Búsqueda de biomarcadores a partir de péptidos expresados en biopsias de cáncer de mama / Search for biomarkers from peptides expressed in breast cancer biopsies / Busca de biomarcadores a partir de peptídeos expressos em biópsias câncer de mama

El cáncer de mama (CM) es una de las principales causas de muerte en México. Se ha observado un incremento en la incidencia de éste en mujeres de 15-29 años. A fin de comprender las causas en el desarrollo del CM, se pretendió buscar la asociación entre los genes/enfermedad empleando técnicas de Biología Molecular. Se analizaron, por genómica funcional, 50 biopsias frescas de pacientes con CM (BFCM), 50 biopsias embebidas en parafina de CM (BEPCM) y 10 biopsias frescas de pacientes con sospecha de CM (BFSC), obtenidas de mujeres que residen en Coahuila, México. Las muestras proteicas se cuantificaron y se resolvieron en geles de poliacrilamida dodecil sulfato de sodio (SDS-PAGE) y en dos dimensiones (2-DE). El perfil proteico de las BFCM, BEPCM versus BFSC mostró diferencias entre las bandas peptídicas observadas en los geles. Aquellos péptidos que se diferenciaron por su expresión fueron analizados por cromatografía líquida acoplada a masas en tándem (LC/ MS/MS). Las huellas peptídicas obtenidas, a su vez, se analizaron por medio del banco de genes (PubMed). Se encontraron, en las muestras de cáncer, proteínas asociadas a migración celular, supresión de tumores, estrés oxidativo y choque térmico. Por último, estos hallazgos se confirmaron empleando inmuno-electro transferencia o Western blot (WB) con anticuerpos contra vimentina.

Breast cancer (BC) is one of the leading causes of death in Mexico. Moreover, BC is the main cause of death in women between 15-29 years old in northern Mexico. Proteomic techniques have been used in order to achieve a better understanding of the genes involved in the development of BC. The proteins in BC extracted from 50 fresh breast cancer tissues (FBCT), 50 paraffin embedded breast cancer tissues (PEBCT) and 10 biopsies from women suspected of cancer (SC), residing in Coahuila, Mexico were analyzed in this paper. The quantity of protein extracted was similar in both samples FBCT and PEBCT. However, protein quality was lower in PEBCT than FBCT. Subsequently, these proteins were resolved in SDS-PAGE and 2DE. Differences were noticed in protein profile and all those suspect proteins were analyzed by LC/MS/MS. Amino acidic fingerprint allowed for the identification of peptides associated with a) cell migration, b) tumor suppression, c) oxidative stress or heat shock.

O câncer da mama (CM) é uma das principais causas de morte no México. Observou-se um aumento na incidência desse câncer em mulheres entre os 15-29 anos de idade. Para compreender as causas do desenvolvimento de CM, visou-se encontrar a associação entre os genes/doença utilizando técnicas de Biologia molecular. Analisaram-se por genômica funcional, 50 biópsias frescas de pacientes com CM (BFCM), 50 biópsias embebidas em parafina (BEPCM) e 10 biópsias frescas de pacientes com suspeita de CM (BFSC), obtidas de mulheres residentes em Coahuila, México. As amostras de proteínas foram quantificadas e separadas em géis de poliacrilamida dodecil sulfato de sódio (SDS-PAGE) e em duas dimensões (2-DE). O perfil proteico das BFCM, BEPCM comparado com BFSC mostrou diferenças entre as bandas peptídicas observadas nos géis. Esses peptídeos que diferem em sua expressão foram analisados por cromatografia líquida acoplada a massas em tandem (LC/MS/MS). As pegadas peptídicas obtidas, por sua vez, foram analisadas utilizando o banco de genes (PubMed). Verificaram-se nas amostras de câncer, proteínas associadas à migração celular, supressão de tumores, estresse oxidativo e choque térmico. Finalmente, estes achados foram confirmados utilizando a imuno-eletro transferência ou Western Blot (WB) com anticorpos contra vimentina.

Application of capillary electrophoresis to the simultaneous determination and stability study of four extensively used penicillin derivatives

The applicability of capillary electrophoresis for the analysis of four extensively used penicillin derivatives (benzylpenicillin, ampicillin, amoxicillin, oxacilllin) has been studied. Because of structural similarities, the electrophoretic behavior of these derivatives is very similar; consequently an efficient separation using the conventional capillary zone electrophoresis is hard to be achieved. Their simultaneous separation was solved by using micellar electrokinetic capillary chromatography, the separation being based on the differential partition of the analytes between the micellar and aqueous phase. Using a buffer solution containing 25 mM sodium tetraborate and 100 mM sodium dodecyl sulfate as surfactant, at a pH of 9.3, applying a voltage of + 25 kV at a temperature of 25 °C, we achieved the simultaneous separation of the studied penicillin derivatives in less then 5 minutes. The separation conditions were optimized and the analytical performance of the method was evaluated in terms of precision, linearity, limit of detection, and quantification. Also, a simple capillary zone electrophoresis method was applied to study the stability of the studied penicillin derivatives in water at different temperatures, using ciprofloxacin hydrochloride as internal standard. It was observed that the extent of the hydrolysis of penicillins in water is highly dependent on the time and also temperature.

