RESUMO
Background/aim: Autophagic cell death and apoptosis of tumor cells has become one of the main objectives in cancer treatment, whereas tumor cell lines are mainly used in studies for providing important data for the evaluation of potential anti cancer substances. In this study, our objective was to evaluate morphological and biochemical changes including rate of apoptosis and Alpha Fetoprotein (AFP) levels at different concentrations of Carnosic Acid (CA) on Human Hepatocellular Carcinoma HepG2 Cells.Materials and methods: Human Hepatocellular Carcinoma (7th passage HepG2 cells) Cell lines were cultured on 11 µM D263M schott glass coverslips placed in 12-well plates and were treated with DMSO, 1, 2.5, 5 and 10 µM concentrations of CA for 24, 48 and 72 hours. Morphological and biochemical data were recorded daily including apoptosis rates demonstrated by Caspase 3, Annexin V expressions under inverted light and Immunofluorescence microscopy, then data were analyzed for statistical significance. AFP, albumin and total protein levels were analyzed spectrophotometricaly for biochemical evaluation.Results: Our results showed that CA significantly inhibited HepG2 cell proliferation in a dose and time dependant manner and significantly caused the formation of autophagic vacuoles starting from 5µM and reaching significance at 10 µM concentrations. Significant decrease was observed in AFP when 48 and 72 hours expressions were examined, with the lowest level reached at 72 hours in the 10 µM CA group. Additionally, increase in albumin levels reached significance only in the 48 h group whereas non-significant increases were also observed in 24 h and 72 h groups.Conclusion: Our current study demonstrates significant increase in apoptosis rates by Carnosic Acid mainly at 10µM concentrations, supporting its anticancer effect on HepG2 cells. These findings are also supported by changes in biochemical analyses of Albumin and AFP levels at 10 µM concentrations.
Antecedentes / objetivos: La muerte celular autofágica y la apoptosis de células tumorales se ha convertido en uno de los principales objetivos en el tratamiento del cáncer, mientras que las líneas celulares tumorales se utilizan principalmente en estudios para proporcionar datos importantes para la evaluación de posibles sustancias anticancerígenas. En este estudio, nuestro objetivo fue evaluar los cambios morfológicos y bioquímicos, incluida la tasa de apoptosis y los niveles de alfa fetoproteína (AFP) a diferentes concentraciones de ácido carnósico (CA) en células de carcinoma hepatocelular humano HepG2.Materiales y métodos: Carcinoma hepatocelular humano (HepG2).Las líneas celulares se cultivaron en cubreobjetos de vidrio Schott D263M de 11 µM colocados en placas de 12 pocillos y se trataron con DMSO, concentraciones de CA 1, 2,5, 5 y 10 µM durante 24, 48 y 72 horas. Los datos morfológicos y bioquímicos se registraron diariamente, incluidas las tasas de apoptosis demostradas por Caspasa 3, las expresiones de Anexina V bajo luz invertida y microscopía de inmunofluorescencia, luego se analizaron los datos para determinar la significación estadística. Los niveles de AFP, albúmina y proteínas totales se analizaron espectrofotométricamente para evaluación bioquímica.Resultados: Nuestros resultados mostraron que CA inhibió significativamente la proliferación de células HepG2 de una manera dependiente de la dosis y el tiempo y causó significativamente la formación de vacuolas autofágicas comenzando desde 5 µM y alcanzando significancia a concentraciones de 10 µM. Se observó una disminución significativa en la AFP cuando se examinaron las expresiones de 48 y 72 horas, alcanzando el nivel más bajo a las 72 horas en el grupo de CA 10 µM. Además, el aumento en los niveles de albúmina alcanzó significación solo en el grupo de 48 h, mientras que también se observaron aumentos no significativos en los grupos de 24 hy 72 h.Conclusión: Nuestro estudio demuestra un aumento significativo en las tasas de apoptosis por el ácido carnósico principalmente a concentraciones de 10 µM, lo que respalda su efecto anticancerígeno en las células HepG2. Estos hallazgos también están respaldados por cambios en los análisis bioquímicos de los niveles de albúmina y AFP a concentraciones de 10 µM.
