Well-of-the-well (WOW) versus polyester mesh (PM): a comparison of single-embryo culture systems in bovines

Background: Mexico is innovating in the livestock industry through in vitro generation of bovine embryos with technologies such as well-of-the-well (WOW) and polyester mesh (PM) single-embryo culture systems. These techniques allow to maintain embryos in separate areas of a shared culture medium. Objective: To compare the quantity and quality of bovine embryos produced in WOW and PM culture systems versus the conventional (CG) culture system. Methods: In total, 345 embryos fertilized in vitro were evaluated for blastocyst yield in the three culture systems. To count blastocyst cell numbers, 69 embryos in each system were differentially stained for trophectoderm (TE), inner cell mass (ICM), and apoptotic cells. A qPCR gene expression analysis was performed for embryos in all three systems. Results: The WOW, PM and CG systems developed similar amount of blastocysts (41, 35 and 36%, respectively; p>0.05). Blastocysts in all three systems showed adequate amounts of ICM and apoptotic cells. Blastocysts in the PM system showed a greater number of TE cells [63.7 versus 58.6% in the CG system (p0.05). The ATP5B expression was higher in WOW than in PM (p0.05). The TJP3 expression was higher in PM than in WOW and CG (p<0.05). Expression of ID2 and CLDN4 was higher in WOW than in PM and CG (p<0.05). The biplot graphic from Principal Component Analysis (PCA) revealed that CG was located near degenerated embryos, whereas PM was located near arrested embryos, larger ICM and TE, and TJP3 expression. The WOW was located toward blastocysts, morulae, and expression of CLDN4, ID2 and GNAS. Conclusion: Compared with CG, both the PM and WOW systems are good options for culturing single embryos in the bovine model. Moreover, the PCA results suggest that embryos developed in the WOW system have greater capacity for generating blastocysts with increased ability to form TE and ICM layers, which might improve implantation.

Antecedentes: México está innovando en la industria ganadera a través de la generación in vitro de embriones bovinos con tecnologías de cultivo individual como lo son Pozo dentro de Pozo (WOW) y Malla de Poliéster (PM). Estos mantienen los embriones en áreas separadas mientras comparten un mismo medio de cultivo celular. Objetivo: Comparar la cantidad y calidad de embriones bovinos producidos en los sistemas WOW y PM contra el sistema de cultivo convencional en grupo (CG). Métodos: En total se evaluaron 345 embriones fertilizados in vitro para determinar la producción de blastocistos generados en los tres sistemas. Para contar el número de células por blastocisto, 69 embriones en cada sistema se tiñeron diferencialmente para trofectodermo (TE), masa celular interna (ICM) y células apoptóticas. Se realizó un análisis de expresión génica por qPCR de los embriones obtenidos en los tres sistemas. Resultados: Los sistemas WOW, PM y CG desarrollaron similares cantidades de blastocistos (41, 35 y 36%, respectivamente; p>0,05). Los blastocistos en los tres sistemas mostraron cantidades adecuadas de ICM y células apoptóticas. Los blastocistos en el sistema PM mostraron un mayor número de células TE [63,7% versus 58,6% en el sistema CG (p0,05). La expresión de ATP5B fue mayor en WOW que en PM (p<0,05), pero similar a CG (p<0,05). La expresión de TJP3 fue mayor en PM que en WOW y CG (p<0,05). La expresión de ID2 y CLDN4 fue mayor en WOW que en PM y CG (p<0,05). El gráfico de biplot del análisis de componentes principales reveló que CG se encontró cerca de embriones degenerados, mientras que PM se encontró cerca de embriones en arresto, ICM, TE, y TJP3. El WOW se localizó hacia blastocistos, mórulas y la expresión de CLDN4, ID2 y GNAS. Conclusión: En el modelo bovino los sistemas PM y WOW son buenas opciones para cultivar embriones individuales, ya que se obtienen resultados muy similares a los obtenidos con el sistema CG. Además, los resultados de PCA sugieren que los embriones individuales desarrollados en el sistema WOW generan blastocistos con mayor capacidad de formar TE e ICM, lo que podría mejorar su éxito de implantación.

