Isolation and characterization of bacteria associated with silkworm gut under antibiotic-treated larval feeding / Isolamento e caracterização de bactérias associadas ao trato intestinal do bicho-da-seda sob alimentação larval tratada com antibióticos

Abstract The impact of antibiotics on growth, cocoon production was assessed in addition to isolation and characterization of bacteria associated with silkworm gut of infected larvae. Larval rearing was maintained at recommended conditions of temperature and humidity. Silkworm larvae showing abnormal symptoms were collected from the control group and dissected for gut collection. Bacteria were isolated from the gut content by spreading on agar plates and incubated at 37 °C for 48 hrs. Bacterial identification and phylogenetic analysis were carried out by 16S rRNA gene sequencing. The isolated bacteria were subjected to antimicrobial susceptibility test (disc diffusion methods) by using Penicillin (10 µg/mL), Tetracycline (30 µg/mL), Amoxicillin (25 µg/mL), Ampicillin (10 µg/mL), and Erythromycin (15 µg/mL). All isolated strains showed positive results for the catalase test. We isolated and identified bacterial strains (n = 06) from the gut of healthy and diseased silkworm larvae. Based on the 16S rRNA gene sequence, isolated bacteria showed close relation with Serratia, Bacillus, and Pseudomonas spp. Notably, 83.3% of strains were resistant to Penicillin, Tetracycline, Amoxicillin, Ampicillin, and Erythromycin but 16.6% showed antibiotic susceptibility to the above-mentioned commonly used antibiotics. Silkworm larvae fed on penicillin-treated leaves showed significant improvement in larval weight, larval length, and cocoon production. Significantly higher larval weight (6.88g), larval length (5.84cm), and cocoon weight (1.33g) were recorded for larvae fed on leaves treated with penicillin as compared to other antibiotics. Isolated bacterial strains showed close relation with Serratia spp., Bacillus spp. and Pseudomonas spp.

Resumo O impacto dos antibióticos no crescimento e na produção do casulo foi avaliado, além do isolamento e caracterização das bactérias associadas ao intestino de larvas infectadas do bicho-da-seda. A criação das larvas foi mantida nas condições recomendadas de temperatura e umidade. As larvas do bicho-da-seda com sintomas anormais foram coletadas do grupo controle e dissecadas para coleta do intestino. As bactérias foram isoladas do conteúdo intestinal por espalhamento em placas de ágar e incubadas a 37° C durante 48 horas. A identificação bacteriana e a análise filogenética foram realizadas pelo sequenciamento do gene 16S rRNA. As bactérias isoladas foram submetidas a teste de sensibilidade antimicrobiana (métodos de difusão em disco) com penicilina (10 µg / mL), tetraciclina (30 µg / mL), amoxicilina (25 µg / mL), ampicilina (10 µg / mL) e eritromicina (15 µg / mL). Todas as cepas isoladas apresentaram resultados positivos para o teste da catalase. Isolamos e identificamos cepas bacterianas (n = 06) do intestino de larvas de bicho-da-seda saudáveis e doentes. Com base na sequência do gene 16S rRNA, as bactérias isoladas mostraram estreita relação com Serratia, Bacillus e Pseudomonas spp. Notavelmente, 83,3% das cepas eram resistentes a penicilina, tetraciclina, amoxicilina, ampicilina e eritromicina, mas 16,6% mostraram suscetibilidade aos antibióticos comumente usados mencionados acima. As larvas do bicho-da-seda alimentadas com folhas tratadas com penicilina apresentaram melhora significativa no peso larval, comprimento larval e produção de casulo. Peso larval significativamente maior (6,88g), comprimento larval (5,84cm) e peso do casulo (1,33g) foram registrados para larvas alimentadas com folhas tratadas com penicilina, em comparação com outros antibióticos. Cepas bacterianas isoladas mostraram estreita relação com Serratia spp., Bacillus spp. e Pseudomonas spp.

Isolation and characterization of bacteria associated with silkworm gut under antibiotic-treated larval feeding

Abstract The impact of antibiotics on growth, cocoon production was assessed in addition to isolation and characterization of bacteria associated with silkworm gut of infected larvae. Larval rearing was maintained at recommended conditions of temperature and humidity. Silkworm larvae showing abnormal symptoms were collected from the control group and dissected for gut collection. Bacteria were isolated from the gut content by spreading on agar plates and incubated at 37 °C for 48 hrs. Bacterial identification and phylogenetic analysis were carried out by 16S rRNA gene sequencing. The isolated bacteria were subjected to antimicrobial susceptibility test (disc diffusion methods) by using Penicillin (10 µg/mL), Tetracycline (30 µg/mL), Amoxicillin (25 µg/mL), Ampicillin (10 µg/mL), and Erythromycin (15 µg/mL). All isolated strains showed positive results for the catalase test. We isolated and identified bacterial strains (n = 06) from the gut of healthy and diseased silkworm larvae. Based on the 16S rRNA gene sequence, isolated bacteria showed close relation with Serratia, Bacillus, and Pseudomonas spp. Notably, 83.3% of strains were resistant to Penicillin, Tetracycline, Amoxicillin, Ampicillin, and Erythromycin but 16.6% showed antibiotic susceptibility to the above-mentioned commonly used antibiotics. Silkworm larvae fed on penicillin-treated leaves showed significant improvement in larval weight, larval length, and cocoon production. Significantly higher larval weight (6.88g), larval length (5.84cm), and cocoon weight (1.33g) were recorded for larvae fed on leaves treated with penicillin as compared to other antibiotics. Isolated bacterial strains showed close relation with Serratia spp., Bacillus spp. and Pseudomonas spp.

