Post-modern bioethical stresses destination of surplus embryos: Brazilian analysis and brief comparisons

The objective of the present study is to point out tensions of the theoretical/practical universe that Bioethics is facing in Brazil, in the search for a praxis for the destination of surplus embryos. We consider that Bioethics analyzes the implications of such practices in society and in relationships between individuals. Brief data from other countries were presented to compare the Brazilian situation progressively from the conceptual point of view and the adoption of measures. The research is a scoping review on the main points that have been hindering the progress of discussions on the subject and consequently the respective solution. The legal status of the embryo was described from several perspectives and theories, with the resulting proposals for the destination of surplus embryos in their positive and negative aspects. The tensions of Bioethics were presented in the context of post-modernity and the consequent social and moral plurality, together with the difficulties of identifying a secular bioethical morality. In the end, we conclude the possibility of proclaiming a consensus on the destination of surplus embryos based on secular morality, supported by the figure of the "moral strangers".

El objetivo del presente estudio es señalar las tensiones del universo teórico/práctico que la bioética enfrenta en Brasil, en la búsqueda de una praxis para el destino de los embriones sobrantes. Consideramos que la bioética analiza las implicaciones de tales prácticas en la sociedad y en las relaciones entre los individuos. Se presentaron breves datos de otros países para comparar progresivamente la situación brasileña desde el punto de vista conceptual y de la adopción de medidas. La investigación es una revisión del alcance de los principales puntos que han obstaculizado el avance de las discusiones sobre el tema y, en consecuencia, la respectiva solución. Se describió el estatuto jurídico del embrión desde diversas perspectivas y teorías, con las consiguientes propuestas para el destino de los embriones sobrantes en sus aspectos positivos y negativos. Se presentaron las tensiones de la bioética en el contexto de la posmodernidad y la consecuente pluralidad social y moral, junto con las dificultades de identificar una moral bioética laica. Al final, se concluye la posibilidad de proclamar un consenso sobre el destino de los embriones sobrantes basado en una moral laica, apoyada en la figura de los "extraños morales".

O objetivo do presente estudo é destacar as tensões do universo teórico/prático que a Bioética está enfrentando no Brasil, na busca de uma praxis para a destinação de embriões excedentes. Nós consideramos que a Bioética analisa as implicações de tais práticas na sociedade e nas relações entre indivíduos. Dados resumidos de outros países são apresentados para comparar a situação brasileira progressivamente de um ponto de vista conceitual para a adoção de medidas. A pesquisa é uma revisão de escopo sobre os pontos principais que vem atrapalhando o andamento das discussões sobre o assunto e consequentemente a solução respectiva. O status legal do embrião foi descrito a partir de diversas perspectivas e teorias, com as propostas resultantes para a destinação dos embriões excedentes em seus aspectos positivos e negativos. As tensões da Bioética foram apresentadas no contexto da pós-modernidade e a consequente pluralidade social e moral, juntamente com as dificuldades de identificar uma moralidade bioética secular. Ao final, nós concluímos pela possibilidade de proclamar um consenso sobre a destinação de embriões excedentes baseado na moralidade secular, apoiado pela figura dos "estranhos morais".

Análisis bioético (subjetivismo moral) desde la percepción de los clínicos sobre la situación de los embriones sometidos a fecundación in vitro. Quito-Ecuador / Bioethical analysis (moral subjectivism) from the perception of clinicians on the situation of embryos subjected to in vitro fertilization. Quito-Ecuador / Análise bioética (subjetivismo moral) a partir da percepção dos médicos sobre a situação dos embriões submetidos à fertilização in vitro. Quito-Equador

Resumen: Objetivo. Analizar las percepciones y prácticas de los clínicos en relación con el manejo del embrión sometido a técnicas de fecundación in vitro. Metodología. Cualitativa (subjetivista y fenomenológico). Se realizaron 15 las entrevistas semiestructuradas aplicando un muestreo por saturación dirigidas a personal clínico que haya participado en procedimientos de fecundación in vitro. Los datos se analizaron con el programa Atlas Ti 8.0®. Resultado. Los clínicos consideran al embrión como un ser humano o futuro ser humano y, además, merecedor de respeto y consideración, proponiendo incluso mejoras en los procesos de manipulación y almacenaje. Conclusión. Los embriones no son considerados como entes susceptibles de recibir daño, desde argumentos no solo técnicos sino éticos. Desde la corriente principialista, se describe la necesidad de promover actitudes de responsabilidad y prudencia para evitar el dogmatismo (objetivismo moral) proponiendo una postura deliberativa.

Abstract: The objective of this paper is to analyze the perceptions and practices of clinicians in relation to the management of embryos subjected to in vitro fertilization techniques. Methodology is Qualitative (subjectivist and phenomenological). A total of 15 semi-structured interviews were conducted using saturation sampling for clinical personnel who have participated in vitro fertilization procedures. The data is analyzed with the Atlas Ti 8.0® program. Results: Clinicians consider the embryo as a Human being or future human being, in addition, deserving of respect and consideration even proposing improvements in the processes of handling and storage. Conclusion. Embryos are not considered as entities susceptible of damage from not only technical but ethical arguments. From the principialist current, the need to promote attitudes of responsibility and prudence to avoid dogmatism (moral objectivism) is described, proposing a deliberative position.

Resumo: Objetivo. Analisar as percepções e práticas dos médicos em relação ao manejo do embrião submetido a técnicas de fertilização in vitro. Metodologia. Qualitativo (subjetivo e fenomenológico). Foram realizadas 15 entrevistas semiestruturadas por amostragem de saturação para pessoal clínico que participou de procedimentos de fertilização in vitro. Os dados são analisados com o programa Atlas Ti 8.0®. Resultado. Os médicos consideram o embrião como um ser humano ou futuro, além de merecer respeito e consideração, propondo até melhorias nos processos de manuseio e armazenamento. Conclusão. Os embriões não são considerados como entidades suscetíveis a receber danos não apenas de argumentos técnicos, mas éticos. A partir da corrente principialista, descreve-se a necessidade de promover atitudes de responsabilidade e prudência para evitar o dogmatismo (objetivismo moral), propondo uma posição deliberativa.

Effect of autologous platelet-rich plasma treatment on patients with thin endometrium / Efecto del tratamiento con plasma autólogo rico en plaquetas en pacientes con endometrio delgado

ABSTRACT Introduction: The success of frozen embryo transfer cycles depends on a delicate interaction between embryo quality and endometrium. Low pregnancy rates are associated with a thin endometrium. Objective: To evaluate the effect of autologous platelet-rich plasma treatment on patients with thin endometrium. Methods: In 34 patients with thin endometrium (< 7 mm), canceled in the previous frozen embryo transfer cycles, autologous platelet-rich plasma was prepared, from autologous peripheral vein blood; intrauterine infusion was given during hormone replacement therapy in frozen embryo transfer cycles. Frozen embryo transfer was performed when the endometrium thickness reached ≥ 7mm. Results: Six patients canceled the embryo transfer cycle due to endometrium thickness did not reach 7 mm; 28 patients got endometrial thickness ≥ 7 mm and performed frozen embryo transfer. The endometrial thickness was 7.5 ± 0.8 mm, which was significantly thicker than in the previous cycles (5.6 ± 0.79 mm) with p< 0.002, the implantation rate was 23.07 %, and the clinical pregnancy rate was 12/28 (42.8 %). Conclusion: Autologous platelet-rich plasma improves the endometrial thickness and the pregnancy rate outcomes in women with thin endometrium.