Antecedentes: O México está inovando na indústria pecuária por meio da geração in vitro de embriões bovinos com tecnologias de cultura de embriões individuais, bem como em poço (WOW) e malha de poliéster (PM). Estes mantêm os embriões em áreas separadas, enquanto compartilham o mesmo meio de cultura de células. Objetivo: Comparar a quantidade e a qualidade de embriões bovinos produzidos nos sistemas de cultura WOW e PM com o sistema convencional de cultura em grupo (CG). Métodos: No total, 345 embriões fertilizados in vitro foram avaliados para determinar a produção de blastocistos gerados nos três sistemas. O número de células por blatocisto foi contado, 69 embriões em cada sistema foram diferencialmente corados para trofectoderme (TE), massa celular interna (ICM) e células apoptóticas. Uma análise de expressão gênica qPCR foi realizada para os embriões obtidos nos três sistemas. Resultados: Os sistemas WOW, PM e CG desenvolveram quantidades semelhantes de blastocistos (41, 35 e 36%, respectivamente; p>0,05). Os blastocistos nos três sistemas mostraram quantidades adequadas de ICM e células apoptóticas. Os blastocistos no sistema PM mostraram um número maior de células TE [63,7 versus 58,6% no sistema CG (p0,05). A expressão de ATP5B foi maior no WOW do que no PM (p<0,05), mas semelhante ao GC (p<0,05). A expressão de TJP3 foi maior no PM do que no WOW e CG (p<0,05). A expressão de ID2 e CLDN4 foi maior no WOW do que no PM e CG (p<0,05). O gráfico biplot da análise de componentes principais revelou que CG foi encontrado próximo a embriões degenerados, enquanto PM foi encontrado próximo a embriões presos, ICM, TE e TJP3. WOW foi encontrado para ter blastocistos, mórulas e a expressão de CLDN4, ID2 e GNAS. Conclusão: Em comparação com o CG, os sistemas PM e WOW são boas opções para a cultura de embriões individuais no modelo bovino. Além disso, os resultados da PCA sugerem que embriões individuais desenvolvidos no sistema WOW têm maior capacidade de desenvolver blastocistos com maior capacidade de formar as camadas TE e ICM, o que poderia melhorar seu sucesso de implantação.

Use and response to phosphorus by potato clones in two cropping systems / Utilização e resposta ao fósforo por clones de batata em dois sistemas de cultivo

The selection of potato plants (Solanum tuberosum L.) that are efficient in the use of phosphorus (P) plays an important role in increasing crop productivity, reducing the cost of production due to the high price of phosphate fertilizers, as well as reducing the pollution of the environment due to the better use of the applied fertilizers. The objective of this work was to compare the method of selection of potato clones for the efficiency of use and response to P between in vitro and off - soil systems with the use of sand as substrate. To that end, potato clones SMIC 148-A, Dakota Rose, SMINIA 793101-3, SMIB 106-7, SMIF 212-3, SMIJ 319-1 and P 150 were cultivated at low and high levels of P in the culture systems in vitro (1,935 and 19,346 mg P L-1) and off-soil (2.32 and 23.2 mg P L-1). The selection of potato clones using only as a criterion the accumulation of P under low nutrient level is not adequate, both in off-soil and in vitro cultivation. Clones selected as being more efficient in the use of P in in vitro cultivation do not prove to be necessarily more efficient in off-soil cultivation. No clone remains in the same classification group regarding the efficiency of use and response to P, based on the production of dry mass, in the two cropping systems.

A seleção de plantas de batata (Solanum tuberosum L.) que são eficientes no uso de fósforo (P) desempenha um papel importante no aumento da produtividade das culturas. reduzindo o custo de produção devido ao alto preço dos fertilizantes fosfatados. além de reduzir a poluição do meio ambiente devido ao melhor uso dos fertilizantes aplicados. O objetivo deste trabalho foi comparar o método de seleção de clones de batata quanto à eficiência de uso e resposta ao P entre sistemas in vitro e fora do solo com o uso de areia como substrato. Para o efeito. os clones de batata SMIC 148-A. Dakota Rose. SMINIA 793101-3. SMIB 106-7. SMIF 212-3. SMIJ 319-1 e P 150 foram cultivados a baixos e altos níveis de P nos sistemas de cultivo in vitro (1.935 e 19.346 mg P L-1) e fora do solo (2.32 e 23.2 mg P L-1). A seleção de clones de batata utilizando apenas como critério o acúmulo de P em baixo nível de nutrientes não é adequada. tanto no cultivo fora do solo quanto no in vitro. Clones selecionados como mais eficientes no uso de P em cultivo in vitro não se mostraram necessariamente mais eficientes no cultivo fora do solo. Nenhum clone permanece no mesmo grupo de classificação quanto à eficiência de uso e resposta ao P. baseado na produção de massa seca nos dois sistemas de cultivo.