Resumo O impacto dos antibióticos no crescimento e na produção do casulo foi avaliado, além do isolamento e caracterização das bactérias associadas ao intestino de larvas infectadas do bicho-da-seda. A criação das larvas foi mantida nas condições recomendadas de temperatura e umidade. As larvas do bicho-da-seda com sintomas anormais foram coletadas do grupo controle e dissecadas para coleta do intestino. As bactérias foram isoladas do conteúdo intestinal por espalhamento em placas de ágar e incubadas a 37° C durante 48 horas. A identificação bacteriana e a análise filogenética foram realizadas pelo sequenciamento do gene 16S rRNA. As bactérias isoladas foram submetidas a teste de sensibilidade antimicrobiana (métodos de difusão em disco) com penicilina (10 µg / mL), tetraciclina (30 µg / mL), amoxicilina (25 µg / mL), ampicilina (10 µg / mL) e eritromicina (15 µg / mL). Todas as cepas isoladas apresentaram resultados positivos para o teste da catalase. Isolamos e identificamos cepas bacterianas (n = 06) do intestino de larvas de bicho-da-seda saudáveis e doentes. Com base na sequência do gene 16S rRNA, as bactérias isoladas mostraram estreita relação com Serratia, Bacillus e Pseudomonas spp. Notavelmente, 83,3% das cepas eram resistentes a penicilina, tetraciclina, amoxicilina, ampicilina e eritromicina, mas 16,6% mostraram suscetibilidade aos antibióticos comumente usados mencionados acima. As larvas do bicho-da-seda alimentadas com folhas tratadas com penicilina apresentaram melhora significativa no peso larval, comprimento larval e produção de casulo. Peso larval significativamente maior (6,88g), comprimento larval (5,84cm) e peso do casulo (1,33g) foram registrados para larvas alimentadas com folhas tratadas com penicilina, em comparação com outros antibióticos. Cepas bacterianas isoladas mostraram estreita relação com Serratia spp., Bacillus spp. e Pseudomonas spp.

Ampullae infection of the malpighian tubules of Bombyx mori by Alphabaculovirus / Infecção de células da ampola dos túbulos de malpighi de Bombyx mori pelo Alphabaculovirus

Alphabaculovirus is a genus of the entomopathogenic virus, whose species Bombyx mori nucleopolyhedrovirus (BmNPV) infects the silkworm, Bombyx mori, which is an important insect in the sericulture industry. A geographic isolate of BmNPV was identified in the state of Paraná, Brazil. It was infecting B. mori larvae and various organs and target tissues were identified, however, there was no information about the infection of Malpighian tubules (MT). The MT comprises the excretory system of B. mori and acts in the elimination of toxic substances and in hydroelectrolytic homeostasis. Thus, the present study examined the susceptibility and cytopathology of B. mori MT to BmNPV. To this end, hybrid fifth instar larvae were inoculated with a virus suspension at different days post-inoculation (dpi). MT segments were collected and divided into the ampullae, proximal, medial and distal regions. These were processed for light microscopy and transmission electron analysis. The MT regions revealed differences in susceptibility to BmNPV and the ampullae in its transition area was infected from the sixth dpi; the other regions did not reveal any evidence of infection. The transition area of the ampullae has not been previously described in Lepidoptera and its cytopathology revealed a hypertrophic nucleus with viroplasm, followed by the formation and development of viral polyhedra, which are common characteristics of infections by Alphabaculovirus. Thus, infection of the ampullae of the MT of B. mori by BmNPV, together with other known targets, compromises the metabolic balance of the insect, which results in consequences for silk production and damage to the sericulture sector.

Alphabaculovirus é um gênero de vírus entomopatogênico, cuja espécie Bombyx mori nucleopolyhedrovirus (BmNPV) infecta o bicho-da-seda, Bombyx mori, inseto importante na indústria sericícola. Um isolado geográfico do BmNPV foi identificado no estado do Paraná, Brasil, infectando lagartas de B. mori e vários órgãos e tecidos alvos foram identificados; entretanto, não há informações sobre a infecção do túbulo de Malpighi (TM). O TM compõe o sistema excretor de B. mori, atuando na eliminação de substâncias tóxicas e na homeostase hidroeletrolítica. Assim, o presente estudo, analisou a susceptibilidade e a citopatologia do TM de B. mori ao BmNPV. Para tanto, lagartas híbridas de 5° instar foram inoculadas com uma suspensão viral e em diferentes dias pós-inoculação (dpi), segmentos do TM foram coletados e subdivididos nas regiões da ampola, proximal, média e distal; sendo processados para análises em microscopias de luz e eletrônica de transmissão. As regiões do TM revelaram diferenças na susceptibilidade ao BmNPV e a ampola, na sua área de transição, foi infectada a partir do 6° dpi, já as demais regiões não revelaram quaisquer indícios de infecção. A área de transição da ampola, ainda não havia sido descrita em lepidópteros e sua citopatologia revelou núcleo hipertrófico com viroplasma, seguido da formação e desenvolvimento dos poliedros virais, características comuns das infecções pelo Alphabaculovirus. Assim, a infecção da ampola do TM de B. mori ao BmNPV, somada a de outros alvos conhecidos, compromete o equilíbrio metabólico do inseto, com consequências na produção de seda e prejuízos ao setor sericícola.

Alternative phytosanitary products against to white muscardine in Bombyx mori L. (Lepidoptera: Bombycidae) / Produtos fitossanitários alternativos contra a calcinose em Bombyx mori L. (Lepidoptera: Bombycidae)

This work aimed to evaluate the effects of the products Biogermex®, Agro-mos®, Soil-Set® and Planta Clean® on the development of white muscardine in Bombyx mori. Products have been tested at two stages for effects on biology of caterpillars and on silk production (1), and then they were evaluated to know their potential in the prevention/control of white muscardine (2). Products were sprayed on mulberry leaves (preventive treatment) and also on the integument of silkworms (curative treatment). At the first stage, the products were applied on four consecutive days, in one of the daily feeds. Planta Clean® - curative treatment - and Soil-Set® - preventive treatment - caused mortality in 63.3% and 30% of silk worms, respectively. The fungus Beauveria bassiana was inoculated at the concentration 5 × 107 conidia/mL on the leaves and insects. The products were applied three hours after application on the fungus, in a single application, and also for four days in the other groups. A group of silkworms sprayed only with the fungus served as control. Biogermex® - curative treatment applied once and for four times - was the most effective, reducing mortality by 25 and 26.7%, respectively, as compared with the control group. None of the evaluated products acts preventively against white muscardine.

