Escherichia coli expression and characterization of alfa-amylase from Geobacillus thermodenitrificans DSM-465 / Expressão e caracterização de Escherichia coli de alfa-amilase de Geobacillus thermodenitrificans DSM-465

Alpha amylase, catalyzing the hydrolysis of starch is a ubiquitous enzyme with tremendous industrial applications. A 1698 bp gene coding for 565 amino acid amylase was PCR amplified from Geobacillus thermodenitrificans DSM-465, cloned in pET21a (+) plasmid, expressed in BL21 (DE3) strain of E. coli and characterized. The recombinant enzyme exhibited molecular weight of 63 kDa, optimum pH 8, optimum temperature 70°C, and KM value of 157.7µM. On pilot scale, the purified enzyme efficiently removed up to 95% starch from the cotton fabric indicating its desizing ability at high temperature. 3D model of enzyme built by Raptor-X and validated by Ramachandran plot appeared as a monomer having 31% α-helices, 15% β-sheets, and 52% loops. Docking studies have shown the best binding affinity of enzyme with amylopectin (∆G -10.59). According to our results, Asp 232, Glu274, Arg448, Glu385, Asp34, Asn276, and Arg175 constitute the potential active site of enzyme.

A alfa-amilase, que catalisa a hidrólise do amido, é uma enzima ubíqua com imensas aplicações industriais. Um gene de 1698 pb que codifica a amilase de 565 aminoácidos foi amplificado por PCR, a partir de Geobacillus thermodenitrificans DSM-465, clonado no plasmídeo pET21a (+), expresso na cepa BL21 (DE3) de E. coli e caracterizado. A enzima recombinante exibiu peso molecular de 63 kDa, pH ótimo igual a 8, temperatura ótima de 70° C e valor KM de 157,7 µM. Em escala piloto, a enzima purificada removeu com eficiência até 95% de amido do tecido de algodão, indicando sua capacidade de desengomagem em alta temperatura. O modelo 3D da enzima construída por Raptor-X e validada por Ramachandran plot apareceu como um monômero com 31% de hélices alfa, 15% de folhas beta e 52% de loops. Os estudos de docking mostraram melhor afinidade de ligação da enzima com amilopectina (∆G: - 10,59). De acordo com nossos resultados, Asp 232, Glu274, Arg448, Glu385, Asp34, Asn276 e Arg175 constituem o sítio ativo potencial da enzima.

Escherichia coli expression and characterization of -amylase from Geobacillus thermodenitrificans DSM-465

Abstract Alpha amylase, catalyzing the hydrolysis of starch is a ubiquitous enzyme with tremendous industrial applications. A 1698 bp gene coding for 565 amino acid amylase was PCR amplified from Geobacillus thermodenitrificans DSM-465, cloned in pET21a (+) plasmid, expressed in BL21 (DE3) strain of E. coli and characterized. The recombinant enzyme exhibited molecular weight of 63 kDa, optimum pH 8, optimum temperature 70°C, and KM value of 157.7µM. On pilot scale, the purified enzyme efficiently removed up to 95% starch from the cotton fabric indicating its desizing ability at high temperature. 3D model of enzyme built by Raptor-X and validated by Ramachandran plot appeared as a monomer having 31% -helices, 15% -sheets, and 52% loops. Docking studies have shown the best binding affinity of enzyme with amylopectin (G -10.59). According to our results, Asp 232, Glu274, Arg448, Glu385, Asp34, Asn276, and Arg175 constitute the potential active site of enzyme.

Resumo A alfa-amilase, que catalisa a hidrólise do amido, é uma enzima ubíqua com imensas aplicações industriais. Um gene de 1698 pb que codifica a amilase de 565 aminoácidos foi amplificado por PCR, a partir de Geobacillus thermodenitrificans DSM-465, clonado no plasmídeo pET21a (+), expresso na cepa BL21 (DE3) de E. coli e caracterizado. A enzima recombinante exibiu peso molecular de 63 kDa, pH ótimo igual a 8, temperatura ótima de 70° C e valor KM de 157,7 µM. Em escala piloto, a enzima purificada removeu com eficiência até 95% de amido do tecido de algodão, indicando sua capacidade de desengomagem em alta temperatura. O modelo 3D da enzima construída por Raptor-X e validada por Ramachandran plot apareceu como um monômero com 31% de hélices alfa, 15% de folhas beta e 52% de loops. Os estudos de docking mostraram melhor afinidade de ligação da enzima com amilopectina (G: - 10,59). De acordo com nossos resultados, Asp 232, Glu274, Arg448, Glu385, Asp34, Asn276 e Arg175 constituem o sítio ativo potencial da enzima.

Escherichia coli expression and characterization of α-amylase from Geobacillus thermodenitrificans DSM-465 / Expressão e caracterização de Escherichia coli de alfa-amilase de Geobacillus thermodenitrificans DSM-465

Alpha amylase, catalyzing the hydrolysis of starch is a ubiquitous enzyme with tremendous industrial applications. A 1698 bp gene coding for 565 amino acid amylase was PCR amplified from Geobacillus thermodenitrificans DSM465, cloned in pET21a (+) plasmid, expressed in BL21 (DE3) strain of E. coli and characterized. The recombinant enzyme exhibited molecular weight of 63 kDa, optimum pH 8, optimum temperature 70°C, and KM value of 157.7µM. On pilot scale, the purified enzyme efficiently removed up to 95% starch from the cotton fabric indicating its desizing ability at high temperature. 3D model of enzyme built by Raptor-X and validated by Ramachandran plot appeared as a monomer having 31% α-helices, 15% ß-sheets, and 52% loops. Docking studies have shown the best binding affinity of enzyme with amylopectin (∆G -10.59). According to our results, Asp 232, Glu274, Arg448, Glu385, Asp34, Asn276, and Arg175 constitute the potential active site of enzyme.

A alfa-amilase, que catalisa a hidrólise do amido, é uma enzima ubíqua com imensas aplicações industriais. Um gene de 1698 pb que codifica a amilase de 565 aminoácidos foi amplificado por PCR, a partir de Geobacillus thermodenitrificans DSM-465, clonado no plasmídeo pET21a (+), expresso na cepa BL21 (DE3) de E. coli e caracterizado. A enzima recombinante exibiu peso molecular de 63 kDa, pH ótimo igual a 8, temperatura ótima de 70° C e valor KM de 157,7 µM. Em escala piloto, a enzima purificada removeu com eficiência até 95% de amido do tecido de algodão, indicando sua capacidade de desengomagem em alta temperatura. O modelo 3D da enzima construída por Raptor-X e validada por Ramachandran plot apareceu como um monômero com 31% de hélices alfa, 15% de folhas beta e 52% de loops. Os estudos de docking mostraram melhor afinidade de ligação da enzima com amilopectina (∆G: - 10,59). De acordo com nossos resultados, Asp 232, Glu274, Arg448, Glu385, Asp34, Asn276 e Arg175 constituem o sítio ativo potencial da enzima.

