RESUMO
Abstract Background: Cryopreservation preserves cellular viability under low temperatures, resulting in diminished intracellular enzymatic activity and reduced cellular metabolism that ultimately allows preserving genetic material for indefinite periods of time. Embryos submitted to cryopreservation suffer from considerable morphological and functional damage, resulting in reduced survival and development rates. Objective: To evaluate pregnancy and delivery rates of in vitro-produced (IVP) Nellore (Bos indicus) embryos after vitrification under field conditions. Methods: The IVP embryos at blastocyst (Bl) and expanded blastocyst (Bx) were transferred fresh (n= 137) or after vitrification (n= 127). Results: Pregnancy rates at 35 d for fresh embryos were lower in Bl (41.6) than in Bx (60.9) (p<0.05). After vitrification, pregnancy rates were similar at 35 d between Bl (38.0) and Bx (47.6) (p>0.05). Pregnancy loss at 60 d were similar (p>0.05) for both fresh (Bl: 3.1 and Bx: 4.8) and vitrified embryos (Bl: 1.9 and Bx: 4.7). Delivery rates were similar between groups (p>0.05). Conclusion: Both pregnancy and delivery rates of Bos indicus IVP embryos vitrified under field conditions are indistinguishable from fresh embryos.
Resumen Antecedentes: La criopreservación se caracteriza por el mantenimiento de la viabilidad celular a bajas temperaturas, resultando en reducido metabolismo y actividad enzimática intracelular, lo que permite la preservación del material genético por períodos de tiempo indefinidos. Los embriones sometidos a ésta técnica sufren daños morfológicos y funcionales considerables, dando como resultado una sobrevivencia y tasas de desarrollo reducidas. Objetivo: Evaluar la tasa de preñez a partir de embriones Nelore (Bos indicus) producidos in vitro (IVP) después de la vitrificación bajo condiciones de campo. Métodos: Embriones IVP en los estadios de blastocisto (Bl) y blastocisto expandido (Bx) se transfirieron en fresco (n= 137) o después de la vitrificación (n= 127). Resultados: La tasa de preñez a los 35 d fue menor para los embriones transferidos en fresco en fase Bl (41,6) en relación con los Bx (60,9) (p<0,05). Después de la vitrificación, las tasas de preñez a los 35 d fueron similares entre Bl (38,0) y Bx (47,6) (p>0,05). Las pérdidas de preñez a los 60 d fueron similares (p>0,05) tanto para embriones en fresco en Bl (3,1) y Bx (4,8) como para los vitrificados (Bl: 1,9 y Bx: 4,7). Las tasas de nacimiento fueron similares entre los grupos (p>0,05). Conclusión: Las tasas de preñez y nacimiento de embriones IVP vitrificados de Nelore (Bos indicus) bajo condiciones de campo son semejantes a las de embriones en fresco.
Resumo Antecedentes: A criopreservação é caracterizada pela manutenção da viabilidade celular em baixas temperaturas, resultando em atividade enzimática intracelular e metabolismo celular reduzido, que permite a preservação do material genético por períodos indefinidos de tempo. Embriões submetidos à criopreservação sofrem danos morfológicos e funcionais consideráveis, resultando em sobrevivência reduzida e menores taxas de desenvolvimento. Objetivo: Avaliar a taxa de prenhez a partir de embriões Nelore (Bos indicus) produzidos in vitro (IVP) após a vitrificação sob condições de campo. Métodos: Embriões IVP nos estádios de blastocisto (Bl) e blastocisto expandido (Bx) foram transferidos a fresco (n= 137) ou depois da vitrificação (n= 127). Resultados: A taxa de prenhez aos 35 d foi menor para os embriões transferidos a fresco na fase de Bl (41,6), em relação aos Bx (60,9) (p<0,05). Apos a vitrificação, as taxas de prenhez foram semelhantes aos 35 d entre Bl (38,0) e Bx (47,6) (p>0,05). As perdas de prenhez aos 60 d foram semelhantes (p>0,05) tanto para embriões a fresco nos estádios de Bl (3,1) e Bx (4,8), e vitrificados em Bl (1,9) e Bx (4,7). As taxas de nascimentos foram semelhantes entre os grupos (p>0,05). Conclusão: As taxas de prenhez e nascimentos dos embriões IVP vitrificados de Nelore (Bos indicus) sob condições de campo é semelhante àquela dos embriões a fresco.
