, seja como fonte de antioxidantes, conservante natural (antimicrobiano) para alimentos secos ou uso suplementar no tratamento de Alzheimer.

Mary Broadfoot Walker: 83 years since a historical discovery / Mary Broadfoot Walker: 83 anos desde uma descoberta histórica

ABSTRACT Mary Broadfoot Walker was a Scottish physician who, in 1935, described in great detail the effect of an anticholinesterase drug (physostigmine) on the signs and symptoms of myasthenia gravis. An original five-minutes movie is available online and the skepticism of her contemporary British medical doctors is understandable when the drastic effect of the treatment is shown in this movie. What Mary Walker taught us, more than eight decades ago, about myasthenia gravis continues to be the basis of a pharmacological diagnostic test and treatment of this disease.

RESUMO Mary Broadfoot Walker foi uma médica escocesa que em 1935 descreveu em grande detalhe o efeito de uma droga anticolinesterásica (fisostigmina) nos sinais e sintomas da myasthenia gravis. Um filme original com cinco minutos de duração está disponível online e a reação cética dos colegas médicos contemporâneos de Mary é compreensível dado o drástico efeito terapêutico mostrado neste filme. O que Mary Walker nos ensinou mais de oito décadas atrás continua a ser a base de um teste diagnóstico farmacológico e do tratamento da myasthenia gravis.

Effect of Sciatic Nerve Transection on acetylcholinesterase activity in spinal cord and skeletal muscles of the bullfrog Lithobates catesbeianus

Abstract Sciatic nerve transection (SNT), a model for studying neuropathic pain, mimics the clinical symptoms of phantom limb, a pain condition that arises in humans after amputation or transverse spinal lesions. In some vertebrate tissues, this condition decreases acetylcholinesterase (AChE) activity, the enzyme responsible for fast hydrolysis of released acetylcholine in cholinergic synapses. In spinal cord of frog Rana pipiens, this enzymes activity was not significantly changed in the first days following ventral root transection, another model for studying neuropathic pain. An answerable question is whether SNT decreases AChE activity in spinal cord of frog Lithobates catesbeianus, a species that has been used as a model for studying SNT-induced neuropathic pain. Since each animal model has been created with a specific methodology, and the findings tend to vary widely with slight changes in the method used to induce pain, our study assessed AChE activity 3 and 10 days after complete SNT in lumbosacral spinal cord of adult male bullfrog Lithobates catesbeianus. Because there are time scale differences of motor endplate maturation in rat skeletal muscles, our study also measured the AChE activity in bullfrog tibial posticus (a postural muscle) and gastrocnemius (a typical skeletal muscle that is frequently used to study the motor system) muscles. AChE activity did not show significant changes 3 and 10 days following SNT in spinal cord. Also, no significant change occurred in AChE activity in tibial posticus and gastrocnemius muscles at day 3. However, a significant decrease was found at day 10, with reductions of 18% and 20% in tibial posticus and gastrocnemius, respectively. At present we cannot explain this change in AChE activity. While temporally different, the direction of the change was similar to that described for rats. This similarity indicates that bullfrog is a valid model for investigating AChE activity following SNT.

Resumo A transecção do nervo isquiático (SNT), um modelo para estudar dor neuropática, simula os sintomas clínicos do membro fantasma, uma condição dolorosa que ocorre nos humanos após amputação ou secção completa da medula espinal. Essa condição muda a atividade da acetilcolinesterase (AChE), a enzima responsável pela rápida hidrólise da acetilcolina liberada nas sinapses colinérgicas, em alguns tecidos de vertebrados. Em medula espinal de rã Rana pipiens, a atividade da AChE não foi significativamente alterada nos primeiros dias após a secção da raiz ventral, outro modelo para o estudo da dor neuropática. Uma questão ainda não respondida é se a SNT diminui a atividade da AChE na medula espinal de rã Lithobates catesbeianus, uma espécie que vem sendo usada como modelo em estudos da dor neuropática induzida por SNT. Como cada modelo animal é criado a partir de metodologia específica, e seus resultados tendem a variar com pequenas mudanças na metodologia de indução da dor, o presente estudo avaliou a atividade da AChE em medula espinal lombossacral de rã-touro Lithobates catesbeianus, adultos, machos, 3 e 10 dias após a completa SNT. Como há diferenças temporais na maturação de placas motoras em músculos esqueléticos de ratos, nosso estudo ainda demonstrou, na rã-touro, os efeitos da SNT sobre a atividade da AChE nos músculos esqueléticos tibial posticus, um músculo postural, e gastrocnêmio, um músculo frequentemente usado em estudos do sistema motor. A atividade da AChE não mudou significativamente na medula espinal aos 3 e 10 dias após a SNT. Nos músculos, a atividade não alterou significativamente aos 3 dias após a lesão, mas reduziu de forma significativa aos 10 dias após a SNT. Aos 10 dias, a diminuição foi 18% no músculo tibial posticus e 20% no gastrocnêmio. No momento, nós não temos explicação para essa mudança na atividade da AChE. Embora temporalmente diferente, o sentido da mudança é similar ao que é descrito em ratos. Esta similaridade torna a rã-touro um modelo válido para se estudar questões ainda não respondidas da SNT sobre a AChE.