Este trabalho objetivou avaliar os efeitos de produtos Biogermex®, Agro-mos®, Soil-Set® e Planta Clean® no desenvolvimento da calcinose branca em Bombyx mori. Os produtos foram testados em duas etapas: efeitos sobre a biologia e produção de seda pela lagarta (1) e, em seguida, em função do seu potencial na prevenção/no controle da calcinose branca (2). Os produtos foram pulverizados sobre as folhas de amoreira (tratamento preventivo) e sobre o tegumento das lagartas (tratamento curativo). Na primeira etapa, os produtos foram aplicados durante quatro dias consecutivos, em uma das alimentações do dia. Planta Clean® - tratamento curativo - e Soil-Set® - tratamento preventivo - causaram mortalidade em 63,3 e 30% das lagartas, respectivamente. O fungo Beauveria bassiana foi inoculado na concentração 5 × 107 conídios/mL sobre folhas e insetos. Os produtos foram aplicados três horas após o fungo, em uma aplicação, e também por quatro dias em outro grupo. Um grupo de lagartas pulverizadas apenas com fungo serviu como controle. Biogermex® - tratamento curativo aplicado uma e quatro vezes - foi o mais eficiente, reduzindo a mortalidade em 25 e 26,7% respectivamente, em relação ao grupo controle. Nenhum dos produtos avaliados atuou de forma preventiva contra muscardina branca.

Alternative phytosanitary products against to white muscardine in Bombyx mori L. (Lepidoptera: Bombycidae) / Produtos fitossanitários alternativos contra a calcinose em Bombyx mori L. (Lepidoptera: Bombycidae)

This work aimed to evaluate the effects of the products Biogermex®, Agro-mos®, Soil-Set® and Planta Clean® on the development of white muscardine in Bombyx mori. Products have been tested at two stages for effects on biology of caterpillars and on silk production (1), and then they were evaluated to know their potential in the prevention/control of white muscardine (2). Products were sprayed on mulberry leaves (preventive treatment) and also on the integument of silkworms (curative treatment). At the first stage, the products were applied on four consecutive days, in one of the daily feeds. Planta Clean® - curative treatment - and Soil-Set® - preventive treatment - caused mortality in 63.3% and 30% of silk worms, respectively. The fungus Beauveria bassiana was inoculated at the concentration 5 × 107 conidia/mL on the leaves and insects. The products were applied three hours after application on the fungus, in a single application, and also for four days in the other groups. A group of silkworms sprayed only with the fungus served as control. Biogermex® - curative treatment applied once and for four times - was the most effective, reducing mortality by 25 and 26.7%, respectively, as compared with the control group. None of the evaluated products acts preventively against white muscardine.(AU)

Este trabalho objetivou avaliar os efeitos de produtos Biogermex®, Agro-mos®, Soil-Set® e Planta Clean® no desenvolvimento da calcinose branca em Bombyx mori. Os produtos foram testados em duas etapas: efeitos sobre a biologia e produção de seda pela lagarta (1) e, em seguida, em função do seu potencial na prevenção/no controle da calcinose branca (2). Os produtos foram pulverizados sobre as folhas de amoreira (tratamento preventivo) e sobre o tegumento das lagartas (tratamento curativo). Na primeira etapa, os produtos foram aplicados durante quatro dias consecutivos, em uma das alimentações do dia. Planta Clean® - tratamento curativo - e Soil-Set® - tratamento preventivo - causaram mortalidade em 63,3 e 30% das lagartas, respectivamente. O fungo Beauveria bassiana foi inoculado na concentração 5 × 107 conídios/mL sobre folhas e insetos. Os produtos foram aplicados três horas após o fungo, em uma aplicação, e também por quatro dias em outro grupo. Um grupo de lagartas pulverizadas apenas com fungo serviu como controle. Biogermex® - tratamento curativo aplicado uma e quatro vezes - foi o mais eficiente, reduzindo a mortalidade em 25 e 26,7% respectivamente, em relação ao grupo controle. Nenhum dos produtos avaliados atuou de forma preventiva contra muscardina branca.(AU)

Controle e prevenção da calcinose branca em Bombyx mori L. (Lepidoptera: Bombycidae) / Control and prevention of white muscardine in Bombyx mori L. (Lepidoptera: Bombycidae)

Um dos principais problemas enfrentados pelos sericicultores em todo o mundo são entomopatógenos que causam grandes perdas na produção. Destaca-se a doença calcinose branca, causada pelo fungo Beauveria bassiana (Bals.) Vuill. (Ascomycota: Cordycipitaceae). Doenças fúngicas são facilmente disseminadas, já que os conídios são transportados pelo ar. Além disso, as condições de temperatura e umidade nos barracões são favoráveis ao surgimento e à manutenção do fungo, aumentando sua incidência. Práticas de higiene como a desinfecção do barracão e de utensílios são recomendadas, no entanto a contaminação das lagartas ainda é frequente. Dessa forma, esse artigo reuniu trabalhos voltados para a pesquisa de produtos antimicrobianos alternativos para o uso em sericicultura.(AU)

Entomopathogens are the most important problem from sericulture all over the world, and cause heavy loss to silkworm crops. Calcinosis is a common disease of silkworm, caused by the pathogenic fungus Beauveria bassiana (Bals.) Vuill. (Ascomycota: Cordycipitaceae). Fungal diseases of silkworm are easily spread by spores which are carried through the air. Also, temperature and humidity inside the silkworm rearing rooms are favorable to disease development. Practice hygiene measures during silkworm rearing such as disinfection of rearing houses and appliances are recommended. However, contamination is frequent. This paper presents related research on promising antimicrobiotic products for their use in sericulture industry.(AU)

Verificação da interferência do solvente propilenoglicol sobre o efeito da própolis na produção de lagartas de Bombyx mori l. (Lepidoptera: bombicidae) comparado ao extrato alcoólico de própolis / Interference of propyleneglycol solvent on the effect of propolis in the production of silkworm Bombyx mori l. (Lepidoptera: bombicidae) compared to propolis alcoholic extract / Verificación de la interferencia del solvente propilenoglicol sobre el efecto de propóleos en la producción de gusano de seda Bombyx mori l. (Lepidoptera: bombicidae) comparado al extracto alcohólico de propóleos