RESUMEN Introducción: El éxito de los ciclos de transferencia de embriones congelados depende de una delicada interacción entre la calidad del embrión y el endometrio. Las bajas tasas de embarazo están asociadas con un endometrio delgado. Objetivo: Evaluar el efecto del tratamiento con plasma rico en plaquetas autólogo en pacientes con endometrial delgado. Métodos: En 34 pacientes con endometrio delgado (< 7 mm) canceladas en los ciclos previos de transferencia de embriones congelados, se preparó plasma autólogo rico en plaquetas, a partir de sangre autóloga de venas periféricas; la infusión intrauterina se administró durante la terapia de reemplazo hormonal en los ciclos de transferencia de embriones congelados. La transferencia de embriones congelados se realizó cuando el grosor del endometrio alcanzó ≥ 7 mm. Resultados: En 6s pacientes se canceló el ciclo de transferencia embrionaria debido a que el grosor del endometrio no alcanzó los 7 mm; 28 pacientes obtuvieron un grosor endometrial ≥ 7 mm y realizaron transferencia de embriones congelados. El grosor del endometrio fue de 7,5 ± 0,8 mm, significativamente mayor que en los ciclos anteriores (5,6 ± 0,79 mm) con p< 0,002; la tasa de implantación fue de 23,07 % y la tasa de embarazo clínico fue de 12/28 (42,8 %). Conclusión: El plasma autólogo rico en plaquetas mejora el grosor endometrial y los resultados de la tasa de embarazo en mujeres con endometrio delgado.

Asynchrony between in vivo and in vitro rabbit embryos

Background: Comparative features of embryos developed under in vitro and in vivo conditions are particularly important in designing embryo transfer procedures that fulfil embryo-recipient synchronization requirements. Objective: To determine the degree of asynchrony in rabbit embryo development between cultured and in vivo embryos. Methods: A total of 55 non- lactating multiparous female rabbits were used. Embryos were classified as 16-cells or early morulae at 48 hours post-coitum (hpc). Embryos were cultured during 30 or 32 h and embryo development was compared with in vivo embryos of 72 hpc. In vitro and in vivo embryos at 72 hpc were classified as early or compacted morulae. Bayesian statistics was used. Difference between in vivo and in vitro embryos and the actual probability of the difference between the in vivo and in vitro embryo higher than zero (P) was estimated. Results: The percentage of compacted morulae was higher in in vivo embryos than in in vitro embryos with +6 h of asynchrony (73.5 and 32.8%, P=1.00). But the percentage of compacted morulae was similar with +8 h asynchrony. Conclusions: In vitro embryos delay their development by + 8 hours compared to in vivo embryos.

Antecedentes: El desarrollo comparativo de embriones producidos in vitro e in vivo es particularmente importante para el diseño de procedimientos de transferencia de embriones cuando se requiere sincronización entre el embrión y la hembra receptora. Objetivo: Determinar el grado de asincronía en el desarrollo embrionario entre embriones in vivo y cultivados. Métodos: Un total de 55 conejas multiparas no lactantes fueron utilizadas. Los embriones se clasificaron en 16 células o mórulas tempranas a las 48 horas después del coito (hpc). Los embriones se cultivaron durante 30 ó 32 horas y el desarrollo embrionario se comparó con embriones de 72 hpc obtenidos in vivo. Los embriones in vitro e in vivo a 72 hpc se clasificaron como mórulas tempranas o compactas. Se utilizó estadística bayesiana. Se estimó la diferencia entre embriones in vivo e in vitro y la probabilidad de que la diferencia sea superior a cero (P). Resultados: El porcentaje de mórulas compactas fue mayor en embriones in vivo que en embriones in vitro con +6 horas de asincronía (73,5 y 32,8%, P=1,00), pero el porcentaje de mórulas compactas fue similar con asincronía de +8 horas. Conclusión: Los embriones cultivados retrasan +8 horas su desarrollo en comparación con los embriones in vivo.

Antecedentes: A aquisição do desenvolvimento de embriões produzidos in vitro e in vivo é particularmente importante na concepção de procedimentos de transferência de embriões em que a sincronização entre o embrião e a fêmea receptora é necessária. Objetivo: Determinar o grau de assincronia no desenvolvimento embrionário entre embriões cultivados e in vivo. Métodos: Um total de 55 coelhos multíparos não lactantes foram usados. Os embriões foram classificados em 16 células ou mórulas iniciais 48 horas de gestação (hpc). Os embriões foram cultivados por 30 ou 32 horas e o desenvolvimento embrionário foi comparado com embriões de 72 hpc obtidos in vivo. Embriões in vitro e in vivo a 72 hpc foram classificados como mórulas precoces ou compactadas. Estatísticas bayesianas foram usadas. A diferença entre embriões in vivo e in vitro e a probabilidade de que a diferença seja maior que zero (P) foi estimada. Resultados: A porcentagem de mórulas compactadas foi maior em embriões in vivo do que em embriões in vitro com +6 horas de assincronia (73,5 e 32,8%, P=1,00). Mas a porcentagem de mórulas compactadas foi semelhante com assincronia de +8 horas. Conclusão: Embriões cultivados atrasam seu desenvolvimento em +8 horas em comparação com embriões in vivo.

Well-of-the-well (WOW) versus polyester mesh (PM): a comparison of single-embryo culture systems in bovines

Background: Mexico is innovating in the livestock industry through in vitro generation of bovine embryos with technologies such as well-of-the-well (WOW) and polyester mesh (PM) single-embryo culture systems. These techniques allow to maintain embryos in separate areas of a shared culture medium. Objective: To compare the quantity and quality of bovine embryos produced in WOW and PM culture systems versus the conventional (CG) culture system. Methods: In total, 345 embryos fertilized in vitro were evaluated for blastocyst yield in the three culture systems. To count blastocyst cell numbers, 69 embryos in each system were differentially stained for trophectoderm (TE), inner cell mass (ICM), and apoptotic cells. A qPCR gene expression analysis was performed for embryos in all three systems. Results: The WOW, PM and CG systems developed similar amount of blastocysts (41, 35 and 36%, respectively; p>0.05). Blastocysts in all three systems showed adequate amounts of ICM and apoptotic cells. Blastocysts in the PM system showed a greater number of TE cells [63.7 versus 58.6% in the CG system (p0.05). The ATP5B expression was higher in WOW than in PM (p0.05). The TJP3 expression was higher in PM than in WOW and CG (p<0.05). Expression of ID2 and CLDN4 was higher in WOW than in PM and CG (p<0.05). The biplot graphic from Principal Component Analysis (PCA) revealed that CG was located near degenerated embryos, whereas PM was located near arrested embryos, larger ICM and TE, and TJP3 expression. The WOW was located toward blastocysts, morulae, and expression of CLDN4, ID2 and GNAS. Conclusion: Compared with CG, both the PM and WOW systems are good options for culturing single embryos in the bovine model. Moreover, the PCA results suggest that embryos developed in the WOW system have greater capacity for generating blastocysts with increased ability to form TE and ICM layers, which might improve implantation.

Antecedentes: México está innovando en la industria ganadera a través de la generación in vitro de embriones bovinos con tecnologías de cultivo individual como lo son Pozo dentro de Pozo (WOW) y Malla de Poliéster (PM). Estos mantienen los embriones en áreas separadas mientras comparten un mismo medio de cultivo celular. Objetivo: Comparar la cantidad y calidad de embriones bovinos producidos en los sistemas WOW y PM contra el sistema de cultivo convencional en grupo (CG). Métodos: En total se evaluaron 345 embriones fertilizados in vitro para determinar la producción de blastocistos generados en los tres sistemas. Para contar el número de células por blastocisto, 69 embriones en cada sistema se tiñeron diferencialmente para trofectodermo (TE), masa celular interna (ICM) y células apoptóticas. Se realizó un análisis de expresión génica por qPCR de los embriones obtenidos en los tres sistemas. Resultados: Los sistemas WOW, PM y CG desarrollaron similares cantidades de blastocistos (41, 35 y 36%, respectivamente; p>0,05). Los blastocistos en los tres sistemas mostraron cantidades adecuadas de ICM y células apoptóticas. Los blastocistos en el sistema PM mostraron un mayor número de células TE [63,7% versus 58,6% en el sistema CG (p0,05). La expresión de ATP5B fue mayor en WOW que en PM (p<0,05), pero similar a CG (p<0,05). La expresión de TJP3 fue mayor en PM que en WOW y CG (p<0,05). La expresión de ID2 y CLDN4 fue mayor en WOW que en PM y CG (p<0,05). El gráfico de biplot del análisis de componentes principales reveló que CG se encontró cerca de embriones degenerados, mientras que PM se encontró cerca de embriones en arresto, ICM, TE, y TJP3. El WOW se localizó hacia blastocistos, mórulas y la expresión de CLDN4, ID2 y GNAS. Conclusión: En el modelo bovino los sistemas PM y WOW son buenas opciones para cultivar embriones individuales, ya que se obtienen resultados muy similares a los obtenidos con el sistema CG. Además, los resultados de PCA sugieren que los embriones individuales desarrollados en el sistema WOW generan blastocistos con mayor capacidad de formar TE e ICM, lo que podría mejorar su éxito de implantación.

