Techniques of digital image analysis for histological quantification of melanin / Técnicas de análise de imagem digital para quantificação histológica da melanina

Morphometric analysis of tissue melanin may quantitatively contribute to research on pigmentation disorders. The authors present three methods for image analysis, which allow for identification of melanin-equivalent pixels in the epidermis using Fontana-Masson stain and, therefore, for the calculation of its percentage in the different epidermal layers. Moreover, they discuss the main elements related to the analysis and the need for rigorous standardization of the process.

A análise morfométrica da melanina tecidual pode subsidiar quantitativamente a pesquisa em discromias. Os autores demonstram três técnicas de análise de imagem digital que permitem a identificação dos pixels equivalentes à melanina na epiderme pela coloração de Fontana-Masson, possibilitando o cálculo da sua porcentagem nas diferentes camadas da epiderme, e discutem os principais elementos relacionados à análise e a necessidade de rigorosa padronização do processo.

Análise morfométrica do colágeno dérmico a partir da segmentação por conglomerados (clusters) de cor / Morphometric analysis of dermal collagen by color clusters segmentation

Análise morfométrica do colágeno dérmico pode fornecer subsídio quantitativo para a pesquisa em dermatologia. Os autores demonstram uma técnica de análise de imagem digital que permite a identificação de estruturas microscópicas, a partir da segmentação por conglomerados (clusters), de cor aplicada à estimativa da intensidade e densidade das fibras colágenas da derme.

Morphometric analysis of dermal collagen can provide quantitative support to dermatologic research. The authors of this article disclose a technique of digital image analysis which allows the identification of microscopic structures by color cluster segmentation regarding the estimate intensity and density of dermal collagen fibers.

Expressão citofotométrica quantitativa da CASPASE-3 e do CD-34 no carcinoma ductal infiltrante de mama / Cytophotometric expressions of CASPASE-3 and CD-34 in breast cancer

OBJETIVO: Descrever, correlacionar e comparar a expressão dos marcadores tumorais CD-34 (angiogênese) e caspase-3 (apoptose) em carcinoma ductal invasor de mama. MÉTODOS: Foram utilizados 22 casos de adenocarcinoma infiltrante de mama provenientes de blocos de parafina e, após preparo específico para imunoistoquímica, 15 apresentaram leitura satisfatória e foram avaliados pelo sistema de fotocitometria de imagem SAMBA 4000® e software IMMUNO®. Os parâmetros analisados foram o índice de marcagem e densidade óptica. RESULTADOS: Para o CD-34 não houve normalidade dos dados na análise do índice de marcagem, com obtenção de P=0,019, havendo normalidade para a análise da densidade óptica, com P=0,199. Para a caspase-3 houve normalidade de dados para o índice marcagem com P=0,306 e para a densidade óptica com P=0,114; não houve diferença estatística significativa entre eles em relação à média do índice de marcagem (P=0,872) e da densidade óptica (P=0,816), quando analisados os parâmetros que definem a expressão dos marcadores; existiu tendência à associação entre a densidade óptica e o índice de marcagem do marcador tumoral caspase-3, com P=0,025. Não foi observada tendência à associação quando comparados densidade óptica e índice de marcagem do marcador tumoral CD-34; índice de marcagem do marcador tumoral caspase-3 e índice de marcagem do marcador tumoral CD-34; e densidade óptica da caspase-3 com a do CD-34. CONCLUSÃO: Dos 22 casos incluídos foi possível verificar a expressão do marcador CD-34 em 18 lâminas e da caspase-3 em 22 lâminas; Para o CD-34 não houve normalidade dos dados na análise do índice de marcagem, havendo sim normalidade para a análise da densidade óptica. Para a caspase-3 houve normalidade de dados tanto para o índice de marcagem como para a densidade óptica. Existe tendência à associação entre a densidade óptica e o índice de marcagem da caspase-3. Não foi observada tendência quando comparados densidade óptica e índice...