Este experimento foi realizado no Laboratório de Sericicultura, no Campus Sede da Universidade Paranaense (UNIPAR) de Umuarama, no período de fevereiro a outubro de 2011, com o objetivo de verificar o efeito da própolis em diferentes dosagens na alimentação durante o desenvolvimento biológico do bicho-da-seda (Bombxy mori L.). O método empregado na parte experimental foi a pulverização do extrato glicólico de própolis, diluído em 500mL de água destilada nas folhas de amoreira, nas seguintes dosagens, água-controle, 25mL, 30mL, 35mL e 40mL compondo os tratamentos: controle, T1, T2, T3 e T4 respectivamente. As folhas de amoreira foram fornecidas cinco vezes ao dia, durante o manejo alimentar. Verificou-se, pelos resultados obtidos, que as diferentes dosagens de própolis utilizadas não interferiram no ganho de peso das lagartas, no peso dos casulos verdes, no peso da casca sérica e crisálidas, quando comparado ao tratamento controle, mas quando se compara o Controle e T4 do ensaio da primavera, respectivamente, para os teores de seda bruto e líquido, há resultados significativos. Portanto, verificou-se que o extrato glicólico de própolis, em dosagens de 40mL, pode prejudicar o teor líquido de seda em uma produção de casulos, trazendo resultados pouco apreciados dentro da sericicultura.

This experiment was performed at the Laboratory of Sericulture, at the main campus of University Paranaense (UNIPAR), in the city of Umuarama, from February to October 2011, in order to verify the effect of different doses of propolis in feeding during the biological development of silkworm (Bombyx mori L.). The method used in the experiment was the spraying of propolis glycolic extract dissolved in 500-mL distilled water on the mulberry leaves in the following water-control dosages: 25mL, 30mL, 35mL and 40mL related to the treatment controls T1, T2, T3 and T4, respectively. Mulberry leaves were provided five times a day for feeding management. The results obtained showed that the different dosages of propolis used did not affect the weight gain of the larvae, the weight of green cocoons, shells and pupae when compared to the control treatment. However, when comparing the control and T4 from the Spring assay, respectively, to the levels of crude and net silk, significant results were noted. Thus, it can be concluded that propolis glycolic extract in 40-ml dosages may impair the net silk content in a cocoon production, presenting negative results in sericulture.

Este experimento se llevó a cabo en el Laboratorio de Sericultura, Campus Sede de la Universidad Paranaense (UNIPAR) de Umuarama, en el período de febrero a octubre de 2011, con el fin de verificar el efecto de propóleos en diferentes concentraciones en la alimentación durante el desarrollo biológico del gusano de seda (Bombyx mori L.). El método utilizado en el experimento fue la pulverización de extracto glicólico de propóleos, disuelto en 500 ml de agua destilada en las hojas de morera, en las siguientes dosis, agua control, 25 mL, 30mL, 35 mL, y 40 mL componiendo los tratamientos: control T1, T2, T3 e T4 respectivamente. A las hojas de morera se les han dado cinco veces al día, durante el manejo alimentar. Se verificó, por los resultados obtenidos, que las diferentes dosis de propóleos utilizados no afectaron en la ganancia de peso de los gusanos, en el peso de los capullos verdes, en el peso de la cáscara sérica y crisálidas, en comparación con el tratamiento de control, pero cuando se compara el Control y T4 del ensayo de la primavera, respectivamente, para los niveles de seda cruda y líquida, hay resultados significativos. Por lo tanto, se encontró que el extracto glicólico de propóleos, en dosis de 40 mL, puede perjudicar la concentración líquida de seda en una producción de capullos, trayendo resultados poco apreciados dentro de la sericultura.

Verificação da interferência do solvente propilenoglicol sobre o efeito da própolis na produção de lagartas de Bombyx mori L. (Lepidoptera: bombicidae) comparado ao extrato alcoólico de própolis / Interference of propyleneglycol solvent on the effect of propolis in the production of silkworm Bombyx mori L. (Lepidoptera: bombicidae) compared to propolis alcoholic extract / Verificación de la interferencia del solvente propilenoglicol sobre el efecto de propóleos en la producción de gusano de seda Bombyx mori L. (lepidoptera: bombicidae) comparado al extracto alcohólico de propóleos

Este experimento foi realizado no Laboratório de Sericicultura, no Campus Sede da Universidade Paranaense (UNIPAR) de Umuarama, no período de fevereiro a outubro de 2011, com o objetivo de verificar o efeito da própolis em diferentes dosagens na alimentação durante o desenvolvimento biológico do bicho-da-seda (Bombxy mori L.). O método empregado na parte experimental foi a pulverização do extrato glicólico de própolis, diluído em 500mL de água destilada nas folhas de amoreira, nas seguintes dosagens, água-controle, 25mL, 30mL, 35mL e 40mL compondo os tratamentos: controle, T1 , T2 , T3 e T4 respectivamente. As folhas de amoreira foram fornecidas cinco vezes ao dia, durante o manejo alimentar. Verificou-se, pelos resultados obtidos, que as diferentes dosagens de própolis utilizadas não interferiram no ganho de peso das lagartas, no peso dos casulos verdes, no peso da casca sérica e crisálidas, quando comparado ao tratamento controle, mas quando se compara o Controle e T4 do ensaio da primavera, respectivamente, para os teores de seda bruto e líquido, há resultados significativos. Portanto, verificou-se que o extrato glicólico de própolis, em dosagens de 40mL, pode prejudicar o teor líquido de seda em uma produção de casulos, trazendo resultados pouco apreciados dentro da sericicultura...