Antecedentes: O México está inovando na indústria pecuária por meio da geração in vitro de embriões bovinos com tecnologias de cultura de embriões individuais, bem como em poço (WOW) e malha de poliéster (PM). Estes mantêm os embriões em áreas separadas, enquanto compartilham o mesmo meio de cultura de células. Objetivo: Comparar a quantidade e a qualidade de embriões bovinos produzidos nos sistemas de cultura WOW e PM com o sistema convencional de cultura em grupo (CG). Métodos: No total, 345 embriões fertilizados in vitro foram avaliados para determinar a produção de blastocistos gerados nos três sistemas. O número de células por blatocisto foi contado, 69 embriões em cada sistema foram diferencialmente corados para trofectoderme (TE), massa celular interna (ICM) e células apoptóticas. Uma análise de expressão gênica qPCR foi realizada para os embriões obtidos nos três sistemas. Resultados: Os sistemas WOW, PM e CG desenvolveram quantidades semelhantes de blastocistos (41, 35 e 36%, respectivamente; p>0,05). Os blastocistos nos três sistemas mostraram quantidades adequadas de ICM e células apoptóticas. Os blastocistos no sistema PM mostraram um número maior de células TE [63,7 versus 58,6% no sistema CG (p0,05). A expressão de ATP5B foi maior no WOW do que no PM (p<0,05), mas semelhante ao GC (p<0,05). A expressão de TJP3 foi maior no PM do que no WOW e CG (p<0,05). A expressão de ID2 e CLDN4 foi maior no WOW do que no PM e CG (p<0,05). O gráfico biplot da análise de componentes principais revelou que CG foi encontrado próximo a embriões degenerados, enquanto PM foi encontrado próximo a embriões presos, ICM, TE e TJP3. WOW foi encontrado para ter blastocistos, mórulas e a expressão de CLDN4, ID2 e GNAS. Conclusão: Em comparação com o CG, os sistemas PM e WOW são boas opções para a cultura de embriões individuais no modelo bovino. Além disso, os resultados da PCA sugerem que embriões individuais desenvolvidos no sistema WOW têm maior capacidade de desenvolver blastocistos com maior capacidade de formar as camadas TE e ICM, o que poderia melhorar seu sucesso de implantação.

Evaluation of fertility and embryo implantation in rats after the oral administration of Salvia officinalis (sage) extract / Evaluación de la fertilidad y la implantación de embriones en ratas después de la administración oral de extracto de Salvia officinalis (salvia)

SUMMARY: In Saudi Arabia, it is widely believed that women with reproductive problems can use the extract of the sage plant as a tea drink. This study was conducted to investigate the effects of this herb on the fertility of female rats and embryo implantation. Forty-eight Wistar virgin female rats were divided into four groups at random, with 12 rats in each group. The control group received distilled water orally. The three treatment groups received different concentrations of sage extract: 15, 60, or 100 mg/kg for 14 days before mating, then mated with a male and sacrificed on the 7th day of gestation, the uterine horns removed, and photographed. The total body weight of mothers, weight of uteri and ovaries and number of fetuses were determined. Ovarian and uteri tissues were cut into 5 µ sections and stained with hematoxylin and eosin. Serum FSH, LH were determined by the ELISA method. The present study showed that low dose of sage (15 mg/kg) have no effects on serum concentration levels of FSH and LH hormones, also has no effect on the number of growing follicles. The present study showed a significant differences (P≤0.05) in body weight, ovary and uterus weight in the groups treated with high doses of Salvia officinalis as compared to control group. Also a significant differences (P≤0.05) found in FSH, LH hormones. Histological study showed overall histomorphological structural configurations including growing and matured graafian follicular countable changes, besides a number of corpora lutea and regressed follicles in the treated groups with high doses of Salvia officinalis as compared to control group. The researchers concluded that the extract of the sage plant with high doses can stimulate the growth graafian follicles and improve fertility in female rats.

RESUMEN: En Arabia Saudita, se cree ampliamente que las mujeres con problemas reproductivos pueden usar el extracto de la planta de salvia como bebida de té. Este estudio se realizó para investigar los efectos de esta hierba sobre la fertilidad de las ratas hembra y la implantación del embrión. Se dividieron cuarenta y ocho ratas hembra vírgenes Wistar en cuatro grupos al azar, con 12 ratas en cada grupo. El grupo control recibió agua destilada por vía oral. Los tres grupos de tratamiento recibieron diferentes concentraciones de extracto de salvia: 15, 60 o 100 mg/kg durante 14 días antes del apareamiento, luego se aparearon con un macho y se sacrificaron el día 7 de gestación, se extrajeron los cuernos uterinos y se fotografiaron. Se determinó el peso corporal total de las madres, el peso del útero y los ovarios y el número de fetos. Los tejidos ováricos y uterinos se cortaron en secciones de 5 µ y se tiñeron con hematoxilina y eosina. FSH sérica, LH se determinaron por el método ELISA. El presente estudio mostró que dosis bajas de salvia (15 mg/kg) no tienen efectos sobre los niveles de concentración sérica de las hormonas FSH y LH, tampoco tienen efecto sobre el número de folículos en crecimiento. El presente estudio mostró diferencias significativas (P≤0,05) en el peso corporal, peso de ovario y útero en los grupos tratados con altas dosis de Salvia officinalis en comparación con el grupo control. También se encontraron diferencias significativas (P≤0,05) en las hormonas FSH, LH. El estudio histológico mostró configuraciones estructurales histomorfológicas generales que incluyen cambios contables en los folículos maduros (de Graaf) y en crecimiento, además de una cantidad de cuerpos lúteos y folículos en regresión en los grupos tratados con altas dosis de Salvia officinalis en comparación con el grupo de control. Los investigadores concluyeron que el extracto de la planta de salvia en altas dosis puede estimular el crecimiento de los folículos maduros y mejorar la fertilidad en ratas hembra.

Aplicación de diferentes metodologías en el mejoramiento de lenteja (Lens culinaris Medik) / Application of different methodologies in lentil (Lens culinaris Medik) breeding

RESUMEN La lenteja (Lens culinaris Medik.) es una especie diploide autógama (2n=2x=14) perteneciente a la familia Fabaceae. Es uno de los cultivos más antiguos que se conocen, con 8.000 a 9.000 años de historia, y se encuentra entre los primeros domesticados en Medio Oriente. Las semillas tienen un alto valor nutricional. Este cultivo es un interesante sustituto del trigo en las rotaciones de cereales, pero su importancia es baja debido a la falta de buenas variedades con adaptación local. Uno de los principales problemas que enfrentan los mejoradores en nuestro país es la estrecha base genética del germoplasma cultivado y su bajo potencial de rendimiento. En 2004 se inició un programa de mejoramiento de lentejas para desarrollar nuevas variedades con adaptación a las condiciones predominantes en las áreas de cultivo de Argentina. El germoplasma se obtuvo del ICARDA (Centro Internacional de Investigación Agrícola en las Zonas Áridas) y de productores locales. Se utilizan métodos convencionales de mejoramiento basados en la hibridación y selección. Se han obtenido dos nuevas variedades, una del tipo macrosperma (Boyerito FCA) y la otra del tipo microsperma (Tacuarita FCA) mediante la aplicación de selección masal en poblaciones F2 provenientes de la hibridación de materiales seleccionados. Este programa complementa los métodos de mejora tradicional con técnicas biotecnológicas como la transgénesis, el uso de marcadores moleculares, el cultivo de embriones in vitro combinado con el método SSD para acortar el ciclo generacional, y el fenotipado digital.

