Expressão imunohistoquímica de P53 e Ki-67 na carcinogênese esofágica induzida pela dietilnitrosamina: modelo experimental / Immunohistochemical expression of P53 and Ki-67 in diethylnitrosamine-induced carcinomas esophageal: experimental model

OBJETIVO: Avaliar a expressão imunohistoquímica de p53 e ki-67 na carcinogênese esofágica induzida quimicamente através do uso de dietilnitrosamina, em um grupo de 100 camundongos fêmeas. MÉTODOS: O estudo experimental foi realizado com quatro grupos de animais, onde os grupos I e II foram considerados controles, sendo diferenciados por gavagem esofágica, uma vez semana, com água fria (temperatura ambiente) ou quente (60º-70ºC). E os grupos III e IV foram considerados estudos, os quais receberam dietilnitrosamina por três dias consecutivos semanalmente, também sendo diferenciados por gavagem, uma vez por semana, com água fria ou quente. O estudo apresentou datas progressivas de sacrifícios com coleta de peças esofágicas, que iniciava aos 30 dias de experimento e terminava aos 150 dias. Demonstrou-se que não houve diferença na incidência tumoral quando foi acrescida a variável temperatura da água; provavelmente devido ao episódio único semanal que era adicionado ao animal em experimentação. RESULTADOS: A análise imunohistoquímica do p53 não evidenciou diferença estatística durante a evolução da carcinogênese até 150 dias, porém quando analisado a relação com alterações patológicas demonstra-se que apresenta significância em relação à patologia baixo grau de displasia, alto grau e carcinoma. CONCLUSÃO: A análise imunohistoquímica do ki-67 demonstrou diferença estatística durante a evolução da carcinogênese a partir do dia 120 de experimento e quando analisada a relação com alterações patológicas demonstrou-se que apresenta significância também em relação à lesão intraepitelial de alto grau e carcinoma.

OBJECTIVE:To evaluate the expression of P53 and Ki-67 during esophageal diethylnitrosamine (DEN)-induced carcinogenesis in 100 mice by immunohistochemistry. METHODS: The animals were assigned to 4 groups, receiving water and food ad libitum. Control groups I and II received weekly esophageal gavage with cold (room temperature) or hot (60-70ºC) water, respectively. Experimental groups III and IV were treated with DEN for 3 consecutive days during the week, and one weekly gavage as above. The mice were sacrificed in different periods from day 30 to day 150 after the beginning of the experiment, for collection of esophageal samples which were then submitted to microscopic and immunohistochemical analyses. The temperature of the water administered by gavage was not related to the frequency of esophageal tumors. RESULTS:The expression of Ki-67 was significantly higher in high-grade intraepithelial lesion (I.L.), and the expression of P53 was also higher in low-grade I.L. CONCLUSION:The results emphasize the direct relationship of the carcinogenic process with early cell alterations detected by immunohistochemistry.

Atividade hepatoprotetora do extrato alcoólico da Camellia sinensis (L. ) Kuntze (chá-verde) em ratos Wistar tratados com dietilnitrosamina / Hepatic protection effect of the alcoholic extract from Camellia sinensis (L. ) Kuntze (green tea) in Wistar rats treated with diethylnitrosamine

O chá-verde (Camellia sinensis (L.) Kuntze) é utilizado por suas propriedades: antioxidante, quimioprotetora e antiinflamatória em varias situações patológicas, principalmente frente a compostos químicos cancerígenos. Para tanto se avaliou o efeito hepatoprotetor do extrato de chá verde (ECV) sobre a lipoperoxidação e necrose provocada pelo agente cancerígeno Dietilnitrosamina (DEN) no fígado de ratos machos Wistar. Os ratos foram expostos a dose única de 200 mg/kg de DEN via intra peritoneal e tratados por via oral de 120 mg/kg de ECV em diferentes momentos experimentais. Após 24 h em relação a exposição ao DEN, os animais foram sacrificados sendo avaliado: os níveis de AST/ALT no plasma, a lipoperoxidação por quantificação de TBARS e FOX no fígado e a ocorrência de necrose e hemorragia hepática através do estudo histopatológico. A ação quimioprotetora e a diminuição da lipoperoxidação foram verificadas pela diminuição das transaminases, TBARS, FOX e redução da necrose hepática. A avaliação confirmou a importância de se utiliza o chá verde como agente quimioprotetor, principalmente na forma preventiva.

