Uso da citometria de fluxo no diagnóstico sorológico da COVID-19 / The use of flow cytometry for the serological diagnosis of COVID-19

A pandemia da COVID-19 tem tido um impacto devastador em todo o mundo e levou ao rápido desenvolvimento de testes diagnósticos. Diferentes tecnologias vêm sendo utilizadas para a detecção de imunoglobulinas frente à infecção por SARS-CoV-2. Ensaios imunoenzimáticos (ELISA), quimioluminescentes e imunocromatográficos estão disponíveis e, no geral, apresentam poder diagnóstico limitado, principalmente para a detecção de IgA. A citometria de fluxo tem surgido como alternativa para o desenvolvimento de métodos sensíveis e específicos para a COVID-19 aplicados para diagnóstico, triagem e estratificação da doença. A citometria de fluxo é uma tecnologia óptica baseada em laser que detecta características físico-químicas de células ou partículas em um fluido heterogêneo. O artigo explora a citometria de fluxo para o diagnóstico da COVID-19 em duas estratégias para a detecção de anticorpos no soro ou plasma, uma utilizando antígenos virais expressos na superfície de células de mamíferos e outra com estes elementos imobilizados em microesferas (beads). A possibilidade de detecção rápida de múltiplos anticorpos simultaneamente, com pequeno volume de amostra e elevada sensibilidade e especificidade, torna a citometria de fluxo uma metodologia promissora para o laboratório clínico, como ferramenta de referência para auxiliar na contenção do processo pandêmico da COVID-19 e futuros eventos similares.

The COVID-19 pandemic has had a devastating impact around the world and has led to the rapid development of diagnostic tests. Different technologies have been used to detect immunoglobulins produced against SARS-CoV-2 infection. Immunoenzymatic (ELISA), chemiluminescent and immunochromatographic assays are available and, in general, they have limited diagnostic accuracy, especially for the detection of IgA. Flow cytometry has emerged as an alternative for the development of sensitive and specific methods for COVID-19 applied for diagnosis, screening and stratification of the disease. Flow cytometry is a laser-based optical technology that detects physicochemical characteristics of cells or particles in a heterogeneous fluid. The article explores flow cytometry for the diagnosis of COVID-19 in two strategies for detecting antibodies in serum or plasma, the first one using viral antigens expressed on the surface of mammalian cells and the other one with these elements immobilized on microspheres (beads). The possibility of rapid detection of multiple antibodies simultaneously, with a small sample volume and high sensitivity and specificity, makes flow cytometry a promising methodology for the clinical laboratory, as a reference tool to help stop the COVID-19 pandemic process and similar future events.

Vertical transmission and kinetic of antibodies anti-Neospora caninum in naturally infected lambs in the semiarid region of Brazil / Transmissão vertical e cinética de anticorpos anti-Neospora caninum em cordeiros naturalmente infectados na região Semiárida do Brasil

Abstract Aimed with this study to evaluate vertical transmission of Neospora caninum in naturally infected sheep and to monitor the kinetics of antibodies against this protozoon in their lambs. Therefore, 48 pregnant ewes, from five herds, were divided into two groups: G1 - positive for anti-N. caninum antibodies, with 19 animals; and G2 - seronegative, with 29 animals. Blood samples were taken from the ewes and their lambs, immediately after birth, before ingesting colostrum, and 2, 7, 14, 21, 28, 35, 42, 49 and 56 days after birth. Analysis on serum antibodies was performed using the indirect immunofluorescent antibody test. Among the 19 seropositive mothers, six (31.6%) gave birth to lambs seropositive before ingesting colostrum and it was found that these lambs remained positive until the end of the study (56 days). Only one of the lambs, from a ewe that presented an antibody titer of 200, seroconverted after ingestion of colostrum. All the lambs that had been born from negative mothers remained negative throughout the experimental period. It was concluded that transplacental transmission was an important form of diffusion of N. caninum in the herds studied and that seropositive lambs maintained circulating antibodies during the period analyzed.

