Antimicrobial activity of oregan and clove essential oils against some foodborne pathogens / Atividade antimicrobiona dos óleos essenciais de orégano e cravo frente a patógenos alimentares

The tendency to replace synthetic antimicrobials for natural ones in food industry and an increase in bacterial resistance to antibiotics resulted in a necessity to find new alternatives, and essential oils are emerging as promising substitutes for synthetic chemicals in food preservation. The objective of this work was to test the antimicrobial activity of oregano (OEO) and clove (CEO) essential oils over a range of bacteria, molds and yeast of importance as pathogens or food spoilage. The antimicrobial activity of oregano and clove essential oils were analyzed by disk diffusion method and broth microdilution test (MIC) of OEO and CEO were determined for each tested microorganism. OEO and CEO were evaluated in natura (IN) and after thermal processing (TP) at 120 o C for 5 min. Both OEO and CEO presented the same inhibition zones for IN and TP samples, for all tested microorganisms, indicating that these oils can be thermally processed maintaining their antimicrobial activity. For OEO and CEO, the more sensitive microorganisms were the fungi (Aspergillus niger, Penicillium citrinum and Candida albicans), followed by Staphylococcus aureus, Bacillus cereus and Methicillin - resistant Staphylococcus aureus (MRSA); the lowest antimicrobial activities were observed against Streptococcus mutans and Enterococcus faecalis. In general, OEO resulted in higher inhibition zones and lower MIC values for all tested microorganisms, suggesting that it was more effective as an antimicrobial agent than CEO (AU)

A preferência mundial para alimentos mais saudáveis e livres de aditivos químicos pelos consumidores, associada ao aumento da resistência bacteriana, resultaram na necessidade de medidas alternativas no setor de alimentos. Os óleos correspondem a antimicrobianos naturais e constituem uma classe emergente como substitutos dos produtos químicos sintéticos na conservação de alimentos. O objetivo deste trabalho foi avaliar a atividade antimicrobiana de óleos essenciais de orégano (OEO) e cravo (CEO ) frente a bactérias, fungos e leveduras de importância no setor de alimentos. OEO e CEO foram avaliados in natura (IN) e após processamento térmico (TP) a 120 o C por 5 minutos. Para avaliar a atividade antimicrobiana frente a cada microrganismo empregou-se o método de discodifusão e o teste de microdiluição em caldo (MIC). Tanto o OEO quanto o CEO apresentaram zonas de inibição semelhantes para amostras IN e TP, indicando que a atividade antimicrobiana desses óleos são resistentes a altas temperaturas. Os microrganismos mais sensíveis para ambos os óleos essenciais foram os fungos (Aspergillus niger, Penicillium citrinum e Candida albicans), seguidos por Staphylococcus aureus, Bacillus cereus e Staphylococcus aureus resistente à meticilina (MRSA). Já as cepas Streptococcus mutans e Enterococcus faecalis apresentaram uma maior resistência frente à atividade antimicrobiana dos óleos essenciais. Em geral, os maiores halos de inibição e menores valores de MIC foram obtidos quando empregado o OEO, sugerindo uma maior atividade microbiana do mesmo quando comparado ao CEO. (AU)

Actividad antimicrobiana de adhesivo ortodóntico con nanopartículas de plata sobre Streptococcus mutans / Antimicrobial activity of orthodontic adhesive with silver nanoparticles on Mutans streptococci / Atividade antimicrobiana de adesivo ortodôntico com nanopartículas de prata sobre streptococcus mutans

La aparatología fija usada en ortodoncia dificulta una adecuada higiene bucal, en estas condiciones el de-sarrollo de lesiones cariosas puede ser una complicación, uno de los principales agentes etiológicos involu-crados es Streptococcus mutans. La nanotecnología con plata tiene una aplicación preventiva importante en biomateriales dentales. Objetivo: Se determinó la actividad antimicrobiana sobre Streptococcus mutans de nanopartículas de plata (AgNPs) incluidas en adhesivos ortodónticos a diferentes concentraciones. Materia-les y métodos: En 20 cajas Petri con Streptococcus mutans inoculada en agar Müller-Hinton suplementado con 5% de sangre, se colocaron 6 discos de papel, 4 embe-bidos con AgNPs incluidas en un adhesivo orto-dóntico a concentraciones de 25, 75, 125 y 175 ppm, y 2 discos controles con clorhexidina al 0.12% y agua destilada. Se determinó la capacidad antimicrobiana en función de promedios de halos de inhibición a las 48 horas de incubación, en comparación con la escala de Duraffourd y la clorhexidina 0.12%. Resultados: A 25 ppm no existió capacidad antibacteriana, a 75 ppm el 50% alcanzó sensibilidad límite, pero el 100% de las muestras a 125 y 175 ppm consiguieron sensibilidad límite, sin embargo, la clorhexidina al 0,12% presentó mayor sensibilidad entre media 60% y sumamente sensible 40%. Conclusión: Las nanopartículas de plata con tamaño inferior a 100 nm, incluidas a 125 y 175 ppm en adhesivos de ortodoncia poseen actividad anti-microbiana sobre Streptococcus mutans, sin embargo, en el tiempo de estudio no alcanzan la sensibilidad de la clorhexidina al 0.12%.