Towards the micropropagation of Euphorbia cyathophora Murray: a wild plant species with medicinal and ornamental potential / Micropropagação de Euphorbia cyathophora Murray: uma especie de planta selvagem com potencial medicinal e ornamental

ABSTRACT: Euphorbia cyathophora Murray is a plant species with medicinal and ornamental potential but whose in vitro propagation is unknown. Two experiments were performed to know 1) the effect of light (WL) at 25±2 °C and 20 μmol m-2 s-1 luminous intensity, or darkness at 20±2 °C, for the first 20 days and subsequent placement in light (DKL) as previously described, and 2) the best combination of plant growth regulators: benzyl amino purine (BAP), kynetin (KIN), 2-isopentenyl adenine (2iP) and thidiazuron (TDZ) in combination with naphthaleneacetic acid (NAA) and the effect of both light conditions. The DKL treatment did not promote the growth of leaves, cotyledons, or plantlet height; in contrast, WL produced a more developed root system with early appearance of tertiary roots. In regards to the interaction of plant regulators and light effect, only the treatment with 1 mg BAP L-1 and 0.1 mg NAA L-1 generated shoots in both light conditions (DKL and WL). Darkness (DKL) generated more indirect greatest morphogenic responses (callus formation).

RESUMO: Euphorbia cyathophora Murray é uma espécie vegetal com potencial medicinal e ornamental, mas cuja propagação in vitro é desconhecida. Dois experimentos foram realizados para conhecer 1) o efeito da luz (WL) a 25±2 °C e 20 μmol m-2 s-1 intensidade luminosa, ou escuridão a 20±2 °C, nos primeiros 20 dias e posterior colocação em luz (DKL) como descrito anteriormente, e 2) a melhor combinação de reguladores de crescimento vegetal: benzil amina purina (BAP), kynetina (KIN), 2-isopentenil adenina (2iP) e thidiazuron (TDZ) em combinação com ácido naftalenoacético (ANA) e o efeito de ambas as condições de luz. O tratamento com DKL não promoveu o crescimento de folhas, cotilédones ou altura das plântulas. Em contraste, a WL produziu um sistema radicular mais desenvolvido com o aparecimento precoce de raízes terciárias. Com relação à interação dos reguladores vegetais e efeito luminoso, apenas o tratamento com 1 mg de BAP L-1 e 0,1 mg de NAA L-1 gerou brotações em ambas as condições de luz (DKL e WL). Escuridão (DKL) gerou mais respostas morfogênicas mais diretas (formação de calo).

Effects of glutathione supplementation and carbon source duringsomatic embryogenesis of Acca sellowiana (O. Berg) Burret(Myrtaceae) / Efeitos da suplementação de glutationa e fontes de carbono durante a embriogênesesomática de Acca sellowiana (O. Berg) Burret (Myrtaceae)

The present study intended to investigate the effects of different glutathione (GSH) levels (0, 0.1, 0.5 and 1 mM) on the somatic embryogenesis (SE) induction of Acca sellowiana. Besides, we evaluated the effect of different carbon sources (sucrose and maltose) on the somatic embryos conversion. GSH-supplemented treatments resulted in improved SE induction rates (~70%) as compared to the control GSH-free (~35%) after 50 days of culture. The total number of somatic embryos obtained did not differ between treatments, but significant differences were observed for the embryonic stages after 80 days of culture. After 80 days of culture, 0.5 and 1 mM GSH-supplemented treatments showed the largest amount of torpedo-staged somatic embryos. In contrast, treatments supplemented with 0 and 0.1 mM GSH showed equal amounts of somatic embryos at all embryonic stages. These results indicate that GSH accelerates the SE induction process and increases the synchrony of the somatic embryo formation of A. sellowiana. The use of maltose for the somatic embryos conversion, as compared to sucrose, did not influence the conversion rate of normal chlorophyllous somatic embryos, but increased the formation of normal achlorophyllous somatic plantlets. This finding can be attributed to the rapid hydrolysis of sucrose, contributing to an enhanced chlorophyll synthesis.