Eurytrema coelomaticum infection: correlation between parasite burden and impairment of pancreatic exocrine enzyme secretion / Eurytrema coelomaticum: correlação entre carga parasitária e insuficiência pancreática exócrina

Eurytrema coelomaticum is a trematode reported in the pancreatic ducts of ruminants. It is conjectured that may cause disorders in the pancreas, as well as digestive and metabolic processes dependent on them. This study, determined if there is an impairment of exocrine pancreatic function, and correlated it with parasite burden. Pancreas, blood, and fecal samples were collected from 119 bovines at a abattoir. Stool samples were subjected to the gelatin and x-ray film digestion tests (to detect the presence of trypsin in feces). Using blood samples, the following biochemical tests were performed: amylase, lipase, glucose, fructosamine, cholesterol, triglycerides, total protein, albumin, and globulins. Analyses were correlated with pancreatic parasite burden. Cattle with a high parasitic load presented higher incidence of negative tests in both gelatin digestion and x-ray film digestion tests (P < 0.001) when compared to non-parasitized animals and those with a low parasitic load. Changes in those tests only occurred if the parasitemia was moderate or severe. The activity of the amylase and lipase enzymes was significantly higher in animals with low parasitemia (P < 0.05), compared to non-parasitized animals and with a high parasitic burden. In this study, in cases of high parasitemia, negative results were observed in both gelatin and x-ray film in the feces digestion tests. However, the low infection of E. coelomaticum, higher levels of serum amylase and lipase that also indicated loss of pancreatic exocrine functions were reported.

Eurytrema coelomaticum, um trematódeo de ductos pancreáticos de ruminantes. Conjectura-se que possa ocasionar transtornos nas funções pancreáticas, mais especificamente nos processos digestivos e metabólicos dependentes destas. Neste estudo, o objetivo foi determinar se há comprometimento da função pancreática exócrina, correlacionado-a a carga parasitária. Foram utilizados pâncreas e respectivas amostras de sangue e fezes de 119 bovinos. As amostras de fezes foram submetidas aos testes de digestão da gelatina em tubo e digestão de filme radiográfico, ambos para detecção de tripsina nas fezes. Foram realizados os seguintes exames bioquímicos em amostras de sangue: amilase, lipase, glicemia, frutosamina, colesterol, triglicerídeos, proteínas totais, albumina e globulinas. Após isto, as análises bioquímicas foram correlacionadas com a quantidade numérica de parasitas encontrados no pâncreas (post-mortem). Houve maior quantidade de testes negativos (digestão do filme radiográfico e prova de digestão da gelatina) nos animais com alta carga parasitária (P < 0.001), quando comparados aos animais não parasitados e com baixa carga parasitária. Portanto, os exames supracitados se alteram somente se a quantidade de parasitas for moderada ou severa. As atividades das enzimas amilase e lipase foram significativamente maiores nos animais que apresentavam baixa parasitemia (P < 0.05), em comparação com os animais com alta carga parasitária e não parasitados. Conclui-se que em quadros de alta parasitemia há alteração significativa nos testes de digestão nas fezes, e que em quadros de baixa parasitemia há alterações significativas nos valores de amilase e lipase séricas, ambos comprovando alterações pancreáticas importantes, de acordo com o quadro de parasitemia.

Comparative molecular studies of halophilic bacteria from saline water and soil in the Saudi environment / Estudos moleculares comparativos de bactérias halofílicas de água salina e solo no meio ambiente saudita

Halophilic bacteria are microorganisms that grow optimally in the presence of the very high concentration of sodium chloride. Halophiles are vital sources of various enzymes including hydrolases, which are very stable and catalytically highly efficient at high salt concentration and other extreme conditions such as high temperature, pH and presence of organic solvents. Several hydrolases such as amylases, proteases, and lipases have been obtained from halophilic bacteria and are commonly used for various industrial applications. We initiated a screening to isolate and characterize the halophilic bacteria from the Red Sea, which is one of the saltiest bodies of water in the world. Water and soil samples, collected from the Red Sea coast, Jeddah, Saudi Arabia, were screened for isolation of halophilic bacteria. Ten bacterial isolates were obtained, which were characterized by biochemical tests and 16S rRNA gene sequencing. Hydrolase producing bacteria among the isolates were screened by plate assay on starch and gelatin agar plates for amylase and protease, respectively. Two bacterial isolates i.e. Bacillus glycinifermentans S3 and Enterobacter cloacae W1were found to possess significant amylase and protease activity.

Bactérias halofílicas são microrganismos que crescem de maneira ideal na presença de uma concentração muito alta de cloreto de sódio. Halófilos são fontes vitais de várias enzimas, incluindo hidrolases, que são muito estáveis e cataliticamente altamente eficientes em alta concentração de sal e outras condições extremas, como alta temperatura, pH e presença de solventes orgânicos. Várias hidrolases como amilases, proteases e lipases foram obtidas a partir de bactérias halofílicas e são comumente usadas para várias aplicações industriais. Iniciamos uma triagem para isolar e caracterizar as bactérias halofílicas do Mar Vermelho, que é um dos corpos de água mais salgados do mundo. Amostras de água e solo, coletadas na costa do Mar Vermelho, Jeddah, na Arábia Saudita, foram examinadas quanto ao isolamento de bactérias halofílicas. Foram obtidos dez isolados bacterianos, caracterizados por testes bioquímicos e seqüenciamento do gene 16S rRNA. As bactérias produtoras de hidrolase entre os isolados foram triadas por ensaio em placa em placas de amido e ágar de gelatina para amilase e protease, respectivamente. Verificou-se que dois isolados bacterianos, isto é, Bacillus glycinifermentans S3 e Enterobacter cloacae W1, possuíam significativa atividade de amilase e protease.

Citral as food additive for common snook - zootechnical parameters and digestive enzymes / Citral como aditivo na ração para robalo flecha - parâmetros zootécnicos e enzimas digestivas

ABSTRACT: Essential oils of plants whose main compound is citral showed beneficial effects when added to fish feed. The objective of the present study was to evaluate the dietary effect of the addition of citral on zootechnical parameters and digestive enzyme activities of Centropomus undecimalis. Juveniles were fed for 45 days with diets containing different amounts of citral (0.0 - control, 0.5, 1.0, and 2.0 mL per kg of diet). The water quality parameters were kept stable during the experiment and no mortality was observed. At the end of the experimental period, the treatment 0.5 mL citral per kg of diet had the lowest weight gain and specific growth rate, and the highest feed conversion, while the same parameters did not differ between the other treatments. Pepsin activity was higher in the stomach of fish fed with 0.5 mL citral per kg of diet and amylase activity was higher in the intestine of fish fed with 0.5 and 2.0 mL citral per kg of diet compared to the control group. Intestinal lipase activity was higher in all groups that were fed with citral compared to the control group. Chymotrypsin and trypsin activities showed no difference between groups. Consequently, dietary addition of citral at any of the levels tested is not recommended for common snook.