ABSTRACT Lentil (Lens culinaris Medik.) is a self-pollinating diploid (2n=2x=14) species belonging to the Fabaceae family. It is one of the oldest crops known, with 8,000 to 9,000 years of history and it is among the earliest domesticates from the Near East Fertile Crescent. The seeds have high nutritional value. This crop is an interesting substitute to wheat in cereal rotations but its importance is low due to a lack of suitable varieties with local adaptation. Some of the major problems that Argentinian lentil breeders face are the narrow genetic base of the current cultivated germplasm and its low yield potential. A lentil breeding program was initiated in 2004 to develop new varieties with adaptation to prevalent conditions in growing areas of Argentina. Germplasm was obtained from ICARDA (International Center for Agricultural Research in the Dry Areas) and local producers. Conventional breeding methods using hybridization and selection are being carried out to develop improved varieties, broad the genetic base, and isolate superior recombinant inbred lines. Two new varieties have been obtained, one of the macrosperm type (Boyerito FCA) and the other of the microsperm type (Tacuarita FCA) through the application of mass selection in F2 populations from the cross of selected materials. This program complements traditional breeding methods with biotechnological techniques such as transgenesis, use of molecular markers, in vitro embryo culture combined with the SSD method to shorten the breeding time, and digital phenotyping.

Influence of different protein supplements on the recovery and in vitro maturation of bovine oocytes / Influencia de diferentes suplementos proteicos en la recuperación y maduración in vitro de ovocitos bovinos / Influência de diferentes suplementações proteicas sobre a recuperação e maturação in vitro de oócitos bovinos

Abstract Background: Oocyte quality and maturation are influenced by protein supplementation. Objective: To evaluate the influence of fetal bovine serum (FBS) and bovine serum albumin (BSA) concentrations on the recovery and in vitro maturation (IVM) of bovine oocytes. Methods: The study was divided into Stage 1 (oocyte recovery), and Stage 2 (IVM). In the first stage, three experiments were conducted according to the recovery (R) medium used: (R1) 10 vs. 20% FBS; (R2) 5 vs. 10% BSA; and (R3) the best results from R1, R2, and the combination of FBS+BSA (5+5%). Within the second stage, the maturation medium was supplemented according to three experiments: (M1) 5 vs. 10% FBS; (M2) 0.4 vs. 0.8% BSA; and (M3) better results of M1, M2, and the combination of FBS+BSA (5+0.8%). Results: In Stage 1 (R1 and R2), the media with 10% FBS and 10% BSA showed better oocyte quality results and were defined for experiment R3. In R3, the 10% FBS and the combination of FBS+BSA (5+5%) allowed recovery of better-quality oocytes. In Stage 2 (M1 and M2), media with both levels of FBS (5 and 10%) and 0.8% BSA were defined as better according to the maturation and viability rates of cumulus cells, so they were defined for experiment M3. In M3, no difference was noted among the supplements. Conclusions: For oocyte recovery, 10% FBS and the combination of FBS+BSA (5+5%) can be used to obtain immature oocytes. For the in vitro maturation, FBS (both levels, 5 and 10%) and BSA (0.8%) can be used alone or in combination.

Resumen Antecedentes: La calidad y maduración de los ovocitos son influenciados por la suplementación proteica. Objetivo: Evaluar la influencia de concentraciones de suero fetal bovino (FBS) y albúmina sérica bovina (BSA) en la recuperación y maduración in vitro (IVM) de ovocitos bovinos. Métodos: El estudio se dividió en Etapa 1 (recuperación de ovocitos) y Etapa 2 (IVM). En la primera etapa, tres experimentos se realizaron de acuerdo con el medio de recuperación: (R1) 10 vs. 20% FBS; (R2) 5 vs. 10% BSA; y (R3) los mejores resultados de R1, R2 y la combinación de FBS+BSA (5+5%). En la segunda etapa, el medio de maduración fue suplementado para tres experimentos: (M1) 5 vs. 10% FBS; (M2) 0,4 vs. 0,8% BSA; y (M3) mejores resultados de M1, M2 y la combinación de FBS+BSA (5+0,8%). Resultados: En la Etapa 1 (R1 y R2), los medios con 10% FBS y 10% BSA mostraron mejores resultados de calidad oocitaria y fueron definidos para el experimento R3. En R3, 10% FBS y la combinación de FBS+BSA (5+5%) permitieron la recuperación de ovocitos de mejor calidad. En la Etapa 2 (M1 y M2), los medios con ambos niveles de FBS (5 y 10%) y 0,8% de BSA se definieron como mejores de acuerdo con las tasas de maduración y viabilidad de las células del cumulus, por lo que se definieron para el experimento M3. En M3, no se observó diferencia entre los suplementos. Conclusiones: Para la recuperación de ovocitos, se puede utilizar 10% de FBS y la combinación de FBS+BSA (5+5%) para obtener ovocitos inmaduros. Para la maduración in vitro, FBS (ambos niveles, 5 y 10%) y BSA (0,8%) se pueden usar solos o en combinación.

Resumo Antecedentes: A qualidade e a maturação de oócitos são influenciadas pela suplementação proteica. Objetivo: Avaliar a influência de concentrações de soro fetal bovino (FBS) e albumina sérica bovina (BSA) sobre a recuperação e maturação in vitro (IVM) de oócitos bovinos. Métodos: O estudo foi dividido em Etapa 1 (recuperação de oócitos) e Etapa 2 (IVM). Na primeira etapa, três experimentos foram realizados de acordo com o meio de recuperação: (R1) 10 vs. 20% FBS; (R2) 5 vs. 10% BSA; e (R3) melhores resultados de R1, R2 e a combinação de FBS+BSA (5+5%). Na segunda etapa, o meio de maturação foi suplementado de acordo com três experimentos: (M1) 5 vs. 10% FBS; (M2) 0,4 vs. 0,8% BSA; e (M3) melhores resultados de M1, M2 e a combinação de FBS+BSA (5+0,8%). Resultados: Na Etapa 1 (R1 e R2), os meios com 10% FBS e 10% BSA mostraram melhores resultados de qualidade oocitária e foram definidos para o experimento R3. Em R3, 10% FBS e a combinação de FBS+BSA (5+5%) permitiram a recuperação de oócitos de melhor qualidade. Na segunda etapa (M1 e M2), meios com ambos os níveis de FBS (5 e 10%) e 0,8% BSA foram definidos como os melhores de acordo com as taxas de maturação e viabilidade de células do cumulus, então foram definidos para o experimento M3. No M3, não houve diferença entre os suplementos. Conclusões: Para a recuperação oocitária, 10% FBS e a combinação de FBS+BSA (5+5%) podem ser usados para obter oócitos imaturos. Para maturação in vitro, FBS (ambos os níveis, 5 e 10%) e BSA (0,8%) podem ser usados sozinhos ou em combinação.

Expression of Pax6 and Pax7 proteins during the central nervous system development in human embryos / Expresión de proteínas Pax6 y Pax7 durante el desarrollo del sistema central nervioso en embriones humanos

The family of paired box (Pax) genes encodes the transcription factors that have been emphasized for the particular importance to embryonic development of the CNS, with the evidence obtained from various animal models. Human embryos have rarely been available for the detection of the expression of Pax family members. In this study 32 human embryos of Carnegie (CS) stages 10-20 were investigated to find the differences in the expression of Pax6 and Pax7 proteins in different regions of the neural tube and the caudal spinal cord. The expression of Pax6 and Pax7, as determined by immunohistochemistry, showed a tendency to increase in the later stages of the development both in the spinal cord and the brain. Significantly weaker expression of Pax6 and Pax7 was observed at CS 10 as compared to the later stages. At CS 10-12 weak expression of Pax6 was noticed in both dorsal and ventral parts of the developing spinal cord, while the expression of Pax7 was restricted to the cells in the roof plate and the dorsal part of the spinal cord. At CS 14-20 in the developing spinal cord Pax6 and Pax7 were detected mostly in the neuroepithelial cells of the ventricular layer, while only weak expression characterized the mantle and the marginal layers. At the same stages in the developing brain Pax6 and Pax7 were expressed in the different regions of the forebrain, the midbrain and the hindbrain suggesting for their involvement in the differentiation of neurons in specific parts of the developing brain.

