Validación de un ensayo automatizado para determinar la actividad de cofactor de ristocetina del factor von Willebrand / Validation of an automated assay to determine activity of ristocetin cofactor of von Willebrand factor / Validação de um teste automatizado para determinar a atividade de cofator de ristocetina do fator von Willebrand

La enfermedad de von Willebrand (EvW) se debe a un defecto, cuali o cuantitativo de la molécula del factor von Willebrand (VWF). Bajos niveles de VWF:Ag sugieren la EvW pero no distinguen los subtipos, por lo cual es necesario determinar también la funcionalidad del VWF para completar el diagnóstico. El método de referencia para estudiar la función del VWF es el ensayo del cofactor de ristocetina (VWF:RCo), basado en la habilidad del VWF para inducir la aglutinación de las plaquetas en presencia de ristocetina. Recientemente se han desarrollado métodos automatizados para determinar la actividad de cofactor de ristocetina. El objetivo fue evaluar el comportamiento del ensayo inmunoturbidimétrico automatizado VWF:RCo con el ensayo de actividad de VWF (VWF:Act) utilizado como screening de la EvW y con el ensayo tradicional de VWF:RCo por agregometría. La precisión intraensayo fue 3,1% y la precisión interensayo evaluada con el control normal fue de 3,2% mientras que con el control patológico se obtuvo un coeficiente de variación de 5,1%. Cuando se compararon los resultados de VWF:Act y VWF:RCo inmunoturbidimétrico en 60 pacientes, el coeficiente de correlación fue 0,96 con un bias -3,5%. En un subgrupo de 30 pacientes se comparó el VWF:Rco determinado por agregación y automatizada, y se obtuvo una correlación de 0,90 con un bias de 18,9%. Los valores de vWRCO obtenidos fueron, con un error total máximo permitido de 15%, estadísticamente comparables con aquellos determinados por el método VWF:Act y los valores de VWF:RCo obtenidos por agregometría en los pacientes estudiados.

Von Willebrand disease (VWD) is caused by a defective qualitative or quantitative von Willebrand factor (VWF) molecule. Low VWF:Ag suggests but does not distinguish VWD subtypes. Therefore, it is also necessary to determine the functionality of VWF to complete the diagnosis. The reference method to study VWF function is the ristocetin cofactor assay (VWF:RCo) based on the VWF ability to induce platelet aggregation in the presence of ristocetin. Recently, automated methods for determining the activity of ristocetin cofactor have been developed. The aim of this study is to evaluate the performance of VWF:RCo automated immunoturbidimetric assay: with VWF activity assay (VWF:Act ) used as a screening of VWD and the traditional VWF:RCo test by aggregometry. Intra-assay precision was 3.1% and interassay precision was: 3.2% in normal control and 5.1% low control: When VWF:Act and immunoturbidimetric VWF:RCo results were compared in 60 patients, the correlation coefficient was 0.96 with a -3.5% bias. In a subset of 30 patients VWF:Rco was compared, determined by aggregation and in an automated manner, yielding a correlation of 0.90 with an 18.9% bias. VWO:Rco values obtained were -with a 15% allowable total error- statistically comparable with those determined by the VWF:Act method, and the VWF:RCo values determined by aggregometry in the patients studied.

A doença de von Willebrand (DvW) ocorre devido a um defeito, qualitativo ou quantitativo da molécula do fator von Willebrand (VWF). Baixos níveis de VWF:Ag sugerem a EvW, mas não distinguem os subtipos, portanto é necessário determinar também a funcionalidade do VWF para completar o diagnóstico. O método de referência para estudar a função do VWF é o teste do cofator de ristocetina (VWF:RCo), baseado na habilidade de VWF para induzir a aglutinação das plaquetas em presença de ristocetina. Recentemente foram desenvolvidos métodos automatizados para determinar a atividade de cofator de ristocetina. O objetivo foi avaliar o comportamento do teste imunoturbidimétrico automatizado VWF:RCo com o teste de atividade de VWF (VWF:Act) utilizado como screening da EvW e com o ensaio tradicional de VWF:RCo por agregometria. A precisão intra-teste foi de 3,1% e a precisão inter-teste avaliada com o controle normal foi de 3,2% ao passo que com o controle patológico foi obtido um coeficiente de variação de 5,1%. Quando foram comparados os resultados de VWF:Act e VWF:RCo imunoturbidimétrico em 60 pacientes, o coeficiente de correlação foi de 0,96 com um Bias -3,5%. Num subgrupo de 30 pacientes se comparou o VWF:Rco determinado por agregação e automatizada, obtendo uma correlação de 0,90 com um bias de 18,9%. Os valores de VWF:Rco obtidos foram, com um erro total máximo permitido de 15%, estatisticamente comparáveis com aqueles determinados pelo método VWF:Act e os valores de VWF:RCo obtidos por agregometria nos pacientes estudados.