RESUMO: Óleos essenciais de plantas, cujo composto majoritário é o citral, mostraram efeitos benéficos quando adicionados à ração para peixes. O objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito da adição de citral sobre os parâmetros zootécnicos e atividades das enzimas digestivas de Centropomus undecimalis. Os juvenis foram alimentados por 45 dias com dietas contendo diferentes quantidades de citral (0,0 - controle, 0,5, 1,0 e 2,0 mL por kg de ração). Os parâmetros de qualidade da água foram mantidos estáveis ​​durante o experimento e nenhuma mortalidade foi observada. Ao final do período experimental, o tratamento 0,5 mL citral por kg de ração teve o menor ganho de peso e taxa de crescimento específico e a maior conversão alimentar, enquanto os mesmos parâmetros não diferiram entre os demais tratamentos. A atividade da pepsina foi maior no estômago de peixes alimentados com 0,5 mL de citral por kg de ração e a atividade de amilase foi maior no intestino de peixes alimentados com 0,5 e 2,0 mL citral por kg de ração comparado ao grupo controle. A atividade da lipase intestinal foi maior em todos os grupos que foram alimentados com citral, em comparação ao grupo controle. As atividades de quimotripsina e tripsina não mostraram diferença entre os grupos. Consequentemente, a adição de citral na ração em qualquer um dos níveis testados não é recomendada para robalo flecha.

Análisis de los niveles de cortisol salival y α-amilasa en cirugía del tercer molar / Analysis of salivary cortisol and α-amylase levels in third molar surgery / Análise dos níveis de cortisol salivar e α-amilase em cirurgia de terceiro molar

Los procedimientos dentales implican una alta situación de estrés y ansiedad. Objetivos: Verificar una asociación de ansiedad dental medida por la Escala de ansiedad dental modificada (EADM), con variaciones de los niveles de cortisol salival (sC) y de α-amilasa (sAA) en pacientes sometidos a cirugía del tercer molar. Materiales y métodos: Treinta y dos pacientes fueron seleccionados en la Clínica Odontológica de la Facultad de Odontología de la Universidad de São Paulo. EADM se logró en la primera consulta. Se recogieron muestras de saliva durante la entrevista, el día de la cirugía y las visitas de seguimiento postoperatorio a intervalos de una semana a la misma hora. Tres pacientes clasificados como ansiosos y cuatro que informaron un evento traumático previo se reunieron en un grupo. Resultados: No hubo diferencia entre este grupo y el grupo no ansioso al comparar el sexo y el dolor. Los niveles de sC (KW, p = 0,65) y sAA (KW, p = 0,69) en tres días no fueron diferentes en relación con el género. Los niveles de sAA aumentaron en la cirugía de día al comparar pacientes ansiosos / con eventos y no ansiosos, mientras que los niveles de sC fueron más altos durante la entrevista y el seguimiento postoperatorio. Conclusión: La ansiedad dental y el evento traumático dental previo mostraron una producción marcada de niveles de sC y sAA en relación con sus contrapartes en esta situación. La relación subjetiva y objetiva de ansiedad dental necesita más investigaciones.

Dental procedures involve high situation of stress and anxiety. Objectives: To verify an association of dental anxiety mea-sured by Modified Dental Anxiety Scale (MDAS), with variations of salivary cortisol (sC) and salivary α-amylase (sAA) levels in patients undergoing third molar surgery. Materials and Methods: Thirty two patients were selected in Clínica Odontológica of Faculdade de Odontologia, Universidade de São Paulo. MDAS was accomplished in first query. Saliva samples were collected during interview, on surgery day and postoperative follow-up visits at intervals of one week at the same hour. Three patients classified as anxious, and four who reported prior traumatic event were gathered in a group. Re-sults: There was no difference between this group and the non-anxious group when comparing gender and pain. sC levels (KW, p = 0.65) and sAA (KW, p = 0.69) on three days weren't different in relation to gender. Levels of sAA increased in day surgery when comparing anxious/ event and non-anxious patients, while sC levels were higher during interview and postoperative follow up. Conclusion: Dental anxiety and previous dental traumatic event showed marked production of sC and sAA levels in relation to their counterparts in this situation. Subjective and objective dental anxiety relationship needs further investigations.

Procedimentos odontológicos envolvem uma alta situação de estresse e ansiedade. Objetivos: Verificar a associação da ansiedade odontológica medida pela Escala Modificada de Ansiedade Dental (EMAD), com variações dos níveis de cortisol salivar (sC) e α-amilase salivar (sAA) em pacientes submetidos à cirurgia de terceiro molar. Materiais e Métodos: Trinta e dois pacientes foram selecionados na Clínica Odontológica da Faculdade de Odontologia da Universidade de São Paulo. O EMAD foi realizado na primeira consulta. As amostras de saliva foram coletadas durante a entrevista, no dia da cirurgia e no acompanhamento pós-operatório em intervalos de uma semana na mesma hora. Três pacientes classificados como ansiosos e quatro que relataram evento traumático prévio foram reunidos em um grupo. Resultados: Não houve diferença entre esse grupo e o grupo não ansioso ao comparar sexo e dor. Os níveis sC (KW, p = 0,65) e sAA (KW, p = 0,69) em três dias não diferiram em relação ao sexo. Os níveis de sAA aumentaram em cirurgias diurnas quando comparados pacientes ansiosos / evento e não ansiosos, enquanto os níveis sC foram maiores durante a entrevista e acompanhamento pós-opera-tório. Conclusão: A ansiedade odontológica e o evento traumático dentário prévio mostraram marcada produção de níveis de sC e sAA em relação a suas contrapartes nessa situação. Relação de ansiedade dental subjetiva e objetiva precisa de mais investigações.

Existe associação entre α -amilase salivar, escala hospitalar de ansiedade e depressão e autorrelato em estudantes com sintomas de ansiedade? / Is there an association between salivary α -amylase, hospital scale of anxiety and depression and self-report in students with anxiety symptoms?

Objetivo: Verificar se existe associação entre a α-amilase salivar, a escala hospitalar de ansiedade e a depressão e autorrelato de estudantes universitários com sintomas da ansiedade. Métodos: Estudo observacional, realizado com 67 estudantes de uma universidade pública. Para a coleta de dados, foram utilizada a Escala Hospitalar de Ansiedade e Depressão, o autorrelato de ansiedade e a aferição da α-amilase salivar por meio do dispositivo Cocoro Meter®. Os dados foram analisados por meio do teste de qui-quadrado. Resultados: Não houve associação entre α-amilase salivar e a Escala Hospitalar de Ansiedade e Depressão (p=0,51), nem entre a α-amilase salivar e o autor- relato de ansiedade (p=0,51), o que indica que o biomarcador não produz resposta dessas duas variáveis ao mensurar a ansiedade. Conclusão: O biomarcador α-amilase salivar não possui a mesma capacidade em mensurar a ansiedade quando associado com à Escala Hospitalar de Ansiedade de Depressão e ao autorrelato em estudantes universitários com sintomas de ansiedade.

Objective: Verifying if there is an association between the salivary α-amylase biomarker, the hospital scale of anxiety and depression, and a self-report of university students with anxiety symptoms. Methods: An observational study carried out with 67 students from a public university. For the data collection, the Hospital Anxiety and Depression Scale, the self-reported anxiety, and the salivary α-amylase measurement were carried out with the Cocoro Meter® device. The data were analyzed by using the chi-square test. Results: There is no association between salivary α-amylase and the Hospital Anxiety and Depression Scale (p = 0.51), and neither between the salivary α-amylase and the self-reported anxiety (p = 0.51), which indicates that the biomarker does not produce any response of these two variables when measuring anxiety. Conclusion: The salivary α-amylase biomarker does not have the same ability to measure anxiety when associated with the Hospital Anxiety and Depression Scale and with the self-report in university students with anxiety symptoms.

