Effect of African Yam Bean Flour as an Extender on the Physicochemical and Sensory Properties of Cooked Beef Sausage

Purpose: The effect of African yam bean flour as an extender on the physicochemical and sensory properties of cooked beef sausage was studied. Methodology: Sausage samples were produced using beef and African yam bean flour (AYBF) as extender at 5%, 10%, 15% and 20% substitution levels while 100% beef sausage served as the control. The proximate composition and sensory properties of the formulated products were determined using standard methods. Findings: Proximate analysis revealed a significant (p<0.05) decrease in moisture content (71.45-65.50%), ash (2.45-0.30%), and fat (10.10-1.90%) with a corresponding increase in crude protein (23.06-28.00%), crude fibre (3.80-16.20%) and carbohydrate (5.74-7.91%) as beef was partially replaced with AYBF. Beef sausages containing AYBF showed a significantly lower pH and better water holding capacity and emulsion properties compared to the control sample. Sensory analysis also showed a significant (p<0.05) decrease in the mean sensory scores for taste, mouthfeel, aroma and overall acceptability. Colour and hardness of the products were improved at AYBF supplementation level of 5%. Generally, the control sample was not significantly (p>0.05) different from samples supplemented with 5% AYBF. Recommendations: It is concluded that the incorporation of AYBF could be an effective ingredient to improve the quality and sensory properties of beef sausage with reduced fat content. Thus, the use of full African yam bean flour as an extender at 5% substitution level for cooked beef sausages is feasible as this will reduce the amount of meat used, thereby reducing the cost of the cooked beef sausage and at same time producing nutritious sausages.

Effect of low-density lipoproteins and trehalose on the quality of cryopreserved bovine semen / Efecto de las lipoproteínas de baja densidad y la trehalosa en la calidad del semen bovino criopreservado / Efeito das lipoproteínas de baixa densidade e trealose na qualidade do sêmen bovino criopreservado

Abstract Background: In artificial insemination, chicken egg yolk is added to bovine semen to protect it during the cryopreservation process, although it contains substances that can affect the microbiological quality and metabolism of sperm. Objective: To evaluate post-thaw quality of bovine cryopreserved semen added with centrifuged and non-centrifuged egg yolk, low-density lipoproteins (LDL), and trehalose (T). Methods: Ten ejaculates from five bulls were cryopreserved under the treatments T1: pure egg yolk (PEY) at 20% v/v, T2: centrifuged egg yolk (CEY) at 20% v/v, T3: LDL at 8% v/v, T4: T at 100 mM, and T5: T at 100 mM plus LDL at 8% v/v (TLDL). Spermatic motility and kinetics, functional membrane integrity (FMI), structural membrane integrity (SMI), sperm vitality (SV) and abnormal morphology (AM) were assessed using the Sperm Class Analyzer (SCA®) system, hypoosmotic test (HOST), SYBR/PI probes, and eosin-nigrosin staining, respectively. A completely randomized design was used. Normal distribution of the variables was validated through the Kolmogórov- Smirnov test. A generalized linear model was used to determine sources of variation. Means were compared using the Tukey test. Results: Inclusion of CEY or LDL had a similar effect on sperm protection, and were superior for motility, kinetics and membrane integrity compared to the other treatments (p<0.05). CEY was superior for progressive motility (p<0.05). The cryoprotective action of LDL was similar to TLDL for motility and kinetics, SMI, SV, and AM (p<0.05). Inclusion of PEY and T resulted in the lowest semen quality (p<0.05). The use of T resulted in a reduction in FMI and SMI (p<0.05). No differences in AM between treatments were found (p>0.05). Conclusions: Egg yolk can be replaced by centrifuged egg yolk or low-density lipoproteins in the freezing extender used for bovine semen used in artificial insemination.