Biological screening of extracts from leaf and stem bark of Croton floribundus Spreng. (Euphorbiaceae)

Abstract This work describes the preliminary evaluation of cytotoxic, antimicrobial, molluscicidal, antioxidant and anticholinesterase activities from leaf (LECF) and stem bark alcoholic extracts (BECF) of the species Croton floribundus Spreng. (Euphorbiaceae), popularly known as capixingui or tapixingui. BECF presented significant toxicity (LC50 = 89.6 g/ml) in the Artemia salina Leach, 1819 (Crustacea: Branchiopoda) bioassay, whereas LECF did not show activity (LC50 > 1000 g/ml). From DPPH method, the values of IC50 for the LECF and BECF were 61.2 g/ml and 62.2 g/ml, respectively, showing that C. floribundus has an expressive antioxidant activity. Antimicrobial susceptibility was evaluated by microdilution technique and only BECF was active against Staphylococcus aureus (MIC = 39.6 g/ml). The extracts did not present molluscicidal activity against snail Biomphalaria glabrata Say, 1818 (Gastropoda: Planorbidae). Both extracts revealed the presence of several components with an inhibiting capacity of acetylcholinesterase enzyme on the bioautographic assay. C. floribundus showed to be a promising species considering that it exhibited good biological activity in the most assays performed.

Resumo Este trabalho descreve a avaliação preliminar das atividades citotóxica, antimicrobiana, moluscicida, antioxidante e anticolinesterásica de extratos alcoólicos das folhas (LECF) e das cascas do caule (BECF) da espécie Croton floribundus Spreng. (Euphorbiaceae), popularmente conhecida como capixingui ou tapixingui. No bioensaio com Artemia salina Leach, 1819 (Crustacea: Branchiopoda), BECF apresentou toxicidade significante (LC50 = 89,6 µg/ml), enquanto que LECF não apresentou atividade (LC50 > 1000 µg/ml). A partir do método de DPPH, os valores de IC50 para o LECF e BECF foram 61,2 µg/ml e 62,2 µg/ml, respectivamente, evidenciando que C. floribundus tem uma atividade antioxidante expressiva. A susceptibilidade antimicrobiana foi avaliada pela técnica de microdiluição e apenas BECF foi ativo contra Staphylococcus aureus (MIC = 39,6 mg/ml). Os extratos não apresentaram atividade moluscicida contra o caramujo Biomphalaria glabrata Say, 1818 (Gastropoda: Planorbidae). Ambos os extratos revelaram a presença de componentes com capacidade inibidora da enzima acetilcolinesterase no ensaio bioautográfico. C. floribundus mostrou ser uma espécie promissora considerando que exibiu boa atividade biológica na maioria dos ensaios testados.

Biomarcadores inflamatórios e de estresse oxidativo em cadelas submetidas à ovário-histerectomia videoassistida ou convencional / Inflammation and oxidative stress indicators in bitches submitted to laparoscopic-assisted or conventional ovariohysterectomy

A videocirurgia é atualmente uma das principais ferramentas operatórias, com vantagens que incluem menor estresse, incisões e dor pós-operatória quando comparada aos procedimentos abertos. Objetivou-se comparar o processo inflamatório e o estresse oxidativo resultantes das técnicas de ovário-histerectomia (OVH) convencional e videoassistida, com dois portais em cadelas, por meio de hemograma, avaliação de acetilcolinesterase, butirilcolinesterase, catalase e malondialdeído séricos, imediatamente antes da operação e duas, seis, 12, 24, 48 e 72 horas após a cirurgia. Observou-se menor estresse cirúrgico nas pacientes operadas pela técnica videoassistida, e sugere-se que a técnica convencional possa implicar peroxidação lipídica, mesmo com o uso de anti-inflamatório.(AU)