La familia de genes Pax del inglés (Paired box) codifica los factores de transcripción debido a la particular importancia en el desarrollo embrionario del SNC, con la evidencia obtenida de varios modelos animales. Rara vez han estado disponibles embriones humanos para la detección de la expresión de genes de la familia Pax. En este estudio, se investigaron 32 embriones humanos de Carnegie (CS) etapas 10-20 para encontrar las diferencias en la expresión de las proteínas Pax6 y Pax7 en diferentes regiones del tubo neural y la médula espinal caudal. La expresión de Pax6 y Pax7, según la inmunohistoquímica, se observó una tendencia a aumentar en las etapas posteriores del desarrollo, tanto en la médula espinal como en el cerebro. Se observó una expresión significativamente más débil de Pax6 y Pax7 en CS 10 en comparación con las etapas posteriores. En CS 10-12 se notó una expresión débil de Pax6 en las partes dorsal y ventral de la médula espinal en desarrollo, mientras que la expresión de Pax7 se limitó a células en la placa del techo y dorsal de la médula espinal. En CS 14-20 en la médula espinal en desarrollo, Pax6 y Pax7 se observó principalmente en las células neuroepiteliales de la capa ventricular, mientras que expresión débil se caracterizó en las capas marginales. En las mismas etapas en el cerebro en desarrollo, Pax6 y Pax7 se expresaron en las diferentes áreas del prosencéfalo, el mesencéfalo y el mesencéfalo, lo que sugiere su participación en la diferenciación de las neuronas en partes específicas del cerebro en desarrollo.

Desenlaces en ciclos de transferencia con embriones vitrificados: análisis de dos esquemas de preparación endometrial / Results in cycles of frozen-thawed embryo transfer: Analysis of two protocols of endometrial preparation

Resumen: OBJETIVO: Comparar la tasa de recién nacido vivo con la de embarazo clínico-transferencia embrionaria, las características clínicas y concentraciones hormonales entre dos esquemas de preparación endometrial para transferencia de embriones desvitrificados: con un agonista de GnRH versus su sustitución con dosis altas de estrógenos. MATERIALES Y MÉTODOS: Estudio observacional, de cohorte histórica, efectuado en pacientes atendidas en el Instituto Nacional de Perinatología en protocolo FIV-ICSI entre enero 2017-marzo 2019. Se compararon dos esquemas de preparación endometrial: grupo A con agonista de GnRH y grupo B con estradiol a dosis de 8 mg al día sin agonista de GnRH. A todas las pacientes se les tomaron muestras de sangre para determinación de FSH, LH, estradiol y progesterona y se dio seguimiento ultrasonográfico durante la preparación endometrial. RESULTADOS: En 99 pacientes entre 23 y 42 años, con embriones congelados, la tasa de recién nacido vivo-transferencia embrionaria fue, respectivamente, de 17.2 y 8.6% (OR 1.98; IC95%: 077-1.53) y la de embarazo clínico de 26.5 y 22.8% (OR1.09; IC95%: 0.77-1.53) en los grupos A y B, respectivamente. La duración total del ciclo, los días con estrógenos y la concentración sérica de estradiol al inicio de la progesterona alcanzaron diferencia significativa entre los grupos. No se detectaron datos clínicos ni de laboratorio sugerentes de ovulación. CONCLUSIONES: La tasa de recién nacido vivo fue mayor con agonistas de GnRH sin alcanzar significación; sin embargo, la preparación endometrial solo con estrógenos es un esquema seguro, de menor costo y más amigable para la paciente y el médico.

Abstract: OBJECTIVE: To compare the rate of live newborn with clinical pregnancy-embryo transfer, clinical characteristics and hormonal concentrations between two endometrial preparation schemes for devitrified embryo transfer: with a GnRH agonist (aGnRH) versus its replacement with high doses of estrogens. MATERIALS AND METHODS: Historical cohort observational study conducted in patients treated at the National Institute of Perinatology under IVF-ICSI protocol between January 2017-March 2019. Two endometrial preparation schemes were compared: group A with GnRH agonist and group B with estradiol at 8 mg per day without aGnRH. All patients had blood samples taken for FSH, LH, estradiol and progesterone determination and ultrasonographic follow-up during endometrial preparation. RESULTS: in 99 patients between 23 and 42 years of age, with frozen embryos, the live birth-embryo transfer rate was 17.2 and 8.6%, (OR 1.98; CI95%: 077-1.53) and the clinical pregnancy rate was 26.5 and 22.8% (OR1.09; CI95%: 0.77-1.53) in groups a and b, respectively. total cycle length, estrogen days and serum estradiol concentration at the beginning of progesterone reached significant difference between groups. no clinical or laboratory data suggesting ovulation were detected. CONCLUSIONS: The rate of live newborn was higher with GnRH agonists without reaching significance; however, endometrial preparation with estrogens alone is a safe, lower cost and more patient- and physician-friendLy scheme.

Evaluation of embryo collection and transfer days on pregnancy rate of Mangalarga Marchador mares during the breeding season / Evaluación de los días de recolección y transferencia de embriones sobre las tasas de preñez en yeguas Mangalarga Marchador durante la estación de monta / Avaliação do dia da colheita e da transferência de embriões equino da raça Mangalarga Marchador durante a estação de monta

Abstract Background: Proper timing for embryo collection and transfer in horses -which is critical for the success of this biotechnology- is still debated. Additionally, there is little information on this technology under tropical conditions. Objective: To determine the best day for collection and transfer of embryos in Mangalarga Marchador mares under Brazilian northeast's conditions. Methods: Donors (n= 30) and recipients (n= 76) in diestrus phase were selected based on both clinical and gynecology examinations. Estrus was induced on both donor and recipient mares by intramuscular injection of 5 mg Dinoprost, aiming to obtain an ovulation interval of -1 to +3 between recipient and donor. Ovulation was induced with buserelin acetate when the largest follicle reached at least 35 mm in diameter. At this time, mares were subjected to artificial insemination at 48-hour intervals until ovulation. The embryos were collected on days 7, 8, and 9 after ovulation. Results: The embryo collection on day 8 was more efficient (p<0.05) than on day 7, but it was not more effective (p>0.05) than day 9, which presented the same efficiency (p>0.05) as day 7. From a total of 76 embryos transferred to the recipients, that were between days 4 and 9 after ovulation, there was no influence (p>0.05) of the day of transfer on pregnancy rate. Conclusions: The embryo collection must be performed on day 8 after ovulation, and transfer can be performed on any day of that interval (4-9) without affecting the pregnancy rate.

Resumen Antecedentes: El momento mas apropiado para la recolección y transferencia de embriones en equinos -que es fundamental para el éxito de esta biotecnología- continua siendo sujeto de estudio. Además, es escasa la información sobre esta tecnología en condiciones tropicales. Objetivo: Determinar el momento mas adecuado para la recolecta y transferencia de embriones en yeguas Mangalarga Marchador, en las condiciones del nordeste Brasileño. Métodos: Donadoras (n= 30) y receptoras (n= 76) en la fase de diestro se seleccionaron con base en los exámenes clínicos y ginecológicos. El estro de las yeguas donadoras y receptoras fue inducido con 5 mg de Dinoprost, vía intramuscular, intentando obtener un intervalo de ovulación de -1 a +3 entre la receptora y la donadora. La ovulación fue inducida con acetato de buserelina cuando el folículo mayor alcanzó 35 mm de diámetro. En ese momento, las yeguas fueron sometidas a inseminación artificial en intervalos de 48 horas hasta la ovulación. Los embriones fueron recolectados en los días 7, 8 y 9 después de la ovulación. Resultados: La recolecta de embriones en el día 8 fue más eficiente (p<0,05) que en el día 7, pero no fue más efectivo (p>0,05) que en el día 9, el cuál presentó la misma eficiencia (p>0,05) que en el día 7. De un total de 76 embriones transferidos a las receptoras, que se encontraban entre el día 4 y 9 después de la ovulación, no se registró influencia (p>0,05) del día de la transferencia en la tasa de preñez. Conclusiones: La recolecta embrionaria debe ser realizada el día 8 después de la ovulación, y la transferencia puede ser realizada en cualquier día de este intervalo (4 a 9) sin que se afecte la tasa de preñez.