Validación de una técnica de actividad de factor von Willebrand que utiliza glicoproteína Ib mutada / Validation of a method based on a mutant glycoprotein Ib for von Willebrand factor activity measure / Validação de uma técnica da atividade do fator de von Willebrand que usa mutante de glicoproteína Ib

La medida de actividad del factor von Willebrand (vWF) es importante para el diagnóstico de la enfermedad de von Willebrand (vWD). El equipo Innovance®vWF Ac (Siemens Healthcare Diagnostics) utiliza un método inmunoturbidimétrico diseñado para coagulómetros Sysmex CA (Siemens). El objetivo del estudio fue desarrollar y validar la metodología del reactivo Innovance®vWF Ac para el coagulómetro ACL TOP 700 (Instrumentation Laboratory, IL) y realizar un estudio comparativo de su desempeño frente a la de la técnica vWF Activity (vWF Act, IL) y a la del cofactor de ristocetina (vWF:RCo) por agregación de transmisión de luz. Se desarrolló, calibró y validó la técnica mediante estudios de verificación de linealidad y precisión total para dos niveles de control. Se midió la actividad del vWF por los métodos Innovance®vWF Ac y vWF Act en 82 muestras consecutivas dentro del rango reportable. Para comparar métodos se utilizó la regresión de Deming. El análisis inicial de los resultados de Innovance®vWF Ac y vWF Act demostró que no eran estadísticamente comparables. Se observó un Bias negativo para Innovance®vWF Ac en muestras con vWF Act>150%. Excluyendo las mismas, se demostró que los resultados de ambas pruebas eran comparables, al igual que los de Innovance®vWF Ac y vWF:RCo en un subgrupo de 27 muestras. La adaptación del método Innovance®vWF Ac en el ACL TOP 700 fue exitosa, presentó linealidad y precisión acorde con los requerimientos de calidad del laboratorio, brindando resultados comparables a los de vWF Act y vWF:RCo en el rango de 5-150%, útil para el diagnóstico de vWD.

Measurement of vonWillebrand factor (vWF) activity is important for the diagnosis of von Willebrand disease (vWD). Innovance®vWF Ac assay was designed to Sysmex CA (Siemens) coagulometer. The aim of the study was to develop and validate a method for Innovance®vWF Ac in the ACL TOP 700 (Instrumentation Laboratory) coagulometer and to compare its performance against vWF Activity assay (Instrumentation Laboratory, vWF Act) and Ristocetin cofactor assay by light transmission aggregation (vWF:RCo). The method was designed, calibrated and validated through verification of linearity and total precision studies at two levels of control plasmas. vWF activity was measured by Innovance®vWF Ac and vWF Act in 82 consecutive samples with vWF Act values within the reportable range. For method comparison, Deming regression was used. The initial analysis of results showed that they were not statistically comparable with a negative Bias with Innovance®vWF Ac in samples with vWF Act>150%. Excluding these samples, Deming regression curve showed that both tests gave statistically comparable results, and also did Innovance®vWF Ac and vWF:RCo in a subset of 27 samples. The adaptation of the Innovance®vWF Ac method on the ACL TOP 700 coagulometer was successful, it met the quality requirements of the laboratory for linearity and accuracy, providing comparable results to vWF Act and vWF:RCo in the of 5-150% range, useful for vWD diagnosis.

Medir a atividade do fator von Willebrand (vWF) é importante para o diagnóstico da doença de von Willebrand (vWD). A equipe Innovance®vWF Ac (Siemens Healthcare Diagnostics) utiliza um método imunoturbidimétrico projetado para coagulômetros Sysmex CA (Siemens). O objetivo do estudo foi desenvolver e validar a metodologia do reagente Innovance®vWF Ac para o coagulômetro ACL TOP 700 (laboratório de instrumentação, IL) e realizar um estudo comparativo do seu desempenho perante a técnica vWF Activity (vWF Act, IL) e a do cofator de ristocetina (vWF:RCo) por agregação de transmissão de luz. A técnica foi projetada, calibrada e validada através de testes de verificação da linearidade e total precisão para dois níveis de controle. Foi mensurada a atividade do vWF pelos métodos Innovance®vWF Ac e vWF Act em 82 amostras consecutivas dentro do intervalo reportável. Para comparar métodos foi utilizada a regressão de Deming. A análise inicial dos resultados da Innovance®vWF Ac e vWF Act demonstrou que eles não eram estatisticamente comparáveis. Observou-se um viés negativo para Innovance®vWF Ac em amostras com vWF Act> 150%. Excluindo as mesmas, foi demonstrado que os resultados de ambos os testes eram comparáveis, do mesmo modo que os Innovance®vWF Ac e vWF:RCo num subgrupo de 27 amostras. A adaptação do método Innovance®vWF Ac no ACL TOP 700 foi bem-sucedida, apresentou linearidade e precisão conforme os requisitos de qualidade do laboratório, fornecendo resultados comparáveis aos vWF Act e vWF:RCo na faixa de 5-150%, útil para o diagnóstico da vWD.