RESUMO
The aim of the present study was to evaluate the intracytoplasmic lipid content, development and cryotolerance of in vitro-produced bovine embryos treated with different concentrations of forskolin before vitrification. Embryos were produced from abattoir-derived ovaries and allocated into four groups. In the treatment groups, forskolin was added to the in vitro culture medium on Day 6 and incubated for 24 hours in one of the following concentrations: 2.5µM (Forsk 2.5 group), 5.0µM (Forsk 5.0 group) or 10.0µM (Forsk 10.0 group). Embryos from the control group were cultured without forskolin. On Day 7 of culture, the expanded blastocysts were stained with the lipophilic dye Sudan Black B for determination of the intracytoplasmic lipid content or were cryopreserved via the Vitri-Ingá® procedure. Although there were no significant differences (P>0.05) in the blastocyst rates between the Control group (44.9%) and the other treatments, the embryo production was lower (P<0.05) in Forsk 10.0 group (38.8%) compared to Forsk 2.5 (50.5%) and Forsk 5.0 (54.7%) groups. The intracytoplasmic lipid content (expressed in arbitrary units of pixels) in blastocysts from the Control group (1.00±0.03) was similar (P>0.05) to that found in Forsk 2.5 (0.92±0.03) and Forsk 10.0 groups (1.06±0.03) groups; however the lipid accumulation in blastocysts from Forsk 5.0 group (0.82±0.04) was lower than in the Control group (P<0.05). Based on these results, Forsk 5.0 treatment was tested for cryotolerance and it was observed that the blastocoel re-expansion rate evaluated 24 hours after warming was greater (P<0.05) in Forsk 5.0 group (72.2%) compared to the Control group (46.2%). In conclusion, pre-treatment with forskolin at a concentration of 5.0 µM for 24 hours before vitrification is effective in reducing the intracytoplasmic lipid content and, consequently, improves cryotolerance of IVP bovine embryos.(AU)
Os embriões foram produzidos a partir de ovários obtidos em abatedouro e foram alocados em quatro grupos experimentais. Nos grupos tratados, o forskolin foi adicionado ao meio de cultivo in vitro no dia 6 do cultivo e os embriões foram incubados durante 24 horas com uma das seguintes concentrações: 2,5µM (grupo Forsk 2,5), 5,0µM (grupo Forsk 5,0) ou 10,0µM (grupo Forsk 10,0). Os embriões do grupo controle foram cultivados na ausência de forskolin. No dia 7 do cultivo, os blastocistos expandidos foram corados com o corante lipofílico Sudan Black B para a determinação do teor de lípidos intracitoplasmáticos ou foram criopreservados através do protocolo Vitri-Ingá®. Não foi observada diferença significativa (P>0,05) na taxa de produção de blastocistos entre o grupo Controle (44,9%) e os demais tratamentos, todavia observou-se menor produção de embriões (P<0,05) no grupo Forsk 10,0 (38,8%) em comparação com os grupos Forsk 2,5 (50,5%) e Forsk 5,0 (54,7%). A quantidade de lipídeos intracitoplasmáticos do grupo Controle (1,00±0,03) foi semelhante (P>0,05) a dos grupos Forsk 2,5 (0,92±0,03) e Forsk 10,0 (1,06±0,03); no entanto, o acúmulo de lípidos nos blastocistos do grupo Forsk 5.0 (0,82 ± 0,04) foi menor do que no grupo controle (P<0,05). A partir destes resultados, o grupo Forsk 5,0 foi testado quanto à criotolerância e foi observado que a taxa de re-expansão da blastocele 24 horas após o aquecimento foi maior (P<0,05) no grupo Forsk 5,0 (72,2%) quando comparado ao grupo Controle (46,2%). Em conclusão, o pré-tratamento com forskolin na concentração de 5,0 µM durante 24 horas antes da vitrificação foi eficiente para promover a redução da quantidade de lipídeos intracitoplasmáticos e, consequentemente, melhorou a criotolerância de embriões bovinos produzidos in vitro.(AU)