Resumo Antecedentes: A importância do momentoda colheita e da transferência do embrião equino para o sucesso dessa biotécnica em equino continua sem ser completamente entendida. Adicionalmente, existe pouca informação sobre essa tecnologia em condições tropicais. Objetivo: Determinar o melhor dia para colheita e para transferência de embriões em eguas manga larga marchador nas condições do nordeste brasileiro. Métodos: Doadoras (n = 30) e receptoras (n = 76) na fase de diestro foram selecionadas com base nos exames clínico e ginecológicos. O estro das éguas doadoras e receptoras foi induzido com 5 mg de Dinoprost administrado por via intramuscular, buscando obter um intervalo de ovulação de -1 a +3 entre a receptora e a doadora. A ovulação foi induzida com acetato de buserelina quando o foliculo maior alcançou o tamanho de 35 mm de diâmetro. Nesse momento, as éguas foram submetidas a inseminação artificial em intervalos de 48 horas até a ovulação. Os embriões foram colhidos nos dias 7, 8 e 9 depois da ovulação. Resultados: A colheita de embriões no dia 8 foi mais eficiente (p<0,05) do que no dia 7, porem não foi mais efetivo (p>0,05) do que o dia 9, o qual apresentou a mesma eficiência (p>0,05) que o dia 7. De um total de 76 embriões transferidos para as receptoras que se encontravam entre os dias 4 e 9 depois da ovulação, não se registrou influência (p>0,05) do dia da transferência sobre a taxa de prenhez. Conclusões: A colheita embrionária deve ser realizada no dia 8 depois da ovulação, e a transferência pode ser realizada em qualquer dia desse intervalo (4-9) sem que a taxa de prenhez seja afetada.

Pregnancy and delivery rates after vitrification of in vitro -produced Nelore ( Bos indicus ) embryos under field conditions / Tasas de preñez y nacimientos después de la vitrificación de embriones Nelore (Bos indicus) producidos in vitro bajo condiciones de campo / Taxas de prenhez e nascimentos após vitrificação de embriões Nelore (Bos indicus) produzidos in vitro sob condições de campo

Abstract Background: Cryopreservation preserves cellular viability under low temperatures, resulting in diminished intracellular enzymatic activity and reduced cellular metabolism that ultimately allows preserving genetic material for indefinite periods of time. Embryos submitted to cryopreservation suffer from considerable morphological and functional damage, resulting in reduced survival and development rates. Objective: To evaluate pregnancy and delivery rates of in vitro-produced (IVP) Nellore (Bos indicus) embryos after vitrification under field conditions. Methods: The IVP embryos at blastocyst (Bl) and expanded blastocyst (Bx) were transferred fresh (n= 137) or after vitrification (n= 127). Results: Pregnancy rates at 35 d for fresh embryos were lower in Bl (41.6) than in Bx (60.9) (p<0.05). After vitrification, pregnancy rates were similar at 35 d between Bl (38.0) and Bx (47.6) (p>0.05). Pregnancy loss at 60 d were similar (p>0.05) for both fresh (Bl: 3.1 and Bx: 4.8) and vitrified embryos (Bl: 1.9 and Bx: 4.7). Delivery rates were similar between groups (p>0.05). Conclusion: Both pregnancy and delivery rates of Bos indicus IVP embryos vitrified under field conditions are indistinguishable from fresh embryos.

Resumen Antecedentes: La criopreservación se caracteriza por el mantenimiento de la viabilidad celular a bajas temperaturas, resultando en reducido metabolismo y actividad enzimática intracelular, lo que permite la preservación del material genético por períodos de tiempo indefinidos. Los embriones sometidos a ésta técnica sufren daños morfológicos y funcionales considerables, dando como resultado una sobrevivencia y tasas de desarrollo reducidas. Objetivo: Evaluar la tasa de preñez a partir de embriones Nelore (Bos indicus) producidos in vitro (IVP) después de la vitrificación bajo condiciones de campo. Métodos: Embriones IVP en los estadios de blastocisto (Bl) y blastocisto expandido (Bx) se transfirieron en fresco (n= 137) o después de la vitrificación (n= 127). Resultados: La tasa de preñez a los 35 d fue menor para los embriones transferidos en fresco en fase Bl (41,6) en relación con los Bx (60,9) (p<0,05). Después de la vitrificación, las tasas de preñez a los 35 d fueron similares entre Bl (38,0) y Bx (47,6) (p>0,05). Las pérdidas de preñez a los 60 d fueron similares (p>0,05) tanto para embriones en fresco en Bl (3,1) y Bx (4,8) como para los vitrificados (Bl: 1,9 y Bx: 4,7). Las tasas de nacimiento fueron similares entre los grupos (p>0,05). Conclusión: Las tasas de preñez y nacimiento de embriones IVP vitrificados de Nelore (Bos indicus) bajo condiciones de campo son semejantes a las de embriones en fresco.

Resumo Antecedentes: A criopreservação é caracterizada pela manutenção da viabilidade celular em baixas temperaturas, resultando em atividade enzimática intracelular e metabolismo celular reduzido, que permite a preservação do material genético por períodos indefinidos de tempo. Embriões submetidos à criopreservação sofrem danos morfológicos e funcionais consideráveis, resultando em sobrevivência reduzida e menores taxas de desenvolvimento. Objetivo: Avaliar a taxa de prenhez a partir de embriões Nelore (Bos indicus) produzidos in vitro (IVP) após a vitrificação sob condições de campo. Métodos: Embriões IVP nos estádios de blastocisto (Bl) e blastocisto expandido (Bx) foram transferidos a fresco (n= 137) ou depois da vitrificação (n= 127). Resultados: A taxa de prenhez aos 35 d foi menor para os embriões transferidos a fresco na fase de Bl (41,6), em relação aos Bx (60,9) (p<0,05). Apos a vitrificação, as taxas de prenhez foram semelhantes aos 35 d entre Bl (38,0) e Bx (47,6) (p>0,05). As perdas de prenhez aos 60 d foram semelhantes (p>0,05) tanto para embriões a fresco nos estádios de Bl (3,1) e Bx (4,8), e vitrificados em Bl (1,9) e Bx (4,7). As taxas de nascimentos foram semelhantes entre os grupos (p>0,05). Conclusão: As taxas de prenhez e nascimentos dos embriões IVP vitrificados de Nelore (Bos indicus) sob condições de campo é semelhante àquela dos embriões a fresco.

Ethical problems with the preimplantation genetic diagnosis of human embryos / Problemas éticos con el diagnóstico genético preimplantacional de embriones humanos / Problemas éticos com diagnóstico pré-implantacional de embriões humanos

Abstract: 14. The purpose of preimplantation genetic diagnosis by embryonary biopsy is to identify genetic alterations prior to the implantation of embryos produced by in vitro fertilization. The most important aim is the selection of genetically healthy embryos due to their genetic indemnity, but it can also be used to select the sex or, eventually, other detectable traits accrding to the wishes of the parents. This procedure has been the subject of scientific debates, in relation to the harm that it can cause to healthy embryos that are going to be implanted, and in relation to the interpretation of the genetic tests made. Ethical debates have also focused on the production of and respect for the life and the integrity of developing human beings. In this work, it is argued that most of the uses of PGD are morally reprehensible, because they are done with disregard to the dignity that should be granted to embryos as human persons.

Resumen: 18. El diagnóstico genético preimplantacional (DGP) mediante biopsia embrionaria tiene como objeto la detección de alteraciones genéticas previamente a la implantación de embriones producidos por fertilización in vitro (FIV). Su finalidad más significativa es la selección de embriones por su indemnidad genética. También se puede emplear para seleccionar el sexo o eventualmente otras características detectadas según el deseo de los padres. Este procedimiento ha sido objeto de debates en el ámbito científico, por el eventual daño que puede ocasionar la técnica en embriones sanos que serán implantados y por las interpretaciones de los exámenes genéticos realizados. También ha sido objeto de debates en el ámbito ético-antropológico, en cuanto a la producción y al respeto a la vida e integridad de los seres humanos en desarrollo. En este trabajo se argumenta que los usos que se hacen del DGP son, en su gran mayoría, moralmente reprochables, por hacerse con desprecio de la dignidad que debe darse al embrión como persona humana.