Drain amylase on the first postoperative day of whipple surgery: what value is the best predictor for early drain removal? / Amilase do dreno no primeiro dia de pós-operatório de operaçao de whipple: qual valor é melhor preditor para a retirada precoce do dreno?

ABSTRACT Background: The value of drain amylase on the first postoperative day after pancreatic resections has been described as an efficient predictor of pancreatic fistula. In spite of this, the cut-off point below which the drains can be removed early remains controversial. Aim: Validate the use of the amylase on the 1st postoperative day in the correlation with pancreatic fistula and define the value at which early drain removal is safe. Method: Were included patients undergoing Whipple surgery in the period of 2007 to 2016. Group 1 enrolled the ones who did not develop fistula and those who developed biochemical fistula for less than seven days postoperatively and group 2 included patients who developed persistent biochemical fistula between seven and 21 days and those with grade B and C fistula. Results: Sixty-one patients were included, 41 comprised group 1 and 20 group 2. The incidence of abdominal collections, need for reoperation and time of hospitalization were for group 1 and 2, respectively: 17.1%, 17.1% and 9.5 days, and 65%, 40% and 21.1 days. The median of the amylase from the drain at 1st postoperative day was in group 1 and 2, respectively: 175 U/l and 3172.5 U/l (p=0.001). Using a cut-off of 180 to predict the group to which the patient would belong there was obtained sensitivity, specificity, positive predictive value and negative predictive value of 100%, 48.8%, 50% and 100% respectively. Conclusion: It was validated the cut-off value of 180 U/l as appropriate to early drain removal.

RESUMO Racional: O valor da amilase do dreno no primeiro dia pós-operatório após ressecções pancreáticas é descrito como eficiente preditor de fístula pancreática. Entretanto, o valor abaixo do qual os drenos podem ser removidos precocemente permanece controverso. Objetivo: Validar o uso da amilase do primeiro dia pós-operatório na correlação com a fístula pancreática e definir o valor em que seja segura a retirada precoce do dreno. Método: Foram incluídos pacientes submetidos à operação de Whipple no período de 2007 a 2016. No grupo 1 entraram os que não desenvolveram fístula e os que desenvolveram fístula bioquímica por menos de sete dias de pós-operatório e no grupo 2 os que desenvolveram fístula bioquímica persistente entre 7 e 21 dias e aqueles com fístula grau B e C. Resultados: Sessenta e um pacientes foram incluídos, sendo 41 do grupo 1 e 20 do grupo 2. A incidência de coleções abdominais, necessidade de reoperação e tempo de internação foram para o grupo 1 e 2, respectivamente 17,1%, 17,1% e 9,5 dias, e 65%, 40% e 21,1 dias. A mediana da amilase no grupo 1 e 2, respectivamente foi de 175 U/l e 3172,5 U/l (p=0,001). Utilizando o ponto de corte de 180 para predizer o grupo a que o paciente pertenceria, obteve-se sensibilidade, especificidade, valor preditivo positivo e valor preditivo negativo de: 100%, 48,8%, 50% e 100% respectivamente. Conclusão: Esta amostra pôde validar o ponto de corte de 180 U/l como adequado para a retirada precoce do dreno.

Fatty acid profile and effect of fish fermented silage on digestive enzymes in Labeo rohita / Perfil de ácidos graxos e efeito de peixe fermentado em silagem de enzimas digestivas em Labeo rohita

Due to inconsistency in demand and supply of fishmeal there is immense need of alternate protein sources. Present project was therefore designed to replace costly fishmeal (FM) with low-priced fermented fish silage (FFS) in fish feed. Fermented fish silage was prepared by fermentation process using Lacto bacillus bacteria and its fatty acid profile and effect on digestive system of Labeo rohita was investigated. Lipid contents were isolated by Soxhlet apparatus and recorded as 6.23 ± 1.23 g/100g of fermented fish silage (FFS). Fatty acid profile of extracted Lipids was determined by gas liquid chromatography (GLC), sufficient amount of unsaturated fatty acids were found with pattern mono unsaturated fatty acids (MUFA) > saturated fatty acids (SFA) >poly unsaturated fatty acids (PUFA). Three treatment diets containing 100% silage (T1), 75% silage (T2) and 50% silage (T3) were prepared by mixing it with soybean meal (SBM) and rice bran as co-ingredients while fermented fish silage was replaced by fishmeal in control diet (T0). The experiment was conducted in glass aquaria in triplicate. Fish growth parameters were recorded fortnightly while physicochemical parameters of water were recorded on daily basis. After completion of feeding trial, three fish were randomly dissected to excise out their intestines and determine activity for protease, amylase and lipase enzymes. Non-significant differences (P<0.05) were recorded in growth parameters and enzymatic activity among all diets except lipase enzyme. Deceptively, it can be concluded that FFS has reasonable concentration of nutrients and unsaturated fatty acids so it can successfully replace fishmeal in fish diets.

Devido à diferença na procura e na oferta de farinha de peixe há imensa necessidade de qualquer membro suplente da fonte de proteína. Tão presente projeto foi projetada para substituir a dispendiosa farinha de peixe (FM) com barato peixe fermentado de ensilagem (FFS) em alimentos para peixes. FFS foi preparado pelo processo de fermentação usando Lactobacillus bactérias e seu perfil de ácidos graxos e efeito sobre o sistema digestivo de Labeo rohita foi investigado. Conteúdo lipídico foram isoladas pelo aparelho de Soxhlet e registadas como 6,23 ± 1,23 g/100g de FFS. Perfil de ácidos graxos extraídos de lipídios foi determinada por cromatografia líquida de gás (GLC). Quantidade suficiente de ácidos graxos insaturados foram encontrados com padrão MUFA > SFA > AGPI. Tratamento de três dietas contendo silagem de 100% (T1), 75% silagem (T2) e 50% silagem (T3) foram preparados misturando com farinha de soja (SBM) e farelo de arroz como co ingredientes enquanto FFS foi substituído pela FM na dieta controle (T0). O experimento foi conduzido em aquários de vidro em triplicado. O Crescimento dos peixes foram anotados os parâmetros quinzenal enquanto parâmetros físico-químicos de água foram registradas diariamente. Após a conclusão do teste de alimentação, três peixes foram aleatoriamente dissecada a impostos especiais de consumo os seus intestinos e determinar a atividade de protease, enzimas amilase e lipase. As variações não significativas (P<0,05) foi registrada em parâmetros de crescimento e atividade enzimática entre as dietas exceto enzima lipase mostrou diferença significativa entre as dietas de tratamento. Aparentemente, é possível concluir que a concentração razoável de FFS tem nutrientes e ácidos graxos insaturados de modo que ela possa substituir com êxito a farinha de peixe na dieta de peixes.