Resumen Antecedentes: la yema de huevo de gallina se agrega al semen bovino usado en inseminación artificial para protegerlo durante el proceso de criopreservación, aunque ésta tiene sustancias que pueden afectar el metabolismo espermatico y la calidad microbiológica del semen. Objetivo: evaluar la calidad post-descongelación del semen bovino criopreservado agregado con yema de huevo centrifugada y no centrifugada, lipoproteínas de baja densidad (LDL) y trehalosa (T). Métodos: diez eyaculados de cinco toros se criopreservaron bajo los tratamientos, T1: yema de huevo pura (PEY) al 20% v/v, T2: yema de huevo centrifugada (CEY) al 20% v/v, T3: LDL al 8% v/v, T4: T a 100 mM, y T5: T a 100 mM más LDL al 8% v/v (TLDL). La movilidad y la cinética espermática, la integridad funcional de la membrana (FMI), la integridad estructural de la membrana (SMI), la vitalidad espermática (SV) y la morfología anormal (AM), se determinaron mediante el sistema Sperm Class Analyzer (SCA®), la prueba hipoosmótica (HOST), las sondas SYBR/PI y la tinción con eosina-nigrosina, respectivamente. Se utilizó un diseño completamente al azar. La normalidad de las variables se validó mediante la prueba de Kolmogórov-Smirnov. Se utilizó un modelo lineal generalizado para determinar las fuentes de variación. Las medias de los tratamientos se compararon mediante la prueba de Tukey. Resultados: CEY y LDL tuvieron un efecto similar en la protección de los espermatozoides, siendo superiores a los demás tratamientos respecto a movilidad, cinética e integridad de la membrana (p<0,05). CEY fue superior para la movilidad progresiva (p<0,05). La acción crioprotectora de LDL fue similar a TLDL para movilidad y cinética, SMI, AM y SV (p<0,05). PEY y T resultaron en la más baja calidad seminal (p<0,05). El uso de T redujo la FMI y la SMI (p<0,05). No se encontraron diferencias en AM entre los tratamientos (p>0,05). Conclusiones: la yema de huevo puede reemplazarse por yema de huevo centrifugada o por lipoproteinas de baja densidad en el diluyente de congelación usado para semen bovino destinado a inseminacion artificial.

Resumo Antecedentes: a gema de ovo de galinha tem sido utilizada com a finalidade de proteger o sêmen bovino durante o processo de criopreservação, embora tenha substâncias que possam afetar o metabolismo dos espermatozóides e a qualidade microbiológica do sêmen utilizado para a inseminação artificial. Objetivo: avaliar a qualidade pós-descongelamento do sêmen bovino criopreservado com gema de ovo centrifugada e não centrifugada, lipoproteínas de baixa densidade (LDL) e trealose (T). Métodos: dez ejaculados de cinco touros foram criopreservados sob os tratamentos, T1: gema de ovo pura (PEY) 20% v/v, T2: gema de ovo centrifugada (CEY) 20% v/v, T3: LDL 8% v/v, T4: T 100 mM e T5: T 100 mM mais LDL 8% v/v (TLDL). Mobilidade e cinética espermática, integridade funcional da membrana (FMI), integridade estrutural da membrana (SMI), vitalidade espermática (SV) e morfologia anormal (AM) foram determinadas por o sistema Sperm Class Analyzer (SCA®), teste hiposmótico (HOST), coloração com SYBR/PI e eosina-nigrosina, respectivamente. Um design completamente aleatoriedade foi usado. A normalidade das variáveis foi validada pelo teste de Kolmogorov-Smirnov. Um modelo linear generalizado foi utilizado para determinar as fontes de variação. As médias dos tratamentos foram comparadas pelo teste de Tukey. Resultados: T2 (CEY) e T3 (LDL) tiveram efeito similar na proteção espermática, sendo superior aos demais tratamentos para mobilidade, cinética e integridade da membrana (p<0,05). T2 (CEY) foi superior para mobilidade progressiva (p<0,05). A ação crioprotetora de T3 (LDL) foi semelhante à T5 (TLDL) para motilidade e cinética, SMI, SV e AM (p<0,05). T1 (PEY) e T4 (T) tiveram a menor qualidade seminal (p<0,05). O uso de T4 (T) produziu uma redução na SMI e FMI (p<0,05). Não foram encontradas diferenças na AM entre os tratamentos (p>0,05). Conclusões: a gema de ovo pode ser substituída por gema de ovo centrifugada ou lipoproteínas de baixa densidade no diluente de congelamento de sêmen bovino.

