RESUMO
Abstract Background: Proper timing for embryo collection and transfer in horses -which is critical for the success of this biotechnology- is still debated. Additionally, there is little information on this technology under tropical conditions. Objective: To determine the best day for collection and transfer of embryos in Mangalarga Marchador mares under Brazilian northeast's conditions. Methods: Donors (n= 30) and recipients (n= 76) in diestrus phase were selected based on both clinical and gynecology examinations. Estrus was induced on both donor and recipient mares by intramuscular injection of 5 mg Dinoprost, aiming to obtain an ovulation interval of -1 to +3 between recipient and donor. Ovulation was induced with buserelin acetate when the largest follicle reached at least 35 mm in diameter. At this time, mares were subjected to artificial insemination at 48-hour intervals until ovulation. The embryos were collected on days 7, 8, and 9 after ovulation. Results: The embryo collection on day 8 was more efficient (p<0.05) than on day 7, but it was not more effective (p>0.05) than day 9, which presented the same efficiency (p>0.05) as day 7. From a total of 76 embryos transferred to the recipients, that were between days 4 and 9 after ovulation, there was no influence (p>0.05) of the day of transfer on pregnancy rate. Conclusions: The embryo collection must be performed on day 8 after ovulation, and transfer can be performed on any day of that interval (4-9) without affecting the pregnancy rate.
Resumen Antecedentes: El momento mas apropiado para la recolección y transferencia de embriones en equinos -que es fundamental para el éxito de esta biotecnología- continua siendo sujeto de estudio. Además, es escasa la información sobre esta tecnología en condiciones tropicales. Objetivo: Determinar el momento mas adecuado para la recolecta y transferencia de embriones en yeguas Mangalarga Marchador, en las condiciones del nordeste Brasileño. Métodos: Donadoras (n= 30) y receptoras (n= 76) en la fase de diestro se seleccionaron con base en los exámenes clínicos y ginecológicos. El estro de las yeguas donadoras y receptoras fue inducido con 5 mg de Dinoprost, vía intramuscular, intentando obtener un intervalo de ovulación de -1 a +3 entre la receptora y la donadora. La ovulación fue inducida con acetato de buserelina cuando el folículo mayor alcanzó 35 mm de diámetro. En ese momento, las yeguas fueron sometidas a inseminación artificial en intervalos de 48 horas hasta la ovulación. Los embriones fueron recolectados en los días 7, 8 y 9 después de la ovulación. Resultados: La recolecta de embriones en el día 8 fue más eficiente (p<0,05) que en el día 7, pero no fue más efectivo (p>0,05) que en el día 9, el cuál presentó la misma eficiencia (p>0,05) que en el día 7. De un total de 76 embriones transferidos a las receptoras, que se encontraban entre el día 4 y 9 después de la ovulación, no se registró influencia (p>0,05) del día de la transferencia en la tasa de preñez. Conclusiones: La recolecta embrionaria debe ser realizada el día 8 después de la ovulación, y la transferencia puede ser realizada en cualquier día de este intervalo (4 a 9) sin que se afecte la tasa de preñez.
Resumo Antecedentes: A importância do momentoda colheita e da transferência do embrião equino para o sucesso dessa biotécnica em equino continua sem ser completamente entendida. Adicionalmente, existe pouca informação sobre essa tecnologia em condições tropicais. Objetivo: Determinar o melhor dia para colheita e para transferência de embriões em eguas manga larga marchador nas condições do nordeste brasileiro. Métodos: Doadoras (n = 30) e receptoras (n = 76) na fase de diestro foram selecionadas com base nos exames clínico e ginecológicos. O estro das éguas doadoras e receptoras foi induzido com 5 mg de Dinoprost administrado por via intramuscular, buscando obter um intervalo de ovulação de -1 a +3 entre a receptora e a doadora. A ovulação foi induzida com acetato de buserelina quando o foliculo maior alcançou o tamanho de 35 mm de diâmetro. Nesse momento, as éguas foram submetidas a inseminação artificial em intervalos de 48 horas até a ovulação. Os embriões foram colhidos nos dias 7, 8 e 9 depois da ovulação. Resultados: A colheita de embriões no dia 8 foi mais eficiente (p<0,05) do que no dia 7, porem não foi mais efetivo (p>0,05) do que o dia 9, o qual apresentou a mesma eficiência (p>0,05) que o dia 7. De um total de 76 embriões transferidos para as receptoras que se encontravam entre os dias 4 e 9 depois da ovulação, não se registrou influência (p>0,05) do dia da transferência sobre a taxa de prenhez. Conclusões: A colheita embrionária deve ser realizada no dia 8 depois da ovulação, e a transferência pode ser realizada em qualquer dia desse intervalo (4-9) sem que a taxa de prenhez seja afetada.