The fixed appliances used in orthodontics make proper oral hygiene difficult, in these conditions the develop-ment of carious lesions can be a complication, one of the main etiologic agents involved is Mutans streptococci. It was determined that silver nanotechnology has an important preventive application in dental biomaterials. Objective: Antimicrobial activity on Mutans streptococci of silver nanoparticles (AgNPs) included in orthodon-tic adhesives at different concentrations. Materials and methods: In 20 Petri dishes with Mutans streptococci inoculated in Müller-Hinton agar supplemented with 5% blood, 6 paper discs were placed, 4 soaked up with AgNPs included in an orthodontic adhesive at concentrations of 25, 75, 125 and 175 ppm, and 2 control discs with 0.12% chlorhexidine and distilled water. Antimicrobial capacity was determined based on averages of inhibition halos at 48 hours of incubation, compared to the Duraffourd scale and 0.12% chlorhexidine. Results:At 25 ppm there was no antibacterial capacity, at 75 ppm 50% reached limit sensitivity, but 100% of the sam-ples at 125 and 175 ppm achieved limit sensitivity, however, chlorhexidine 0.12% showed higher sensitivity be-tween average 60% and highly sensitive 40%. Conclusión: Silver nanoparticles smaller than 100 nm, included at 125 and 175 ppm in orthodontic adhessives, have antimicrobial activity on Strptococcus mutans, however, when studying, they don't reach the sensitivity of chlorhexidine at 0.12%.

Os aparelhos fixos utilizados em ortodontia dificultam uma higiene bucal adequada, nessas condições o desenvolvimento de lesões cariosas pode ser uma complicação, um dos principais agentes etiológicos envol-vidos é o Streptococcus mutans. A nanotecnologia com partículas de prata tem uma importante aplicação pre-ventiva em biomateriais dentários. Objetivo: Determinou-se a atividade antimicrobiana das nanopartículas de prata (AgNPs) incluídas em adesivos ortodônticos em diferentes concentrações sobre Streptococcus mutans. Materiais e métodos: Em 20 placas de Petri com Streptococcus mutans inoculadas em ágar Müller-Hinton suplementado com 5% do sangue, foram colocados 6 discos de papel, 4 ensopados com AgNPs incluídos em um adesivo ortodôntico nas concentrações de 25, 75, 125 e 175 ppm e 2 discos de controle com 0,12% de clorexidina e água destilada. O efeito antimicrobiano foi determinado com base nas médias de halos de inibição às 48 horas de incubação, em comparação com a escala de Duraffourd e com clorexidina a 0,12%. Resultados: A 25 ppm não havia capacidade antibacteriana, a 75 ppm 50% atingiram a sensibilidade limite, mas 100% das amostras a 125 e 175 ppm atingiram a sensibilidade limite, no entanto, 0,12% de clorexidina apresentou maior sensibilidade entre 60% em média e 40% altamente sensíveis. Conclusão: Nanopartículas de prata menores que 100 nm, incluídas em 125 e 175 ppm em adesivos ortodônticos, têm atividade antimi-crobiana em Streptococcus mutans, no entanto, no tempo

Resistência aos antimicrobianos de Salmonella heidelberg isoladas na cadeia de produção avícola / Antimicrobial resistance of Salmonella heidelberg isolated in the poultry chain production

S. Heidelberg é responsável por causar doença grave em humanos, e por apresentar alta resistência aos antimicrobianos, sendo considerada um problema emergente na saúde pública mundial. Objetivou-se determinar a resistência aos antimicrobianos em 67 cepas de S. Heidelberg isoladas na cadeia de produção avícola no ano de 2016. Utilizou-se a técnica de disco difusão frente ao ácido nalidíxico, amoxacilina/ácido clavulânico, ceftazidima, ceftiofur, ciprofloxacina, enrofloxacina, gentamicina, imipenem, sulfametoxazol/trimetoprim, sulfato de colistina, tetraciclina. Os maiores índices de resistência foram para o ácido nalidíxico e tetraciclina (100%), seguido do sulfato de colistina (98,5%).Todas as cepas foram classificadas como multirresistentes, alarmando para o perigo que representam para a saúde pública.

Ceftaroline resistance in Staphylococcus pseudintermedius gene mecA carriers / Resistência à ceftarolina em Staphylococcus pseudintermedius portadores do gene mecA

Infections caused by methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) being a constant concern, ceftaroline fosamil has been recently approved as a new cephalosporin, active against MRSA, for use in humans; only rare cases of resistance have been reported till date. There is no report of resistance to ceftaroline in Staphylococcus pseudintermedius, which is the main bacterium causing dermatitis and otitis in dogs. To evaluate staphylococcal resistance to ceftaroline, 35 isolates of methicillin-resistant S. pseudintermedius (MRSP), carrying the mecA gene, from 26 dogs with folliculitis and nine dogs with external otitis, underwent disk diffusion test with cefoxitin, oxacillin, and ceftaroline. Tests with cefoxitin and oxacillin showed > 90% sensitivity in methicillin resistance detection. In the disk diffusion test, 97.14% (34/35) were resistant to cefoxitin, 94.29% (33/35) to oxacillin, and 31.43% (11/35) to ceftaroline. Of the ceftaroline-resistant strains, 27.27% (3/11) were obtained from the ears of dogs while the rest (8/11) were from the skin. The current report is the first description of MRSP resistance to ceftaroline.(AU)

Infecções causadas por Staphylococcus aureus resistente à meticilina (MRSA) são uma preocupação médica constante. A ceftarolina fosamila é uma nova cefalosporina ativa contra Staphylococcus aureus resistente à meticilina recentemente aprovada para uso em humanos e raros casos de resistência relatados até agora. Não há relatos de resistência à ceftarolina em Staphylococcus pseudintermedius, principal bactéria causadora de dermatite e otite em cães. Com o objetivo de avaliar a resistência estafilocócica à ceftarolina, 35 amostras de S. pseudintermedius resistentes à meticilina (MRSP), portadoras do gene mecA, provenientes de 26 cães com foliculite e 9 com otite externa foram submetidos ao teste de disco-difusão com cefoxitina, oxacilina e ceftarolina. Os testes realizados com cefoxitina e oxacilina mostraram mais de 90% de sensibilidade na detecção da resistência à meticilina em ambas. No teste da disco-difusão, 97,14% (1/35) foram resistentes à cefoxitina, 94,29% (3/35) à oxacilina e 31,43% (11/35) à ceftarolina. Das cepas resistentes às ceftarolina, 27,27 (3/11) foram provenientes de ouvido de cães e as demais (8/11), provenientes da pele, sendo essa primeira descrição de resistência de MRSP à ceftarolina na literatura atual.(AU)