Green tea (Camellia sinensis (L.) Kuntze) is used for its properties: antioxidant, chemoprotector and anti-inflammatory in several pathological situations, mainly those facing carcinogen chemical substances. This work has evaluated the hepatic protection effect of the green tea extract (GTE) on lipoperoxidation and necrosis, induced by the carcinogenic DEN in rats´ liver. Adult male Wistar rats were used and exposed to one only intra peritoneal dose of 200 mg/kg of DEN, and orally 120 mg/kg of ECV in different experimental moments. After 24 h of a DEN treatment, the animals were sacrificed and the following aspects were evaluated: the AST/ALT levels in plasma, lipoperoxidation of TBARS and FOX in the liver. Necrosis and Hepatic hemorrhage were observed through a histological examination. The chemoprotector action and the decrease in lipoperoxidation were detected after a decrease of AST/ALT, TBARS, FOX and hepatic necrosis. The evaluation of these results confirmed the importance of the use of the green tea as a chemoprotector agent, particularly as a preventive method.

Role of the vitamin C in diethylnitrosamine-induced esophageal cancer in Wistar rats / O efeito inibidor da vitamina C na carcinogênese esofágica induzida pela dietilnitrosamina em ratos Wistar

PURPOSE: To evaluate the inhibitory effect of vitamin C on the experimental esophageal carcinogenesis induced by diethylnitrosamine (NDEA). METHODS: Sixty Wistar male rats aged three months, with mean weight of 210 g were employed in the study and were divided into four different groups according to the drinking drugs: group I - controls: only water, seven days a week; group II - only vitamin C, seven days a week; group III - NDEA, three days a week and water during the other four days; group IV - NDEA, three days a week and vitamin C during the other four days; group V - NDEA together with vitamin C three days a week, and only water during the other four days and group VI - NDEA together with vitamin C three days a week and vitamin C during the other four days. The dosages of NDEA were: - 10 mg. / Kg / day and vitamin C - 200 mg / animal / day, dissolved in drinking water. The animals were observed during 180 days and after that each one was sacrificed and its esophagus and the stomach were removed together and macro and microscopically analyzed to identify any tumors. RESULTS: The largest number of tumors was observed in the group III: 48 macroscopic lesions (4.8 lesions per animal) and 23 microscopic lesions (2.3 lesions per animal). The groups that received vitamin C (groups IV, V and VI) showed smaller number of tumors: group V - 0.5 macroscopic lesions and 0.3 microscopic lesions per animal and group VI - 0.1 macroscopic lesions and 0.1 microscopic lesions per animal. The incidence of tumors in the groups V and VI showed statistical significance (p<0.05), when compared to the other groups. CONCLUSION: The vitamin C administered together with diethylnitrosamine showed an inhibitory effect on the experimental esophageal carcinogenesis in Wistar rats.

OBJETIVO: Avaliar o efeito inibidor da vitamina C na carcinogênese esofágica experimental induzida pela dietilnitrosamina (DEN). MÉTODOS: Sessenta ratos Wistar, com idade de três meses, machos, com peso médio de 210 g foram utilizados no estudo e divididos em quatro grupos diferentes, conforme ingestão das drogas: grupo I - controles: ingerindo água sete dias por semana; grupo II - só vitamina C, sete dias por semana; grupo III - DEN, três dias por semana e água durante os outros quatro dias; grupo IV - DEN, três dias por semana e vitamina C durante os outros quatro dias; grupo V - DEN junto com vitamina C três dias por semana, e água os outros quatro dias e grupo VI - DEN junto com vitamina C três dias por semana e só vitamina C durante os outros quatro dias. As dosagens de DEN empregadas foram - 10 mg. / Kg / dia e de vitamina C - 200 mg / animal / dia, dissolvidos na água de beber. Os animais foram observados durante 180 dias e depois disso sacrificados, tiveram o seu esôfago e o estômago retirados, e macro e microscòpicamente analisados para identificar qualquer tumor. RESULTADOS: O número maior de tumores foi observado no grupo III: 48 lesões macroscópicas (4.8 lesões por animal) e 23 lesões microscópicas (2.3 lesões por animal). Os grupos que receberam vitamina C (grupos IV, V e VI) evidenciaram número menor de tumores: grupo V - 0.5 lesões macroscópicas e 0.3 lesões microscópicas por animal e grupo VI - 0.1 lesões macroscópicas e 0.1 lesões microscópicas por animal. A incidência de tumores nos grupos V e VI mostraram diferença estatística significa (p <0.05), quando comparados aos outros grupos. CONCLUSÃO: A vitamina C administrada junto com dietilnitrosamina mostrou efeito inibidor no aparecimento de tumores esofágicos.

