Diagnóstico de paratuberculose por biópsia retal em búfalos / Rectal biopsy for the diagnosis of paratuberculosis in buffaloes

Foram realizadas biópsias retais de 140 búfalos, machos e fêmeas, das raças Murrah e mestiços de Murrah com Mediterrâneo, com idade acima de três anos, em uma propriedade no município de São Mateus, Maranhão, Brasil. Adicionalmente foram realizadas necropsias de 11 búfalos, para realizar um estudo comparativo entre os achados das biópsias retais e de tecidos de íleo e linfonodo mesentérico. A propriedade apresentava histórico de animais com emagrecimento progressivo e diarreia não responsiva a antimicrobianos. Os búfalos apresentavam sinais clínicos caracterizados por diarreia, estado nutricional regular a ruim, desidratação e edema submandibular. Nas biópsias retais seis búfalos apresentaram lesões sugestivas da paratuberculose na Hematoxilina-Eosina (HE), sendo estas caracterizadas por inflamação granulomatosa multifocal moderada na lâmina própria com macrófagos epitelioides. Em quatro animais foram observadas adicionalmente células gigantes do tipo Langhans. Em 15 búfalos foi observado infiltrado linfocitário multifocal leve na lâmina própria. Pela coloração de Ziehl-Neelsen (ZN), 4,3% (6/140) apresentaram bacilos álcool-ácido resistentes (BAAR) e na PCR em tempo real (qPCR), 5,71% (7/140) tiveram amplificação do material genético. Foram necropsiados 11 búfalos, à necropsia foram observados aumento de linfonodos mesentéricos com áreas esbranquiçadas na superfície de corte; intestino delgado e grosso com dobras transversais evidentes, mucosa espessada e irregular, de aspecto reticulado, placas de Peyer evidentes e conteúdo líquido e marrom. Ainda se viam áreas espessadas em torno da válvula ileocecal e vasos linfáticos evidentes. As lesões histológicas localizadas no intestino delgado e linfonodos mesentéricos de quatro búfalos foram compatíveis com lesões já descritas na literatura, e apresentaram BAAR e amplificação de material genético na qPCR. A concordância entre a biópsia retal e a análise dos tecidos de íleo e linfonodo mesentérico, segundo...

Paratuberculosis in a herd of buffaloes was studied in the municipality of São Mateus, Maranhão, Brazil. Rectal biopsies were performed in 140 male and female Murrah, Mediterranean and crossbreed buffaloes older than 3 years. Postmortem examination of 11 buffaloes was performed to compare the rectal biopsies with possible lesions in mesenteric nodes and the intestine. The history of the herd and clinical examination revealed progressive weight loss and non-responsive antimicrobial diarrhea, dehydration and submandibular edema. Rectal biopsies showed in six buffaloes microscopically suggestive lesions for paratuberculosis through hematoxilin-eosin staining (HE), characterized by moderate multifocal granulomatous enteritis with epithelioid cell infiltration. In four buffaloes Langhans giant cells were found. In 15 buffaloes lymphocytic infiltrate was observed in the lamina propria of the large intestine. Ziehl-Neelsen staining (ZN) revealed in 4.3% (6/140) acid-fast bacilli in the rectal mucosa. Real time PCR amplified to 5.71% (7/140) Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis (Map) DNA. 11 buffalos were submitted to postmortem examination, gross examination revealed augmented mesenteric nodes with whitish areas in the cut surface. The mucosa of the small intestine was irregular and thickened, with evident traverse folds and Peyer plates. The brownish intestinal content was fluid, the ileocecal valve area thickened and edematous with evident lymphatic vessels. Histological lesions in the mesenteric lymph node and small intestine four buffalo were compatible with those already described in the literature, and presented acid-fast bacilli by ZN staining and amplification of Map genetic material in qPCR. The concordance between the rectal biopsy and the postmortem samples was in agreement with the Kappa test (K=0.792) and was considered substantial or high. The rectal biopsy showed to be promising and can be used by practitioners, together with other...