Bioprospection and characterization of the amylolytic activity by filamentous fungi from Brazilian Atlantic Forest / Bioprospecção e caracterização da atividade amilolítica de fungos filamentosos da Mata Atlântica Brasileira

Abstract Filamentous fungi are widely diverse and ubiquitous organisms. Such biodiversity is barely known, making room for a great potential still to be discovered, especially in tropical environments - which are favorable to growth and species variety. Filamentous fungi are extensively applied to the production of industrial enzymes, such as the amylases. This class of enzymes acts in the hydrolysis of starch to glucose or maltooligosaccharides. In this work twenty-five filamentous fungi were isolated from samples of decomposing material collected in the Brazilian Atlantic Forest. The two best amylase producers were identified as Aspergillus brasiliensis and Rhizopus oryzae. Both are mesophilic, they grow well in organic nitrogen-rich media produce great amounts of glucoamylases. The enzymes of A. brasiliensis and R. oryzae are different, possibly because of their phylogenetical distance. The best amylase production of A. brasiliensis occurred during 120 hours with initial pH of 7.5; it had a better activity in the pH range of 3.5-5.0 and at 60-75°C. Both fungal glucoamylase had wide pH stability (3-8) and were activated by Mn2+. R. oryzae best production occurred in 96 hours and at pH 6.5. Its amylases had a greater activity in the pH range of 4.0-5.5 and temperature at 50-65ºC. The most significant difference between the enzymes produced by both fungi is the resistance to thermal denaturation: A. brasiliensis glucoamylase had a T50 of 60 minutes at 70ºC. The R. oryzae glucoamylase only had a residual activity when incubated at 50°C with a 12 min T50.

Resumo Fungos filamentosos são organismos amplamente diversificados e ubíquos. Esta biodiversidade ainda é pouco caracterizada, desta forma, há um grande potencial a ser descoberto, sobretudo em biomas tropicais, que favorecem o crescimento e diversificação de espécies. Fungos filamentosos são extensivamente utilizados para a produção industrial de enzimas, como as amilases. Esta classe de enzimas atua na hidrólise do amido em glicose ou maltooligossacarídeos. Neste trabalho 25 cepas de fungos filamentosos foram isoladas a partir de amostras de material em decomposição coletados na Mata Atlântica Brasileira. As duas cepas que produziram mais amilases foram identificadas como Aspergillus brasiliensis e Rhizopus oryzae. Ambos os fungos são mesofílicos, crescem bem em meio de cultivo rico em nitrogênio orgânico, e produziram grande quantidade de glucoamilase. As enzimas de A. brasiliensis e R. oryzae possuem características distintas, possivelmente devido à distância filogenética das espécies. A produção de amilase mais expressiva de A. brasiliensis ocorreu em 120 horas de cultivo e pH inicial de 7,5; possui maior atividade em temperaturas entre 60-75ºC e pH entre 3,5-5,0. Ambas glucoamilases fúngicas obtiveram ampla estabilidade de pH (3-8) e foram ativadas por Mn2+. A melhor produção de R. oryzae ocorreu em 96 horas de cultivo e pH 6,5. Suas amilases são mais ativas na faixa de pH de 4,0-5,5 e temperatura entre 50-60ºC. A diferença mais significativa dentre as enzimas produzidas pelos fungos selecionados é a resistência à desnaturação térmica, tendo a glucoamilase de A. brasiliensis um T50 de 60 minutos a 70ºC, já a glucoamilase de R. oryzae somente obteve atividade residual quando incubada a 50°C, com um T50 de apenas 12 minutos.

Change in malate dehydrogenase and alpha amylase activities in Rubus fruticosus and Valeriana jatamansi treated granary weevil, Sitophilus granarius

Abstract Poor storage conditions provide favorable environment to stored grain pests for their growth. The bio-pesticides are the best alternatives to synthetic pesticides. Present study was conducted to compare toxicity of Rubus fruticosus and Valeriana jatamansi against granary weevil, Sitophilus granarius and subsequent changes in enzyme activity responsible for grain damage. In current research 5 g of R. fruticosus fruit and V. jatamansi rhizome powders were tested separately against S. granarius, in 50 g wheat whole grains for seven days in comparison with the control. The enzymatic activity of malate dehydrogenase and -amylase was observed in the cellular extracts of S. granarius. The insects were crushed and homogenized in phosphate-buffer solution and centrifuged at 10000 rpm for 5 minutes. For the enzymatic measurement supernatant was tested; the spectrophotometer was adjusted at 340 nm. The reagents were mixed and incubated at 25 °C for five minutes. The cuvettes were placed in the experimental and reference sites of spectrophotometer and recorded the change in absorbance for 3-4 minutes. There was 5.60% and 14.92% reduction in the activity of malate dehydrogenase in R. fruticosus and V. jatamansi, treated insects, respectively. The alpha amylase enzyme activity was 6.82% reduced and 63.63% increase in R. fruticosus and V. jatamansi, treated insects, respectively. Present study addresses that both plant powders are effective against granary weevil by altering enzyme activities so both the plant powders can be used as bio-pesticides against the stored grains pests.

Resumo As más condições de armazenamento proporcionam um ambiente favorável às pragas armazenadas para o crescimento. Os biopesticidas são as melhores alternativas aos pesticidas sintéticos. O presente estudo foi conduzido para comparar a toxicidade de Rubus fruticosus e Valeriana jatamansi contra gorgulhos, Sitophilus granarius e subsequentes alterações na atividade enzimática responsáveis por danos aos grãos. Na pesquisa atual, 5 g de frutos de R. fruticosus e pós de rizoma de V. jatamansi foram testados separadamente contra S. granarius, em 50 g de grãos integrais de trigo por sete dias, em comparação com o controle. A atividade enzimática da malato desidrogenase e -amilase foi observada nos extratos celulares de S. granarius. Os insetos foram esmagados e homogeneizados em solução tampão fosfato e centrifugados a 10000 rpm por 5 minutos. Para a medição enzimática, o sobrenadante foi testado; o espectrofotômetro foi ajustado a 340 nm. Os reagentes foram misturados e incubados a 25 °C por cinco minutos. As cubetas foram colocadas nos locais experimentais e de referência do espectrofotômetro e registradas as alterações na absorbância por 3-4 minutos. Houve redução de 5,60% e 14,92% na atividade da malato desidrogenase em R. fruticosus e V. jatamansi, insetos tratados, respectivamente. A atividade da enzima alfa amilase foi reduzida em 6,82% e aumento de 63,63% em R. fruticosus e V. jatamansi, insetos tratados, respectivamente. O presente estudo aborda que ambos os pós de plantas são eficazes contra o gorgulho do celeiro, alterando as atividades enzimáticas, de modo que ambos os pós de plantas possam ser usados como biopesticidas contra pragas de grãos armazenados.

Enzymatic activity in braúna seeds subjected to thermal stress / Atividade enzimática em sementes de braúna submetidas ao estresse térmico

ABSTRACT: To occur seed germination distinct hydrolytic enzymes work together, enabling primary root protrusion. The objective of this study was to investigate changes in the activities of α-amylase, β-amylase, and glucose-6-phosphate dehydrogenase (G6PdH) during germination of Melanoxylon brauna Schott. seeds under thermal stress. To this end, seeds of this species were germinated under constant temperature (10, 25, 30 or 40°C) and samples were collected every 24h during a 96-h period, in which the activity of the enzymes were evaluated. At 25 and 30°C, optimal temperatures for the germination of the species, the activities of α-amylase, β-amylase, and G6PdH increased with seed imbibitions. At 10 and 40°C, enzyme activities decreased, impairing the germination process.