Avaliação do potencial genotóxico e cancerígeno do lodo de estação de tratamento de esgoto (LETE) em sistemas experimentais in vivo / In vivo evaluation of the carcinogenic potential of sewage sludge from a urban wastewater treatment plant in experimental systems

A rápida oxidação da matéria orgânica dos solos tropicais é mais uma evidência da grande vantagem do uso de biossólidos como condicionadores, capazes de melhorar as características físicas, químicas e biológicas do solo com grandes reflexos na produtividade agrícola. Portanto, o presente projeto objetivou averiguar o potencial genotóxico e cancerígeno dos lotes do Lodo de Estação de Tratamento de Esgoto (LETE) gerado em uma ETE prédefinida na região da bacia hidrográfica Piracicaba, Capivari e Jundiaí (PCJ1). Estes dados poderão fornecer subsídios para a avaliação do risco das populações humanas e o meio ambiente expostas ao LETE. Foram utilizados 140 ratos Wistar machos com 8 semanas de idade, expostos, via ração, a concentrações de 10.000 e 50.000ppm de LETE, durante 6 e 8 semanas, com os iniciadores DEN (N-dietilnitrosamina) e DMH (1,2- dimetilhidrazina), conforme citado nos respectivos protocolos (Figuras 4 e 5). A avaliação toxicológica do lodo de esgoto desenvolvida pelo Núcleo de Avaliação do Impacto Ambiental Sobre a Saúde Humana (TOXICAM), enfocou os parâmetros toxicológicos, como seu potencial genotóxico, pelos testes do cometa e micronúcleo em sangue periférico e medula óssea e carcinogenicidade pelos ensaios de FCA e FHA. Os dois ensaios foram divididos em 4 grupos (FCA- GI=Controle Negativo, GII=Controle Positivo/DMH III=10.000ppmLETE e GIV=50.000ppmLETE); (FHAGI= Controle Negativo, GII=Controle Positivo/DEN, GIII=10.000ppmLETE e GIV=50.000ppmLETE). Entretanto, na 3ª semana foi realizada hepatectomia parcial em todos os animais dos respectivos grupos do ensaio de FHA. No teste do cometa foram utilizados 10 animais como controle positivo (controle interno - MNU-N-metil-N-nitrosourea), e 10 animais como controle negativo nos respectivos ensaios (FCA e FHA). Os testes em questão indicaram que o LETE não promove aumento do número de criptas...

Fast oxidation of organic matter on tropical soils is another evidence of the great advantage of using biosolids as conditioners once they are able to improve biological, chemical and physical characteristics of the soil with remarkable consequences on agricultural productivity. Therefore, the present project aimed at verifying genotoxic and carcinogenic potential plots of sludge from sewage treatment plants in a pre-defined watershed region at Piracicaba, Capivari and Jundiaí (PCJ1). These data may provide support to evaluate risks on human populations and the environment exposed to sludge from sewage treatment plants. In the study, 140 Wistar male rats, 8 weekold, were used. They were exposed, via chow, to a 10.000 and 50.000 ppm concentration of sludge from sewage treatment plants during 6 to 8 weeks with DEN initiators (diethylnitrosamine) and DMH (1,2-dimethylhydrazine) as mentioned in protocols (Figures 4 and 5). Toxicological evaluation of LETE developed by Center of Evaluation of Environmental Impact on Human Health (TOXICAM) focused toxicological parameters with its genotoxic potential by comet and micronucleus assays on peripheral blood and bone marrow in Wistar rats and carcinogenicity using ACF and AHF assays. Both assays were divided into 4 groups (ACF- GI=Negative Control, GII=Positive Control/DMH III=10.000ppmLETE and GIV=50.000ppmLETE); (AHF-GI=Negative Control, GII=Positive Positive/DEN, GIII=10.000ppmLETE and GIV=50.000ppmLETE). Therefore, on the 3rd week partial hepatectomy was performed in every animal from AHF assays respective groups. assays and to FCA comet test, using MNU (N-methyl-N-nitrosourea) as positive control. The tests in question indicated that the SS not promote increased number of aberrant crypts in the colon, number and area of foci of altered hepatocytes in the liver, lesions in DNA (comet), and also, significantly increased the frequency of micronucleus in...