Effect of egg yolk-based extender and seminal plasma removal on sperm viability of cooled donkey semen / Efeito do diluente à base de gema de ovo e remoção do plasma seminal na viabilidade espermática do sêmen refrigerado de jumento

Developing effective cooled semen protocols is essential to increase pregnancy rates and reproductive efficiency in donkeys. This study aimed to evaluate the effect on sperm kinetic parameters and membrane integrity in cooled donkey semen diluted with defined milk proteins extender with 1% or 2% of egg yolk and the removal of seminal plasma. Twenty-four ejaculates from six jackasses were collected. Each ejaculate was divided into four aliquots that were diluted in extender with 1% (EY1) or 2% (EY2) egg yolk. One sample from each group was centrifuged, seminal plasma was removed (CEY1, CEY2 groups, respectively), and the samples were then refrigerated at 5 °C for 24 h. Fresh and cooled semen samples were assessed for sperm motility, morphology, and plasma membrane integrity. Total motility, progressive motility, sperm kinetic parameters, or live sperm cells were not statistically different when semen was cooled with an extender supplemented with 1% or 2% of egg yolk. Seminal plasma removal does not affect total motility or sperm kinetic parameters. However, progressive motility decreased (P<0.05) when semen was extended with 2% of egg yolk and seminal plasma was removed. Membrane integrity was affected (P<0.05) in centrifuged samples. In conclusion, the obtained results suggest that there is no difference in sperm kinetics and membrane integrity when 1% or 2% of egg yolk was added to the Equiplus extender. Also, the removal of seminal plasma by centrifugation did not have any beneficial effect on cooled donkey semen. Further studies are needed to relate these results with in vivo fertility tests with cooled donkey semen.(AU)

O desenvolvimento de protocolos de sêmen resfriado eficazes é essencial para aumentar as taxas de prenhez e eficiência reprodutiva em jumentos. O objetivo desse estudo foi avaliar o efeito do diluente à base de proteínas do leite com 1 ou 2% de gema de ovo sobre os parâmetros cinéticos do sêmen e integridade da membrana em sêmen resfriado de jumento, com ou sem a remoção do plasma seminal. Vinte e quatro ejaculados de seis jumentos foram coletados. Cada ejaculado foi dividido em quatro alíquotas e diluído em diluente com 1% (EY1) ou 2% (EY2) de gema de ovo. Uma amostra por grupo foi centrifugada e o plasma seminal removido (grupos CEY1 e CEY2, respectivamente). Os pellets foram novamente ressuspendidos nas mesmas concentrações e diluentes. Em seguida, as quatro alíquotas foram refrigeradas a 5°C por 24 horas. Amostras de sêmen fresco e refrigerado foram avaliadas quanto à motilidade espermática e integridade da membrana plasmática. Motilidade total, motilidade progressiva, parâmetros de cinética espermática ou células espermáticas vivas não apresentaram diferença significativa quando o sêmen foi resfriado com diluente suplementado com 1% ou 2% de gema de ovo. A remoção do plasma seminal não afetou a motilidade total ou os parâmetros de cinética espermática; entretanto, a motilidade progressiva diminuiu (P<0,05) quando o sêmen foi diluído com 2% de gema de ovo e o plasma seminal removido. Nas amostras centrifugadas, a integridade da membrana foi afetada (P<0,05). Em conclusão, os resultados sugerem que não há diferença na cinética espermática e na integridade da membrana quando 1% ou 2% de gema de ovo são adicionados ao diluente Equiplus e a remoção do plasma seminal por centrifugação não teve nenhum efeito benéfico no resfriamento de sêmen de jumento. Mais estudos são necessários para relacionar esses resultados com testes de fertilidade in vivo com sêmen resfriado em jumentos.(AU)