O presente estudo teve como objetivo investigar o efeito de diferentes níveis de glutationa (GSH) (0, 0,1, 0,5 e 1 mM) na indução da embriogênese somática (ES) de Acca sellowiana. Além disso, avaliamos o efeito de diferentes fontes de carbono (sacarose e maltose) na conversão de embriões somáticos em plântulas. Os tratamentos suplementados com GSH resultaram em melhores taxas de indução de ES (~70%) em comparação com o controle isento de GSH (~35%) após 50 dias de cultivo. Após 80 dias as taxas de indução foram iguais. O número total de embriões somáticos obtidos não diferiu entre os tratamentos, mas diferenças expressivas foram observadas nos estágios embrionários. No dia 80 em cultura, os tratamentos suplementados com 0,5 e 1 mM de GSH mostraram a maior porção de embriões somáticos no estádio torpedo. Diferentemente, tratamentos suplementados com 0 e 0,1 mM de GSH mostraram quantidades iguais de embriões somáticos em todos os estágios embrionários. Estes resultados indicam que o GSH acelera o processo de indução do ES e aumenta a sincronia na formação de embriões somáticos de A. sellowiana. O uso de maltose no meio de cultura de conversão de embriões somáticos, em comparação com a sacarose, não influenciou a taxa de conversão de embriões somáticos clorofílados normais, mas aumentou a formação de plântulas aclorofiladas normais. Esse resultado pode ser atribuído à rápida hidrólise da sacarose, apresentando translocação de plantas mais eficiente e aumento da osmolaridade do meio de cultura, contribuindo para uma síntese melhorada de clorofila.

Carbohydrates on the growth of Cattleya schilleriana Reichb.f. seedlings (Orchidaceae) / Carboidratos no crescimento de plântulas de Cattleya schilleriana Reichb.f. (Orchidaceae)

ABSTRACT: The aim of the present study was to evaluate the effects of carbohydrate supplementation on the propagation of the orchid Cattleya schilleriana. The 120-d-old seedlings were subcultured in fructose-, glucose-, or sucrose-supplemented (0, 15, 30, and 45g L-1) ½ MS culture medium (half-strength macronutrient concentrations), using a completely random design with four repetitions per treatment. After 120d of treatment, root number and length, leaf number and length, and fresh weight were evaluated, and seedling survival was evaluated after 75d of acclimatization in a greenhouse. The in vitro growth data were submitted to regression analysis, whereas the percentage survival data were analyzed using ANOVA and Tukey's test. Both in vitro growth and ex vitro survival were lowest when the plantlets were grown in the absence of a carbohydrate source and highest (>90% survival) when supplemented with glucose. According to our findings, the addition of either glucose (30g L-1) or sucrose (30g L-1) is recommended for mass propagation of C. schilleriana.

RESUMO: O objetivo deste estudo foi avaliar a adição de doses de carboidratos em meio de cultura ½ MS para a propagação da orquídea Cattleya schilleriana. Plântulas com 120 dias após semeadura foram recultivadas em 12 tratamentos, onde foram investigadas a adição de diferentes doses de frutose, glicose e sacarose (0, 15, 30 e 45g L-1). O delineamento utilizado foi inteiramente casualizado com quatro repetições por tratamento. Após 120 dias nos tratamentos, foram mensurados o número de raízes, comprimento da maior raiz, número de folhas, comprimento da maior folha e massa fresca total. Depois as plântulas foram aclimatizadas em casa de vegetação e avaliada a taxa de sobrevivência após 75 dias. Os dados obtidos foram submetidos ao teste de Tukey a 5% de probabilidade e ajustadas curvas de regressão. A ausência de carboidrato reduziu o crescimento das plântulas entre todas as características avaliadas in vitro e ex vitro. As doses de glicose promoveram maior eficiência para o crescimento in vitro e sobrevivência acima de 90% após a aclimatização. Assim, a adição de glicose (30g L-1) ou sacarose (30g L-1) são recomendadas para a propagação massal de C. schilleriana.

