Avaliação da carga microbiana e fúngica de sistemas de canais radiculares infectados e a expressão apical de integrinas, citocinas e quimiocinas nos tecidos / Assessment of the microbial and fungal load of infected root canal systems and the apical expression of integrins, cytokines and chemokines in adjacent perirradicular tissues

Este estudo busca avaliar quantitativamente a expressão do RNA mensageiro (mRNA) das integrinas alfa1, alfa4, alfa 5, alfa L, citocinas e quimiocinas, a partir de células presentes no líquido intersticial periapical adjacente a dentes com infecção do canal radicular. Foram selecionados 22 indivíduos com necessidade de tratamento endodôntico e encaminhados à Faculdade de Odontologia da Universidade Federal de Minas Gerais (Belo Horizonte, MG, Brasil). As amostras foram coletadas em 11 dentes necróticos e portadores de infecções endodônticas e 11 dentes hígidos que necessitavam de tratamento endodôntico por motivos protéticos. Após a cirurgia de acesso e antes dos procedimentos de limpeza e modelagem do sistema de canais radiculares (T0), imediatamente após a limpeza e formatação do sistema de canais radiculares(T1), em 7 (T2) e 14 dias (T3), um cone de papel esterilizado endodôntico # 20 foi inserido no SCR, mantido por 2 min, e posteriormente armazenado a -70°C. Real-Time PCR analisou microbiologicamente essas amostras para ler a expressão gênica do rRNA microbiano 16S e fragmentos da região ITS do gDNA fúngico da espécie Candida. Após os procedimentos de limpeza e formatação do SCR, três cones de papel absorvente esterilizados foram inseridos. Passivamente, a ponta do papel ultrapassou o ápice radicular em 2 mm e permaneceu por 2 minutos. As amostras foram coletadas imediatamente após a limpeza e modelagem do RCS, 7 e 14 dias após a primeira sessão. As pontas de papel tiveram os 4 mm finais cortados, inseridos em Eppendorf e armazenados a - 70°C. Com este procedimento, o RNA foi extraído do líquido intersticial periapical para caracterizar as expressões dos genes ITGA1, ITGA4, ITGA5, ITGAL, IL-1ß, TNF-α, IL-17A, IL-10, IFN-γ, CCL2/MCP-1, CCL5, CXCR4, e 16S usando PCR em tempo real. O DNA genômico (gDNA) foi extraído para se avaliar a abundância de Candida utilizando-se sequências ITS, por PCR em tempo real. Os resultados demonstraram que os níveis de expressão de mRNA do 16S diminuíram após os procedimentos de limpeza e modelagem e que a abundância de Candida foi insipiente na amostra analisada. As citocinas pro- inflamatórias IL-1ß e IL-17 apresentaram níveis de expressão elevados frente a infecção, reduzindo significativamente após os procedimentos de limpeza e formatação. Os níveis de expressão gênica de TNF-α significantemente aumentaram, em ambos os grupos. Não se observou diferença significativa quanto a expressão gênica das citocinas IFN-γ, IL-10, CCL-2 e CCL-5 e das integrinas ITGAL e ITGA5 nos tempos avaliados. A expressão gênica de CXCR4 reduziu significativamente do tempo T1 para o T2, no grupo experimental. As expressões gênicas de ITGA1 e ITGA4, no grupo experimental, reduziram significativamente de maneira tempo dependente. Finalmente, não houve alteração significativa na expressão de marcadores de macrófagos (CD64), enquanto expressão de marcadores de fibroblastos (S100A4) aumentou significativamente no grupo controle. Concluiu-se que a carga microbiana e a abundância de leveduras correlacionam-se positivamente com a expressão de mediadores pró-inflamatórios e que a que terapia endodôntica negativamente impacta a expressão dos mediadores pró-inflamatórios e das integrinas nos tecidos perirradiculares.

