Experiencia en el uso de los protocolos Biomed-2 para el estudio de reordenamientos de TCR e inmunoglobulinas en proliferaciones linfoides en el Instituto Nacional de Cancerología, Colombia / Experience with the BIOMED-2 standardized polymerase chain reaction protocol for immunoglobulin and T- cell receptor clonality analysis in the Instituto Nacional de Cancerología, Colombia

Introducción. El consorcio europeo BIOMED-2 se creó para determinar si una población linfoide de difícil clasificación patológica es clonal. En Colombia, la implementación de estas pruebas comenzó en el 2015 en el Instituto Nacional de Cancerología E.S.E. (Bogotá). Objetivos. Determinar el comportamiento de las pruebas de reordenamiento clonal o clonalidad linfoide. y determinar las dificultades de su uso en nuestro medio verificando su adaptación local y los resultados en una serie retrospectiva de casos y consecutiva de proliferaciones linfoides sometidas a los protocolos BIOMED-2. Materiales y métodos. A partir de las historias clínicas, se recolectaron los datos clínicos e histológicos y los resultados de los análisis de los reordenamientos en todos los casos de proliferaciones linfoides sometidas a los protocolos BIOMED-2, entre febrero de 2015 y mayo de 2019. Resultados. Se hallaron 132 casos, de los cuales 47 se clasificaron mediante los protocolos de Biomed-2 como hiperplasias linfoides reactivas, 62 como linfomas T, 19 como linfomas B y 3 como neoplasias linfoides de linaje no establecido. Solo en un caso falló la extracción de ADN. Según estos resultados, la mayor dificultad diagnóstica para el patólogo fue el análisis de los infiltrados linfoides T, la mayoría (44) de los cuales correspondía a lesiones cutáneas. Conclusiones. Las pruebas de clonalidad pueden usarse en tejidos de diversa calidad en nuestro medio como ayuda en el diagnóstico de proliferaciones linfoides de difícil clasificación. Es importante hacerlas e interpretarlas de manera multidisciplinaria y considerar cada caso por separado.

Introduction: The European BIOMED-2 consortium was created to evaluate clonality in lymphoproliferations that are difficult to diagnose. In Colombia, the implementation of these tests began in 2015 at the Instituto Nacional de Cancerología E.S.E., Bogotá. Objectives: To determine the behavior of the rearrangement tests for lymphoid clonality and the difficulties of its implementation in our field through a series of retrospective and consecutive cases of lymphoid proliferation subjected to the BIOMED-2 protocols. Materials and methods: Clinical and histological data and the results of the rearrangement analysis of all cases of lymphoid proliferation subjected to the BIOMED-2 protocols between February 2015 and May 2019 were collected from clinical histories. Results: We recovered 132 samples from which 47 corresponded to reactive lymphoid hyperplasias, 62 to T lymphomas, 19 to B lymphomas, and three to lymphoid neoplasms of unestablished lineage. Only in one case did DNA extraction fail. According to these results, the greatest diagnostic difficulty for the pathologist was the analysis of T lymphoid infiltrates, most of which (44) were skin lesions. Conclusions: Clonality tests can be used in tissues of different quality to help in the diagnosis of lymphoid proliferations that are difficult to classify. It is important to implement and interpret them in an interdisciplinary way considering each case separately.

Los patrones electroforéticos de proteínas salivales permiten diferenciar los grupos transandino y cisandino de las especies de Rhodnius de Colombia / Salivary proteins electrophoretic patterns enabled differentiating Colombian Rhodnius Trans-Andean and Cis-Andean groups