Germination and gametophyte development of Cyathea corcovadensis (Raddi) Domin (Cyatheaceae) from spores stored at low temperatures / Germinação e desenvolvimento gametofítico de Cyathea corcovadensis (Raddi) Domin (Cyatheaceae) com esporos armazenados em baixas temperaturas

The tree fern Cyathea corcovadensis (Raddi) Domin is an endangered species in the state of Rio Grande do Sul, Brazil. It currently occurs only in the northern segment of the coastal region. Spore storage would help in conservation programs since it maintains genetic variability and provides material for in vitro cultures. Current study evaluates the effect of low temperatures combined to different spore storage times on the germination and initial gametophyte development of C. corcovadensis. Spores were divided into two groups: spores of the first group were sowed immediately in Meyer culture medium with nystatin, at pH 4.0, while spores of the second group were stored at 7, -20 and -196°C during 60, 120, 180, and 365 days and then sowed in the same medium. Spore storage at 7 and -196°C for 365 days not only provided higher germination percentages than those reported for recently-collected spores but also stimulated gametophytic development. The latter was demonstrated by the higher percentages of laminar gametophytes in these treatments. The possibility of storing spores provides material for in vitro experiments, which is of special interest for C. corcovadensis due to its ornamental potential and conservation status.

A samambaia arborescente Cyathea corcovadensis (Raddi) Domin está em perigo de extinção no Estado do Rio Grande do Sul, Brasil, ocorrendo somente no norte da região costeira. O armazenamento de esporos pode auxiliar programas de conservação, uma vez que oferece a possibilidade de manutenção da variabilidade genética e fornece material para culturas in vitro. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito de temperaturas baixas combinadas com diferentes tempos de armazenamento de esporos sobre a germinação e o desenvolvimento inicial de gametófitos de C. corcovadensis. Os esporos foram divididos em dois grupos: os do primeiro grupo foram semeados imediatamente em meio de cultura Meyer com nistatina, com pH 4,0 e os do segundo grupo foram armazenados a 7, -20 e -196°C durante 60, 120, 180 e 365 dias e então semeados no meio supra mencionado. O armazenamento de esporos a 7 e -196°C durante 365 dias propiciou porcentagens de germinação superiores àquelas observadas para esporos recém coletados e também estimulou o desenvolvimento gametofítico, o que foi demonstrado pelos elevados valores de porcentagem de gametófitos laminares observados nestes tratamentos. A possibilidade de armazenar esporos oferece material para experimentos in vitro, o que é de especial interesse para C. corcovadensis, considerando seu potencial ornamental e estado de conservação.

Morfologia e viabilidade de grãos de pólen de acessos silvestres de abacaxi / Morphology and viability of pollen grains from wild varieties of pineapple

O objetivo do trabalho foi avaliar a viabilidade de grãos de pólen de acessos silvestres de abacaxi mediante a percentagem de germinação in vitro, crescimento do tubo polínico em duas temperaturas de incubação e uso de carmim acético. Além disso, o trabalho busca reconhecer os padrões da morfologia polínica de algumas variedades de abacaxi. Foram utilizadas amostras de pólen coletadas de seis acessos de abacaxi: Silvestre-25, I-26/803 (Ananas macrodontes), Igor (A. comosus var. erectifolius), Ananás Santo Amaro, FRF-22 e FRF-32 (A. comosus var. bracteatus). Os grãos de pólen foram inoculados em meio de cultura contendo 10 por cento de sacarose, 0,01 por cento H3BO3, 0,01 por cento KNO3, 0,03 por cento Ca(NO3)2.4H2O, solidificado com 1 por cento de ágar e pH ajustado para 6,5. Foram testadas as temperaturas de incubação de 25°C e 30°C. A viabilidade do pólen foi avaliada pela coloração com carmim acético a 2 por cento. Todas as variedades de A. comosus apresentaram grãos de pólen de tamanho médio, simetria radial, âmbito ovalado a esferoidal, 2-porados, subprolatos, exina eutectada, reticulada, heterobrocada, lumens variando de arredondados a poligonais, sem granulações, com exceção dos dois acessos de A. macrodontes que apresentaram tamanho grande. Melhores taxas de germinação foram obtidas para A. macrodontes em comparação com o erectifolius e bracteatus. A maioria dos acessos apresentou viabilidade com carmim acético acima de 76 por cento.