RESUMO: Para que ocorra a germinação das sementes, enzimas hidrolíticas distintas atuam em conjunto, permitindo a protrusão da raiz primária. O objetivo neste trabalho foi investigar as alterações nas atividades das enzimas α-amilase, β-amilase e glicose-6-fosfato-desidrogenase durante a germinação das sementes de Melanoxylon brauna Schott, submetidas ao estresse térmico. Para tanto, sementes da espécie foram submetidas ao teste de germinação em temperaturas constantes de 10, 25, 30 e 40°C, sendo retiradas amostras de sementes a cada 24 horas, durante o período de 96 horas, nas quais foi avaliada a atividade das enzimas. Nas temperaturas 25 e 30ºC, consideradas ótimas para a germinação da espécie, as atividades das enzimas α-amilase, β-amilase e glicose-6-fosfato-desidrogenase aumentam com a embebição das sementes, enquanto, nas temperaturas 10 e 40°C, as atividades das enzimas são reduzidas, prejudicando o desenvolvimento adequado do processo germinativo.

Determinação da energia metabolizável do farelo residual do milho com e sem enzima em dietas para frangos de corte / Determination of the metabolizable energy of residual corn bran with and without enzyme in diets for broilers

O objetivo deste trabalho foi avaliar o valor nutricional e determinar a energia metabolizável do farelo residual de milho (FRM) sem e com o uso da enzima alfa- amilase. Foi realizado um experimento de metabolismo com 180 pintos machos Cobb com 14 dias, distribuídos em um delineamento inteiramente ao acaso, com seis tratamentos, cinco repetições e seis aves por parcela. As dietas experimentais foram: T1: ração referência (RR), T2: 60% T1 + 40% de FRM, T3: RR + enzima, T4: 60% T1 + 40% de FRM com adição de enzima, T5: RR com substituição de 100% do milho pelo FRM e T6: RR com substituição de 100% do milho pelo FRM com adição de enzima. A composição química do FRM foi: 88,33% de matéria seca (MS), 10,23% de proteína bruta (PB), 15,44% de extrato etéreo (EE), 4,33% de cinzas (CZ) e 4555kcal/kg de energia bruta (EB). Os valores dos coeficientes de metabolizabilidade aparente para o FRM sem e com adição de enzima foram, respectivamente, de 73,37% e 76,33% para MS (p=0,0136), 70,44% e 70,39% para PB (p=0,9595) e de 74,79% e 76,77% para EB (p=0,0128). Os valores da energia metabolizável aparente (EMA) e da EMA corrigida para retenção de nitrogênio (EMAn) para o FRM (na base natural) foram de 3322±19 e 3241±18kcal/kg e de 3334±16 e 3261±17kcal/kg, respectivamente, sem e com adição de enzima. A adição da enzima não teve efeito estatístico significativo sobre os valores de EMA e EMAn, entretanto houve efeito positivo no coeficiente de metabolização da energia.(AU)

The aim of this study was to evaluate the nutritional value and the metabolizable energy of residual corn bran (FRM) with and without the use of alpha amylase enzyme. One metabolism assay was done using 180 Ross male broilers at 14 days of age distributed in an entirely randomized design with six treatments, five replications and six broilers per plot. The assay treatments established were: T1: reference diet (RR), T2: 60% T1 + 40% of FRM, T3: T1 (RR) + enzyme addition, T4: 60% T1 + 40% of FRM with enzyme addition, T5: T1 (RR) with 100% replacement of corn by FRM and T6: T1 (RR) with 100% replacement of corn by FRM with enzyme addition. FRM chemical composition was: 88.33% of dry matter (MS), 10.23% of crude protein (PB), 15.44% of crude fat (EE), 4.33% of ashes (CZ) and 4555Kcal/kg of Gross Energy (EB). The FRM apparent metabolizability coefficients with and without the enzyme addition were, respectively, 73.37% and 76.33% for MS (p=0.0136), 70.44% and 70.39% for PB (p=0.9595) and 74.79% and 76.77% for EB (p=0.0128). The apparent metabolizable energy (EMA) and EMA corrected for nitrogen retention values (as is basis) were 3322±19 and 3241±18Kcal/kg and 3334±16 and 3261±17Kcal/kg, respectively, for with and without the enzyme addition to FRM. The enzyme addition had no statistical significance on the EMA and EMAn values, however, a significant effect on energy metabolizability coefficient was observed.(AU)

Evaluation of the supplementation of a feed additive as a potential protector against the adverse effects of 2. 5 ppm T-2 toxin on growing broiler chickens / Avaliação da suplementação de um aditivo alimentar como um protetor potencial contra os efeitos adversos de 2, 5ppm de toxina T-2 em frangos em crescimento

A trial was conducted to evaluate a feed additive containing epoxidase activity from a bacterium (Mycofix-S) as a potential protection against the adverse effects of 2.5 ppm dietary T-2 toxin in male growing broiler chickens. A total of 144 one-day-old Ross 308 male chicks were individually wing-banded and allotted into each of the four experimental groups. Group 1: negative control, no T-2 toxin or additive; group 2: Mycofix-S, 2.5 g/kg; group 3: positive control, 2.5 ppm T-2 toxin; group 4: 2.5 ppm T-2 toxin + 2.5 g/kg Mycofix-S. Feed and water were provided ad libitum for 28 days (days 1 to 28 of age). Each experimental treatment was replicated 6 times, with 6 birds per replicate pen. Response variables included performance parameters, serum activity of alkaline phosphatase (ALP) and amylase, relative weight of selected organs and histology of the upper digestive system. T-2 toxin at 2.5 ppm significantly (P = 0.016) decreased the 28-day body weight gain and cumulative feed intake without affecting feed conversion. The feed additive counteracted these adverse effects. Serum enzyme activities were not significantly (P>0.05) affected for the four experimental groups but when data from the groups receiving T-2 toxin was pooled and compared against the pooled data from groups without the toxin a significant decrease in amylase activity was observed in chickens receiving T-2 toxin. The histological examination of the upper digestive system revealed lesions in mouth, esophagus, proventriculus, gizzard and duodenum in the chickens fed T-2 toxin without the additive. Chickens fed T-2 toxin plus the additive showed lesions in the same tissues except in the duodenum. The results of the present study show that the addition of 2.5 g/kg of the feed additive tested protects against adverse effects on performance and also the integrity of the duodenal mucosa.(AU)