Estudou-se a aplicabilidade de electroforese capilar para a análise de quatro derivados de penicilina (benzilpenicilina, ampicilina, amoxicilina, oxacilina) amplamente utilizados. Em razão das semelhanças estruturais, o comportamento electroforético destes derivados é muito semelhante e, por conseguinte, a separação eficaz utilizando a electroforese capilar de zona convencional é difícil de ser efetuada. A separação simultânea foi realizada por cromatografia capilar electrocinética micelar, que se baseia na partição diferencial entre os analitos na fase micelar e aquosa. Utilizando-se solução tampão contendo 25 mM de tetraborato de sódio e 100 mM de dodecil sulfato de sódio, como agente tensioativo, com pH de 9,3, voltagem de +25 kV, à temperatura de 25 °C, obteve-se a separação simultânea das penicilinas estudadas em menos de 5 minutos. As condições de separação foram otimizadas e o desempenho do método analítico foi avaliado em termos de precisão, linearidade, limite de detecção e de quantificação. Além disso, aplicou-se método de electroforese capilar de zona simples para estudar a estabilidade de penicilinas em água a diferentes temperaturas, utilizando cloridrato de ciprofloxacino como padrão interno. Estabeleceu-se que o grau de hidrólise de penicilinas em água é altamente dependente do tempo e também da temperatura.

Estudio de la mdduración de carne de cordero empleando electroforesis sds-page / Study of lamb meat ageing using electrophoresis sds-pgee / Estudo domaturaçção cordeiros usando eletroforese sds-page

La maduración de la carne es causada por reacciones metabólicas que producen cambios en su calidad, mejorando las características organolépticas como la terneza, la jugosidad y el color. El presente estudio tuvo como objetivo encontrar los cambios producidos en las proteínas sarcoplasmáticas y miofibrilares durante la instauración del rigor mortis y la maduración en carne de cordero semiestabulado (AS) y cordero alimentado por pastoreo (AP). Para tal fin se tomaron muestras del músculo Longissimus dorsi de corderos de raza Dorper x criollo ¾ de diez semanas de edad. Las proteínas sarcoplasmáticas se extrajeron con agua y solución salina diluida, y las proteínas miofibrilares con solución salina concentrada. La cuantificación se hizo por el método de Bradford y la separación por electroforesis SDS-PAGE. En las proteínas sarcoplasmáticas se observó la aparición de una banda de 146 kDa a los cinco y trece días para los corderos AS y AP, respectivamente. En las proteínas miofibrilares se encontró evidencia del rigor mortis a las 16 h y una intensificación drástica de una banda de 28 kDa a las 16 h en el cordero AS. Esta banda también se observó en el cordero AP a las 14 h. En todo el proceso se pudo ver la degradación gradual de la DESMINA, ACTINA Y TROPONINA T.

The ageing of meat is caused by metabolic reactions than result in changes in its quality, improving its organoleptics characteristics such as the tenderness, the juiciness and the color. This study had the aim to find changes in sarcoplasmic and myofibrillar proteins during the establishment of rigor mortis and the ageing in lamb meat: semi feedloot (SF) and lamb feeding for pasture (FP). For this purpose, were sampled Longissimus dorsi muscle of lambs bred Dorper x Criollo ¾ and 10 weeks old. Sarcoplasmic proteins were extracted with water or saline solution diluted and the myofibrillar protein with saline solution concentrate. The Quantification was done by the Bradford method and the separation by SDS-PAGE electrophoresis. In the sarcoplasmic proteins observed the appearance of a band of 146 kDa in the samples of five and thirteen days for lamb SB and AP, respectively. In the myofibrillar proteins found evidence of the establishment of rigor mortis at 16 hours and a drastic intensification of a band of 27 kDa to 16 hours in the lamb SB. This band was also observed in the lamb FP at 14 hours. In the whole process could see the gradual degradation of Desmin, Actin and Troponin T.

A maturação da carne é causada por reações metabólicas que resultam em alterações na qualidade, melhorando as características organolépticas, tais como a suculência, ternura e cor. Este estudo teve como objetivo encontrar alterações nas proteínas miofibrilares sarcoplasmático e durante o início do rigor mortis e maturação na carne: cordeiro Semiestabulado (AS) e pastagem-fed cordeiro (AP). Para o efeito, amostras do músculo Longissimus dorsi de cordeiros Dorper x criollo ¾ de 10 semanas de idade. As proteínas sarcoplasmático foram extraídas com água ou soro fisiológico e diluído com concentrado de proteína miofibrilar salina. Quantificação foi feita pelo método de Bradford e separação por electroforese SDS-PAGE. Nas proteínas sarcoplasmático observado o aparecimento de uma banda de 146 kDa cinco e 13 dias de cordeiro AS e AP, respectivamente. As proteínas miofibrilares encontraram evidências de rigor mortis em 16 horas e uma intensificação drástica de uma banda de 28 kDa a 16 horas no cordeiro AS. Esta banda também foi observada na AP cordeiro em 14 horas. Durante todo o processo podia ver a degradação gradual da Desmina, Actina e Troponina T.