RESUMO
A mamoneira (Ricinus communis L.) é uma oleaginosa de alto valor econômico pelo fato de apresentar um mercado bem definido para o óleo extraído de suas sementes. A torta, que é um resíduo desta extração, se destaca pelo alto teor em proteínas. Dentre as proteínas encontradas na torta destaca-se a ricina, uma citotoxina, que inviabiliza sua utilização como fonte protéica alternativa para alimentação animal. O presente trabalho tem como objetivo identificar um melhor tratamento experimental para a extração de ricina da torta de mamona, visando futuros estudos de perda de integridade da ricina, o que garantiria a inocuidade do produto. Para tanto, buscou-se identificar a solução de maior capacidade de extração de proteínas, empregando a metodologia de superfície de resposta. Um delineamento composto central rotacional foi elaborado a fim de verificar o melhor pH e concentração de NaCl para a extração. Dos cinco diferentes valores de pH (4,0; 4,6; 6,0; 7,4; 8,0) e concentração de NaCl (0,0M; 0,3M; 1,0M; 1,7M; 2,0M) utilizados, o tratamento associando fosfato de potássio 0,2M/NaCl 1,7M pH 7,4 foi escolhido como o melhor. A concentração de proteína extraída neste tratamento chegou a valores quatro vezes maiores que o encontrado no de mínima extração de proteína. Pela evidenciação do gel de eletroforese não houve extração preferencial de ricina nos tratamentos testados, entretanto etapas de purificação usando diálise e precipitação com sulfato de amônio, permitiram uma evidenciação melhor das duas cadeias polipeptídicas de ricina.
Castor bean (Ricinus communis L.) is an oilseed crop of high economic value due to the fact of presenting a clearly defined market for the oil extracted from its seeds. Castor cake, which is a residue of oil extraction, is at the moment receiving special attention because of its high protein content. However, among the proteins found in this cake it is observed the presence of ricin, a cytotoxin, which turns this seed dangerous to be used as an alternative protein source for animal feed. The present research has the objective of identifying the best experimental treatment for extraction of ricin from castor cake, with the aim of future studies of loss of ricin integrity, which would ensure the safety of the product. With this aim, it was initiated the search for a buffer of higher capacity of proteins extraction, using the response surface methodology. A central composite design was developed in order to determine the best pH and NaCl concentration for extraction. Of the five different pH values (4.0, 4.6, 6.0, 7.4, 8.0) and NaCl (0.0M, 0.3M, 1.0M, 1.7M, 2.0M) used, the treatment containing 0.2M potassium phosphate / 1.7M NaCl pH 7.4 was chosen as the best. The amount of protein extracted in this treatment reached values four times larger than the minimum found in other treatment studied. The electrophoresis analysis showed that there was no preferential extraction of ricin in the treatments; however purification steps using dialysis and precipitation with ammonium sulfate led to a better resolution of the two polypeptide chains presents in ricin.
RESUMO
V. cholerae non-O1 non-O139 serogroups isolated from clinical and environmental sources in Córdoba, Argentina, were analyzed for the presence and expression of virulence genes. Most of the strains studied contained the genes toxR and hlyA, but lacked ctxA, zot, ace, tcpA and stn. The culture supernatants were tested for hemolytic and cytotoxic activity. The enterotoxic potential of the strains was studied in a rabbit ileal loop assay and their genetic profiles were compared by PFGE. The environmental strains varied in their virulence phenotype and showed no-clonal relationships. The clinical strains were highly enterotoxic, hemolytic, proteolytic and showed indistinguishable PFGE profiles, although they differed in their cytotoxic activity. This is the first description, using cell culture and “in vivo” studies, of the virulence properties of non-O1 non-O139 V. cholerae from Argentina.
En este trabajo se analizó la presencia y expresión de genes de virulencia en V. cholerae no-O1 no-O139 de origen clínico y ambiental, aislados en Córdoba, Argentina. La mayoría de las cepas estudiadas contiene los genes toxR y hlyA, pero no ctxA, zot, ace, tcpA y stn. Se analizó la actividad hemolítica y citotóxica de estas cepas en los sobrenadantes de cultivo, así como su potencial enterotóxico en ensayos de asa ileal ligada de conejo. Además, los aislamientos fueron comparados por sus perfiles genéticos en PFGE. Las cepas del medio ambiente mostraron variación en su fenotipo de virulencia y no mostraron relación clonal. Las cepas clínicas fueron muy enterotóxicas, hemolíticas, proteolíticas y mostraron perfiles indistinguibles de PFGE, aunque mostraron diferencias en su actividad citotóxica. En este trabajo se describen por primera vez, utilizando ensayos de cultivo celular e “in vivo”, propiedades de virulencia de V. cholerae no-O1 no-O139 aislados en Argentina.