Development of dissolution test method for a telmisartan/amlodipine besylate combination using synchronous derivative spectrofluorimetry

The dissolution process is considered an important in vitro tool to evaluate product quality and drug release behavior. Single dissolution methods for the analysis of combined dosage forms are preferred to simplify quality control testing. The objective of the present work was to develop and validate a single dissolution test for a telmisartan (TEL) and amlodipine besylate (AML) combined tablet dosage form. The sink conditions, stability and specificity of both drugs in different dissolution media were tested to choose a discriminatory dissolution method, which uses an USP type-II apparatus with a paddle rotating at 75 rpm, with 900 mL of simulated gastric fluid (SGF without enzymes) as the dissolution medium. This dissolution methodology provided good dissolution profiles for both TEL and AML and was able to discriminate changes in the composition and manufacturing process. To quantify both drugs simultaneously, a synchronous first derivative spectrofluorimetric method was developed and validated. Drug release was analyzed by a fluorimetric method at 458 nm and 675 nm for AML and TEL, respectively. The dissolution method was validated as per ICH guidance.

O processo de dissolução é considerado como uma importante ferramenta in vitro para avaliar a qualidade do produto e o comportamento de liberação do fármaco. Prefere-se um ensaio único de dissolução para formas farmacêuticas contendo associação de fármacos pela simplificação dos testes de controle de qualidade. O objetivo do presente trabalho foi desenvolver e validar um teste de dissolução único para forma farmacêutica comprimidos contendo telmisartana (TEL) e besilato de anlodipino (AML) associados. Condições "sink", estabilidade e especificidade de ambos os fármacos nos diferentes meios de dissolução foram avaliadas para selecionar um método de dissolução discriminatório, que utiliza um aparato do tipo II da USP, com pás girando a 75 rpm e 900 mL de fluido gástrico simulado (SGF sem enzima) como o meio de dissolução. Estas condições proporcionaram bons perfis de dissolução para ambos, TEL e AML, sendo capaz de discriminar as mudanças na composição e processo de fabricação. Para quantificar os dois fármacos simultaneamente, um método de fluorescência derivada sincronizado foi desenvolvido e validado. A quantidade de fármaco liberado foi analisada pelo método fluorimétrico em 458 e 675 nm para a AML e TEL, respectivamente. O método de dissolução foi validado de acordo com a orientação da ICH.

Optimization of a spectrofluorimetric method based on a central composite design for the determination of potassium losartan in pharmaceutical products

Here, a spectrofluorimetric method for the determination of potassium losartan (PL) in pharmaceutical products is described. The effects of critical parameters, pH, acid molarity, and temperature, on the fluorescence intensity of PL were analyzed, and these parameters were optimized using a central composite design (CCD). The highest fluorescent intensity at excitation (λex) and emission (λem) wavelengths of 248 nm and 410 nm, respectively, was achieved using 0.01 M sulfurous acid (pH 2) at 21.6 °C. Under optimum conditions, the method was linear from 0.025-0.5 µg/mL, with a reasonably high correlation coefficient (0.9993). Furthermore, the method was very sensitive (LOQ, 0.006), accurate (RE, ≤7.06), and precise (%RSD, ≤6.51). After development and validation of the method, samples containing PL were analyzed with this method, and the obtained data were statistically compared with those obtained with a previously published reference method using a two one-sided equivalence test (TOST). According to the data, the results from the proposed and reference assays were equivalent.

Descreve-se método espectrofluorométrico para a determinação de losartana potássica (PL) em produtos farmacêuticos. Os efeitos de parâmetros críticos (pH, molaridade ácida e temperatura) na intensidade da fluorecência foram otimizados usando o planejamento de componente central (DCC). A mais alta intensidade fluorescente com λex=248 nm e λem= 410 nm foi obtida usando ácido sulfúrico 0.01 M (pH 2) e 21.6 ºC. Nas condições ideais, a linearidade do método foi estabelecida na faixa de concentração de 0.025-0.5 µg/mL com coeficiente de correlação bastante elevado (0.9993). Além disso, o método foi muito sensível com valor de LOQ 0.006, exato (RE≤7.06) e preciso (RSD%≤6.51). Depois do desenvolvimento e validação do método, amostras de medicamentos contendo PL foram analisadas com este método e os resultados obtidos foram comparados estatisticamente com método de referência, publicado anteriormente, usando o Teste de equivalência TOST (Teste de Equivalência Unilateral). De acordo com os dados estatísticos, os resultados do ensaio de referência e do método proposto foram equivalentes.

Fluorometric quantification of protoporphyrin IX in biological skin samples from in vitro penetration/permeation studies

A fluorometric analytical method was developed for quantification of protoporphyrin IX (PpIX) in skin samples and receptor phase solution after in vitro cutaneous penetration/permeation studies. Analytical conditions used were: excitation and emission wavelengths: 400 nm and 632 nm; bandwidth: 0.5 nm; excitation and emission slits: 10/10. PpIX was recovered from two different layers of skin, the stratum corneum (SC) and the epidermis plus dermis ([E+D]), by vortex homogenization, probe and bath sonication, using DMSO as an extraction solvent. The detection and quantification limits were 0.002 and 0.005 μg/mL, respectively. The assay was linear from 0.005 - 0.5 μg/mL. The within-day and between-day assay precision and accuracy in DMSO and receptor phase solution were each studied at the two concentration levels 0.04 and 0.2 μg/mL, and 0.01 and 0.08 μg/mL, respectively. The coefficients of variation and deviation from the theoretical values were lower than 5%. The skin recovery of PpIX from SC and [E+D] layers using two different concentrations (0.5 and 1.0 μg/mL) were all above 90.0%. The method described has potential application to in vitro penetration/permeation studies of PpIX using porcine skin as a biological membrane model.