Susceptibility of dermatophytic fungi to commonly used disinfectants / Suscetibilidade de fungos dermatófitos a desinfetantes comumente utilizados

This study aimed evaluate the antidermatophytic activity of three commercial disinfectants commonly used for environmental control of microorganisms in veterinary medicine. Sodium hypochlorite at 40 µL/mL, chloro-phenol derived at 30 µL/mL and chlorhexidine digluconate at 66.7 µL/mL were tested against 14 strains of dermatophytes, identified as Microsporum canis (n: 3) and Microsporum gypseum (n: 11). The tests was performed in accordance with guidelines of the Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI), documents M38-A2 and M51-A, adapted to disinfectants. In the microdilution broth test, chlorhexidine digluconate had MIC values (Minimum Inhibitory Concentration) of 4.16 µL/mL and MCF (Minimum Fungicidal Concentration) from 4.16 to 8.33 µL/mL, while chloro-phenol derived obtained MIC and MCF of 1.87 µL/mL, and both disinfectants had fungicidal activity at concentrations below the recommended. Sodium hypochlorite obtained MIC from 10 to 80 µL/mL and MFC of 40 to 80 µL/mL, requiring at most isolates twice the recommended concentration to achieve same activity. In the disc diffusion test, the mean inhibition zones for chlorhexidine digluconate was 10.53 mm, for chloro-phenol of 9.9 mm and for sodium hypochlorite was 6.2 mm. Chlorhexidine digluconate and chloro-phenol presented a significant reduction in the growth of dermatophytes, while sodium hypochlorite in concentration recommended showed a low antifungal activity against tested isolates.

O objetivo do estudo foi avaliar a atividade antidermatofítica de três desinfetantes comerciais frequentemente utilizados no controle ambiental de micro-organismos em medicina veterinária. Hipoclorito de sódio a 40 µL/mL, derivado de clorofenol a 30 µL/mL e digluconato de clorexidine a 66.7 µL/mL foram testados contra 14 cepas de dermatófitos, identificados como Microsporum canis (n: 3) e Microsporum gypseum (n: 11). Foram utilizadas as diretrizes do Clinical and Laboratory Standard Institute (CLSI), documentos M38-A2 e M51-A, com adaptações para desinfetantes. Na microdiluição em caldo, digluconato de clorexidine apresentou valores de CIM (Concentração Inibitória Mínima) de 4.16 µL/mL e CFM (Concentração Fungicida Mínima) entre 4.16 a 8.33 µL/mL; derivado de clorofenol obteve CIM e CFM de 1.87 µL/mL, demonstrando que ambos os desinfetantes apresentaram atividade fungicida em concentrações inferiores às recomendadas. O hipoclorito de sódio demonstrou CIM entre 10 a 80 µL/mL e CFM de 40 a 80 µL/mL, requerendo duas vezes a concentração recomendada pelo fabricante para obter atividade fungicida frente a maioria dos isolados fúngicos testados. No teste de disco-difusão, a média das zonas de inibição do digluconato de clorexidine foi de 10.53 mm; do derivado clorofenol 9.9 mm e do hipoclorito de sódio 6.2 mm. O digluconato de clorexidine e o derivado cloro-fenol apresentaram redução significante no crescimento dos dermatófitos testados, enquanto o hipoclorito de sódio, na concentração recomendada, demonstrou baixa atividade antifúngica contra os dermatófitos testados.

Resistência antimicrobiana e tipagem molecular de pseudomonas aeruginosa isoladas de feridas crônicas / Antimicrobial resistance and molecular typing of pseudomonas aeruginosa isolated from chronic wounds

Introdução: Para a correta reparação das feridas, as diversas fases do processo de cicatrização devem ocorrer na sequencia correta, numa intensidade ideal. Vários fatores afetam a cicatrização das feridas ao interferir em uma ou mais fases deste processo, tal como, a presença de infecção. Objetivo geral: Analisar as cepas de Pseudomonas aeruginosa encontradas nas feridas crônicas tratadas com gel de carboximetilcelulose a 2% ou com placa de poliuretano. Método: Pesquisa observacional descritiva, com abordagem quantitativa, realizada através da coleta de material biológico de feridas crônicas de pacientes atendidos em serviços ambulatoriais, empregando swabs. A pesquisa foi aprovada pelo Comitê de Ética em Pesquisa (Hospital Universitário Antônio Pedro ­ UFF) com número de parecer 815.353. As cepas de P. aeruginosa foram identificadas por MALDI-TOF MS, submetidas a testes de susceptibilidade aos antimicrobianos, identificação de genes de virulência através de PCR e tipagem molecular através de PFGE. Resultados: Das 43 feridas a partir das quais foramcoletados swabs, em 31 (72,09%) obteve-se isolamento de P. aeruginosa (foram identificadas 48 cepas). Estas feridas têm 3,6 vezes mais chances de desenvolverem infecção quando comparadas àquelas a partir das quais esse microrganismo não foi isolado. As cepas isoladas dos pacientes em uso de gel de carboximetilcelulose a 2% apresentaram maiores taxas de resistência a gentamicina e ciprofloxacino (ambos com 7,89%). Já as cepas isoladas dos pacientes tratados com placa de poliuretano, destacaram-se pela resistência a ciprofloxacino (90%). Foram identificadas três cepas multirresistentes de duas feridas tratadas com placa de poliuretano impregnada com prata. Foram positivas para presença do gene exoS 26 cepas (54,16%), e 13 (27,08%), para o gene exoU. Observou-se mesmo perfil de PFGE entre as cepas coletadas em diferentes momentos de onze pacientes, enquanto que em seis pacientes as cepas coletadas em diferentes momentos foram distintas. Não houve semelhança de padrões de fragmentação de DNA entre cepas derivadas de pacientes diferentes. Conclusão: A maioria das feridas não apresentava sinais clínicos de infecção. Foram identificadas 48 cepas de P. aeruginosa. O isolamento deste microrganismo é fator de risco para desenvolvimento de infecção. As cepas de P. aeruginosa têm baixos índices de resistência antimicrobiana, com apenas três cepas multiresistentes. Os desbridamentos realizados nas feridas crônicas não têm sido efetivos para descolonização de P. aeruginosa, já que um mesmo clone bacteriano foi identificado na ferida em diferentes momentos, na maioria dos casos