RESUMO
En el presente trabajo se presenta el análisis de los costos de tres esquemas de transferencia de embriones aplicados en Colombia, realizado con base en la cotización de los productos en las casa comerciales a precios actualizados del año 2008. Las fuentes de variación consideradas en el análisis fueron las siguientes:1) superovulación (SOV) de donadoras, 2) sincronización de las receptoras, y 3) mano de obra. Los esquemas comparados fueron:esquema 1 (E1), sincronización con implantes de progesterona, dosis constante de FSH y sincronización de la ovulación con GnRH, seguidas de la IA; esquema 2 (E2), sincronización con prostaglandinas, dosis constante de FSH, LH e inseminación; y esquema 3 (E3), sincronización con progesterona, dosis constante de FSH, prostaglandina, GnRH (36h), LH e IA. El costo por embrión transferible producido se calculó con base en 6.3, 6.6, y 10.3 embriones transferibles/lavado, para los esquemas 1, 2, y 3, respectivamente; cuatro lavados/donadora/año, y 50 o 100% de embriones implantados, para los tres esquemas. Los costos estimados por embrión transferible, asumiendo un 100% de tasas de gestación fueron:US 239.8 ($ 479.585.7), US 156 ($ 312.879.0), y US 115.1 ($ 230.186.5), para los esquemas E1, E2 y E3, respectivamente, sin diferencias estadísticas significativas (p>0.05) en los componentes de costos entre esquemas. Los costos aumentaron a US 359.7 ($719.378.6), US 234.7 ($ 469.318.4), y US 172.6 ($ 345.279.7), respectivamente, cuando se incluyeron las pérdidas por embriones transferidos no implantados (50%). En el trabajo se discuten otros costos fijos del proceso de TE que fueron invariables para los tres esquemas. Hasta donde se pudo consultar la literatura, este es el primer reporte que hace un análisis de costos de programa de TE en Colombia. Este trabajo aporta elementos del sistema de costos que se proponen para el cálculo de costos en programas de transferencia de embriones.
In this work an estimated calculation of the cost of three of the most common protocols for superovulation and embryo trasnsfer in Colombia is presented. Estimate costs were defined according to commercial avalilable products at december 2005, taking into account the following sources of costs: 1) Superovulation of donor cows, 2) sinchronization of receptor cows, and 3) personnel. Hormonal schedules that were analyzed included: schedule 1 (S1), sinchronization with progesterone implants, FSH (continuous dose) GnRH (synchronization of ovulation), and AI; schedule 2 (S2), sinchronization with two dose prostaglandins, FSH (continuous dose), LH source and insemination; and schedule 3 (S3), sinchronization with progesterone implants, FSH (continuous dose), prostaglandin, GnRH (36h) after, and AI. Costs were calculated on the basis of 6.3, 6.6, and 10.3 transferable embryos/flush, for schedule 1, 2 and 3, respectively; flushes/donor/year (n = 4), and global pregnancy rate (50 or 100%). The estimated costs for transferable embryo were US 239.8 ($ 479.585.7), US 156 ($ 312.879.0), y US 115.1 ($ 230.186.5) for S1, S2, and S3, respectively. No statistically significant differences (p>0.05) between schedules were found for cost components. Average costs/transferable embryo were increased to US 359.7 ($719.378.6), US 234.7 ($ 469.318.4), y US 172.6 ($ 345.279.7), respectively, when 50% of transferred embryo losses were included in the analysis. To our knowledge, this is the first report on estimated costs for embryo transfer in Colombia. In this work several cost components for calculating the cost of ET according to each hormonal schedule are provided.