The aim of this research was to evaluate the pollen grains viability from accessions of wild pineapple using in vitro pollen germination and the growth of the polinic tube in two different temperatures and acetic carmine. In addition, the study aimed to recognize the pattern of pollen morphology of some pineapple varieties. Samples from six pineapple's accessions: Silvestre-25, I-26/803 (Ananas macrodontes), Igor (A. comosus var. erectifolius), Ananás Santo Amaro, FRF-22 and FRF-32 (A. comosus var. bracteatus) were used. The pollen grains were inoculated onto medium culture containing 10 percent of sucrose, 0.01 percent H3BO3, 0.01 percent KNO3, 0.03 percent Ca(NO3)2.4H2O, solidified with 1 percent agar and pH adjusted to 6.5. Two incubation temperatures, 25°C e 30°C were evaluated. Pollen viability was evaluated by staining with 2 percent acetic carmine. All varieties of A. comosus showed pollen grains of medium size, radial symmetry, oval to spheroidal, ambit 2-porate, subprolate, exine eutectic, reticulate, heterobrochate, lumens ranging from polygonal to rounded, grain-free, except for two accessions of A. macrodontes that showed big size. The best germination rates were obtained for A. macrodontes when compared to erectifolius and bracteatus. The majority of accessions presented pollen viability higher than 76 percent using the acetic carmine technique.

Agentes osmóticos e temperatura na conservação in vitro de sempre-viva / Osmotic agents and temperature on in vitro conservation of sempre-viva

A conservação in vitro é uma estratégia de conservação ex situ que garante a manutenção da integridade genética e biológica das espécies. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito de agentes osmóticos e temperatura na conservação in vitro de Syngonanthus mucugensis Giul. subsp. mucugensis. Os brotos foram inoculados em meio de cultura MS ½ contendo 7g L-1 de ágar e suplementado com 60g L-1 de sacarose, e com as concentrações de sacarose 15, 30 e 45g L-1 combinados com 0 e 15g L-1 de sorbitol ou manitol. As culturas foram mantidas em duas temperaturas (18 e 25°C). A porcentagem de sobrevivência das plantas foi avaliada mensalmente e ao final de 180 dias foram analisados o comprimento da parte aérea e da raiz, a porcentagem de folhas verdes, a porcentagem de explantes com brotos, o número de brotos por explante e o comprimento dos brotos. Os agentes osmóticos promoveram um decréscimo no crescimento das plantas, no entanto reduziram a sua viabilidade. Os resultados observados nos experimentos mantidos a 18°C foram significativamente superiores aos encontrados a 25°, para todas as variáveis analisadas. A conservação de S. mucugensis subsp. mucugensis pode ser feita à 18°C em meio de cultura MS ½ contendo 15g L-1 de sacarose, por até 180 dias, sem subcultivo.

The in vitro conservation is an ex situ conservation strategy that ensures the maintenance of genetic and biological integrity of species. The present study evaluated the effects of, osmotic agents and different temperature regimes on the in vitro conservation of Syngonanthus mucugensis Giul. subsp. mucugensis. The shoots were inoculated into half salt strength Murashige and Skoog culture medium (MS ½) containing 7g L-1 of agar. The culture medium was supplemented with 60gL-1 sucrose and with the sucrose concentrations 15, 30 and 45g L-1 combined with 0 and 15g L-1 of sorbytol or mannitol. Two different temperatures were used in these experiments (18 and 25°C). The percentage of plant survival was evaluated monthly and at 180 days were analyzed length of shoot and root, the percentage of green leaves, the percentage of explants with shoots and number of shoots per explants and shoot length. The addition of osmotic agents resulted in decreased growth of the plants and therefore reduced their viability. The averages observed in the experiments undertaken at 18°C were significantly superior to those observed at 25°C for all of the variables analyzed. S. mucugensis subsp. mucugensis can be cultured at 18°C in MS½ culture medium containing 15g L-1 of sucrose, for up to 180 days, without subculturing.