Introducción. Las especies Rhodnius (Hemiptera: Reduviidae: Triatominae) están conformadas por insectos hematófagos vectores de Trypanosoma cruzi, agente etiológico de la enfermedad de Chagas, y T. rangeli, parásito infectivo pero no patógeno para el vertebrado. El estudio de la diversidad proteica de la saliva de estos insectos permite la obtención de perfiles electroforéticos unidimensionales característicos de algunas especies de triatominos. Sin embargo, el reporte de los patrones electroforéticos de proteínas salivales de las especies de Rhodnius ha sido escaso. Objetivo. Hacer un análisis comparativo de los perfiles electroforéticos unidimensionales de las proteínas salivales de R. colombiensis, R. pallescens, R. pictipes, R. prolixus y R. robustus. Materiales y métodos. Se obtuvieron los perfiles electroforéticos de la saliva de las especies en estudio mediante electroforesis en gel de poliacrilamida con dodecilsulfato sódico (Sodium Dodecyl Sulfate Polyacrylamide Gel Electrophoresis, SDS-PAGE) y se construyó un fenograma mediante el método UPGMA (Unweighted Pair Group Method Using Arithmetic Averages). Resultados. Los perfiles electroforéticos de las proteínas solubles de saliva presentaron bandas en un rango de masa aproximado de 15 a 45 kDa, los cuales permitieron diferenciar las cinco especies estudiadas. El fenograma reveló la existencia de dos grupos principales: uno conformado por los grupos cisandinos Pictipes y Prolixus y otro constituido por el grupo transandino Pallescens. Conclusiones. Existen diferencias en los perfiles electroforéticos de las proteínas salivales entre R. colombiensis, R. pallescens, R. pictipes, R. prolixus y R. robustus, cuya variabilidad permitió construir un fenograma congruente con los grupos del género Rhodnius.

Introduction: Rhodnius (Hemiptera: Reduviidae: Triatominae) species are made up of haematophagous insect vectors for Trypanosoma cruzi (Chagas' disease aetiological agent) and T. rangeli, an infective parasite that is not pathogenic for vertebrate hosts. The study of their salivary protein diversity enables the obtention of characteristic one-dimensional electrophoretic profiles of some triatomine species; however, few reports have dealt with Rhodnius species salivary proteins electrophoretic patterns. Objective: To compare R. colombiensis, R. pallescens, R. pictipes, R. prolixus, and R. robustus' salivary proteins one-dimensional electrophoretic profiles. Materials and methods: SDS-PAGE was used for obtaining electrophoretic profiles of saliva from the species under study. The unweighted pair group method with arithmetic mean (UPGMA) was used for constructing a phenogram. Results: Electrophoretic profiles of soluble saliva had protein bands ranging from 15 to 45 kDa, thereby enabling the five species studied to be differentiated. The phenogram revealed two main groups, one formed by the Pictipes and Prolixus cis-Andean groups and another consisting of the Pallescens trans-Andean group. Conclusion: Differences were revealed regarding R. colombiensis, R. pallescens, R. pictipes, R. prolixus, and R. robustus electrophoretic profiles of salivary proteins; their variability facilitated constructing a phenogram which was taxonomically congruent with the groups from the genus Rhodnius.

Neutralización heteróloga e interacción de amanitinas con venenos de Bothropsy Crotalus y de abeja / Heterologous neutralization and interaction of toxic amanitins with Bothrops and Crotalus venoms, and honey bee venom / Neutralização heteróloga e interação das amanitinas tóxicas com veneno de Bothrops e Crotalus e veneno de abelha