Neste trabalho apresenta a análise dos custos de transferência embrionária três esquemas utilizados na Colômbia, feita com base no preço de produtos comerciais na casa dos preços em 2005. Os regimes avaliados hormônio-cio referência ao: esquema 1 (E1), sincronização com progesterona implantes, estável dose de FSH e de calendário da ovulação com GnRH, seguido pelo IA; esquema 2 (E2), sincronização com prostaglandinas, estável dose de FSH, LH e de inseminação; e esquema 3 (E3), sincronização com progesterona, estável dose de FSH, prostaglandina, GnRH (36h), LH e AI. As fontes de variação consideradas na análise foram as seguintes: 1) superovulação (SOV) da doadora, 2) sincronização do destinatário, ET 3) personel. Como fontes de variação na análise foram consideradas as seguintes: 6.3, 6.6 et 10.3 embriões transferibles produzidos/lavagem, lavados/doadora/ano (n = 4), e 50 o 100% taxa de gestação. Os custos estimados para a implantação do embrião para E1, E2 e E3, foram E.U. $ 239.8 ($ 479.585.7), E.U. 156 ($ 312.879.0), e E.U. 115.1 ($ 230.186.5), respectivamente, que passou a assumir as perdas embriões não implantados (50% aprox.) e receber o valor de E.U. $ 359.7 ($719.378.6), E.U. $ 234.7 ($ 469.318.4), e E.U. $ 172.6 ($ 345.279.7). No que diz respeito poderia consultar a literatura, este é o primeiro relatório que uma análise de custos TE programa na Colômbia. Este trabalho traz elementos do sistema de custos que são propostos para o cálculo dos custos de programas de transferência embrionária.
Assuntos
Bovinos , Animais , Sincronização do Estro , Hormônio Foliculoestimulante , Hormônios , Hormônio Luteinizante , SuperovulaçãoRESUMO
El desarrollo de sistemas de cultivo in vitro que permitan obtener altos porcentajes de embriones viables es de gran importancia para la implementación de biotecnologías como el clonado y la transferencia de genes. Estudios tendientes a mejorar la eficiencia de los sistemas de cultivo embrionario son especialmente importantes en ganado caprino por el escaso desarrollo de estos métodos en dicha especie. El objetivo del presente estudio fue comparar el desarrollo de embriones caprinos fecundados in vivo cultivados: a) con células epiteliales de oviducto caprino (CEO), b) en fluido sintético de oviducto (SOF; del Inglés: synthetic oviduct fluid) o c) en medio condicionado por células epiteliales de oviducto caprino (MC). Embriones de 1-8 células colectados del oviducto de cabras superovuladas se cultivaron in vitro durante 4-5 días en los diferentes tratamientos. Al término del cultivo se estableció el estadio de desarrollo embrionario alcanzado y el número de células por embrión a partir de embriones teñidos con lacmoid. Un mayor porcentaje de embriones se desarrollaron hasta el estado de mórula/blastocisto en cocultivo comparado con los cultivados en SOF (75% vs. 41% respectivamente; P < 0,05) o MC (5,5%); mientras que el SOF resultó superior al MC para sustentar el desarrollo de los embriones caprinos hasta mórula/blastocisto. Los embriones producidos en cocultivo con CEO tenían más células que los cultivados en SOF (15,3 vs. 8,1 células/embrión; P < 0,05) y estos últimos más que los cultivados en MC. La viabilidad de los embriones generados en SOF se confirmó mediante transferencia a una cabra receptora, seguido por el nacimiento de 2 cabritos. En conclusión el cocultivo con CEO brinda mejores condiciones para sustentar el desarrollo in vitro de embriones caprinos en relación con los otros dos sistemas estudiados.
Development of reliable in vitro culture systems to produce high percentages of viable embryos is instrumental in the application of biotechnologies such as cloning and transgenesis. This is especially true for caprine species in which in vitro technology for embryo culture has been poorly developed. The objective of this study was to compare in vitro development of in vivo fertilized caprine embryos in: a) coculture with caprine oviductal epithelial cells (OEC), b) synthetic oviduct fluid (SOF), or c) medium conditioned by oviductal epithelial cells (CM). In vivo fertilized 1-8 cell caprine embryos collected by oviductal flushing were allocated to treatments and cultured for 4-5 days in vitro. At the end of the culture period, embryonic development was recorded and the number of cells per embryo was determined in lacmoid-stained embryos. A significantly higher percentage of embryos reached the morula/blastocyst stage in coculture compared with those cultured in SOF (75% vs. 41% respectively; P < 0.05) or CM (5.5%); SOF was superior to CM to supporting goat embryo development. Likewise, embryos grown in coculture with OEC had more cells than those cultured in SOF (15.3 vs. 8.1 cells/embryo; P < 0.05). Cell counts were higher in embryos cultured in SOF than those originated from CM. In conclusion, coculture of goat embryos with OEC provided superior conditions to support in vitro development of early-stage goat embryos compared with the other treatments studied.