Assuntos
Humanos , Carcinoma Hepatocelular/tratamento farmacológico , Abietanos/administração & dosagem , Células Hep G2/efeitos dos fármacos , Neoplasias Hepáticas/tratamento farmacológico , Sobrevivência Celular , Células Cultivadas , Apoptose/efeitos dos fármacos , Microscopia de FluorescênciaRESUMO
Resumen Objetivo: Determinar si la eliminación de espermatozoides positivos a marcadores tempranos de apoptosis en parejas con infertilidad inexplicable incrementa la tasa de nacidos vivos. Materiales y métodos: Ensayo piloto, con asignación al azar, controlado y triple ciego; y un estudio paralelo de dos grupos. Se incluyeron parejas con diagnóstico de infertilidad inexplicable que se asignaron en una proporción 1:1 al grupo A (método de capacitación espermática swim-up) o grupo B (método de capacitación espermática swim-up complementado con separación magnética de células activadas; magnetic-actived cell sorting; MACS). Posteriormente, a todas las muestras se les efectuó una inyección intracitoplasmática de espermatozoides, como técnica de fertilización. Por último, todos los embriones obtenidos se analizaron hasta la etapa de blastocisto y todas las transferencias se llevaron a cabo en la misma etapa. Resultados: Se incluyeron 40 parejas y no se encontraron diferencias en la tasa de fertilización. Con la aplicación de MACS se obtiene mayor porcentaje de embriones de buena calidad en día 3 (90.3 vs 99.5%; p = 0.03) y en día 5 (77.3 vs 90.1%; p = < 0.0001) disminuyó el porcentaje de embriones arrestados (16.3 vs 7.9%; p = 0.01). Por último, las tasas de implantación (42.1 vs 57.1%), embarazo clínico (60 vs 80%) y nacidos vivos (55 vs 80%) aumentaron, sin diferencias estadísticamente significativas. Conclusiones: La separación magnética de células activadas (MACS) en parejas con infertilidad inexplicable mejora el desarrollo embrionario. A pesar de no existir una diferencia significativa se observa una tendencia al incremento de embarazos clínicos y nacidos vivos.
Abstract Objective: To determine if the live births delivery rate with the eliminating sperm positive to early apoptotic events is higher in couples with unexplained infertility. Materials and methods: A pilot randomized controlled trialA pilot and triple-blinded; using a parallel study of two groups. We included a total of 40 couples with unexplained infertility assigned in a 1:1 proportion either to the group A (sperm training method swim-up) or to the group B (swim-up sperm training method supplemented with the use of "magnetic-actived cell sorting (MACS)"). Subsequently, all samples were submitted to intracytoplasmic sperm injection as a fertilization technique. Finally, all embryos obtained were analyzed until the blastocyst stage, and all the transfers were performed in the same stage. Results: There are no differences in the fertilization rate; however, with the use of "magnetic-actived cell sorting" there is a higher percentage of good quality embryos on day 3 (90.3% vs 99.5%, p = 0.03) and day 5 (77.3% vs 90.1%, p = <0.0001). In addition, a decrease in the percentage of arrested embryos was demonstrated (16.3% vs 7.9%, p = 0.01). Finally, implantation (42.1% vs 57.1%), clinical pregnancy (60% vs 80%) and live birth rates (55% vs 80%) increased; however, no statistically significant differences were reported. Conclusions: The use of "magnetic-actived cell sorting" in couples with unexplained infertility improves embryonic development. Although there is no significant difference, a trend is observed in relation to the increase in the number of clinical pregnancies and live births.