Videosurgery is currently a very important surgical tool with several benefits over the open surgery, including less surgical stress, shorter incisions and less postoperative pain. The purpose of this study was to compare the inflammatory process and oxidative stress between conventional and two-port laparoscopic-assisted ovariohisterectomy (OVH) in bitches. Complete blood counting, serum acetylcholinesterase, butyrylcholinesterase, catalase and malondialdehyde were assessed on the baseline and at two, six, 12, 24, 48 and 72 hours after surgery. The patients submitted to the videoassisted technique presented lower inflammatory response. There are suggestions that the conventional technique promotes lipid peroxidation, even with the use of anti-inflammatories.(AU)

Atividade basal de acetilcolinesterase e níveis plasmáticos de serotonina não se associam ao delirium em pacientes gravemente enfermos / Baseline acetylcholinesterase activity and serotonin plasma levels are not associated with delirium in critically ill patients

RESUMO Objetivo: Investigar se os níveis plasmáticos de serotonina e atividade de acetilcolinesterase determinados por ocasião da admissão à unidade de terapia intensiva preveem a ocorrência de disfunção cerebral aguda em pacientes internados em unidade de terapia intensiva. Métodos: Foi conduzido no período entre maio de 2009 e setembro de 2010 um estudo prospectivo de coorte em uma amostra com 77 pacientes não consecutivos. A ocorrência de delirium foi determinada utilizando a ferramenta Confusion Assessment Method for the Intensive Care Unit, tendo sido determinadas as avaliações de acetilcolinesterase e serotonina em amostras de sangue coletadas até um máximo de 24 horas após admissão do paciente à unidade de terapia intensiva. Resultados: No presente estudo, 38 pacientes (49,6%) desenvolveram delirium durante sua permanência na unidade de terapia intensiva. Nem os níveis de atividade de acetilcolinesterase nem os de serotonina tiveram associação independente com delirium. Não se observaram correlações significantes entre atividade de acetilcolinesterase e níveis de serotonina com o número de dias livres de delirium/coma, porém, em pacientes que desenvolveram delirium, ocorreu uma forte correlação negativa entre níveis de acetilcolinesterase e número de dias livres de delirium/coma, demonstrando que níveis mais elevados de acetilcolinesterase se associaram com menos dias de vida sem delirium e coma. Nenhuma associação foi identificada entre os biomarcadores e mortalidade. Conclusão: Nem a atividade de acetilcolinesterase nem os níveis séricos de serotonina se associaram com delirium ou disfunção cerebral aguda em pacientes gravemente enfermos. A ocorrência de sepse não modificou esse relacionamento. .

ABSTRACT Objective: The aim of this study was to investigate whether plasma serotonin levels or acetylcholinesterase activities determined upon intensive care unit admission could predict the occurrence of acute brain dysfunction in intensive care unit patients. Methods: A prospective cohort study was conducted with a sample of 77 non-consecutive patients observed between May 2009 and September 2010. Delirium was determined using the Confusion Assessment Method for the Intensive Care Unit tool, and the acetylcholinesterase and serotonin measurements were determined from blood samples collected up to a maximum of 24 h after the admission of the patient to the intensive care unit. Results: In the present study, 38 (49.6%) patients developed delirium during their intensive care unit stays. Neither serum acetylcholinesterase activity nor serotonin level was independently associated with delirium. No significant correlations of acetylcholinesterase activity or serotonin level with delirium/coma-free days were observed, but in the patients who developed delirium, there was a strong negative correlation between the acetylcholinesterase level and the number of delirium/coma-free days, indicating that higher acetylcholinesterase levels are associated with fewer days alive without delirium or coma. No associations were found between the biomarkers and mortality. Conclusions: Neither serum acetylcholinesterase activity nor serotonin level was associated with delirium or acute brain dysfunction in critically ill patients. Sepsis did not modify these relationships. .