Introduction: For proper wound healing, various stages of the healing process must occur in a correct sequence and an ideal intensity. Several factors affect the wounf healing on one or more phases of this process, such as the presence of infection. General objective: To analyze Pseudomonas aeruginosa strains found in chronic wounds treated with 2% carboxymethylcellulose gel or polyurethane plate. Method: Descriptive observational research with a quantitative approach, carried out through the collection of biological material of chronic wounds of patients attended in outpatient services, using swabs. The study was approved by the Research Ethics Committee (Academic Hospital Antonio Pedro - UFF) with number 815.353. P. aeruginosa strains were identified by MALDI-TOF MS, subjected to antimicrobial susceptibility testing, identification of virulence genes by PCR and molecular typing by PFGE. Results: Of the 43 wounds from which swabs were collected, at 31 (72.09%) was obtained isolation of P. aeruginosa (48 strains have been identified). These wounds are 3.6 times more likely to develop infection when compared to those from which this microorganism was not identified. The strains isolated from patients using 2% carboxymethyl cellulose gel showed more resistance rates to gentamicin and ciprofloxacin (both 7.89%). Already the strains isolated from patients treated with polyurethane plate, highlighted by the resistance to ciprofloxacin (90%). Three multiresistant strains were identified from two wounds treated with polyurethane plate impregnated with silver. 26 strains (54.16%) were positive for the presence of exoS gene and 13 (27.08%), for the exoU gene. It was observed even PFGE profile among strains collected at different times of eleven patients, while in six patients, strains collected at different times were different. There was no resemblance DNA fragmentation patterns among strains derived from different patients. Conclusion: Most of the wounds showed no clinical signs of infection. 48 strains of P. aeruginosa have been identified. The isolation of this microorganism is a risk factor for development of infection in chronic wounds. Strains of P. aeruginosa demonstrated low antimicrobial resistance rates and only three multi-resistant strains were identified. The debridement performed in chronic wounds is not effective for removing colonization by P. aeruginosa, because same bacterials clones was identified in the wound swabs collected in same patients at different times in most cases

Comparação de métodos para avaliação da atividade antimicrobiana e determinação da concentração inibitória mínima (cim) de extratos vegetais aquosos e etanólicos / Comparison of methods for evaluation of antimicrobial activity and determination of minimum inhibitory concentration (mic) of aqueous and ethanol plant extracts

Vários estudos estão sendo conduzidos para a descoberta de novos agentes antimicrobianos provenientes de plantas, para que possam ser utilizados em produtos farmacêuticos, cosméticos e na indústria alimentícia. A ausência de padronização de métodos utilizados para a avaliação de extratos vegetais com potencial antimicrobiano dificulta a comparação de resultados. Considerando a necessidade de estabelecer um método com resultados consistentes para avaliar a atividade antimicrobiana dos extratos vegetais, este trabalho propôs-se a avaliar a atividade antimicrobiana e determinar a concentração mínima inibitória de extratos de plantas da família Myrtaceae sobre diferentes micro-organismos, utilizando três métodos para avaliação de antimicrobianos. Os métodos empregados foram microdiluição em caldo e difusão em ágar por disco e poço. Foram avaliados os extratos de Psidium guajava, Myrciaria cauliflora e Syzygium cumini sobre bactérias Gram-positivas, negativas e levedura. Em geral, a inibição promovida pelos extratos no teste de difusão em ágar por poço foi maior do que os valores obtidos por disco, independentemente do extrato vegetal testado. Contudo, a atividade inibitória de todos os micro-organismos só pôde ser determinada com o método de microdiluição em caldo, que também apresentou os resultados mais reprodutíveis, e mostrou-se o mais econômico e confiável para se avaliar a atividade antimicrobiana de extratos vegetais quando comparado aos outros métodos.(AU)

Several studies have been conducted to discover new antimicrobial agents from plants to be used in pharmaceuticals, cosmetics and in the food industry. The lack of standardized methods for the evaluation of plant extracts with antimicrobial potential complicates the comparison of results. Taking into consideration the need to establish a method with consistent results to evaluate the antimicrobial activity of plant extracts, this study aimed to evaluate the antimicrobial activity of extracts of some plants from the Myrtaceae family on different micro-organisms based on a comparative assay with three methods that are commonly used for the assess antimicrobials. The methods used were broth microdilution, and agar diffusion by disc and well. The evaluated extracts were those of Psidium guajava, Myrciaria cauliflora, and Syzygium cumini for Gram-positive and negative bacteria and yeast. In general, inhibition extracts promoted by the agar diffusion test by well was higher than the values ​​obtained by disc, regardless of the plant extracts tested. However, the inhibitory activity of all micro-organisms was only possible to be determined with the microdilution broth method, which also presented the more reproducible results, and proved to be the most economic and reliable way to evaluate the antimicrobial activity of plant extracts in contrast with other methods.(AU)

Sensibilidade de isolados de candida spp. a antifúngicos por disco-difusão em ágar e microdiluição em caldo / Antifungal susceptibility of isolates of candida spp. by disk diffusion and broth microdilution

