RESUMO
The activity of three anti-herpetic drugs (Acyclovir [ACV], Gancyclovir [GCV] and Foscarnet [PFA]) was tested against bovine herpesvirus 1 (BoHV-1), 2 (BoHV-2) and 5 (BoHV-5) in vitro using the plaque reduction assay. Different drug concentrations were tested against one hundred 50 percent tissue culture infectious dose (TCID50) of the respective viruses. Drug concentrations lower than 200μg/mL resulted in viability rates of more than 80 percent for MDBK and Hep2 cells in the MTT test (3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide). The selectivity index (IS) of the drugs was calculated dividing the concentration of the drug that is cytotoxic for 50 percent of the cells (CC50) by the concentration of the drug that was effective in reducing by 50 percent the number of viral plaques (EC50) for the three herpesviruses. Thus, ACV was shown to be moderately active against BoHV-1 (EC50: 112.9μg/mL; IS: 4.5), BoHV-2 (EC50: 114.2μg/mL; IS: 4.5) and BoHV-5 (EC50: 96.9μg/mL; IS: 5.3). GCV was effective against BoHV-2 (EC50: 33.5μg/mL; IS: 16.6), moderately effective against BoHV-5 (EC50: 123.2μg/mL; IS: 4.5) and poorly active against BoHV-1 (EC50: 335.8μg/mL; IS: 1.7). PFA exhibited the highest antiviral activity, being the only drug that, at concentration of 100μg/mL, completely inhibited plaque formation by all three viruses. PFA was the most effective in vitro against BoHV-1 (EC50: 29.5μg/mL; IS: 42.2), BoHV-2 (EC50: 45.2μg/mL; IS: 27.6) and BoHV-5 (EC50: 7.8μg/mL; IS: 160.6). Thus, the results indicate that PFA is a promising candidate for experimental therapeutic testing in vivo against bovine herpesviruses.
A atividade de três fármacos antivirais (Aciclovir [ACV], Ganciclovir [GCV] e Foscarnet [PFA]) foi testada in vitro frente aos herpesvírus bovino tipos 1 (BoHV-1), 2 (BoHV-2) e 5 (BoHV-5). Para isso, utilizou-se o teste de reducao de placas virais em cultivo celular, testando-se diferentes concentracoes dos farmacos frente a 100 doses infectantes para 50 por cento dos cultivos celulares (DICC50) dos respectivos virus. Pelo teste de MTT (3-(4,5-Dimethylthiazol- 2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide), verificou-se que concentracoes inferiores a 200Êg/mL dos tres antivirais resultaram em indices de viabilidade de celulas MDBK e Hep2 superiores a 80 por cento. Com base na concentracao citotoxica para 50 por cento das celulas (CC50) e na concentracao dos farmacos efetiva para inibir em 50 por cento o numero de placas virais (EC50), calculou-se o indice de seletividade (IS) dos antivirais para os tres herpesvirus. Assim, o ACV demonstrou ser moderadamente ativo frente ao BoHV-1 (EC50: 112,9Êg/mL e IS: 4,5), ao BoHV-2 (EC50: 114,2 Êg/mL e IS: 4,5) e BoHV-5 (EC50: 96,9Êg/mL e IS: 5,3). O GCV apresentou atividade moderada frente ao BoHV-2 (EC50: 33,5Êg/mL e IS: 16,6) e, em menor grau, contra o BoHV-5 (EC50: 123,2Êg/mL e IS: 4,5), sendo ineficaz frente ao BoHV-1 (EC50: 335,8Êg/mL e IS: 1,7). O PFA apresentou atividade antiviral mais pronunciada, sendo o unico farmaco que, na concentracao de 100Êg/mL, inibiu completamente a producao de placas pelos tres virus testados. O PFA foi o mais efetivo in vitro frente ao BoHV-1 (EC50: 29,5Êg/mL e IS: 42,2), ao BoHV-2 (EC50: 45,2Êg/mL e IS: 27,6) e ao BoHV-5 (EC50: 7,8Êg/mL e IS: 160,6). Portanto, os resultados obtidos indicam que o PFA pode se constituir em um candidato para terapia experimental de infeccoes pelos herpesvirus de bovinos in vivo.
Assuntos
Herpesvirus Bovino 1 , Técnicas de Cultura de Células/métodos , Técnicas de Cultura de Células/veterináriaRESUMO
O herpesvírus bovino tipo 2 (BoHV-2), agente da mamilite herpética bovina (BHM), possui distribuição mundial e foi identificado no Brasil, na década de 70. A partir de então, casos de mamilite clinicamente compatíveis com a BHM têm sido relatados por técnicos e produtores, o que sugere a presença e disseminação do agente no rebanho bovino brasileiro. Este trabalho relata um inquérito sorológico da infecção pelo BoHV-2 no Estado do Rio Grande do Sul (RS), em amostras coletadas como parte do Programa Nacional de Controle e Erradicação da Brucelose e Tuberculose (PNCBT). Um total de 2.213 amostras de soro coletadas de fêmeas bovinas com idade igual ou superior a 24 meses, predominantemente de rebanhos leiteiros, de 136 municípios pertencentes a sete macrorregiões do RS, foram testadas para anticorpos anti-BoHV-2 pela técnica de soro-neutralização (SN). Anticorpos anti-BoHV-2 (títulos > 2) foram detectados em 24,5 por cento (543/2.213) das amostras. Os índices de positividade variaram entre 12,9 por cento (22/170), na região metropolitana de Porto Alegre, e 48,9 por cento (69/137), na região centro oriental do RS. Em geral, os rebanhos leiteiros apresentaram prevalência maior (32,3 por cento), seguidos dos rebanhos mistos (22 por cento) e de corte (17,6 por cento). Esses resultados demonstram uma ampla disseminação da infecção pelo BoHV-2 no rebanho bovino do Estado e sugerem a participação do agente em parte dos casos de mamilite descritos em gado leiteiro.