This experiment was performed at the Laboratory of Sericulture, at the main campus of University Paranaense (UNIPAR), in the city of Umuarama, from February to October 2011, in order to verify the effect of different doses of propolis in feeding during the biological development of silkworm (Bombyx mori L.). The method used in the experiment was the spraying of propolis glycolic extract dissolved in 500-mL distilled water on the mulberry leaves in the following water- -control dosages: 25mL, 30mL, 35mL and 40mL related to the treatment controls T1, T2, T3 and T4, respectively. Mulberry leaves were provided five times a day for feeding management. The results obtained showed that the different dosages of propolis used did not affect the weight gain of the larvae, the weight of green cocoons, shells and pupae when compared to the control treatment. However, when comparing the control and T4 from the Spring assay, respectively, to the levels of crude and net silk, significant results were noted. Thus, it can be concluded that propolis glycolic extract in 40-ml dosages may impair the net silk content in a cocoon production, presenting negative results in sericulture...

: Este experimento se llevó a cabo en el Laboratorio de Sericultura, Campus Sede de la Universidad Paranaense (UNIPAR) de Umuarama, en el período de febrero a octubre de 2011, con el fin de verificar el efecto de propóleos en diferentes concentraciones en la alimentación durante el desarrollo biológico del gusano de seda (Bombyx mori L.). El método utilizado en el experimento fue la pulverización de extracto glicólico de propóleos, disuelto en 500 ml de agua destilada en las hojas de morera, en las siguientes dosis, agua control, 25 mL, 30mL, 35 mL, y 40 mL componiendo los tratamientos: control T1 , T2 , T3 e T4 respectivamente. A las hojas de morera se les han dado cinco veces al día, durante el manejo alimentar. Se verificó, por los resultados obtenidos, que las diferentes dosis de propóleos utilizados no afectaron en la ganancia de peso de los gusanos, en el peso de los capullos verdes, en el peso de la cáscara sérica y crisálidas, en comparación con el tratamiento de control, pero cuando se compara el Control y T4 del ensayo de la primavera, respectivamente, para los niveles de seda cruda y líquida, hay resultados significativos. Por lo tanto, se encontró que el extracto glicólico de propóleos, en dosis de 40 mL, puede perjudicar la concentración líquida de seda en una producción de capullos, trayendo resultados poco apreciados dentro de la sericultura...

Efeito de vitaminas e esterol como aditivos foliares no desenvolvimento de Bombyx mori L. e influência do modo de aplicação / Effect of vitamins and sterol as foliar additives in the development of Bombyx mori L. and influence of the application mode

O objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos e os métodos de aplicação dos aditivos foliares decanoato de nandrolona (esteroide anabolizante) a 0,5%, ácido ascórbico (vitamina C) a 0,5%, palmitato de retinol (vitamina A) a 0,5% e acetato de retinol (vitamina A) a 1,0% em alguns parâmetros biológicos do bicho-da-seda. No experimento do modo de aplicação (pulverização foliar antes do fornecimento, depois do fornecimento e por imersão antes do fornecimento) foram utilizados: decanoato de nandrolona 0,5%; ácido ascórbico 0,5%; e palmitato de retinol 0,5%. No ensaio de desenvolvimento do inseto foram avaliados: duração e viabilidade larval; peso de casulo; taxa de encasulamento; teor líquido de seda; longevidade de adultos; número de ovos por fêmea; e duração do período de subida ao bosque. Para o modo de aplicação determinaram-se: ganho de peso, comprimento, diâmetro do tórax e diâmetro do abdome de lagartas de 5º ínstar, assim como comprimento, diâmetro e peso de glândula sericígena. Os resultados mostraram que, apesar de o ácido ascórbico proporcionar os melhores valores para o desenvolvimento corpóreo das lagartas, este não corresponde a incrementos significativos na produção; o palmitato de retinol não melhora o desenvolvimento das lagartas; o acetato de retinol e o palmitato de retinol prolongam o período larval, sem, no entanto, alterar significativamente os parâmetros de produção; a imersão de folhas antes do fornecimento às lagartas é mais viável para a aplicação dos aditivos.(AU)

The present study was aimed to evaluate the effects of different methods of foliar application of the additives nandrolone decanoate (anabolic steroid) 0,5%; ascorbic acid (vitamin C) 0,5%; retinol palmitate (vitamin A) 0,5%; and retinol acetate (vitamin A) 1,0% on some biological parameters of the silkworm. The experiment of application method (foliar spray prior to delivery, after delivery and soaking before feeding) used: nandrolone decanoate 0.5%, ascorbic acid 0.5%, and retinol palmitate 0.5%. The test of insect development evaluated: duration and larval viability, weight of cocoon, cocooning rate, liquid silk content, adult longevity, number of eggs per female and rising up time. For the application of foliar additives, the following were determined: weight gain, length, diameter and abdomen diameter of fifth instar larvae, and length, diameter and weight of silk gland. The results showed that although ascorbic acid provided the best value for the development of the caterpillars body, it did not correspond to significant increase in production; retinol palmitate did not affect the larvae body development; retinol acetate and retinol palmitate prolong the larval period, without, however, significantly altering the production parameters. The immersion method of leaves before being delivered to the caterpillars is the most feasible for the foliar application of additives.(AU)

Genetic Analysis of Izoenzymes Polymorphisms in Silkworm (Bombyx mori L) Strains / Análise genética de polimorfismos bioquímicos em linhagens do bicho da seda (Bombyx mori L)

This work carried out to evaluates the polymorhism in the silkworm of different lineages using the isoenzymes electrophoresis to detect biochemical markers and to investigate the genetics of populations for those lineages. They were used as samples individual extracts of silk glands of second day old larvas of the fifth instar, originating from seven Japanese lineages and eight pure Chinese lineages maintained by the Cocamar- Cooperativa Agroindustrial de Maringá. The isozymes acid phosphatase (ACP), alkaline phosphatase (AKP) and carbonic anhydrase (CA) they were submitted to the electrophoresis in starch gels 14%. The esterases (EST) were analyzed in polyacrylamide gels to 10% and stained with α and ß-naphtyl acetate. The total of 21 loci was detected, and 04 (19.05%) they are polymorphic, Est-11, Acp, Akp, Ca. The fixation index (Fis) for the analyzed isozymes it was 0.0751, indicating excess of homozygotes. The value of Fst (0.6128) it shows that the lineages are well differentiated. The dendrogram obtained with the values of genetic distance didn't separate the Chinese and Japanese lineages analyzed totally. That preliminary evaluation of the lineages of B. mori shows that they present genetic material that it can be used in breeding programs that have the purpose of producing hybrid for silk production.