En el presente trabajo se examinó la interacción de las amanitinas de Amanita phalloides (Basidiomycetes) con los venenos de las serpientes Bothrops neuwiedi diporus ("yarará pequeña"), B. alternatus ("yarará grande"), Crotalus durissus terrificus ("serpiente de cascabel") y de la abeja mielera Apis mellifera. Se aplicaron las técnicas de Ouchterlony, inmunotransferencia, electroforesis rocket y electroforesis en gel de poliacrilamida a los anti-venenos y anti-toxinas obtenidos por inmunización en caballos y/o en conejos. Los anti­sueros de serpientes y las amanitinas reaccionaron en forma cruzada, así como el veneno de abeja y las amanitinas. Cuando los venenos de Bothrops neuwiedii diporus y Crotalus durissus terrificus se preincubaron con las amanitinas y se analizaron por electroforesis en gel de poliacrilamida-dodecilsulfato de sodio (dodecylsulfate-polyacrylamide gel electrophoresis: SDS-PAGE), algunas bandas de proteínas desaparecieron y otras se redujeron notablemente. Estos resultados revelan por primera vez la interacción y la degradación de las proteínas de los venenos de serpientes por las amanitinas. Por otra parte, la modificación del tiempo de coagulación de la sangre humana, debida a los venenos, se corrigió con los ciclopéptidos de Amanita. Estos resultados también se informan por primera vez en este trabajo. La presencia de polipéptidos tóxicos en los venenos de serpientes y abejas, así como en A. phalloides y la reactividad cruzada demostradas en este trabajo, sugieren la existencia de epítopos comunes a todos ellos. Teniendo en cuenta estas reacciones, el uso de anti-venenos heterólogos parece ser de utilidad en el tratamiento del envenenamiento.

In the present work, the interaction of the amanitins of Amanita phalloides (Basidiomycetes) with the venoms of Bothrops neuwiedi diporus ("small yarará snake"), B. alternatus ("big yarará"), Crotalus durissus terrificus ("rattlesnake"), and honey bee Apis mellifera was examined. Ouchterlony, immunotransfer, rocket-electrophoresis, and polyacrylamide gel electrophoresis techniques were applied to anti-venoms and anti-toxins obtained by immunization in horses and/or in rabbits. Snake antisera and amanitins cross-reacted as well as bee venom and amanitins. When venoms of Bothrops neuwiedii diporus and Crotalus durissus terrificus were preincubated with amanitins and analysed by sodium dodecylsulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE), some protein bands disappeared and others were significantly reduced. These results reveal for the first time the interaction and degradation of proteins in snake venoms by amanitins. Moreover, the modification of the human blood clotting time due to snake venoms was corrected by the Amanita cyclopeptides. These results are also reported for the first time in this work. The occurrence of toxic polypeptides in the snake and bee venoms as well as in A. phalloides, and the cross-reactivity demostrated herein, suggest the occurrence of epitopes common to all of them. Taking into account these reactions,the use of heterologous anti-venoms seems to be of value in envenomation treatment.

No presente trabalho foi examinada a interação das amanitinas de Amanita phalloides (Basidiomy­cetes) com os venenos das serpentes Bothrops neuwiedi diporus ("jararaca-cruzeira"), B. alternatus ("urutu"), Crotalus durissus terrificus ("serpente cascavel") e da abelha-europeia Apis mellifera. Foram aplicadas as técnicas de Ouchterlony, imunotransferência, eletroforese rocket e eletroforese em gel de poliacrilamida aos anti-venenos e anti-toxinas obtidos por imunização em cavalos e/ou em coelhos. Os anti-soros de serpentes e as amanitinas reagiram em forma cruzada, bem como o veneno de abelha e as amanitinas. Quando os venenos de Bothrops neuwiedii diporus e Crotalus durissus terrificus foram incubados previamente com as amanitinas e foram analisados por eletroforese em gel de poliacrilamida-dodecilsulfato de sódio (dodecylsulfate-polyacrylamide gel electrophoresis: SDS-PAGE), algumas faixas de proteínas desapareceram e outras se reduziram notavelmente. Estes resultados revelam por primeira vez a interação e a degradação das proteínas dos venenos de serpentes pelas amanitinas. Por outra parte, a modificação do tempo de coagulação do sangue humano, devido aos venenos, se corrigiu com os ciclopeptídeos de Amanita. Estes resultados também se informam por primeira vez neste trabalho. A presença de polipeptídeos tóxicos nos venenos de serpentes e abelhas, bem como em A. phalloides e a reatividade cruzada demonstradas neste trabalho, sugerem a existência de epítopos comuns a todos eles. Levando em consideração estas reações, o uso de anti-venenos heterólogos parece ser de utilidade no tratamento do envenenamento.