Synthesis and DPPH scavenging assay of reserpine analogues, computational studies and in silico docking studies in AChE and BChE responsible for Alzheimer's disease

Alzheimer's disease (AD) is a fast growing neurodegenerative disorder of the central nervous system and anti-oxidants can be used to help suppress the oxidative stress caused by the free radicals that are responsible for AD. A series of selected synthetic indole derivatives were biologically evaluated to identify potent new antioxidants. Most of the evaluated compounds showed significant to modest antioxidant properties (IC50 value 399.07 140.0±50 µM). Density Functional Theory (DFT) studies were carried out on the compounds and their corresponding free radicals. Differences in the energy of the parent compounds and their corresponding free radicals provided a good justification for the trend found in their IC50 values. In silico, docking of compounds into the proteins acetylcholinesterase (AChE) and butyrylcholinesterase (BChE), which are well known for contributing in AD disease, was also performed to predict anti-AD potential.

A doença de Alzheimer (DA) é uma doença neurodegenerativado sistema nervoso central, em rápido crescimento, e antioxidantes ajudam a suprimir o estresse oxidativo causado por radicais livres, responsávies pela DA. Avaliou-se, biologicamente, série de derivados sintéticos de indol selecionados para identificar novos antioxidantes. A maioria dos compostos avaliados apresentou de significativa a boa propriedade antioxidante (valor de IC50 399,07140.0 ± 50 µM). Eftuaram-se estudos de Teoria do Funcional de Densidade (DFT) com os compostos e os seus correspondentes radicais livres. As diferenças de energia entre os compostos protótipos e os radicais livres correspondentes proporcionaram boa justificativa para a tendência encontrada nos seus valores de IC50. O ancoramento in silico dos compostos com a acetilcolinesterase (AChE) e com a butirilcolinesterase (BChE), que contribuem para a DA, foi, também, realizado para prever o seu potencial anti-DA.

Biomarcadores inflamatórios e indicadores de estresse oxidativo em cadelas submetidas à ovariossalpingohisterectomia convencional, por NOTES híbrida e NOTES total / Inflammatory biomarkers and oxidative stress indicators in bitches subjected to conventional ovarysalpingohysterectomy, by hybrid NOTES and by total NOTE

Objetivou-se comparar a resposta inflamatória e o perfil oxidativo da técnica de ovariossalpingohisterectomia (OSH) convencional com duas técnicas de Cirurgia Endoscópica por Orifícios Naturais (NOTES). Foram utilizados 15 fêmeas, alocadas em três grupos de cinco animais. No primeiro grupo, a OSH foi realizada por celiotomia convencional, no segundo, por NOTES total e, no terceiro, por NOTES híbrida. Foram realizadas as coletas sanguíneas antes do procedimento cirúrgico (basal), 3, 6, 12, 24, 48 e 72h pós-operatórias. A atividade da catalase manteve-se alta nos três grupos estudados, entretanto a peroxidação lipídica, medida pelos níveis dos produtos de reação com o ácido tiobarbitúrico (TBARS), ocorreu mais acentuadamente no grupo convencional e foi quase que imperceptível no grupo de NOTES total. Nos três grupos estudados, ocorreu elevação na atividade da butirilcolinesterase e acetilcolinesterases, bem como aumento leucocitário neutrofílico nas primeiras horas pós-cirúrgicas. Conclui-se que a inflamação sistêmica acontece de forma similar nas três técnicas operatórias, com ressalva para as realizadas por NOTES total que mantiveram as mais baixas taxas oxidativas.

This study aimed at comparing the inflammatory response and the oxydative profile of the conventional ovarysalpingohysterectomy (OSH) technique to Totally Natural Orifice Transluminal Endoscopic Surgery (NOTES) and Hybrid NOTES. Group of fifteen female dogs was used for each technique. Blood samples were taken before the surgical procedure (basal) and 3, 6, 12, 24, 48 and 72h postoperative. The catalase activity was increased in the three studied groups. Nevertheless, lipid peroxidation, measured by TBARS (thiobarbituric acid reactive substances) levels, was higher in the conventional group and almost indistinguishable in the total NOTES group. In the three analyzed groups, both butyrylcholinesterase and acetylcholinesterase activities were increased as well as the neutrophil counts during the first post-surgical hours. It is possible to conclude that systemic inflammation occurs in a similar way in the three operative techniques; however, total NOTES technique presents lower levels of cellular oxidative damage, particularly if compared to the conventional approach.

Exposição a agrotóxicos: determinação dos valores de referência para colinesterase plasmática e eritrocitária / Exposure to agrochemicals: determination of reference values for plasma and erythrocyte cholinesterase

Estabelecer um valor de referência de acetilcolinesterase e butirilcolinesterase para os trabalhadores da Saúde Pública no controle de vetores.

To set reference values of acetylcholinesterase and butyrylcholinesterase for public health workers in the vector control area.