Este trabalho teve como objetivo avaliar o polimorfismo em lagartas do bicho-da-seda de diferentes linhagens utilizando a eletroforese de isoenzimas para detectar marcadores bioquímicos e investigar a genética de populações para essas linhagens. Foram utilizados como amostras extratos individuais de glândulas sericígenas de lagartas do segundo dia da quinta idade, de sete linhagens japonesas e oito linhagens chinesas puras mantidas pela Cocamar-Cooperativa Agroindustrial de Maringá. As isozimas fosfatase ácida (ACP), fosfatase alcalina (AKP) e anidrase carbônica (CA) foram avaliadas por meio de eletroforese em géis de amido de milho a 14%. As esterases (EST) foram analisadas por meio de eletroforese vertical em géis de poliacrilamida a 10% e coloração com α e ß- naftil acetato. Foram observados 21 locos, dentre os quais quatro (19.05%) são polimórficos, Est-11, Acp, Akp, Ca. O índice de fixação (Fis) para as isozimas analisadas foi 0.0751, indicando excesso de homozigotos. O valor de Fst (0.6128) permite sugerir que as linhagens estão bem diferenciadas. O dendograma obtido a partir dos valores de distância genética não separou totalmente as linhagens chinesas e japonesas analisadas. Essa avaliação preliminar das linhagens de B. mori mostra que elas apresentam material genético que pode ser utilizado em programas de cruzamentos que tenham a finalidade de produzir híbridos para produção de seda.

A criação do bombyx mori (bicho-da-seda) e as principais doenças / Cría del bombyx mori (gusano de seda) y las principales enfermedades / Bombyx mori (silkworm) breeding and main diseases

Este artigo revisa os principais aspectos relacionados à sericicultura, que abrange a criação do Bombyx mori, popularmente conhecido como bicho-da-seda, que representa uma atividade desenvolvida principalmente nas pequenas propriedades rurais, onde predomina o trabalho familiar, representando uma alternativa importante para a melhoria da renda e, contribuindo desta forma para a diminuição do êxodo rural. Além dessas características, a sericicultura é uma atividade de baixo impacto ambiental, que contribui para o desenvolvimento sustentável do país. O presente trabalho tem por objetivo discutir a criação do bicho-da-seda e as principais doenças que acarretam perdas na produção, destacando que o melhoramento genético pode auxiliar na criação de híbridos mais resistentes à doenças e com melhor qualidade e quantidade de seda por casulo.

This article revises the main aspects related to sericulture which includes the breeding of Bombyx mori, popularly known as silkworm. It represents an activity developed mainly in small rural properties, where the family work prevails, representing an important alternative for the income improvement and, thus, contributing to the decrease of rural exodus. Besides, sericulture is an activity with low environmental impact which contributes to the sustainable development of the country. This study aims to discuss silkworm breeding and the main diseases that cause production losses, noting that genetic improvement can help breed more disease-resistant hybrids with better quality and quantity of silk by cocoon.

Este artículo revisa los principales aspectos relacionados con la sericultura, que abarca la cría del Bombyx mori, popularmente conocido como gusano de seda, que representa una actividad desarrollada principalmente en las pequeñas propiedades rurales, donde predomina el trabajo familiar, representando una alternativa importante para la mejora de renta y, contribuyendo así a reducir el éxodo rural. Además de esas características, la sericultura es una actividad de bajo impacto ambiental, que contribuye al desarrollo sostenible del país. Este trabajo pretende discutir la cría del gusano de seda y las principales enfermedades que causan pérdidas en la producción, señalando que el mejoramiento genético puede ayudar a crear híbridos más resistentes a las enfermedades y con mejor calidad y cantidad de seda por capullo.

Notas sobre o bicho-da-seda no folclore Chinês

Notas sobre o bicho-da-seda no folclore chinês. Duas lendas sobre o bicho-da-seda (Bombyx mori Linnaeus, 1758) no folclore chinês são apresentadas: uma sobre a sua origem, a outra sobre os gatos como protetores do bicho-da-seda e da sericultura.

Notes about the silkworm in Chinese folklore. Two legends about the silkworm (Bombyx mori Linnaeus, 1758) in Chinese folklore are presented: one about its origin, the other about cats as protectors of silkworms and sericulture.

Avaliação da dosagem de própolis pulverizada nas folhas de amoreira (morus sp.) sobre o desenvolvimento biológico e produtivo do bicho-da-seda (bombyx mori l.) / Evaluación de la dosis de propóleos esparcidas en las hojas de morera (morus sp.) en el desarrollo biológico y productivo del gusano de seda (bombyx mori l.) / Evaluation of the doses of propolis pulverization in mulberry leaves (morus sp.) on the biological and productive development of silkworm (bombyx mori l.)

Este experimento foi realizado no Laboratório de Sericicultura, no Campus Sede da Universidade Paranaense (UNIPAR) de Umuarama, no período de 17/09/2009 a 17/10/2009, com o objetivo de verificar o efeito da própolis em diferentes dosagens na alimentação durante o desenvolvimento biológico do bicho-da-seda (Bombxy mori L). O método empregado na parte experimental foi a pulverização do extrato alcoólico de própolis, diluído em 500 mL de água destilada nas folhas de amoreira, nas seguintes dosagens, água-controle, 5mL, 10mL, 15mL e 20mL compondo os tratamentos T1, T2, T3, T4, T5, respectivamente. As folhas de amoreira foram fornecidas cinco vezes ao dia, durante o manejo alimentar. Verificou-se pelos resultados obtidos, que as diferentes dosagens de própolis utilizadas interferem no ganho de peso das lagartas, no peso dos casulos verdes e crisálidas quando comparado ao tratamento controle, influenciando também no número de casulos formados e, para os teores de seda bruto e líquido não apresentaram resultados significativos, quando comparados com o tratamento controle. Portanto, verificou-se que a própolis, nas dosagens utilizadas, não trouxe efeitos depressivos à biologia e produção do bicho-da-seda.