Polimorfismo do gene da proteína prion celular (PrPC) e imunohistoquímica de tecido linfóide em ovinos / Polymorphism of cellular prion protein (PrPC) and immunohistochemistry of lymphoid tissue of sheep

O objetivo deste trabalho foi avaliar o polimorfismo do gene da proteína prion celular (PRPN) de ovinos introduzidos numa propriedade onde ocorreu um surto de scrapie, e relacionar com a suscetibilidade à doença por meio da análise da presença da proteína prion celular alterada (PrPSc), utilizando imunohistoquímica (IHQ) de tecido linfóide associado à mucosa reto-anal. Foram avaliados 42 ovinos, mestiços Texel. Eram fêmeas entre um e oito anos de idade, sendo que sete (16,67%) ovelhas foram introduzidas adultas na propriedade em 2006. As demais, 83,33%, eram nascidas na fazenda. A genotipagem do PRPN foi feita pela análise do polimorfismo de comprimento de fragmento de restrição - RFLP ("Restriction Fragment Lenght Polimorphism"). O genótipo ARQ/ARQ foi o mais freqüente, encontrado em 73,81% dos animais, seguido do genótipo ARR/ARQ, com 16,67% e do ARQ/VRQ, com 9,52%. Os alelos ARH e AHQ não foram encontrados nestes animais. O resultado da IHQ foi negativo em todas as amostras. Não foi possível, portanto, estabelecer uma relação entre genótipo e maior susceptibilidade ao scrapie, devido à ausência de PrPSc na amostras examinadas. No Brasil, há poucos dados de genotipagem do gene da proteína prion celular (PRNP) em ovinos e, até o momento, nenhum tipo de controle baseado em cruzamentos direcionados foi implementado.

The aim of this work was to study the polymorphism of the prion protein gene (PRNP) of a sheep flock raised in a farm where a scrapie outbreak had occurred, and to relate to disease susceptibility of possible animals infected with altered prion protein (PrPSc), by immunohistochemical analysis of recto-anal mucosa-associated lymphoid tissue (RAMALT). Forty two sheep, crossbred with Texel, Ile de France, Dorper and Suffolk were used. Females were between one and eight years old, and seven (16.67%) were adult ewes when they entered the flock in 2006. The rest, 83.33% were born in the farm. The PRNP genotyping was performed by RFLP ("restriction fragment length polymorphism") analysis. The most frequent genotype was ARQ/ARQ, found in 73.81% of the animals, followed by ARR/ARQ, with 16.67% and ARQ/VRQ, with 9.52%. The ARH and AHQ alleles were not found. All RAMALT samples were negative in immunohistochemical analysis. It was not possible to establish a relation between PRNP polymorphisms and susceptibility to scrapie, due to the lack of positive samples to PrPSc. In Brazil, there is little available PRNP genotyping data of sheep and, so far, no type of controlled breeding scheme for scrapie has been implemented.

The accuracy of acetylcholinesterase reaction in rectal suction biopsy in the diagnosis of Hirschsprung's disease

Suction rectal biopsy with acetylcholinesterase (AChE) histochemistry has been recognized as a reliable method for the diagnosis of Hirschsprung's disease (HD). This study compares the final pathologic diagnosis made on paraffin embedded material of 68 colectomy specimens with the histochemical AChE reaction from the same patients previously diagnosed as HD by rectal suction biopsy at the Hospital Infantil Pequeno Príncipe (Curitiba, Brazil) from 1988 to 1999. The group included 58 male and ten female patients with ages ranging from 7 days to 10 years. Thirty-six patients (52.94 percent) where under 1 year of age at time of surgery. Two of the 68 patients had previous normal histochemical reactions for AChE: one of them resulted a normal ganglionic segment of bowel and the other one was a 15-day-old boy with total colonic aganglionosis, the only false-negative result in this series. Two patients had inconclusive results and because untreatable clinical symptoms also received surgical treatment. One of them resulted a normal ganglionic bowel and the other one was diagnosed as HD. All surgical specimens from the other 64 patients resulted in various extents of aganglionosis presenting prominent nerve trunks in the submucosal and myenteric plexuses, confirming the previous AChE histochemical diagnosis. In three cases there was total colonic aganglionosis. In this study the rectal suction biopsy associated with the histochemical method of AChE, performed days, months or sometimes years before surgery, resulted in a diagnostic accuracy rate of 95.59 percent, a positive predictive value of 100 percent and there were no false-positive results.