Os testes de sensibilidade aos antifúngicos realizados pelo método de disco-difusão em ágar são práticos e bem conhecidos pelos profissionais do laboratório de microbiologia, entretanto apresentam particularidades que os diferem dos testes realizados para bactérias. O objetivo deste trabalho foi comparar as técnicas de disco-difusão em ágar e microdiluição em caldo na determinação da sensibilidade in vitro de isolados de Candida spp. a antifúngicos. Foram analisados 63 isolados clínicos de leveduras, que incluíram as espécies Candida parapsilosis complex (n = 20), Candida albicans (n = 18), Candida tropicalis (n = 14), Candida glabrata (n = 4), Candida krusei (n = 4), Candida kefyr (n = 2) e Candida lusitaniae (n = 1). As técnicas de disco-difusão em ágar e de microdiluição em caldo foram utilizadas para testar a sensibilidade em relação aos antifúngicos fluconazol, itraconazol e anfotericina B. A sensibilidade ao voriconazol foi determinada somente pela técnica de disco-difusão. Os halos ao redor dos discos de fluconazol variaram de 14 mm a 50 mm, e a CIM de 0,125 µg/mL a 32 µg/mL; para itraconazol, os halos variaram de 9 mm a 27 mm e a CIM de 0,03 µg/mL a 0,25 µg/mL; para anfotericina B, 9 mm a 21mm e 0,5 µg/mL a 2 µg/mL, respectivamente; para voriconazol, o diâmetro dos halos variaram de 19 mm a 50 mm. Para as três espécies, C. albicans, C. parapsilosis e C. tropicalis, a técnica de disco-difusão apresentou boa concordância com a microdiluição, especialmente em relação ao fluconazol, representando, assim, um recurso importante para os laboratórios reportarem os resultados dos testes de sensibilidade dos isolados dessas espécies ao fluconazol.

Antimicrobial susceptibility tests performed by disk diffusion method are practical and well known by professionals that work in the microbiology laboratory. The disk diffusion methodology used to verify the susceptibility of fungi to antifungal agents, however, has characteristics that differ from the tests for bacteria. The objective of this study was to evaluate the disk diffusion method to determine the in vitro susceptibility to antifungal agents of Candida species. We analyzed 63 clinical isolates of yeasts, which included Candida parapsilosis complex species (n = 20), Candida albicans (n = 18), Candida tropicalis (n = 14), Candida glabrata (n = 4), Candida krusei (n = 4), Candida kefyr (n = 2) and Candida lusitaniae (n = 1). The susceptibility tests to antifungal drugs was performed by disk diffusion methods and broth microdilution for antifungal fluconazole, itraconazole and amphotericin B. Voriconazole was used to test the susceptibility only by the disk diffusion method. The inhibition halos of growth around disks of fluconazole ranged from 14 mm to 50 mm and the MIC from 0.125 µg/mL to 32 µg/mL, for itraconazole, halos ranged from 9 mm to 27 mm and the MIC from 0.03 µg/mL to 0.25 µg/mL, for amphotericin B, 9 mm to 21 mm and 0.5 µg/mL to 2 µg/mL, respectively. The diameter of voriconazole disks varied from 19 mm to 50 mm. For the three species, C. albicans, C. parapsilosis and C. tropicalis, the disk diffusion method showed good agreement with the microdilution, especially to fluconazole, thus representing an important resource for medical laboratories reporting results of susceptibility testing of isolates of these species to fluconazole.

Estudo da atividade antibacteriana do picolinato de sacarose em Escherichia coli / Study of antimicrobial activity of sucrose picolinate against Escherichia coli

Os sucroésteres são empregados como surfactantes, tensoativos, substitutos de gordura e antibióticos. Este trabalho tem como objetivo sintetizar um novo sucroéster derivado do ácido picolínico (ácido 2-piridinocarboxílico), o picolinato de sacarose, e estudar sua atividade antibacteriana in vitro sobre a bactéria Gram-negativa patogênica Escherichia coli. A síntese do picolinato de sacarose foi processada a partir da transesterificação da sacarose com picolinato de metila em condição anidra à 80º C, utilizando dimetil sulfóxido (DMSO) como solvente e K2 CO3 como catalisador. A separação dos isômeros formados foi realizada por HPLC no modo semipreparativo e cinco frações cromatográficas foram coletadas e aplicadas em testes de atividade antibacteriana, por disco-difusão em meio sólido, nas concentrações de 150; 300; 450; 600; 750 e 900 μg/mL. As frações 2, 4 e 6 foram ativas contra E.coli. e a fração 4 (900 μg/mL) foi a mais eficiente, sendo selecionada para testes em sinergia com EDTA nas concentrações de 250, 500 e 750 μg/mL, com melhor resultado quando empregado EDTA em 750 μg/mL. Neste caso, os discos apresentaram halos de inibição de crescimento igual ao da Tetraciclina (30 μg/mL) e superior aos produzidos pelos discos com Gentamicina (10 μg/mL). A fração 4 foi caracterizada por FTIR e espectrometria de massas (ESI-MS) e os resultados indicam que se trata sucroéster monossubstituído.

Sucrose esters are generally used as surfactants, fat substitutes and antibiotics. The aim of the present study was to synthesize new sucrose esters derived from picolinic acid (2-pyridine carboxylic acid) and study in vitro antimicrobial activity on the Gram-negative pathogenic bacterium Escherichia coli. The synthesis of sucrose picolinate was performed through the transesterification of sucrose with methyl picolinate under anhydrous conditions at 80 o C using dimethyl sulfoxide (DMSO) as the solvent and K2 CO 3 as the catalyst. The separation of the formed isomers was performed by HPLC in a semi-preparative chromatograph system. Five fractions were collected and applied to a disc-diffusion antibiogram in solid-medium tests at concentrations of 150, 300, 450, 600, 750 and 900 μg/mL. Fractions 2, 4 and 6 were active against E. coli. Fraction 4 (900 μg/mL) was the most efficient and was selected for the determination of antimicrobial activity in synergistic tests with EDTA at concentrations of 250, 500 and 750 μg/mL. The best result was obtained with 750 μg/mL of EDTA. Fraction 4 was characterized as a monosubstituted sucrose ester by FTIR and mass spectrometry (ESI-MS).