Anatomical and histochemical aspects of zigotic embryo and leaves in Coqueiro Anão / Aspectos anatômicos e histoquímicos de embrião zigótico e folhas em Coqueiro Anão

The paper provides information about histochemical staining reactions in leaves and embryos of 'Coqueiro Anão' (Cocos nucifera). It was compared in vitro coconut and autotrophic palm leaves. Reactions for insoluble polysaccharides and acidic compounds, protein, extractable lipids, lignin and other classes of compounds were tested using histochemical tests. None sample gave positive reaction for lignin and phenolic compounds. All the samples gave positive reaction for protein, starch and insoluble polysaccharides while acidic compounds were positive only in in vitro leaves. Both in vitro and autotrophic leaves gave positive reaction for lipids showing presence of cuticle even in in vitro leaves. Only autotrophic palm leaves showed idioblasts containing calcium oxalate crystals.

Este trabalho fornece informações sobre resultados de testes histoquímicos em folhas e embriões zigóticos de 'coqueiro anão' (Cocos nucifera). Foram comparadas folhas de palmeiras de cultura in vitro e autotróficas. Reações para polissacarídeos insolúveis e compostos acídicos, proteínas, lipídios, lignina e outras classes de compostos foram testadas por meio de testes histoquímicos. Nenhuma amostra foi positiva para lignina e compostos fenólicos. Todas as amostras foram positivas para proteína, amido e polissacarídeos insolúveis, enquanto compostos acídicos foram observados apenas em folhas cultivadas in vitro. Amostras de folhas in vitro e autotróficas apresentaram reação positiva para lipídios, demonstrando a presença de cutícula mesmo em plântulas in vitro. Somente folhas de palmeiras autotróficas apresentaram ideoblastos contendo cristais de oxalato de cálcio.

Cultivo inicial in vitro de gemas axilares de Ananas comosus (L.) Merr., em meio líquido/sólido, na presença/ausência de luz / In nitial in vitro culture of axillary buds of Ananas comosus (L.) Merr. in liquid/semi-solid culture medium, in the presence/absence of light

A capacidade regenerativa de gemas axilares de abacaxizeiro cv. Pérola (Ananas comosus (L.) Merr.) foi avaliada em meio de cultivo líquido e gelificado, na presença e ausência de luz, com o objetivo de produzir material para subsequentes fases da micropropagação. Os explantes foram estabelecidos, por 60 dias, em meio MS acrescido de 0,63 μM de ANA e 2,5 μM de BAP. O delineamento experimental foi inteiramente casualizado, constituído com quatro tratamentos (meio líquido com e sem ponte de papel de filtro e meio gelificado com ágar a 6,0 g L-1 e com Phytagel® a 3,0 g L-1), com quatro repetições e cinco explantes por repetição. Diferentes volumes de meio líquido (2,5 mL; 5,0 mL e 10,0 mL) também foram avaliados, usando-se quatro repetições por volume de meio de cultura. Maior número de brotos foi obtido na presença de luz, em meio líquido sem ponte de papel de filtro, onde 80 por cento dos explantes se diferenciaram em brotos. Na ausência de luz, 68,8 por cento a 87,5 por cento dos explantes não regeneraram brotos. Explantes cultivados em volumes de 5,0 mL ou 2,5 mL de meio MS líquido, acrescido de 0,63 μM de ANA e 2,5 μM de BAP, na presença de luz, constitui um protocolo adequado para cultivo inicial de gemas axilares e regeneração de brotos de abacaxizeiro.