A biópsia de reto por sucção associada à histoquímica enzimática pela acetilcolinesterase (AChE) tem sido reconhecida como um método confiável para o diagnóstico da doença de Hirshsprung (HD). Este estudo compara o diagnóstico patológico final de 68 peças de colectomias incluídas em parafina com o diagnóstico prévio de HD através da reação histoquímica da AChE em biópsia por sucção retal dos mesmos pacientes, todos operados no Hospital Infantil Pequeno Príncipe, de Curitiba, entre 1988 e 1999. No grupo há 58 pacientes masculinos e dez femininos com idades variando entre 7 dias e 1 ano, sendo que 33 pacientes (52,94 por cento) tinham menos de 1 ano de idade no momento da cirurgia. Dos 68 pacientes, dois tiveram reação prévia normal pela AChE, porém, como persistiam com quadro de suboclusão intestinal, foram levados à cirurgia; um deles resultou HD, padrão aganglionose total do cólon, o único caso falso-negativo deste estudo. Outros dois pacientes tiveram resultado inconclusivo pela AChE, e um deles resultou HD no exame da colectomia. Todas as colectomias dos demais 64 pacientes resultaram agangliônicas (HD), apresentando proeminência de troncos nervosos nos plexos submucoso e mioentérico, confirmando o diagnóstico histoquímico prévio pela AChE. Em três casos havia aganglionose colônica total. Neste estudo a biópsia retal por sucção associada ao método histoquímico da AChE, realizado dias, meses ou anos antes da cirurgia, apresentou taxa de acurácia diagnóstica de 95,59 por cento, valor preditivo positivo de 100 por cento e nenhum resultado falso-positivo.

O valor dos ovos mortos como critério de avaliação da cura parasitológica na esquistossomose mansoni

Dezoito crianças com esquistossomose mansoni foram tratadas com a oxamniquine (20mg/kg de peso, dose únicaj e acompanhadas até o 22? mês pós-tratamento com 22 exames de fezes e uma biópsia retal no último mês. Dos 16 pacientes curados, cinco (31,3%), não apresentaram qualquer tipo de ovo na biópsia retal, 11 (68,7%), apresentaram ovos calcificados, oito (50%), ovos "recém-mortos" e três (18,8%), granulomas. Para observar a dinâmica de desaparecimento de ovos dos tecidos, 31 camundongos, foram infectados com 100 cercárias de S. mansoni e após 45 dias, tratados com drogas sabidamente esquistossomicidas. Os camundongos foram sacrificados 30, 90, 180, 260 e 400 dias após o tratamento. Observou-se diminuição progressiva dos ovos mortos nos fragmentos de intestino dos animais sacrificados, mas cerca de um ano após o tratamento os ovos hemitransparentes, calcificados, cascas e granulomas ainda foram encontrados. 0 encontro apenas destes elementos, fala a favor da cura parasitológica.

Eighteen children with schistosomiasis mansoni were treated with oxamniquine (20mg/kg body weight, single oral dose) and follow-up was continued for twenty two months post-treatment, with twenty two stool examinations and one rectal biopsy in the last month. From 16 children considered as cured, the results of the oogram in the rectal snips revealed in 5 (31.3%), no eggs; in 11 (68.7%), calcified eggs; in 8 (50%), "recent-dead" eggs and in 3 (18.8%), granulomas. To study the dynamics of disappearance of S. mansoni eggs in the tissues, 31 white mices were infected with 100 S. mansoni cercariae and after 45 days treated with an association of known schistosomicidal drugs. The animals were sacrificed 30, 90, 180, 260 and 400 days after treatment and ileal fragments were microscopically examined and oograms were performed. A significant decrease in the number of dead eggs was observed, and after one year post-treatment only semi transparents, shells and calcified eggs as well as granulomas were still found. The finding of those types of eggs alone is a strong evidence of parasitological cure.