Suscetibilidade a antifúngicos in vitro de Candida spp. em pacientes do Hospital Universitário Regional de Maringá-PR / Antifungal susceptibility of Candida spp. in vitro among patients from Regional University Hospital of Maringá-PR

INTRODUÇÃO: No ambiente hospitalar, são frequentes as infecções por leveduras do gênero Candida spp., o que torna esse assunto um importante alvo de estudos. OBJETIVO: Avaliar o perfil de suscetibilidade aos antifúngicos de espécies de Candida de pacientes internados no Hospital Universitário Regional de Maringá-PR (HURM). MATERIAL E MÉTODOS: As amostras foram submetidas ao teste de microdiluição em caldo (MD), segundo o documento M27-A3 para determinação da concentração inibitória mínima (CIM), e ao teste de difusão em disco de acordo com o documento M44-A2, ambos do Clinical Laboratory Standarts Institute (CLSI). RESULTADOS E DISCUSSÃO: Foram obtidos 91 isolados provenientes de amostras de urina, hemocultura, ponta de cateter, secreção orotraqueal, entre outros, sendo 38 Candida albicans, 23 C. tropicalis, 16 C. gabrata, 10 C. parapsilosis e quatro C. krusei. Dos antifúngicos testados, anfotericina B, voriconazol e anidulafungina foram os mais eficazes. CONCLUSÃO: A comparação entre as metodologias de microdiluição em caldo e disco difusão (DD) mostrou boa correlação para fluconazol para a maioria das espécies de Candida spp., sendo possível destacar que a DD é útil para triagem dos principais antifúngicos usados na prática clínica. No entanto, casos de resistência detectados por DD devem ser confirmados por meio do método de MD, evitando, assim, resultados falsos resistentes, melhorando a eficácia e a segurança do tratamento.

INTRODUCTION: Due to the ubiquity of nosocomial yeast infections of the genus Candida spp., studies in this area have become increasingly relevant. OBJECTIVE: To evaluate the antifungal Candida spp. susceptibility profile of hospitalized patients from the Regional University Hospital of Maringá-PR (HURM). MATERIAL AND METHODS: The samples were submitted to broth microdilution test (MD) according to protocol M27-A3 in order to determine the minimum inhibitory concentration (MIC) and disk diffusion test according to protocol M44-A2, both from Clinical Laboratory Standards Institute (CLSI). RESULTS AND DISCUSSION: We obtained 91 isolates from urine samples, blood culture, catheter tip, endotracheal secretions, among others, from which 38 were Candida albicans, 23 were C. tropicalis, 16 were C. gabrata, 10 were C. parapsilosis, and four were C. krusei. Among the tested antifungal medications, amphotericin B, voriconazole and anidulafungin proved to be the most effective. CONCLUSION: In the comparison between broth microdilution and disk diffusion (DD) methods, fluconazole showed good correlation for most Candida spp., which corroborates the usefulness of DD in the screening of main antifungal agents used in clinical practice. Nonetheless, cases of resistance detected by DD need to be confirmed by MD method, which avoids false-resistant results and maximizes the treatment efficacy and reliability.

Comparação entre microdiluição e disco difusão para o teste de susceptibilidade aos antifúngicos contra Candida spp / Comparison of microdilution broth and disk diffusion for antifungal susceptibility testing against Candida spp

A evolução da resistência fúngica pode ser avaliada pelo teste de susceptibilidade aos antifúngicos. Os protocolos mais utilizados para testes de susceptibilidade são a micro diluição em caldo (MDC), disco difusão (DD) e E-test. O objetivo principal deste estudo foi comparar os testes de sensibilidade realizados pelos métodos de MDC e DD para a anfotericina B e o fluconazol contra cepas de Candida spp. isoladas em Fortaleza/CE. Foram utilizadas 40 C. albicans, 50 C. tropicalis e 47 C. parapsilosis, isoladas de amostras de sangue e urina de pacientes atendidos no Hospital Geral de Fortaleza. Os testes foram realizados pelos métodos MDC e DD, de acordo com os protocolos M27-A3 e M44-A2 do CLSI. As metodologias foram comparadas e calculadas os percentuais de concordância. Para a anfotericina B e fluconazol, ocorreu um predomínio de cepas com susceptibilidade. O percentual de concordância para as metodologias foi acima de 97% e não foram detectados erros graves. A utilização de DD para realização de testes de susceptibilidade antifúngica pode ser aplicada na rotina laboratorial, pois é uma técnica fácil, barata, e de confiança quando comparada ao teste de MDC, sem comprometer os resultados para as cepas de C. albicans, C. tropicalis e C. parapsilosis.

The evolution of fungal resistance can be evaluated by testing susceptibility to antifungal agents. The protocols for susceptibility testing most common are Broth Microdilution (BMD), Disk Diffusion (DD) and E-test. The objective of this study was to compare the susceptibility tests conducted by the BMD and DD methods for amphotericin B and fluconazole against Candida spp. isolated in Fortaleza/CE. Were used 40 C. albicans, 50 C. tropicalis and 47 C. parapsilosis isolated from blood and urine samples of patients treated at Fortaleza General Hospital. The tests were conducted by the BMD and DD methods according to protocols M27-A3 and M44-A2 of the CLSI. These methods were compared and the percentages of agreement were calculated. For amphotericin B and fluconazole was a predominance of strains with reduced susceptibility. The percentage of agreement for the methods tested was above 97%. No serious errors were detected. The use of DD for performing antifungal susceptibility testing can be applied in routine laboratory tests, since one technique is easy, inexpensive, and reliable when compared to the BMD without compromising the results for the strains of C. albicans, C. tropicalis and C. parapsilosis.