OBJECTIVE: Describe, correlate and compare the expression of the tumor markers CD 34 (angiogenesis) and caspase-3 (apoptosis) in invasive breast adenocarcinoma, through image cytometry with the system SAMBA4000®. METHODS: Twenty-two cases of invasive breast adenocarcinoma from paraffin-embedded archival tissue, and after specific prepare, fifteen cases presented a satisfactory lecture with SAMBA4000® and could, finally, be evaluated by the software IMMUNO® (n = 15). The parameters analysed were the label index - in percentage, indicating the marked surface - and the optical density, in pixels - indicator of the marker intensity. The results were tabulated and expressed in averages, mediums, minimum and maximum values. The statistic analysis was realized by the Shapiro-Wilkins, Student test, Pearson's and Spearman's correlation, with statistic significance for values from p < 0,05. RESULTS: There was no data normality for the label index CD34 (p= 0,019), there was normality in the analysis of the optical density of both markers and label index of the marker Caspase-3. There was no difference relating to the average of the index marker and the optical density when they were compared. CONCLUSIONS: There was a tendency to correlate the label index and the optical density of the tumor marker caspase-3, the same did not occur with the tumor marker CD 34. Other analysis did not show any correlation between the two studied markers. Other studies involving theses two cell processes are needed to extend the knowledge of the cancer biomolecular mechanic and to permit new diagnostic and therapeutic strategies.

Expressão dos marcadores de angiogênese fator VIII e CD-34 no adenocarcinoma gástrico / Expression of angiogenesis markers factor VIII and CD-34 in gastric adenocarcinoma

RACIONAL: O câncer gástrico continua sendo objeto de grande número de estudos que tentam entender melhor sua gênese, e conseqüentemente propor novos tratamentos. Na atualidade destaque especial está sendo dado na marcação imunoistoquímica onde estão sendo utilizados marcadores diversos sem se saber ainda qual ou quais são os mais efetivos no diagnóstico. OBJETIVO: Identificar e quantificar por citometria de imagem a expressão dos marcadores de angiogênese Fator VIII e CD-34 em tumores gástricos. MÉTODOS:Foram utilizados 29 casos de adenocarcinomas gástricos, todos oriundos de material arquivado e conservado em blocos de parafina. Após a desparafinização, realizou-se coloração com marcadores imunoistoquímicos de angiogênese Fator VIII e CD-34, e as lâminas coradas foram submetidas a estudo citofotométrico de imagem em sistema informatizado SAMBA 4000. RESULTADOS: Foram comparados os dois parâmetros oferecidos pelo método, índice de marcagem e densidade óptica, apenas nos 17 casos em que ocorreu identificação de ambos marcadores. Observou-se expressão numericamente significativa de ambos, porém o Fator VIII apresentou melhor média de densidade óptica, enquanto o CD-34 melhor resultado quanto ao índice de marcagem. CONCLUSÃO:A citometria de imagem foi capaz de identificar e quantificar a expressão do Fator VIII e CD-34 de maneira confiável e satisfatória demonstrando presença de angiogênese, sendo que o Fator VIII marcou menores áreas com melhor qualidade e o CD-34 marcou maiores áreas com menor qualidade.

BACKGROUND: Gastric cancer remains a subject of great interest in several studies searching for understanding its genesis and, therefore, proposing new treatments. Currently special credits have been given to immunohistochemistry as various markers are being tested with uncertain efficacy on diagnosis. AIM: To identify and quantify the expression of Factor VIII and CD-34, angiogenesis markers, in gastric tumors by imaging cytometry. METHODS: Twenty-nine 29 gastric adenocarcinomas sampled-tissue in paraffin blocks underwent immunohistochemical angiogenesis markers evaluation for factor VIII and CD-34 and the marked slides were submitted to SAMBA 4000 reading. RESULTS:The investigation method offered two comparison parameters, marking index and optical density, showing up both in 17 cases. Significant numerical expression had been observed for both markers, but Factor VIII showed a better optical density average while CD-34 presented a better result for marking index. CONCLUSIONS: Image cytometry identified and quantified Factor VIII and CD-34 expressions in a reliable and satisfactory manner, revealing the presence of angiogenesis. Factor VIII enhanced in smaller areas with better quality while CD-34 enhanced greater areas with lower quality.