Seguimiento del perfil proteico urinario en el trasplante renal / Follow-up of urine protein profile in renal transplant

La nefropatía crónica del trasplante (NCT) se caracteriza por fibrosis intersticial y atrofia tubular, pero su etiología es diversa. El objetivo del trabajo fue evaluar el seguimiento cualitativo de proteínas urinarias en pacientes con más de seis años de trasplante renal y compararlo con parámetros de laboratorio y con biopsia renal. Se evaluaron 17 pacientes durante un año, a través de creatinina sérica, proteinuria y fraccionamiento proteico por electroforesis en geles de poliacrilamida (SDS-PAGE) en una y dos dimensiones con coloración argéntica. Todos los pacientes con biopsias características de nefropatía crónica del trasplante presentaron un perfil tubular y aquellos con glomerulopatía del trasplante evidenciaron un perfil predominantemente glomerular. Los cambios en el perfil tubular se asociaron a infecciones urinarias, pulmonares e intestinales y a una respuesta inmunológica en el límite al rechazo (borderline), aún sin modificaciones evidentes en la creatinina sérica ni en la proteinuria. La electroforesis bidimensional permitió detectar claramente las proteínas orosomucoide y zinc alfa-2 glicoproteína, aparentemente asociadas a hialinosis arteriolar por toxicidad causada por ciclosporina. La electroforesis SDS-PAGE permitió identificar el sitio de lesión en el nefrón y cambios en la evolución, aún en presencia de vestigios de proteinuria. Las electroforesis SDS-PAGE mono y bidimensional se plantean como complemento para la evaluación de la condición clínica del paciente trasplantado renal crónico.

Post-transplant chronic nephropathy is characterized by interstitial fibrosis and tubular atrophy. These alterations are non-specific, but the glomerular and vascular lesions help to differentiate the etiological causes. The aim of this study was to determine the qualitative follow-up study of urine proteins in patients, six years after receiving a renal transplant, and compare their relationship to laboratory parameters and renal biopsy. The evolution of 17 patients with renal transplant was studied for one year, through serum creatinine, proteinuria, and polyacrylamide gel electrophoresis in the presence of sodium dodecylsulfate (SDS-PAGE) in one and two dimensions with silver staining. The patients with chronic nephropathy by renal biopsy presented a tubular profile of urinary proteins, and those who presented glomerulopathy showed a predominant glomerular profile. Changes in the tubular profiles during the follow-up study were associated to urinary tract, pulmonary, and intestinal infections, as well as borderline rejection, even without evident changes in either proteinuria or serum creatinine. The bidimensional electrophoresis clearly marked the orosomucoid proteins and zinc alpha-2 glycoprotein, generally associated to arterial hyalinosis due to ciclosporin toxicity. Even with traces of proteinuria, SDS-PAGE with silver staining made it possible to identify the renal lesion location. It also enabled the detection of the stable profiles of urinary proteins and changes in the evolution, without modification of serum creatinine. SDS-PAGE in one and two dimensions is used as a complement in the evaluation of renal transplant patients' clinical condition.

Utilidad de la fosfatasa alcalina urinaria como marcador precoz de lesión tubular renal / Utility of urinary alkaline phosphatase as early marker of renal tubular failure