Resumo Objetivou-se avaliar a ocorrência da transmissão vertical de Neospora caninum em ovelhas naturalmente infectadas e monitorar a cinética de anticorpos para esse protozoário nos cordeiros. Portanto, foram selecionadas 48 matrizes prenhes, provenientes de cinco propriedades, e estas foram divididas em dois grupos: G1- 19 matrizes positivas para anticorpos anti-N. caninum antes da prenhez; e G2 - 29 matrizes soronegativas. Foram realizadas colheitas sanguíneas nas mães e cordeiros, no G1 e G2, imediatamente após a parição, antes da ingestão do colostro. Também foi possível realizar colheitas de sangue com 2, 7, 14, 21, 28, 35, 42, 49 e 56 dias após o nascimento. A pesquisa de anticorpos séricos foi realizada por meio da Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI). Das 19 matrizes soropositivas, seis (31,6%) pariram cordeiros soropositivos antes da ingestão do colostro, os quais mantiveram-se positivos até o final do experimento (56 dias). Apenas um dos cordeiros, filho de uma ovelha com título de anticorpos 200, soroconverteu após ingestão do colostro. Todos os cordeiros, filhos de mães negativas, mantiveram-se negativos durante todo o período experimental. Conclui-se que a transmissão transplacentária é uma importante forma de difusão do N. caninum nos rebanhos estudados e que os descendentes infectados, durante a gestação, mantiveram anticorpos circulantes durante o período analisado.

Resposta imune humoral ao antígeno rGroES do mycobacterium tuberculosis em pacientes com tuberculose e seus contatos domiciliares / Humoral immune response to mycobacterium tuberculosis rGroES antigen in patients with tuberculosis and their household contacts

A tuberculose (TB) continua sendo um dos mais urgentes problemas de saúde pública do mundo, com 8 a 10 milhões de novos casos e 2 a 3 milhões de mortes a cada ano. Cerca de 50 milhõesde pessoas estão infectadas com o Mycobacterium tuberculosis. A fim de desenvolver testes para imunodiagnóstico da TB, vários antígenos têm sido testados na resposta imune humoral de pacientes com TB ativa. O teste imunoenzimático de ELISA realizado com amostras de plasma de 45 pacientes com tuberculose pulmonar e 172 contatos (96 prova tuberculínica negativa e 76, positiva) foi conduzido para avaliação da resposta imune humoral, com pesquisa de anticorpos das classesIgM e IgG contra o antígeno recombinante GroEs do Mycobacterium tuberculosis (MtGroEs). Pacientes com tuberculose pulmonar ativa apresentaram maiores níveis de IgG anti-rGroEs do que indivíduos saudáveis, o que permitiu a discriminação entre os dois grupos e sugeriu resposta imune humoral específica a este antígeno.

Tuberculosis (TB) remains one of the most important public health problems ofthe world, with 8-10 million new cases and 2-3 million deaths each year. About 50 million people are infected with Mycobacterium tuberculosis. In order to develop immunodiagnostic tests for TB, several antigens have been tested for the humoral immune response of patients with active TB. ELISA was performed with plasma samples from 45 patients with pulmonary TB and 172 contacts (96 negative and 76 positive for the tuberculin skin test). The humoral immune response was evaluated through assessment of IgM and IgG antibodies against recombinant Mycobacterium tuberculosis GroES (MtGroEs). Patients with active pulmonary tuberculosis had higher levels of IgG anti-rGroEs than healthy individuals, allowing discriminationbetween the two groups.

Hepatite viral A: frequência de positividade para anticorpos das classes IgG e IgM sgundo faixa etária e tremestre sazonal (São Paulo, SP/1996) / HV virus: positivity frequency of anti-HAV antibodies IgG (HAV-G) and IgM (HAV-M)

Foram analisados os resultados dos testes imunoenzimáticos ELISA (Roche Diagnóstica) para anticorpos anti-HAV das classes IgG (HAV-G) e IgM (HAV-M) obtidos no período de dezembro de 1995 a novembro de 1996. Os 1177 pacientes estavam assim distribuídos: 1042 (88,5%) adultos (≥ 15 anos), sendo 49,4% do sexo masculino e 50,6% feminino, e 135 crianças (54,1% masculino e 45,9% feminino). Foram obtidos os seguintes índices de positividade para HAV-G: 76,2% para adultos (77,5% dos homens e 75,0% das mulheres) e 48,9% para as crianças (56,2% entre os meninos e 40,3% entre as meninas). Os adultos apresentaram maior frequência de positividade que as crianças (p<0,05). O contrário foi observado para anticorpos IgM: 4,6% de positividade para adultos e 29,6% entre as crianças.