Foi realizado um experimento com o objetivo de avaliar um aditivo alimentar contendo atividade de epoxidase de uma bactéria (Mycofix-S) como proteção potencial contra os efeitos adversos de uma dieta com 2,5ppm de toxina T-2 em frangos de corte machos. Um total de 144 pintos machos Ross 308 de um dia de idade foram marcados na asa individualmente e alocados em um de quatro grupos experimentais: grupo 1: controle negativo, sem toxina T-2 ou aditivo; grupo 2: 2,5g/kg de Mycofix-S; grupo 3: controle positivo, 2,5ppm de toxina T-2; grupo 4: 2,5ppm de toxina T-2 + 2,5g/kg de Mycofix-S. Alimento e água foram fornecidos ad libitum por 28 dias (dias um a 28 de idade). Cada tratamento experimental foi replicado seis vezes, com seis pintos por gaiola de replicação. As variáveis de resposta incluíram parâmetros de desempenho, atividade sérica de fosfatase alcalina (ALP) e amilase, peso relativo de órgãos selecionados e histologia do sistema digestivo superior. A toxina T-2 a 2,5ppm diminuiu significativamente (P = 0.016) o ganho de peso corporal aos 28 dias e o consumo de alimento acumulado, sem afetar a conversão alimentar. O aditivo diminuiu os efeitos adversos. As atividades séricas das enzimas não foram afetadas significativamente (P>0.05) nos quatro grupos experimentais, porém, quando os dados dos grupos que receberam a toxina T-2 foram combinados e comparados com o pool de dados dos grupos sem toxina, foi observado um decréscimo significativo da atividade de amilase nos frangos que receberam a toxina T-2. O exame histológico do sistema digestivo superior revelou lesões em boca, esôfago, pró-ventrículo, moela e duodeno nos frangos alimentados com toxina T-2 sem aditivo. Frangos alimentados com toxina T-2 mais aditivo mostraram lesões nos mesmos tecidos, exceto no duodeno. Os resultados do presente estudo mostram que a adição de 2,5g/kg do aditivo alimentar testado protege contra os efeitos adversos sobre o desempenho e a integridade da mucosa duodenal.(AU)

Fibra de casca de laranja como substituto de gordura em pão de forma / Citrus peel fiber and its application as a fat substitute in loaf brad

Os subprodutos da indústria de frutas possuem alta qualidade nutricional, de forma que sua transformação em ingredientes para aplicação em produtos alimentícios é de grande importância. No presente estudo, foram avaliados os efeitos da substituição total da gordura em pães de forma através da utilização de fibra de casca de laranja (0 a 5%), um subproduto industrial. A adição da fibra de laranja foi combinada ao uso de α-amilase (10 a 50ppm), através de um planejamento experimental fatorial completo 22. Para fins de comparação, foi elaborada uma formulação controle, sem fibras, sem enzimas e com 2% de gordura. A qualidade dos pães foi avaliada através de análises de vida útil (por índice de retrogradação, DSC), volume, cor, atividade de água e análise sensorial. A fibra de laranja, associada ao uso de enzimas, contrapôs os possíveis efeitos negativos causados pela ausência da gordura, para as concentrações de fibra e enzima estudadas, permitindo a obtenção de pães isentos de gordura e com fibras. A presença de 2,5% de fibra de laranja combinada ao uso de 30ppm de α-amilase gerou um pão com volume 23% maior ao alcançado pela amostra controle e com índice de aceitação em torno de 80%.

Food industry byproducts have high nutritional quality, so that its transformation into ingredients for use in food products is of great importance. This study aimed to analyze the effects of total fat replacement in loaf bread, by adding orange peel fiber (0-5%), an industrial byproduct. The use of citrus fiber was combined with the addition of α -amylase (10 to 50ppm), by using a complete experimental factorial design (22). A formulation containing 2% of fat, without citrus fiber and enzyme was used as control. The breads quality was measured by analyzing shelf life (by Retrogradation Index determination), volume, crumb color, water activity and sensorial parameters. The citrus fiber in association with the addition of α-amylases neutralized the potential negative effects that the removal of fat could cause, considering the ranges of fiber and enzyme studied, allowing to obtain fat-free breads with fibers. The presence of 2.5% of citrus fiber combined with the use of 30ppm of α-amylase increased the volume of breads by 23%, comparing with the control formula, and had an acceptance index of around 80%.

Glyphosate on digestive enzymes activity in piava (Leporinus obtusidens) / Glifosato sobre a atividade de enzimas digestivas em piavas (Leporinus obtusidens)

The effects of glyphosate, a nonselective herbicide (1.0 or 5.0mg L-1) on digestive enzymes activity (stomach and intestine) were evaluated in juveniles of piava (Leporinus obtusidens) after 90 days of exposure. The activity of acid protease, trypsin, chymotrypsin and amylase increased with the increase of glyphosate concentration. These results indicate that glyphosate affects digestive enzyme activities in this species, and may be an indicator of poor nutrient availability when fish survive in herbicide-contaminated water.

Os efeitos do glifosato, um herbicida não seletivo (1,0 ou 5,0mg L-1), sobre a atividade de enzimas digestivas (estômago e intestino) foram avaliadas em juvenis de piava (Leporinus obtusidens) após 90 dias de exposição. A atividade da protease ácida, tripsina, quimiotripsina e amilase aumentaram com a elevação da concentração de glifosato. Esses resultados indicam que o glifosato afeta a atividade de enzimas digestivas nesta espécie e pode ser indicador da reduzida disponibilidade de nutrientes, quando peixes sobrevivem em água contaminada com este herbicida.

Salivary and serum cortisol levels, salivary alpha-amylase and unstimulated whole saliva flow rate in pregnant and non-pregnant / Niveis de cortisol salivar e serico, alfa-amilase e fluxo de saliva total nao estimulada em gestantes e nao gestantes

PURPOSE: To compare salivary and serum cortisol levels, salivary alpha-amylase (sAA), and unstimulated whole saliva (UWS) flow rate in pregnant and non-pregnant women. METHOD: A longitudinal study was conducted at a health promotion center of a university hospital. Nine pregnant and 12 non-pregnant women participated in the study. Serum and UWS were collected and analyzed every trimester and twice a month during the menstrual cycle. The salivary and serum cortisol levels were determined by chemiluminescence assay and the sAA was processed in an automated biochemistry analyzer. RESULTS: Significant differences between the pregnant and non-pregnant groups were found in median [interquartile range] levels of serum cortisol (23.8 µL/dL [19.4-29.4] versus 12.3 [9.6-16.8], p<0.001) and sAA (56.7 U/L [30.9-82.2] versus 31.8 [18.1-53.2], p<0.001). Differences in salivary and serum cortisol (µL/dL) and sAA levels in the follicular versus luteal phase were observed (p<0.001). Median UWS flow rates were similar in pregnant (0.26 [0.15-0.30] mL/min) and non-pregnant subjects (0.23 [0.20-0.32] mL/min). Significant correlations were found between salivary and serum cortisol (p=0.02) and between salivary cortisol and sAA (p=0.01). CONCLUSIONS: Serum cortisol and sAA levels are increased during pregnancy. During the luteal phase of the ovarian cycle, salivary cortisol levels increase, whereas serum cortisol and sAA levels decline. .