The regenerative capacity of buds from lateral sprouts of the pineapple cv. Pérola (Ananas comosus (L.) Merr.) was evaluated in liquid and semi-solid medium, under light and dark conditions, with the objective of producing materials for subsequent phase of micropropagation. The explants were established for 60 days in basal MS medium, supplemented with 0.63 μM NAA and 2.5 μM BAP. The statistical design was completely randomized with four treatments (liquid medium with and without filter paper bridge, and semi-solid medium gellified with agar and phytagel®), four repetitions and five explants per experimental unit. Different volumes of liquid medium (2.5 mL, 5.0 mL, and 10.0 mL) were also evaluated in four replications per treatment. More buds were obtained in liquid medium without filter paper bridge, where 80.0 percent of explants differentiated new shoots. In treatments cultivated in the dark, 68.8 percent to 87.5 percent of the explants did not regenerate new shoots. Explants cultivated in volumes of 2.5 mL and 5.0 mL of medium, in the presence of light, were more efficient in the induction and formation of shoots. The cultivation of axillary buds of lateral pineapple sprouts in 2.5 mL or 5.0 mL of MS liquid medium, supplemented with 0.63 μM NAA and 2.5 μM BAP, in the presence of light, represents an adequate protocol for establishing new pineapple shoots for use in subsequent phases of micropropagation.

Exoerythrocytic development of Plasmodium ga llinaceum in primary fibroblast culture of chicken embryo / Desenvolvimento exoeritrocítico de Plasmodium gallinaceum em cultura primária de fibroblasto de embrião de galinha

In this study we assessed the susceptibility of primary fibroblast culture of chicken embryo to infection of P. gallinaceum sporozoites as well as the initial development of exoerithrocytic stages. Fibroblasts were obtained from the chest muscles of chicken embryos and sporozoites were obtained from experimentally infected Aedes fluviatilis salivary glands. After 1h, 3h, 24h, 48h and 72h periods pos-infection, cell cultures were fixed and analyzed both by indirect immunofluorescent-antibody test with anti-circumsporozoite protein monoclonal antibodies and by transmission electron microscopy. Circumsporozoite protein was detected in all parasitic forms. The mean percentage of fibroblasts with adhered or penetrated sporozoites did not significantly increase proportionately to the concentration of parasites in the inoculum, and independently if fetal calf or normal chicken sera were used in the culture medium. It was noted that the longer the incubation time, higher the possibility of the sporozoites to adhere and penetrate to fibroblats. Spozoites were observed penetrating in the fibroblast after 3h incubation when 0.68% of the cells had adhered parasites. Differentiation and development of the exoerythrocytic forms was observed after 24h incubation, when an average of 0,14% of the parasites have already invaded the cells. Developing parasites were found until 72h, when only 0.04% of fibroblasts were infected. Fibroblast cell culture seems to be a valuable experimental tool for in vitro investigation of the exoerytrocytic cycle of P. gallinaceum.

No presente estudo, avaliamos a susceptibilidade de cultura primária de fibroblastos de embrião de galinha à infecção por esporozoítas de P. gallinaceum, assim como o desenvolvimento de estágios do ciclo exoeritrocítico. Fibroblastos foram obtidos a partir da musculatura do peito de embriões de galinha e esporozoítas foram obtidos de glândulas salivares de Aedes fluviatilis experimentalmente infectados. Após períodos de 1h, 3h, 24h, 48h e 72h após a infecção, culturas de células foram fixadas e analisadas através de imunofluorescência indireta empregando-se anticorpos monoclonais contra a proteína circum-esporozoíta e microscopia eletrônica de transmissão. Proteína circum-esporozoíta foi detectada em todas as formas parasitárias. O percentual médio de fibroblastos com esporozoítas aderidos ou já penetrados não aumentou proporcionalmente com a concentração de parasitos no inóculo e independeu se o soro utilizado no cultivo celular era soro bovino fetal ou soro de galinha normal. Foi observado que, quando maior é o período de incubação, maior é a possibilidade dos esporozoítas aderirem e penetrarem nos fibroblastos. Esporozoítas foram observados penetrando em fibroblastos depois de 3h de incubação, quando 0,68% das células tinham parasitos aderidos. A diferenciação e o desenvolvimento das formas exoeritrocíticas foram observados após 24h de incubação, quando somente 0.04% dos fibroblastos achavam-se infectados. A cultura primária de fibroblastos de galinha parece ser um valioso modelo experimental para a investigação in vitro do ciclo exoeritrocítico do P. gallinaceum.