This experiment was conducted at the Sericulture Laboratory, in the Campus Sede of the Universidade Paranaense (UNIPAR) in Umuarama, from 17/09/2009 to 17/10/2009, in order to verify the effects of propolis in different dosages during the development of silkworm (Bombyx mori L). The method used during the experiment was the dillution of an alcohoolic solution of propolis, in 500 mL of destilled water with its further pulverization on mullberry leaves, with the following doses: water control; 5 mL; 10 mL; 15 mL; 20 mL, composing the following treatments: T1, T2, T3, T4, T5, respectively. The mullberry leaves were sprinkled five times a day, during the feed management. It was verified by the results that the different doses of propolis used interfere with gain-weight of the larvae, weight of cocoons and chrysalis, when compared to control. The treatment also influenced the number of cocoons formed. The contento fraw and liquid silk were not significant when compared with the control. Therefore, it was concluded that the propolis, used in those dosages, brought no depressive effects to the development and the production of silkworm.

Este experimento se realizó en el Laboratorio de Sericicultura del Campus Sede de la Universidad Paranaense (UNIPAR) de Umuarama, en el período de 17/09/2009 a 17/10/2009, con el objetivo de verificar el efecto de propóleos en diferentes dosis en la alimentación durante el desarrollo biológico del gusano de seda (Bombyx mori L.). El método usado en la parte experimental fue la pulverización del extracto alcohólico de propóleos, diluido en 500 ml de agua destilada en las hojas de morera, en las siguientes dosis: agua control, 5 ml, 10 ml, 15 ml y 20 ml componiendo los tratamientos T1, T2, T3, T4, T5, respectivamente. Las hojas de morera fueron suministradas cinco veces al día, durante el manejo alimentar. Por los resultados obtenidos se verificó que las dosis diferentes de propóleos utilizadas interfieren en el gano de peso de los gusanos, en el peso de los capullos verdes y crisálidas cuando comparado al tratamiento control, influenciando también en el número de capullos formados y, para contenidos de seda bruta y líquida no presentan resultados significativos, mientras comparado con el tratamiento control. Sin embargo, se puede verificar que propóleos, en dosis utilizadas, no trajo efectos depresivos a la biología y producción del gusano.

Avaliação da dosagem de própolis pulverizada nas folhas de amoreira (morus sp.) sobre o desenvolvimento biológico e produtivo do bicho-da-seda (bombyx mori L. ) / Evaluación de la dosis de propóleos esparcidas en las hojas de morera (morus sp.) en el desarrollo biológico y productivo del gusano de seda (bombyx mori L.) / Evaluation of the doses of propolis pulverization in mulberry leaves (morus sp.) on the biological and productive development of silkworm (bombyx mori L.)

Este experimento foi realizado no Laboratório de Sericicultura, no Campus Sede da Universidade Paranaense (UNIPAR) de Umuarama, no período de 17/09/2009 a 17/10/2009, com o objetivo de verificar o efeito da própolis em diferentes dosagens na alimentação durante o desenvolvimento biológico do bicho-da-seda (Bombxy mori L). O método empregado na parte experimental foi a pulverização do extrato alcoólico de própolis, diluído em 500 mL de água destilada nas folhas de amoreira, nas seguintes dosagens, água-controle, 5mL, 10mL, 15mL e 20mL compondo os tratamentos T1, T2, T3, T4, T5, respectivamente. As folhas de amoreira foram fornecidas cinco vezes ao dia, durante o manejo alimentar. Verificou-se pelos resultados obtidos, que as diferentes dosagens de própolis utilizadas interferem no ganho de peso das lagartas, no peso dos casulos verdes e crisálidas quando comparado ao tratamento controle, influenciando também no número de casulos formados e, para os teores de seda bruto e líquido não apresentaram resultados significativos, quando comparados com o tratamento controle. Portanto, verificou-se que a própolis, nas dosagens utilizadas, não trouxe efeitos depressivos à biologia e produção do bicho-da-seda.

This experiment was conducted at the Sericulture Laboratory, in the Campus Sede of the Universidade Paranaense (UNIPAR) in Umuarama, from 17/09/2009 to 17/10/2009, in order to verify the effects of propolis in different dosages during the development of silkworm (Bombyx mori L). The method used during the experiment was the dillution of an alcohoolic solution of propolis, in 500 mL of destilled water with its further pulverization on mullberry leaves, with the following doses: water control; 5 mL; 10 mL; 15 mL; 20 mL, composing the following treatments: T1, T2, T3, T4, T5, respectively. The mullberry leaves were sprinkled five times a day, during the feed management. It was verified by the results that the different doses of propolis used interfere with gain-weight of the larvae, weight of cocoons and chrysalis, when compared to control. The treatment also influenced the number of cocoons formed. The contento fraw and liquid silk were not significant when compared with the control. Therefore, it was concluded that the propolis, used in those dosages, brought no depressive effects to the development and the production of silkworm.

Este experimento se realizó en el Laboratorio de Sericicultura del Campus Sede de la Universidad Paranaense (UNIPAR) de Umuarama, en el período de 17/09/2009 a 17/10/2009, con el objetivo de verificar el efecto de propóleos en diferentes dosis en la alimentación durante el desarrollo biológico del gusano de seda (Bombyx mori L.). El método usado en la parte experimental fue la pulverización del extracto alcohólico de propóleos, diluido en 500 ml de agua destilada en las hojas de morera, en las siguientes dosis: agua control, 5 ml, 10 ml, 15 ml y 20 ml componiendo los tratamientos T1, T2, T3, T4, T5, respectivamente. Las hojas de morera fueron suministradas cinco veces al día, durante el manejo alimentar. Por los resultados obtenidos se verificó que las dosis diferentes de propóleos utilizadas interfieren en el gano de peso de los gusanos, en el peso de los capullos verdes y crisálidas cuando comparado al tratamiento control, influenciando también en el número de capullos formados y, para contenidos de seda bruta y líquida no presentan resultados significativos, mientras comparado con el tratamiento control. Sin embargo, se puede verificar que propóleos, en dosis utilizadas, no trajo efectos depresivos a la biología y producción del gusano.