This study seeks to quantitatively evaluate the expression of messenger RNA (mRNA) of integrins alpha1, alfa4, alpha 5, alpha L, cytokines, and chemokines, from cells present in the periapical interstitial fluid adjacent to teeth with root canal infection. Twenty-two individuals needing endodontic treatment and referred to the School of Dentistry of the Federal University of Minas Gerais (Belo Horizonte, MG, Brazil) were selected. The samples were collected in 11 necrotic teeth and carriers of endodontic infections and 11 healthy teeth needing endodontic treatment for prosthetic reasons. After access surgery and before root canal system (RCS) cleaning and shaping procedures (T0), immediately after cleaning and shaping the root canal system (T1), in 7 (T2) and 14 days (T3) an endodontic sterilized paper point #20 was inserted into the RCS, maintained for 2 min, and subsequently stored at -70°C. Real-Time PCR microbiologically analyzed these samples to read the gene expression of microbial rRNA 16S and fragments of the ITS region of the Fungus Candida species gDNA. After RCS cleaning and shaping procedures, three sterilized absorbent paper cones were inserted. Passively, the paper point exceeded the root apex by 2 mm and remained for 2 minutes. Samples were collected immediately after RCS cleaning and shaping, 7 and 14 days after the first session. The paper points have the 4 mm of their tip cut, inserted in Eppendorf, and stored at - 70°C. This procedure extracted RNA from the periapical interstitial fluid to characterize the expressions of the genes ITGA1, ITGA4, ITGA5, ITGAL, IL-1ß, TNF- α, IL-17A, IL-10, IFN-γ, CCL2/MCP-1, CCL5, CXCR4, ITS using Real-Time PCR. The results showed that 16S mRNA expression levels decreased after cleaning and modeling procedures and that Candida abundance was incipient in the analyzed sample. Pro-inflammatory cytokines IL-1ß and IL-17 showed high expression levels against infection, significantly reduced after cleaning and formatting procedures. TNF-α gene expression levels significantly increased in both experimental and control groups. No significant difference was observed regarding the gene expression of the cytokines IFN-γ, IL-10, CCL-2, and CCL-5 and the integrins ITGAL and ITGA5. The gene expressions of ITGA1 and ITGA4 in the experimental group were significantly reduced time-dependent. Finally, there was no significant change in their macrophage markers (CD64) expression, while fibroblast markers (S100A4) expression significantly increased in the control group. It was concluded that microbial load and yeast abundance are positively correlated with the expression of pro-inflammatory mediators and that endodontic therapy negatively impacts the expression of pro-inflammatory mediators and integrins in periradicular tissues.

A periodontite apical como fator de risco às manifestações sistêmicas: uma perspectiva histórica atualizada / Apical periodontitisas a risk factor to systemic manifestations: a updated historical perspective

Objetivo: O objetivo deste trabalho foi revisar a literatura científica pertinente, dando enfoque ao tratamento endodôntico e dentes portadores de necrose pulpar associados à periodontite apical como fator de risco às manifestações sistêmicas, desde a teoria da infecção focal até os dias atuais. Metodologia: Empregou-se fontes de catalogação bibliográfica identificadas eletronicamente pelo MEDLINE, até setembro de 2018. Os artigos relacionados pela busca eletrônica foram selecionados, por três revisores independentes, avaliando os critérios de inclusão e exclusão. Resultados: A busca apresentou 107 artigos, sendo que destes, 17 estudos satisfizeram os critérios de inclusão, o que possibilitou a análise dos dados. Conclusão: Muitos dos preceitos da teoria da infecção focal estão sendo reerguidos por pesquisas que mostram cada vez mais a existência de associações entre patologias endodônticas e sistêmicas.

Objective: The aim of this work was to review the pertinent scientific literature, focusing on endodontic treatment and teeth with pulp necrosis associated with apical periodontitis as a risk factor for systemic manifestations, from the focal infection theory to the present day. Methodology: The sources of bibliographic cataloging electronically identified by MEDLINE were used until September 2018. Articles related to the electronic search were selected by three independent reviewers, evaluating the inclusion and exclusion criteria. Results: The search presented 107 articles, of which, 17 studies met the inclusion criteria, which made it possible to analyze the data. Conclusion: Many of the precepts of the focal infection theory are being reinstated by research that increasingly shows the existence of associations between endodontic and systemic pathologies.