Effect of black tea in diethylnitrosamine-induced esophageal carcinogenesis in mice / Efeito do chá preto sobre a carcinogênese esofágica induzida por dietilnitrosamina em camundongos

PURPOSE: To evaluate the effect of black tea on esophageal carcinogenesis induced by the oral administration of diethylnitrosamine (DEN). METHODS: A population of 120 female mice (Mus musculus, strain CF1) were studied for 160 days. The animals were assigned to two control groups and three treatment groups. The control groups received water or tea throughout the study period, while the three experimental groups received DEN weekly, for three consecutive days, and water, tea, or both, in the other days of the week. On completion of the 160-day period, the animals were killed and their esophagi promptly examined macroscopically and subsequently submitted to histopathology (using the hematoxylin-eosin technique). RESULTS: In the comparative analysis between the treatment groups, tumor incidence (macroscopy) was significantly lower in those animals that received black tea besides the carcinogen. As regards the histopathologic changes, there was a greater number of low grade epithelial lesions in the same groups (p < 0.001). CONCLUSION: The animals that received black tea had a lower incidence of effects related to the carcinogen's action, thus indicating that, in this model, the infusion had a significant chemoprophylactic effect on experimental diethylnitrosamine-induced carcinogenesis.

OBJETIVO: Avaliar o efeito do chá preto sobre a carcinogênese esofágica experimental induzida pela administração oral de dietilnitrosamina (DEN). MÉTODOS: Durante 160 dias foi estudada uma população de 120 camundongos fêmeas, gênero Mus musculus, da cepa CF1, dividida em dois grupos controles e três grupos de tratamento. Os grupos controles receberam água ou chá durante todo o período do estudo. Os três grupos tratados receberam DEN semanalmente, durante três dias consecutivos, e água, chá ou ambos, nos demais dias da semana. Ao completar o período de 160 dias foram efetuadas as eutanásias dos animais e seus esôfagos foram analisados macroscopicamente (a fresco) e, posteriormente, à histopatologia (empregando a técnica da hematoxilina e eosina - HE). RESULTADOS: Na análise comparativa entre os grupos de tratamento, a incidência tumoral (macroscopia) foi significativamente menor naqueles animais que receberam chá preto, além do carcinógeno. No que se refere às alterações histopatológicas, houve maior número de lesões epiteliais de baixo grau nesses mesmos grupos (p < 0,001). CONCLUSÃO: Os animais que receberam chá preto apresentaram menor incidência dos efeitos relacionados à ação do carcinógeno, indicando que, neste modelo, a infusão apresentou efeito quimioprofilático significativo sobre a carcinogênese experimental induzida pela dietilnitrosamina.

Morphine does no promote esophageal carcinogenesis in rats exposed to diethylnitrosamine

BACKGROUND: The high incidence of esophageal cancer in the north of Iran has been associated to the consumption of opium and exposure to nitrosamines. Diethylnitrosamine has an established potential of producing experimental cancer in the esophagus and liver. AIM: To evaluate by histopathology the effect of oral administration of morphine and diethylnitrosamine during 23 weeks on the hepatic and esophageal carcinogenesis on 176 rats. METHODS: We divided the rats into the following groups: Morph: morphine; Den: diethylnitrosamine; Den+morph: Den and morphine in the same solution; Den/morph: Den and morphine in different solutions and days. RESULTS: Morphine did not promote neoplasias. The highest neoplastic incidents were found: a) in the esophagus, Den in relation to Den/morph and Den+morph (71.1 percent, 55.8 percent, and 50.0 percent); b) in the liver, Den and Den/morph in relation to Den+morph (73.8 percent, 81.4 percent, and 40.9 percent); c) higher incident of hepatic neoplasia than esophageal in Den/morph (81.4 percent and 55.8 percent). Different doses of diethylnitrosamine were ingested among the groups Den, Den/morph, and Den+morph, respectively 2.9, 2.8, and 2.3 mg/kg/day. CONCLUSIONS: These results show that the morphine did not promote esophageal carcinogenesis and may have stimulated the hepatic metabolism of the first pass of the carcinogen.