Influência da alimentação na morfologia da glândula sericígena de lagartas no 5º ínstar de Bombyx mori L. utilizando diferentes cultivares de amoreira / Influencia de la alimentación en la morfología de la glándula sericígena de lagartas en el 5º instar de Bómbix mori L utilizando diferentes cultivos de morera / Influence of the feeding in the morphology of the silk-producing gland of insects in 5º period of Bombyx mori L. using different mulberry cultivars

O bicho-da-seda, Bombyx mori L. (Lepidoptera: Bombycidae), é o inseto produtor de casulos de seda, destinados à fiação industrial têxtil, para posterior produção de tecidos de seda. Os filamentos de seda, expelidos pelas glândulas sericígenas do inseto, se solidificam ao entrar em contato com o ar. A sericicultura abrange a criação das lagartas de B. mori e a cultura da amoreira, principal fonte de alimentação da lagarta. Com o objetivo de avaliar a influência da alimentação na morfologia da glândula sericígena de lagartas de B. mori, realizou-se experimento em que foram fornecidos aos insetos quatro cultivares de amoreira, sendo estes a variedade Korin e os híbridos comerciais FM86, SK4 e IZ40. Os dados obtidos revelaram que, quanto ao peso da glândula sericígena, as lagartas alimentadas com SK4 e Korin apresentaram maior peso quando comparadas com os cultivares FM86 e IZ40. O híbrido SK4 revelou diferença significativa no comprimento da glândula posterior. Porém, os dados gerais apresentaram um certo equilíbrio entre os cultivares, perdendo em alguns aspectos e superando outros, quando comparados entre si.

El gusano de seda, Bombyx mori L. (Lepidoptera: Bombycidae), es el insecto productor de los capullos de seda, destinado a la hilatura industrial textil, para posterior producción de tejidos de seda. Los filamentos de seda, expulsados por las glándulas sericígenas del insecto, se solidifican al ponerse en contacto con el aire. La sericicultura abarca la creación de lagartas de B. mori y el cultivo de la morera, principal fuente de alimentación de la lagarta. Con el fin de evaluar la influencia de la alimentación en la morfología de la glándula sericígena de lagartas de B. mori, se realizó experimento en que fueron suministrados a los insectos cuatro cultivares de morera, siendo estos la variedad Korin y los híbridos comerciales FM86, SK4 y IZ40. Los datos obtenidos revelaron que, cuanto al peso de la glándula sericígena, las lagartas alimentadas con SK4 y Korin presentaron mayor peso en comparación con los cultivares FM86 y IZ40. El híbrido SK4 reveló diferencia significativa a lo largo de la glándula posterior. Sin embargo, los datos generales muestran un cierto equilibrio entre los cultivares, perdiendo en algunos aspectos y superando en otros, cuando comparados entre ellos.

The silkworm, Bombyx mori L. (Lepidoptera:Bombycidae), is the insect that produces cocoons of silk - the more important raw material for the silk industry. Silk filaments, which are expelled by the insect’s silk-producing gland, become solid in contact with air. Silk culture encloses the creation of silkworm and mulberry plant growing – its major source of food. With the objective of evaluating the influence of feeding in the morphology of the silk-producing gland of the B. mori worms, an experiment was conducted with four mulberry cultivars: Korin , FM86, SK4 e IZ40. The results revealed that with respect to wight of the silk-producing gland, the silkworms fed with SK4 and Korin presented higher weight when compared to the FM86 and IZ40 cultivars. SK4 presented significant difference with respect to the posterior gland length. However, general data presented certain balance among the cultivars when compared mutually.

Amplificação por PCR da região controle do DNA mitocondrial de raças de bombyx mori / Bombyx mori mitocondrial DNA control region amplification by PCR / Amplificación por pcr de la región control del dna mitocondrial de razas de Bombyx mori

A sericicultura é uma importante atividade agroindustrial no Brasil, sendo o Estado do Paraná responsável por aproximadamente 90% de toda a produção nacional. A localização de marcadores genéticos para o bicho-da-seda (Bombyx mori L.) é importante para a diferenciação intra e interespecífica e para o uso em melhoramento genético da espécie, sendo o DNA mitocondrial (DNAmt) um dos marcadores genéticos mais utilizados no estudo de insetos. O objetivo deste trabalho foi amplificar a região controle do DNA mitocondrial de quatro raças de Bombyx mori, pela técnica de Polymerase Chain Reaction (PCR). Obteve-se a amplificação de um fragmento de aproximadamente 750 pb referente à região controle, demonstrando a eficiência da metodologia empregada para a amplificação desta região específica do DNAmt de Bombyx mori.

Sericulture is an important agro industrial activity in Brazil, mainly in Paraná State, that is responsible for 90% of the national production. For the genetic improvement of silkworm (Bombyx mori L.), it is necessary to develop techniques to amplify molecular markers in order to use it on genetic analysis. Mitochondrial DNA (mtDNA) has been widely used as a molecular marker for insects and provides suitable markers for studies on genetic variability and molecular characterization. The control region is the major non-coding region of animal mtDNA and has been responsible for providing important evolutionary data about many insect groups. The aim of this paper was to amplify the mtDNA control region of four Bombyx mori strains by polymerase chain reaction (PCR). A 750 bp fragment including the control region was amplified showing the efficiency of the methodology to amplify specific regions of the Bombyx mori mtDNA.

La sericicultura es una importante actividad agroindustrial en Brasil, siendo el Estado del Paraná responsable por aproximadamente 90% de toda la producción nacional. La localización de marcadores genéticos para el gusano de seda (Bombyx mori L.) es importante para la diferenciación intra e interespecífica y para el uso en mejoramiento genético de la especie, siendo el DNA mitocondrial (DNAmt) uno de los marcadores genéticos más utilizados en el estudio de insectos. El objetivo de esta investigación fue amplificar la región control del DNA mitocondrial de cuatro razas de Bombyx mori, por la técnica de Polymerase Chain Reaction (PCR). Se obtuvo la amplificación de un fragmento de aproximadamente 750 pb referente a la región control, demostrando la eficiencia de la metodología empleada para la amplificación de esta región específica del DNAmt de Bombyx mori.