Participação de citocinas relacionadas às respostas Th17/Treg na inflamação periapical inflamatória crônica / Role of cytokines related to responses Th17 / Treg in chronic inflammatory periapical disease

A doença periapical inflamatória é uma sequela da infecção e necrose pulpar. Ela representa a resposta de defesa do hospedeiro à agressão proveniente do canal radicular. Assim, lesões periapicais crônicas se desenvolvem como resposta à manutenção da inflamação e à reabsorção óssea. As células T reguladoras (Treg) e células T helper (Th) 17 (Th17) têm papel fundamental na regulação da resposta imunológica. Forkhead box P3 (FoxP3) é o fator de transcrição para as células Treg, mas a diferenciação e maturação das células T naive em Treg ou Th17 depende também de citocinas específicas como o fator transformador de crescimento ß (TGF-ß), interleucina 10 (IL-10), interleucina 17 (IL-17), interleucina 6 (IL-6) e interleucina 21 (IL-21). Outras citocinas participam na modulação da atividade de Treg e Th17 como as quimiocinas CCL4 e CCL20 com função de recrutamento destas células para atuação no processo inflamatório. O papel de Treg e Th17 tem sido muito estudado em doenças autoimunes, mas ainda pouco avaliado na patogenia das lesões inflamatórias periapicais crônicas. Para este estudo foram utilizadas oitenta e sete amostras de tecido periapical humano para realização de análises morfológicas e dosagem de citocinas por meio de ensaio imunoenzimático (ELISA) (TGF-ß, IL10, IL-17, CCL4, CCL20). As amostras de tecido periapical foram coletadas de três grupos: grupo controle (dentes hígidos), grupo de dentes com necrose pulpar e lesão periapical e grupo de dentes com necrose pulpar sem lesão periapical. Observamos alta expressão de CCL4 e TGF-ß no grupo com lesão periapical quando comparado com os grupos sem lesão e uma correlação positiva entre CCL20 e IL-17, além de um aumento na expressão de CCL20 no grupo com lesão periapical quando comparado ao controle. Nossas observações implicam que essas duas características, tanto pró-inflamatórias quanto imunossupressoras, estão presentes na lesão periapical crônica, ocorrendo de maneira simultânea e com características de co-estimulação, como resultado do intenso trabalho da resposta imunológica do hospedeiro contra o processo inflamatório proveniente das bactérias intracanais e seus subprodutos.(AU)

Inflammatory periapical disease is a sequel of the infection and pulp necrosis. It represents the host defense response to aggression from the root canal. Chronic periapical lesions are developed in response to the maintenance of inflammation and bone resorption. Regulatory T cells (Tregs) and Th17 cells play a key role in regulating the immune response with opposite functions. Forkhead box P3 (FoxP3) is the master transcription factor for Treg cells, but differentiation and maturation of naive T cells in Treg or Th17 also depend on specific cytokines such as transforming growth factor ß (TGFß), interleukin 10 (IL -10), interleukin17 (IL-17), interleukin-6 (IL-6) and interleukin-21 (IL-21). Other cytokines participate in the modulation of the Treg and Th17 activity, as the chemokines CCL4 and CCL20 with function of recruitment of these cells to act in the inflammatory process. The role of Treg and Th17 has been better studied in autoimmune diseases, but sparsely evaluated in the pathogenesis of chronic periapical inflammatory lesions. Eighty-six human samples were used to perform histologic analysis and the cytokine dosage by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) (TGF-ß, IL-10, IL-17, CCL4, CCL20) in the periapical tissue of three groups: control group, group of teeth with pulp necrosis and periapical lesion and group of teeth with necrosis without periapical lesion. We observed high expression of CCL4 and TGF-ß in the group with periapical lesion in comparison with the groups without lesion and demonstrated increased expression of CCL20 in the group with periapical lesion when compared to control. Our findings imply that these two characteristics, pro-inflammatory and immunosuppressive, are present in the chronic periapical lesion, occurring simultaneously and with co-stimulation characteristics, as a result of the intense actionof the host's immune response against the inflammatory process coming from intracanal bacteria and their by-products.(AU)