RACIONAL: A alta incidência de câncer esofagiano no norte do Irã foi associada ao consumo de ópio e exposição às nitrosaminas. A dietilnitrosamina possui potencial estabelecido de produzir câncer experimental em esôfago e fígado. OBJETIVO: Avaliar por histopatologia o efeito da administração oral de morfina e de dietilnitrosamina na carcinogênese esofágica e hepática em ratos. MÉTODOS: Durante 23 semanas, 176 ratos ingeriram diferentes soluções, sendo divididos em grupos: Morf: morfina; Den: dietilnitrosamina; Den+morf: dietilnitrosamina e morfina numa mesma solução; Den/morf: dietilnitrosamina e morfina em diferentes soluções e dias. RESULTADOS: Morf não promoveu neoplasias. Encontraram-se maiores incidências neoplásicas: a) no esôfago, Den em relação à Den/morf e Den+morf (71,1 por cento, 55,8 por cento e 50,0 por cento); b) no fígado, Den e Den/morf em relação à Den+morf (73,8 por cento, 81,4 por cento e 40,9 por cento); c) maior incidência de neoplasia hepática do que esofágica em Den/morf (81,4 por cento e 55,8 por cento). Diferentes doses de dietilnitrosamina foram ingeridas entre os grupos Den, Den/morf e Den+morf, respectivamente 2,9, 2,8 e 2,3 mg/kg/dia. CONCLUSÕES: A morfina não promoveu a carcinogênese esofágica e pode ter estimulado o metabolismo hepático de primeira passagem do carcinógeno.

Efeito do ácido ascórbico durante a hepatocarcinogênese quimicamente induzida em ratos / Effect of ascorbic acid in the chemically-induced hepatocarcinogenesis in rats

Estudos em modelos animais sugerem que vitaminas que atuam como antioxidantes teriam efeito protetor na carcinogênese: o ácido ascórbico parece ser um dos mais efetivos sobre uma ampla variedade de neoplasias induzidas experimentalmente. A presente pesquisa verificou o efeito do ácido ascórbico na hepatocarcinogênese em ratos...Microscopicamente, todos os grupos apresentavam focos e nódulos fenotipicamente alterados, sendo frequentes e com prevalência de nódulos em DENA. O volume nuclear dos hepatócitos dos focos e nódulos foi similar entre os grupos. Nos grupos DENA+AA e DENA, o número e a área de focos e nódulos glutationa S transferase placentária positivos foi significativamente superior ao grupo AA, contudo o grupo DENA+AA foi significativamente inferior ao grupo DENA. A incidência dos tumores foi maior no grupo DENA. O ácido ascórbico tem efeito protetor da hepatocarcinogênese induzida em ratos.

Modelo experimental de carcinogênese esofágica / Experimental model of esophageal carcinogenesis

OBJETIVO: O carcinoma epidermóide do esôfago é neoplasia com alta taxa de mortalidade. A necessidade do entendimento do processo de carcinogênse na melhora de resultados desta doença, conduz aos estudos experimentais. MÉTODO: Induzida a carcinogênese esofágica quimicamente por meio da dietilnitrosamina(DEN), em um grupo de 100 camundongos fêmeas. Utilizados quatro grupos, onde os Grupos 1 e 2 foram considerados controles, sendo diferenciados por gavagem esofágica, uma vez semana, com água em temperatura ambiente (20-25°C) ou quente (60°-70°C). E os Grupos 3 e 4, considerados estudos, receberam DEN por três dias consecutivos semanalmente, também sendo diferenciados por gavagem quente ou fria. Progressivas eutanásias com coletas de peças esofágicas, com início no 30° dia do experimento e terminando no 150° dia. RESULTADOS: Demonstrou-se que não houve diferença na incidência tumoral quando foi acrescida a variável temperatura da água (p=0,6854). Observou-se, que a carcinogênese durante o experimento, considerados os grupos que receberam DEN como sendo um único grupo, demonstrou clara e evidente progressão de lesões neoplásicas. CONCLUSÃO: Houve progressão neoplásica esofágica com a utilização de DEN, bem como o método pode ser utilizado em estudos para investigação do processo mutagênico.

BACKGROUND: Esophageal epidermoid carcinoma is a neoplasm with high mortality rates and a peculiar geographic distribution. Experimental studies are necessary to better understand the carcinogenesis process and improve therapeutic protocols. METHODS: Esophageal carcinogenesis has been chemically induced with diethylnitrosamine (DEN) in 100 female mices. Four groups of animals were separated. Control groups I and II were treated weekly by esophageal gavage at room temperature or hot (60°-70°C) water. Study groups III and IV were treated weekly for 3 consecutive days with diethylnitrosamine receiving also esophageal gavage with room temperature or hot water. Mices were sequentially sacrificed from day 30 until day 150 for collection and analysis of the esophagus. RESULTS: Results showed tumor incidence has not been affected by water temperature used for gavage (p=0.6854). Carcinogenesis has been induced in both groups receiving DEN, with clear and evident progression of pathological lesions. CONCLUSION: The model can be used for the study of mutagenic processes.