Resumo: 22. O Diagnóstico genético pré-implantacional (PGD) por meio de biópsia embrionária visa a identificação de alterações genéticas prévias à implantação de embriões produzidos por fertilização in vitro (FIV). Seu propósito mais significativo é a seleção de embriões por sua característica genética. Ele também pode ser usado para selecionar o sexo ou, eventualmente, outras características identificadas de acordo com os desejos dos pais. Este procedimento tem sido tema de debate em âmbito científico, por eventual dano que pode ocaciosionar a técnica em embriões saudáveis que serão implantados e pela interpretações dos exames genéricos realizados. Ele também tem sido objeto de debate na área ético-antropológica, no que concerne a produção e o respeito à vida e integridade do ser humano em desenvolvimento. Este artigo argumenta que os usos que são feitos do PGD são, em sua grande maioria, moralmente condenáveis, por ser instrumentalizado com desrespeito pela dignidade que deve ser dada ao embrião como uma pessoa humana.

Embrioteca: espacio para la investigación científica y la docencia en la universidad médica villaclareña / Embrioteca: space for scientific research and teaching at the medical university of Villa Clara

Las embriotecas humanas son valiosas colecciones de material embrionario humano que honran las instituciones que las poseen. Entre las más citadas actualmente están prestigiosas embriotecas en España, Estados Unidos y Argentina. Resultan de un laborioso trabajo de recolección y procesamiento de delicadas muestras embrionarias con potencialidades de uso docente e investigativo. Han sido múltiples las aportaciones al conocimiento científico a partir del estudio de sus series, además del inestimable valor didáctico de las imágenes que atesoran. La Universidad de Ciencias Médicas de Villa Clara presenta la modesta colección que posee, abierta a nuevas contribuciones y a los interesados en su consulta. El objetivo de esta revisión es exponer su relevancia científica y docente en un contexto de revisión histórica y actualidad.

Human embryos are valuable collections of human embryonic material that honor the institutions that own them. Among the most cited are currently prestigious embryos in Spain, the United States and Argentina. They result from a laborious work of collection and processing of delicate embryonic samples with potential for teaching and research use. There have been many contributions to scientific knowledge from the study of their series, in addition to the invaluable didactic value of the images they treasure. The University of Medical Sciences of Villa Clara presents the modest collection that it has, open to new contributions and to those interested in its consultation. The objective of this review is to expose its scientific and teaching relevance in a context of historical review and current affairs.

Percepciones y creencias sobre criopreservación embrionaria en mujeres y hombres que se realizan técnicas de reproducción asistida en Santiago, Chile / Perceptions and beliefs about embryo cryopreservation in women and men who have assisted reproductive techniques in Santiago, Chile

RESUMEN Introducción y objetivos: Aunque la criopreservación embrionaria es frecuentemente utilizada como parte de las técnicas de reproducción asistida, no existe información cuantitativa de cómo las parejas infértiles viven la experiencia de tener embriones criopreservados en Chile. El objetivo del estudio fue examinar las percepciones y creencias que tienen mujeres y hombres respecto de sus embriones criopreservados, sus perspectivas respecto de la donación reproductiva y destino de los embriones remanentes. Metodología: 153 mujeres y hombres con embriones criopreservados provenientes de un hospital público, Instituto de Investigaciones Materno Infantil y un centro privado, Clínica Las Condes, en Santiago, Chile, respondieron durante mayo 2015 a mayo 2016 un cuestionario en línea, anónimo, respecto de sus percepciones y creencias sobre criopreservación embrionaria. Resultados: Los encuestados reconocen a sus embriones criopreservados como un hijo (53.2%) o un proyecto de hijo (40.7%). Sólo 8% los considera un grupo organizado de células; sobre el 60% rechaza la opción de descartarlos o usarlos para investigación. Los participantes del hospital público tenían mayor disposición a donar sus embriones remanentes a otras parejas que aquellos del privado (61% vs 40%; P=0.016). Un 34% de las personas encuestadas estuvo de acuerdo con donar embriones a parejas de un mismo sexo. Conclusión: Este estudio muestra que las personas chilenas tienen un vínculo emocional con sus embriones criopreservados y no consideran descartarlos. Los resultados de este estudio pueden servir para dar adecuada consejería a las personas que se realizan técnicas de reproducción asistida, de tal modo de tomar decisiones informadas respecto de la criopreservación.

ABSTRACT Background and objetive: Although embryo cryopreservation is frequently used as part of assisted reproductive technology, quantitave information addressing how infertile couples live the experience of having cryopreserved embryos is lacking in Chile. The aim of this study is to examine men and women's perception and beliefs regarding their cryopreserved embryos, as well as their perspective on embryo donation and disposition. Methods: 153 women and men with frozen embryos from a public hospital, Instituto de Investigactiones Materno Infantil, and a private clinic, Clínica Las Condes, in Santiago, Chile, responded between May 2015 and May 2016 to an anonymous online survey addressing their perceptions and beliefs concerning their cryopreserved embryos. Results: Respondents considered their frozen embryos to be equivalent to a child (53.2%) or a potential child (40.7%). Only 8% regard them as an organized group of cells. Over 60% of respondents disagree with destroying surplus embryos or using them for research. Participants from the public hospital are more willing to donate their embryos to another couple than those from the private center (61% vs 40%; P=0.016); 34% of respondents agreed to donate surplus embryos to same sex couples. Conclusion: This study reveals that Chilean couples are emotionally bound to their frozen embryos, and that discarding them is not an option. The results from this survey will help strengthen counseling for couples to enable them to make informed decisions regarding their surplus embryos.

Efecto en los resultados reproductivos con la "magnetic-actived cell sorting (MACS)" para la eliminación de espermatozoides positivos a anexina V en parejas con infertilidad inexplicable / Effect on reproductive outcomes by using "magnetic-actived cell sorting (MACS)" for the elimination of sperm-positive annexin-V in couples with unexplained infertility

Resumen Objetivo: Determinar si la eliminación de espermatozoides positivos a marcadores tempranos de apoptosis en parejas con infertilidad inexplicable incrementa la tasa de nacidos vivos. Materiales y métodos: Ensayo piloto, con asignación al azar, controlado y triple ciego; y un estudio paralelo de dos grupos. Se incluyeron parejas con diagnóstico de infertilidad inexplicable que se asignaron en una proporción 1:1 al grupo A (método de capacitación espermática swim-up) o grupo B (método de capacitación espermática swim-up complementado con separación magnética de células activadas; magnetic-actived cell sorting; MACS). Posteriormente, a todas las muestras se les efectuó una inyección intracitoplasmática de espermatozoides, como técnica de fertilización. Por último, todos los embriones obtenidos se analizaron hasta la etapa de blastocisto y todas las transferencias se llevaron a cabo en la misma etapa. Resultados: Se incluyeron 40 parejas y no se encontraron diferencias en la tasa de fertilización. Con la aplicación de MACS se obtiene mayor porcentaje de embriones de buena calidad en día 3 (90.3 vs 99.5%; p = 0.03) y en día 5 (77.3 vs 90.1%; p = < 0.0001) disminuyó el porcentaje de embriones arrestados (16.3 vs 7.9%; p = 0.01). Por último, las tasas de implantación (42.1 vs 57.1%), embarazo clínico (60 vs 80%) y nacidos vivos (55 vs 80%) aumentaron, sin diferencias estadísticamente significativas. Conclusiones: La separación magnética de células activadas (MACS) en parejas con infertilidad inexplicable mejora el desarrollo embrionario. A pesar de no existir una diferencia significativa se observa una tendencia al incremento de embarazos clínicos y nacidos vivos.

Abstract Objective: To determine if the live births delivery rate with the eliminating sperm positive to early apoptotic events is higher in couples with unexplained infertility. Materials and methods: A pilot randomized controlled trialA pilot and triple-blinded; using a parallel study of two groups. We included a total of 40 couples with unexplained infertility assigned in a 1:1 proportion either to the group A (sperm training method swim-up) or to the group B (swim-up sperm training method supplemented with the use of "magnetic-actived cell sorting (MACS)"). Subsequently, all samples were submitted to intracytoplasmic sperm injection as a fertilization technique. Finally, all embryos obtained were analyzed until the blastocyst stage, and all the transfers were performed in the same stage. Results: There are no differences in the fertilization rate; however, with the use of "magnetic-actived cell sorting" there is a higher percentage of good quality embryos on day 3 (90.3% vs 99.5%, p = 0.03) and day 5 (77.3% vs 90.1%, p = <0.0001). In addition, a decrease in the percentage of arrested embryos was demonstrated (16.3% vs 7.9%, p = 0.01). Finally, implantation (42.1% vs 57.1%), clinical pregnancy (60% vs 80%) and live birth rates (55% vs 80%) increased; however, no statistically significant differences were reported. Conclusions: The use of "magnetic-actived cell sorting" in couples with unexplained infertility improves embryonic development. Although there is no significant difference, a trend is observed in relation to the increase in the number of clinical pregnancies and live births.