Bovine herpesvirus type 2 (BoHV-2), the agent of bovine herpetic mammillitis (BHM), has a worldwide distribution and was identified in Brazil in the 70's. Thereafter, cases of bovine mammillitis clinically compatible with BHM have been frequently reported by cattle owners and veterinarians, mainly in dairy herds, suggesting the dissemination of BoHV-2 among Brazilian cattle. This article reports a serologic survey for BoHV-2 antibodies in cattle from Rio Grande do Sul (RS), using serum samples obtained upon a statistically planned sampling as a part of the Program of Control/Eradication of Brucellosis and Tuberculosis (PNCBT). A total of 2.213 serum samples from cows with 24 months or older, predominantly from dairy herds, from 136 counties located in seven geographical regions of RS were tested by virus neutralization (VN). Serum samples with VN titers > 2 were detected in 24.5 percent (543/2.213) of the animals. Prevalence rates varied from 12.9 percent (22/170) in Porto Alegre metropolitan area to 48,9 percent (69/137) in the central-eastern region. In most regions, the highest prevalence rates were observed in dairy herds (32.3 percent), followed by double proposit (22 percent) and beef herds (17.6 percent). These results demonstrate that BoHV-2 infection is widespread among cattle in RS, and potentially involved in cases of mammillitis described in dairy cows.
RESUMO
A mamilite causada pelo herpesvírus bovino tipo 2 (BoHV-2) possui importante repercussão sanitária em gado leiteiro de alguns países, mas a sua patogenia permanece pouco conhecida. Este trabalho descreve a reprodução e caracterização da mamilite aguda em ovelhas lactantes inoculadas com o BoHV-2 na pele do úbere e dos tetos. Cinco de oito ovelhas inoculadas desenvolveram extensas placas com necrose focal, pequenas vesículas e formação de crostas nos locais de inoculação. As lesões foram inicialmente observadas no 4º dia pós-inoculação (pi), progrediram em extensão e gravidade até os dias 7-8pi e posteriormente regrediram. O vírus foi isolado das lesões entre os dias 7 e 8 pi. Antígenos virais e partículas típicas de herpesvírus foram demonstrados por microscopia eletrônica em biópsias de lesões coletadas nos dias 5, 6 e 10pi. Os achados histológicos foram caracterizados por necrose epitelial, erosões e úlceras, com formação de células sinciciais e infiltrado inflamatório linfoplasmocitário na derme. Associadas a essas lesões observaram-se inclusões eosinofílicas intranucleares em células epiteliais, sinciciais e inflamatórias. Em um segundo experimento, 7 de 10 cordeiros inoculados na mucosa nasal desenvolveram hiperemia e descarga nasal, bem como vesículas e erosões no focinho. O vírus foi isolado das secreções nasais por até três dias e todos os cordeiros soroconverteram ao BoHV-2. Tentativas de reativar a infecção latente pela administração de dexametasona no 40º dia pi foram infrutíferas, pois não foram observados re-excreção viral, recrudescência clínica ou soroconversão. Esses resultados demonstram que ovelhas são susceptíveis à infecção experimental pelo BoHV-2 e desenvolvem lesões semelhantes às observadas em casos naturais de mamilite herpética. Além disso, esses resultados sugerem o uso dessa espécie animal como modelo para o estudo de vários aspectos da biologia da infecção pelo BoHV-2.
Mammillitis caused by bovine herpesvirus type 2 (BoHV-2) is an important disease in dairy herds yet its pathogenesis remains largely unknown. This report describes the reproduction and characterization of acute mammillitis in lactating ewes inoculated with BoHV-2 in the skin of the udder and teats. Five out of eight inoculated ewes developed large plaques, with focal necrosis, small vesicles and crust formation in the inoculated areas. The lesions were first observed on day 4 post-inoculation (pi), progressed in size and severity up to days 7-8pi and subsided progressively thereafter. Infectious virus was isolated from the lesions at days 7 and 8pi. Viral antigens and herpesvirus-like particles were demonstrated by electron microscopy in lesions examined at days 5, 6 and 10pi. Histological findings included epithelial necrosis, erosions and ulcers, and formation of syncytial cells. Intranuclear inclusions bodies in epithelial, syncytial and inflammatory cells and lymphoplasmacytic inflammatory infiltrate in the dermis were also observed. In a second experiment, seven out of ten lambs inoculated into the nostrils and muzzle developed nasal hyperemia and discharge, vesicles, and erosions in the nose. Infectious virus was isolated from lesions during up to three days and all lambs seroconverted to BoHV-2. Attempts to reactivate the latent infection by dexamethasone administration on day 40pi failed, since virus shedding, clinical recrudescence or seroconversion were not observed. The reproduction of acute infection and mammillitis resembling that occurring in cattle paves the way for the use of sheep to study several aspects of the biology of BoHV-2 infection.