OBJETIVO: Comparar os níveis de cortisol sérico e salivar, alfa-amilase salivar (sAA) e fluxo de saliva não estimulada (UWS) em gestantes e não gestantes. MÉTODOS: Trata-se de um estudo longitudinal realizado no centro de promoção da saúde de um hospital universitário. Nove gestantes e 12 não gestantes participaram do estudo. Foram coletados e analisados soro e UWS nos três trimestres gestacionais e duas vezes por mês durante o ciclo menstrual. A análise do cortisol salivar e sérico foi realizada com o uso de quimiluminescência e a atividade da sAA foi determinada por meio de analisador automático para bioquímica. RESULTADOS: Foi verificado que a mediana (intervalo interquartil) dos níveis de cortisol sérico no grupo de gestantes foi maior que 23,8 µL/dL (19,4-29,4) quando comparado ao grupo de não gestantes, que teve média de 12,3 (9,6-16,8; p<0,001). Os níveis de sAA seguiram o mesmo padrão, com médias de 56,7 U/L (30,9-82,2) e 31,8 (18,1-53,2; p<0,001), respectivamente. Foram observadas diferenças dos níveis de cortisol sérico e salivar (µL/dL) e de sAA entre a fase folicular versus a fase lútea (p<0,001). As medianas dos fluxos salivares (UWS) foram semelhantes em gestantes (0,26 [0,15-0,30] mL/min) e não gestantes (0,23 [0,20-0,32] mL/min). Foram encontradas correlações significativas entre o cortisol salivar e o sérico (p=0,02) e entre o cortisol salivar e a sAA (p=0,01). CONCLUSÕES: Os níveis de cortisol sérico de sAA durante a gestação elevam-se. Na fase lútea do ciclo ovariano, os níveis de cortisol salivar aumentam ao passo que os níveis de cortisol sérico e sAA diminuem. .

Presença de inibidores de proteases em amostras comerciais de “faseolaminas” utilizadas como bloqueadores de carboidratos e os riscos à saúde / Occurrence of proteases inhibitors in commercial samples of “phaseolamins” used as carbohydrate blockers and the health risks

Foi investigada a veiculação de inibidores de proteases, concomitante ao consumo de “faseolamina”, cuja ingestão diária e de maneira prolongada poderia estar associada ao risco no desenvolvimento de alterações morfológicas e metabólicas de pâncreas. Dez amostras foram obtidas em farmácias de manipulação no município de Uberaba – MG, as quais são comercializadas na forma de cápsulas como “faseolamina”e uma como “farinha de feijão branco”, além de amostra de farinha preparada a partir da trituração de feijões brancos (Phaseolus vulgaris) obtidos comercialmente, sem qualquer processamento. Estas amostras foram analisadas efetuando-se a determinação de atividade de inibidores de tripsina, a determinação de proteínas totais e de atividade de inibição de amilase. Todas as amostras estudadas apresentaram atividades de inibição de tripsina, porém com baixa ou mesmo inexistente inibição de amilase; e em algumas amostras foi detectada concentração de proteínas muito inferior ao esperado. Uma vez observada a presença de atividade de inibição de tripsina em todas as amostras estudadas, e pela inexistência de níveis seguros de consumo estabelecidos para o ser humano, e ainda baseando-se nos trabalhos sobre associação de ingestão prolongada destes inibidores com alterações de atividade pancreática, o consumo destes “bloqueadores de carboidratos” deveria ser melhor controlado.

This study aimed at verifying the risk in developing the metabolic and morphological changes inpancreas, owing to the use of daily and prolonged consumption of protease inhibitors in conjunctionwith “phaseolamine”. Ten samples were obtained from drugstores in the city of Uberaba – MG, soldas “phaseolamine” and one known as “white bean flour”, and also one flour sample produced fromcommercial white beans (Phaseolus vulgaris) without any processing. These samples were analyzedby determining the activity of trypsin inhibitors, the total protein and the amylase inhibition activity.Trypsin inhibition activity was found in all of analyzed samples; however, the amylase inhibition activitywas low, and in some samples the protein concentration was much lower than expected. Seeing that thetrypsin inhibitory activity was detected in all of analyzed samples, and considering that the prolongedingestion of these inhibitors might cause activity changes in pancreas, the consumption of these types of“carbohydrate blockers” should be deeply discussed, since the safe amounts of these compounds have notbeen established for humans consumption yet.

Effect of alpha amylase on early childhood caries: a matchedcase-control study / Efeito da alfa-amilase na cárie precoce da infância: estudo caso-controle

Objective: This study was implemented in order to investigate the effect of salivary alpha-amylase level on early childhood caries (ECC). Methods: In this matched case-control study, which was carried out from November 2011 to March 2012 in Hamadan City, the west of Iran, mean levels of salivary alpha-amylase of 84 ECC-active cases were compared to that of 84 ECCfree controls using spectrophotometric method to assay enzyme kinetics. The two groups were matched by oral hygiene (frequency of tooth brushing per day) and food habits (frequency of sugar consumption between servings). Subsequently, a subsample of 28 cases was undergone emergency treatment of dental caries. Alpha amylase level was measured before treatment and 30 to 45 min later. Results: The results indicated an inverse relationship between alpha-amylase level and dental caries. The mean level of salivary alpha-amylase was 28.27 and 42.08 kU/L in cases and controls respectively (P = 0.001). In addition, emergency treatment of dental caries increased the level of salivary alphaamylase significantly from 15.05 kU/L before treatment to 23.94 kU/L thereafter (P = 0.001) although the level of alpha-amylase did not reach the normal level of ECC-free controls. Conclusion: Generally it can be concluded that low levels of alpha-amylase may promote early childhood caries. On the other hand, dental caries may subsequently reduce the level of salivary alpha-amylase. This vicious cycle may promote and then accelerate caries formation among susceptible people with low level of salivary alpha-amylase.

Objetivo: Este estudo foi implementado para investigar o efeito do nível de alfa-amilase salivar sobre a cárie precoce da infância (CPI). Métodos: Neste estudo de caso-controle pareado conduzido entre novembro de 2011 e março de 2012, na cidade de Hamadan – oeste do Irã, os níveis médios da alfa-amilase salivar de 84 pacientes apresentando CPI ativa foram comparados ao níveis de 84 pacientes-controle, livres de CPI, utilizando-se método espectrométrico para analisar a cinética enzimática. Os dois grupos foram agrupados de acordo com a higiene oral (frequência de escovação dentária diária) e hábitos de dieta (frequência de consumo de açúcar entre refeições). Posteriormente, uma parcela da amostra, composta de 28 casos, foi submetida ao tratamento de urgência da cárie dentária. O nível de alfa-amilase foi mensurada antes do tratamento e após 30 a 45 minutos. Resultados: Os resultados mostraram relação inversa entre o nível de alfa-amilase e cárie dentária. O nível médio de amilase salivar foi de 28,27 e 42,08 kU/L para os grupos teste e controle, respectivamente (P = 0,001). Adicionalmente, o tratamento de urgência da cárie dentária resultou em aumento significativamente dos níveis de alfa-amilase salivar, de 15,05 kU/L antes do tratamento para 23,94 kU/L após o tratamento (P = 0,001), embora os níveis de alfa-amilase salivar não tenham atingido os níveis normais apresentados pelos controles livres de CPI. Conclusão: Conclui-se que os baixos níveis de alfa-amilase podem produzir a cárie precoce da infância. Por outro lado, a cárie dentária deve reduzir subsequentemente os níveis de alfa-amilase salivar. Este ciclo vicioso deve promover e acelerar a formação de lesões cariosas em pessoas susceptíveis com baixo nível de alfa-amilase salivar.