Comportamiento del semen bovino sexado congelado-descongelado en fertilización in vitro (FIV) capacitado mediante BO en dos concentraciones versus percoll / Behavior of sexed frozen-thawed bovine semen on in vitro fertilization (IVF) capacitated with two concentrations of BO versus percoll

RESUMEN: El objetivo fue comparar la tasa de división (TD) y desarrollo embrionario (DE) con semen sexado X (SX) en FIV capacitado con Percoll vs. BO, y evaluar el efecto de dos concentraciones (5x106 vs. 10x106 espermatozoides/ml), capacitado con BO, comparado con el semen no-sexado (NS). Un avance importante es predeterminar el sexo en bovinos, es posible obtener mayor proporción de terneras a partir del citómetro de flujo con la capacidad de seleccionar los espermatozoides X por la diferencia del ADN (4 %, bovinos), con confiabilidad del 90 %. El SX aumenta la eficiencia reproductiva, permite la selección de hembras e incrementa la ganancia genética. Se obtuvieron complejos ovocito cúmulus (COC), de ovarios de matadero, se cultivaron para maduración en gotas de 100 µl de TCM-199 + 5 % de suero fetal bovino + 0.005 U/ml de (FSH-p) + 10 IU hCG/ml + 1µg Estradiol (E2)/ml, 15 COC/gota, cubiertas con aceite mineral, en incubadora (38,5 ºC, 5 % de CO2 y 95 % de humedad), 22 h. Posmaduración se dividieron en 4 grupos (G1, G2, G3, G4) y se realizaron dos experimentos simultáneamente: I) G1: NS a 5x106, G2: SX a 5x106, G3: SX a 10x106 espermatozoides/ml capacitados con BO. II) G2: SX a 4,5x106 espermatozoides/ml capacitados con BO y G4: SX capacitado con Percoll a 5x106 espermatozoides/ ml. Se colocaron 15 COC/gota de semen cubiertas con aceite mineral, en incubadora, 18 h. Para el desarrollo se colocaron en gotas de CR1aa, en incubadora. Se aplicó el test de χ2. La TD a las 48 h entre G1 y G3 no presentó diferencias significativas (p<0,05), sin embargo, en ambos grupos fue significativamente mayor al G2. En el DE al día 7 hubo diferencias significativas (p<0,05) a favor del G4. Se obtuvo mayor DE con el SX capacitado con Percoll respecto al BO y no hubo diferencias entre ambas concentraciones de semen.

SUMMARY: The objective of this study was to evaluate the in vitro fertility of bovine sexed semen (SX) capacitated with Percoll vs. BO. The division rate (DR), embryo development (ED) were evaluated in two concentrations 5x106 vs. 10x106 sperm/ml, capacitated with BO and compared with non-sexed semen (NS). Offspring sexing represents an important advance for livestock production. Flow cytometry separates X and Y spermatozoa by difference in DNA content (4 % greater in X) with 90 % effectiveness. The SX increases the reproductive efficiency, allows the selection of females and increases the genetic gain. Cumulusoocytes complexes (COC) were obtained from slaughterhouse ovaries. They were then cultured 22 hours for maturation in TCM199 + 5 % fetal calf serum + 0.005 IU/ml (FSH-p) + 10 IU hCG/ml + 1 mg Estradiol (E2)/ml, in 100 µl drops with mineral oil, in incubator (38.5 ºC, 5 % CO and 95 % humidity). Post maturation, 4 groups were randomly assigned (G1, G2, G3, G4) and were performed two experiments simultaneously: I) G1 was inseminated with NS at 5x106 sperm/ml, G2: SX at 5x106, G3: SX at 10x106 sperm/ml capacitated with BO. II) G2: SX at 5x106 sperm/ml capacitated with BO and G4: SX capacitated with Percoll at 5x106 sperm/ml. 15 COC/drop of capacitated semen covered with mineral oil and placed in an incubator for 18 hours. For development, they were placed in drops of CR1aa, in an incubator. Results were analyzed with the c square test. At 48 hours, there were no significant differences (p<0.05) in DR between G1 and G3, however, in both groups it was significantly greater than G2. At day 7 there were significant differences (p <0.05) in ED, greater in G4. At 48 hours, there were no significant differences (p<0.05) in DR between G1 and G3, however, in both groups it was significantly greater than G2. At day 7 there were significant differences (p <0.05) in ED, greater in G4. A higher ED was obtained with the SX capacitated with Percoll, with respect to BO and there was no difference between the two semen concentrations.

Dilemas éticos en embriones criopreservados: avance de investigación / Ethical dilemmas in cryopreserved embryos: research update

Los adelantos en medicina reproductiva han producido cambios y transformaciones en la estructura familiar. El impacto de la técnica sobre la subjetividad requiere de un trabajo interdisciplinario capaz de conceptualizar las variantes y los efectos de esas transformaciones sobre el tejido social de la Argentina. En esta oportunidad, el foco será la conceptualización del embrión in vitro; se estudiará cómo el modo de percibirlos afecta el destino de los embriones criopreservados. Este trabajo presenta un primer acercamiento, en el marco de una investigación posdoctoral (CONICET) que tiene por objeto el desarrollo de una guía psico-educativa de buenas prácticas para la resolución de dilemas éticos en embriones criopreservados. La indagación se llevó a cabo en 27 pacientes/usuarios de técnicas de reproducción humana asistida (TRHA) por medio de una encuesta estructurada on-line autoadministrable, que indaga la representación del embrión no implantado en dos casos controvertidos de la práctica clínica: disposición de embriones en caso de fallecimiento de uno de los progenitores (viñeta 3) y disposición de embriones posdivorcio (viñeta 4).

Improvements in reproductive medicine have transformed the structure of families. The impact of the technique on the subjectivity of those involved in these processes requires interdisciplinary work in order to conceptualize the variations and effects of these transformations on the Argentinean society. In this opportunity, the focus will be the conceptualization of the in vitro embryo and the effects of this perception in its possible destinations. This paper summarizes a first approach, within the framework of a postdoctoral research (CONICET) which aims to develop a psycho-educational guide for the resolution of ethical dilemmas in cryopreserved embryos. The inquiry was carried out in 27 patients of assisted reproductive technologies (ARTs) by a self-administered structured online survey, which explores the perception of in vitro embryos in two controversial cases of clinical practice: embryos dispositions after death (case 3) and after divorce (case 4).

CRISPR/Cas9 y la terapia génica / CRISPR/Cas9 and gene therapy

El desarrollo de técnicas que permitan editar o corregir con precisión y eficiencia el genoma de células vivas es uno de los objetivos principales de la investigación biomédica. En las últimas décadas se han investigado e implementado distintas herramientas de edición genómica entre las cuales se destaca el sistema CRISPR/Cas9, un mecanismo de defensa bacteriano que ha sido adaptado y rediseñado para su utilización en otros modelos celulares. La accesibilidad, técnica y económica, y el enorme potencial de CRISPR/Cas9 han dado lugar a una revolución casi sin precedentes en las ciencias biomédicas y representan un gran avance en el campo de la terapia génica que requiere, sin embargo, la cautela apropiada.

The development of techniques that allow the precise and efficient edition of the genome of living cells is one of the main goals of biomedical research. Over the last few decades, a number of genome editing tools have been developed, the most prominent being the CRISPR/Cas9 system, a bacterial defense mechanism that has been redesigned for its use in other cellular systems. The accessibility, both technical and economical, and the enormous potential of CRISPR/Cas9 have contributed to an almost unprecedented revolution in the biomedical sciences and represent an important step forward in the field of gene therapy that needs, however, to be taken cautiously.