Perfil de susceptibilidade antimicrobiana de bactérias isoladas de queijos coalho / Profile of susceptibility of bacteria, isolated from curdle cheese

A susceptibilidade antimicrobiana de isolados de Escherichia coli, (36), Staphyloccocus coagulase positiva(15) e Salmonella spp. (16) provenientes de queijos coalho comercializados na orla de Salvador (BA) foi avaliada pelo método de difusão. Os antibióticos testados foram amplicilina (AMP), amoxicilina/ácido clavulânico (AMC), cefalotina (CFL), cefotaxima (CTX), levofloxacina (LVX), ciproflaxina (CIP), norfloxacina (NOR), clorafenicol (CLO), tetraciclina (TET), nitrofurantoína (NIT), gentamicina (GEN), sulfametoxazol-trimetropim (SUT), eritromicina (ERI) e oxacilina (OXA). Todos os isolados de E. coli apresentaram susceptibilidade aos antibióticos CIP, CTX, LVX, NOR, TET e SUT, enquanto 10 mostraram-se resistentes a AMP, GEN, AMC, CLO, NIT e CFL, sendo um deles resistente a quatro antibióticos. Os isolados de Salmonella entérica subsp. enterica, sorovares: Hadar (7), Newport (6), Ohio (2) e Oranienburg(1) foram susceptíveis aos antibióticos CLO, CIP, LVX, CTX, SUT, GEN e NOR. S. Oranienburg mostrou-se multirresistente a quatro antibióticos. Para Staphyloccocus coagulase positiva NIT, TET, CLO e SUT foram eficazes; no entanto, verificou-se resistência a GEN, OXA (13,3%) e a ERI (26,7%). Os resultados apontam que os antibióticos de uso comum em terapêutica humana e veterinária não foram eficazes contra os micro-organismos testados, tornando essencial a adoção de medidas para controlar o uso indiscriminado na terapêutica humana e animal e, consequentemente, reduzir o aparecimento de resistência.

Avaliação da qualidade dos discos utilizados em testes de suscetibilidade a antimicrobianos pelo método de disco-difusão / Evaluation of the quality of the disks used in antimicrobial susceptibility test by the disk diffusion method

O Teste de Sensibilidade a antimicrobianos por disco-difusão é importante na rotina laboratorial porque permite determinar a sensibilidade ou a resistência bacteriana aos antimicrobianos com praticidade e baixo custo. essa técnica é essencial no monitoramento da resistência bacteriana e para a prescrição racional dos antimicrobianos na terapêutica. Entretanto, a qualidade dos discos e o controle ineficientes dos testes interferem na confiabilidade dos resultados. Por isso, avaliamos a qualidade dos discos comercializados no Brasil seguindo recomendações padronizadas, e propomos uma nova técnica de inoculação das placas de ágar, visando melhorar o controle de qualidade dos testes. Observamos resultados insatisfatórios para grande parte dos discos analisados , independente do fabricante. Além da necessidade de cuidados na fase pré-analítica dos testes por disco-difusão é importante adotar procedimentos que permitam aumentar o controle da qualidadedos testes por discos-difusão. Apontamos que esse fato é possível com a utilização da técnica de inoculação analisada nesta pesquisa.

Stenotrophomonas maltophilia: resistência emergente ao SMX-TMP em isolados brasileiros: uma realidade / Stenotrophomonas maltophilia: emerging resistance to TMP-SMX in Brazilian isolate: a reality

INTRODUÇÃO: Stenotrophomonas maltophilia é um importante patógeno hospitalar emergente, naturalmente resistente aos carbapenêmicos, que possui sulfametoxazol/trimetoprima (SMX-TMP) como opção terapêutica. Porém, relatos de resistência a essa droga começaram a aparecer. OBJETIVO: Avaliar o perfil de sensibilidade das cepas de S. maltophilia e comparar os resultados obtidos por diferentes metodologias. MÉTODOS: As cepas isoladas na rotina microbiológica do Hospital das Clínicas de São Paulo em 2007 foram avaliadas quanto ao perfil de suscetibilidade por disco-difusão e microdiluição. Respeitando a padronização do Clinical and Laboratory Standard Institute (CLSI), SMX-TMP e levofloxacino foram testados pelas duas técnicas, bem como a tigeciclina, interpretada segundo a agência norte-americana Food and Drug Administration (FDA). Ticarcilina/clavulanato, ceftazidima, imipenem, meropenem e moxifloxacino foram avaliados apenas por microdiluição. O percentual de correlação entre as metodologias foi analisado pelo programa WHONET®. RESULTADOS: Das 126 cepas, 1,6 por cento apresentaram resistência a SMX-TMP; 2,4 por cento, a levofloxacino; 23 por cento, a ticarcilina/clavulanato; 54 por cento, a ceftazidima. Todas apresentaram concentração inibitória mínima (CIM) < 2 µg/mL para tigeciclina e 96,8 por cento, CIM < 2 µg/mL para moxifloxacino. O índice de concordância categórica entre as metodologias foi de 100 por cento para SMX-TMP e de 89,6 por cento para levofloxacino. DISCUSSÃO E CONCLUSÃO: Embora SMX-TMP seja a droga de escolha para o tratamento de infecções por S. maltophilia, há possibilidade de resistência a esse antibiótico, dificultando a decisão terapêutica empírica, sendo fundamental a realização do teste de sensibilidade. A técnica de disco-difusão demonstrou boa correlação com a microdiluição. Entre as novas opções terapêuticas, tigeciclina e moxifloxacino apresentaram boa atividade in vitro.