El objetivo de este estudio fue determinar la actividad de la fosfatasa alcalina urinaria (FALur) para evaluar precozmente lesión tubular y su utilidad diagnóstica. Los pacientes estudiados fueron: 20 Controles (C), 11 hipertensos (HTA), 23 diabéticos (DBT) y 34 con insuficiencia renal de diverso origen (IRDO). Se realizaron las determinaciones de: creatinina, clearence de creatinina (Jaffé cinético), FAL sérica y urinaria (cinético DGKC), microalbuminuria (inmunoturbidimétrico), proteiunuria (turbidimétrico), uroproteinograma, SDS-PAGE (al 12,5%) e isoenzimograma de FAL. La FAL sérica hallada fue normal, sin diferencia entre grupos y sin relación con el aumento de la FALur. El valor de corte recomendado para FALur fue de 8 UI/L. La FALur estuvo elevada en HTA e IRDO y normal en individuos con DBT. Los aumentos de FALur en IRDO se relacionaron con la lesión tubular estructural y en pacientes con HTA podrían relacionarse con alteración tubular precoz. Se propone la determinación de FALur para la detección temprana de lesión tubular ante falla renal establecida o en individuos con riesgo de desarrollarla, y se establece su utilidad en pacientes: - con DBT y HTA para seguimiento (junto a microalbuminuria y clearence de creatinina), - internados en riesgo de insuficiencia renal aguda: para orientar tratamientos, - con insuficiencia renal crónica: como indicador de lesión y pronóstico.

The objective of this study was to determine the activity of urinary Alkaline Phosphatase (ALPur) to evaluate early tubular failure and its diagnostic usefulness. The patients studied were: 20 Controls (C), 11 with Hipertensión (HTA), 23 Diabetic (DBT) and 34 with renal Insufficiency of diverse origin (IRDO). The creatinine, creatinine clearence (kinetic Jaffé) serum and urinary ALP (kinetic DGKC), microalbuminuria (Immunoturbidimetric), proteiunuria (Turbidimetric), uroproteinogram, SDS-PAGE (12.5%) and ALP isoenzymes determinations were made. The results indicate that serum ALP was normal, without difference between groups, and no relation with the increase in ALPur. Recommended cut-off value of ALPur was 8 UI/L. ALPur was elevated in HTA and IRDO, and normal in DBT. Increases in ALPur in IRDO were related to the structural tubular injury, and those in HTA could be related to early tubular alteration. Determination of ALPur is proposed for early detection of tubular injury, before renal failure is established or when there is risk of developing it, establishing its usefulness in: - DBT and HTA patients: screening (together with microalbuminuria and creatinine clearence). - Hospitalized patients in risk of acute renal insufficiency: in order to orient treatments. - Patients with chronic renal insufficiency: as an indicator of injury and prognosis.

Candidiasis esofágica en pacientes con sida. Estudio clínico y microbiológico

Se estudiaron 18 pacientes con sida, que presentaban síntomas gastrointestinales altos o lesiones en la cavidad oral sugestivos de candidiasis. Se obtuvieron datos clínicos, muestras de la cavidad oral, biopsias y cepillado esofágico, así como suero de todos los pacientes. El síntoma que principalmente se observó en la candidiasis esofágica fue la disfagia; la candidiasis oral se comportó de forma asintomática. Candida albicans fue la especie que más se aisló con predominio del serotipo A. Se analizaron por la técnica de electroforesis en gel de poliacrilamida los perfiles proteicos de las 12 cepas pertenecientes a esta especie, se observó identidad de sus patrones de peso molecular, lo que sugiere que sea la misma cepa la que se halla en la cavidad oral y en el esófago. Se evaluó la respuesta de anticuerpos anti-C. albicans, no resultó útil la inmunodifusión doble para el diagnóstico de candidiasis esofágica.

18 AIDS patients who presented high gastrointestinal symptoms or lesions in the oral cavity suggestive of candidiasis were studied. Clinical data, specimen of the oral cavity, biopsies and esophageal brushing, as well as serum from all patients were obtained. Dysphagia was the main symptom observed in the esophageal candidiasis. Candida albicans was the most isolated species with a predominance of serotype A. The protein profiles of 12 strains belonging to this species were analyzed by the polyacrylamide gel electrophoresis, and it was found that their molecular weight patterns were identical, which indicates that the same strain is in the oral cavity and in the esophagus. The response of the anti-C. albicans antibodies was evaluated. The double immunodiffussion was not useful for the diagnosis of esophageal candidiasis.