RESUMO
En los pacientes hemodializados son frecuentes las oclusiones de los accesos vasculares por una diálisis insuficiente y en un bajo porcentaje por un estado hipercoagulable desencadenado por anticuerpos dirigidos contra determinados componentes fosfolipídicos. El objetivo del trabajo fue evaluar la prevalencia de estos autoanticuerpos (APL) y del marcador anti anexina V en 79 pacientes en plan de hemodiálisis y en 66 donantes de sangre de la ciudad de Bahía Blanca. Para la detección del anticoagulante lúpico (AL) se realizaron estudios coagulométricos básicos, pruebas de detección, corrección con mezclas con plasma normal y ensayos confirmatorios con lisados plaquetarios. En paralelo, se efectuaron ensayos inmunológicos séricos: anticuerpos anticardiolipinas (ACL) IgM/IgG, anticuerpos anti β2 Glicoproteina I (aβ2GPI) IgM/IgG y anticuerpos anti anexina V IgM/IgG. Para estimar las diferencias se realizó el test de Fisher con una significancia del 5%. No se detectó anticoagulante AL en ninguna de las dos poblaciones. La prevalencia de los ACL IgG fue mayor en los dializados que en los dadores (31,6% vs. 12,1%, p: 0,0056); la correspondiente a las antiβ2 GPI fue similar (2,5% en dializados vs. 7,6% en dadores, p: 0,2458), mientras que la correspondiente a la anti anexina V IgG resultó mayor en dializados (16,4% vs. 4,5%, p: 0,0316). Los resultados obtenidos sugieren la importancia de monitorear la presencia de anticuerpos antifosfolípidos y anti anexina V previo al ingreso de un plan de diálisis para prevenir eventos trombóticos.
In hemodialysis patients, occlusions of vascular access are frequent due to insufficient dialysis and in a low percentage, due to a hypercoagulable state triggered by antibodies directed against certain phospholipid components. The objective of this work was to evaluate the prevalence of these autoantibodies (APL) and the anti-annexin V marker in 79 patients undergoing hemodialysis and in 66 blood donors in the city of Bahía Blanca. For the detection of lupus anticoagulant (LA), basic coagulometric studies, detection tests, correction with mixtures with normal plasma and confirmatory tests with platelet lysates were performed. In parallel, serum immunological assays were performed: IgM/IgG anticardiolipin antibodies (ACL), IgM/IgG anti-β2 glycoprotein I (aβ2GPI) antibodies and IgM/IgG anti-annexin V antibodies. To estimate the differences, a Fisher test with a significance of 5% was performed. Lupus anticoagulant (LA) was not detected in any of the two populations. The prevalence of IgG ACL was higher in the dialysate than in the donors (31.6% vs. 12.1%, p: 0.0056); the corresponding antiβ2GPI was similar (2.5% dialysate vs. 7.6% donors, p: 0.2458), while the corresponding anti-Annexin V IgG was higher in dialysate (16.4% vs. 4.5%, p: 0.0316). The results obtained suggest the importance of monitoring the presence of antiphospholipid and anti-annexin V antibodies prior to entry to a dialysis plan to prevent thrombotic events.
Em pacientes hemodialisados são frequentes as oclusões dos acessos vasculares devido a uma diálise insuficiente e, um percentual baixo, a um estado de hipercoagulabilidade desencadeado por anticorpos dirigidos contra determinados componentes dos fosfolípidos. O objetivo do trabalho foi avaliar a prevalência desses autoanticorpos (APL) e do marcador anti Anexina V em 79 pacientes em plano de hemodiálise e em 66 doadores de sangue da cidade de Bahía Blanca. Para a detecção do anticoagulante lúpico (AL) foram realizados estudos coagulométricos básicos, testes de detecção, correção com misturas com plasma normal e ensaios de confirmação com lisados de plaquetas. Em paralelo se realizaram ensaios imunológicos séricos: anticorpos anticardiolipinas (ACL) a IgM/IgG, anticorpos anti β 2 GlicoproteinaI (aβ 2GPI) IgM/IgG e anticorpos anti Anexina V IgM/IgG. Para estimar as diferenças foi realizado o teste de Fisher com uma significância de 5%. Não foi detectado anticoagulante AL em qualquer uma das duas populações. A prevalência de ACL IgG foi maior nos dialisados que nos doadores (31,6% vs. 12,1%, p: 0,0056); a correspondente às anti β 2GPI foi semelhante (2,5% em dialisados vs. 7,6% em doadores, p: 0,2458), enquanto que o correspondente à anti Anexina V IgG foi maior em dialisados (16,4% vs. 4.5 %, p: 0,0316). Os resultados obtidos sugerem a importância de monitorar a presença de anticorpos antifosfolipídios e anti Anexina V antes de entrar em um plano de diálise para prevenção de eventos trombóticos.