INTRODUCTION: Stenotrophomonas maltophilia is an important emerging nosocomial pathogen naturally resistant to carbapenems. Although trimethoprim/sulfamethoxazole (TMP-SMX) is commonly used as a treatment option, resistance to this drug has been recently reported. OBJECTIVE: To evaluate the susceptibility profile of S. maltophilia strains and compare the results obtained by different methods. METHODS: As to susceptibility profile, all strains, which had been routinely isolated at Hospital das Clínicas, São Paulo, in 2007, were evaluated through disk diffusion and microdilution. In accordance with the Clinical and Laboratory Standard Institute (CLSI), TMP-SMX and levofloxacin were tested through both techniques, as well as tigecycline, which was interpreted in conformity with Food and Drug Administration (FDA) regulations. Ticarcillin/clavulanate, ceftazidime, imipenem, meropenem and moxifloxacin were evaluated only through microdilution. The correlation between these methods was assessed by WHONET®. RESULTS: 1.6 percent of 126 strains were resistant to TMP-SMX, 2.4 percent to levofloxacin, 23 percent to ticarcillin/clavulanate, and 54 percent to ceftazidime. All strains showed minimum inhibitory concentration (MIC) < 2 µg/mL for tigecycline and 96.8 percent MIC < 2 µg/mL for moxifloxacin. The correlation index between both methods was 100 percent for TMP-SMX and 89.6 percent for levofloxacin, respectively. DISCUSSION AND CONCLUSION: Although TMP-SMX is the standard treatment for S. maltophilia infections, there may be resistance to this antibiotic, which hinders the therapeutic approach, hence the significance of susceptibility tests. The disk diffusion technique showed a good correlation with microdilution. Among the new therapeutic options, both tigecycline and moxifloxacin presented significant activity in vitro.

Sucesso terapêutico da terbinafina em um caso de esporotricose / Successful treatment of terbinafine in a case of sporotrichosis

A esporotricose é uma infecção subaguda ou crônica, causada por fungos pertencentes ao Complexo Sporothrix. Relato do caso: esporotricose de localização nasal foi tratada com iodeto de potássio e como não se obteve sucesso, reiniciou-se o tratamento com associação de iodeto de potássio e itraconazol. Porém, ocorreu nova recidiva. As culturas dos exames micológicos foram submetidas a ensaios de atividade antifúngica in vitro para auxiliar no tratamento. A terbinafina foi o antifúngico que apresentou melhores resultados, por isso, o tratamento foi reiniciado com este antifúngico e, após dois anos do término do mesmo, não recidivou. Adicionalmente, ambas as culturas foram comparadas por RAPD, obtendo padrões de fragmentos distintos, indicando que os isolados são diferentes ou demonstrando um processo microevolutivo do microrganismo.

Sporotrichosis is a chronic subacute infection caused by fungi belonging to the Sporothrix Complex. In the present clinical case, nasal sporotrichosis was treated with potassium iodide. This was unsuccessful, and the treatment was restarted with a combination of potassium iodide and itraconazole. This however resulted in a further recurrence of the infection. The mycological cultures were tested in vitro for antifungal activity to assist in treatment. Terbinafine, an antifungal drug, produced the best results and was therefore used for the rest of the treatment course, with no recurrence after two years of its completion. In addition, both cultures were compared using RAPD and different fragment patterns were observed. This indicated that the isolates were either different or indicated a microevolutionary process of this microorganism.

Resistência a antifúngicos de Candida tropicalis isoladas no Estado do Ceará / Antifungal resistance of Candida tropicalis isolated in the State of Ceará

Neste estudo, foi avaliada a resistência a drogas antifúngicas em 51 cepas de Candida tropicalis isoladas de amostras clínicas no Estado do Ceará, Brasil. Resistência antifúngica foi um evento raro no nosso estudo e foi restrita a 3 (5,9 por cento) das cepas de Candida tropicalis, que exibiram resistência a fluconazol e itraconazol.

In this study, the resistance to antifungal drugs was investigated among 51 strains of Candida tropicalis isolated from clinical samples in the State of Ceará, Brazil. Antifungal resistance was a rare finding in our study and was restricted to three (5.9 percent) of the strains of Candida tropicalis. These exhibited resistance to both fluconazole and itraconazole.

Prevalência e susceptibilidade in vitro a Itraconazol e Anfotericina B de isolados clínicos de Candida / Prevalence and in vitro susceptibility to Itraconazole and Amphotericin B of clinical Candida isolates

Foram avaliadas 58 cepas de Cândida spp. Recuperada de sangue e cateter de pacientes hospitalizados admitidos em dois hospitais terciários na cidade do Rio de Janeiro, Brasil, num período de três anos. Os isolados foram identificados empregando-se técnicas micológicas de rotina e apresentaram a seguinte distribuição: Cândida parasilosis (47,1%), C. albicans (38,0%), C. tropicalis (6,9%), C. guilliermondii (6,9%), C. iamata (3,4%) e C. globrata (1,7%). Um método de disco-difusão em Agar para estudo de susceptibilidade e antifúngicos foi analisado. Discos de papel com itraconaazol (10g) e anfotericina B (100g) foram depositados sobre o Agar Mueller-Hinton com 2% de glicose e 0,5g/mL de azul de metilene para os ensaios de susceptibilidade. AS cepas foram classificadas como susceptíveis, intermediárias e resistentes pela mensuração dos diâmetros dos halos de inibição. O percentual de susceptibilidade encontrado foi o seguinte: itraconazol, susceptíveis: 91,4% e intermediárias: 8,6%; anfotericina B, susceptíveis: 100%. Cepas resistentes não foram detectadas por este método.