Um método analítico por espectrofluorimetria foi desenvolvido para quantificar a protoporfirina IX (Pp IX) em amostras de pele e fase receptora após a realização de testes in vitro de penetração/permeação cutâneas. As condições analíticas utilizadas foram: comprimentos de onda de excitação e emissão: 400 nm e 632 nm; largura de banda: 0,5 nm; fendas de excitação e emissão: 10/10. A PpIX foi extraída de amostras de estrato córneo (EC) e da epiderme sem estrato córneo + derme ([E+D]) através da agitação em vórtex e sonicação por haste e banho, utilizando-se o DMSO como solvente extrator. O limite de detecção e quantificação foram, respectivamente, de 0,002 e 0,005 μg/mL. O método mostrou-se linear da faixa de 0,005 - 0,5 μg/mL. A precisão e exatidão intra e inter-ensaio em DMSO e na fase receptora foram validadas utilizando-se duas concentrações distintas, respectivamente, de 0,004 e 0,2 μg/mL, e 0,01 e 0,08 μg/mL. Os valores de coeficiente de variação e o desvio do valor teórico foram inferiores a 5%. A recuperação da PpIX das camadas da pele (EC e [E+D]) utilizando-se duas concentrações distintas (0,5 e 1,0 μg/mL) foram todas acima de 90,0%. O método descrito pode ser utilizado para determinação da PpIX após estudos de penetração/permeação cutânea in vitro utilizando pele de porco como modelo de membrana.

Emission fi lter design to detect poultry skin tumorsusing fl uorescence hyperspectral imaging / Diseño del filtro de emisión para detectar tumores cutáneos en canales de aves usandoimagenes de fluorescencia hiperespectral / Desenho de um filtro de emissão para detectar tumores cutâneos em carcaças de avesusando imagens de fluorescência hiperespectral

This paper presents an optimal emission filter of the fluorescence imaging system to detect skintumors on poultry carcasses. The secure production of disease-free meat is crucial in the mass productionenvironment. The fluorescence spectra have been gaining the practical use in many areas because thefluorescence response is very sensitive in detecting trace elements. The spectral features of the specimenare embedded across broad spectral bands and have been analyzed in various methods. We apply thelinear discriminant analysis to determine the emission filter of fluorescence imaging system. It providesthe optimal attenuation of emission wavelengths in terms of discriminant power. The attenuation valuesprioritize wavelengths to select significant spectral bands. With the optimal filter, skin tumor parts ofchicken carcasses are enhanced saliently in resultant fluorescence images.

La producción de carne libre de enfermedades es crucial en producción pecuaria intensiva. Losespectros de fluorescencia se han estado usando en forma práctica en muchas áreas, ya que la respuestade fluorescencia es muy sensible para detectar elementos traza. Este artículo presenta un óptimo filtrode emisión para el sistema de imágenes de fluorescencia utilizado para detectar tumores cutáneos encanales de pollo. Las características espectrales de la muestra --insertas en bandas espectrales amplias- sehan analizado por varias metodologías. En este artículo aplicamos el análisis lineal discriminante paradeterminar el filtro de emisión del sistema de imágenes por fluorescencia, mediante el cual se obtiene laatenuación optima de las ondas de emisión en términos de poder discriminante. Los valores de atenuaciónpriorizan las longitudes de onda para seleccionar las bandas espectrales más significativas. Gracias a lautilización de este filtro optimizado, los tumores cutáneos existentes en la canal de pollo son magnificados,de modo que se alcanzan a diferenciar perfectamente en las imágenes de fluorescencia resultantes.

A produção de carne livre de doenças é crucial em produção pecuária intensiva. Os espectros defluorescência temse estado utilizando em forma prática em muitas áreas, já que a resposta da fluorescênciaé muito sensível para detectar elementos traça. Este artículo apresenta um óptimo filtro de emissão parao sistema de imagens de fluorescência utilizado para detectar tumores cutâneos em carcaças de frangos.As características espectrais da amostra, insertas em bandas espectrais amplas são utilizadas por variasmetodologias. Neste artículo aplicamos a análises linear discriminante para determinar o filtro de emissãodo sistema de imagens por fluorescência, mediante o qual obtém-se a atenuação óptima das ondas deemissão em termos de poder discriminante. Os valores de atenuação dão prioridade às longitudes deonda para seleccionar as bandas espectrais mais significativas. Graças à utilização do filtro optimizado,os tumores cutâneos existentes na carcaça de frango são magnificados, de fato que são diferenciadosperfeitamente nas imagens de fluorescência resultantes.

Pesquisa de toxina paralisante dos moluscos em pescado / Investigation of paralyzing toxin from molluscs in fish

A toxina paralisante dos moluscos foi pesquisada em amostras de ostras, mariscos e peixes, colhidas em diferentes praias do litoral paulista. Foram empregados dois procedimentos analíticos: o químico e o bioensaio. Em decorrência do aparecimento de manchas avermelhadas nas águas e mortalidade de peixes na região, no período de agosto a setembro de 1983, suspeitou-se do fenômeno de "maré vermelhra". A toxina não foi detectada em nenhuma das amostras, pelos dois métodos empregados, que permitem segurança dos resultados, considerando que os testes foram realizados com o padrão de saxi toxina (AU).