Effect of refrigeration at -1°C on spermatozoa quality of domestic cats / Efeito da refrigeração a -1°C na qualidade de espermatozoides de gatos domésticos

The objective of this study was to evaluate the sperm quality obtained of domestic cats by electroejaculation and recovery of the tail of the epididymis after cooling at -1°C and 4°C for 24 and 48 hours. Twenty-nine adult cats (2 to 6kg) were used. Sperm collection was performed by electroejaculation (EEJ), and after 48 hours, the cats were orchiectomized, and sperm sample was obtained from the vas deferens and epididymis tail (EPD). The samples were diluted in ACP-117® extender, and the sperm characteristics were evaluated at three different moments: when still fresh, 24 and 48 hours after cooling. The objective of this study was to evaluate the sperm quality obtained of domestic cats by electroejaculation and recovery of the tail of the epididymis after cooling at -1°C and 4°C for 24 and 48 hours. Twenty-nine adult cats (2 to 6kg) were used. Sperm collection was performed by electroejaculation (EEJ), and after 48 hours, the cats were orchiectomized, and sperm sample was obtained from the vas deferens and epididymis tail (EPD). The samples were diluted in ACP-117® extender, and the sperm characteristics were evaluated at three different moments: when still fresh, 24 and 48 hours after cooling. In order to compare the two refrigeration temperatures, the first stage was to analyze if there was a difference between the harvesting techniques. After this, two experiments were conducted: in the first, sperm sample from 14 cats were used and the cooling was performed at -1°C; and in the second, sample from 15 cats were used and the sperm were refrigerated at 4°C. Sperm kinetics were evaluated by computerized analysis (CASA) and concentration by Neubauer chamber, spermatic morphology was evaluated by modified Karras staining, and membrane integrity was evaluated by eosin nigrosine. The results obtained were analyzed in R software, version 3.2.5 using the Mann-Whitney test for variables with abnormal distributions, considering significance at the level of 5%. In ejaculate samples, higher values of total morphological defects were observed after 24 and 48 hours of refrigeration at 4°C (P<0.022) compared to refrigeration at -1°C, using Friedman test. To quantify the decrease in sperm quality, parameter reductions were calculated among time points (F-24h/F-48h/24h-48h). In EPD samples, a greater reduction in sperm quality was detected after 24 hours of refrigeration at 4°C, both in motility and sperm kinetics and in the movement and velocity indices, compared to refrigeration at -1°C. Based on the results, it can be concluded that cooling of feline spermatozoa at -1°C for up to 48 hours was efficient in maintaining spermatic quality collected by EEJ and EPD, and it could be an alternative to spermatozoa cryopreservation in domestic felines.(AU)

O objetivo deste trabalho foi avaliar a qualidade espermática de gatos domésticos obtidos por eletroejaculação e recuperação da cauda do epidídimo após a refrigeração a -1°C e a 4°C por 24 e 48 horas. Vinte e nove gatos adultos (2 a 6kg) foram utilizados. A colheita de espermatozoides foi realizada por eletroejaculação (EEJ) e, após 48 horas, os gatos foram orquiectomizados, e as amostras espermáticas foram obtidas a partir do ducto deferente e da cauda do epidídimo (EPD). As amostras foram diluídas em ACP-117® e as características espermáticas foram avaliadas em três momentos distintos: fresco, 24 e 48 horas após a refrigeração. Para ser possível comparar as duas temperaturas de refrigeração, a primeira etapa foi analisar se havia diferença entre as técnicas de colheita. Após isto, dois experimentos foram conduzidos: no primeiro, espermatozoides de 14 gatos foram utilizados e a refrigeração foi realizada a -1°C; e no segundo, amostras de 15 gatos foram utilizados e os espermatozoides foram refrigerados a 4°C. A cinética espermática foi avaliada por análise computadorizada (CASA), a concentração por câmara de Neubauer, a morfologia espermática foi avaliada pela coloração de Karras modificada, e a integridade da membrana foi avaliada por eosina nigrosina. Os resultados obtidos foram analisados no software R, versão 3.2.5, utilizando o teste de Mann-Whitney para variáveis com distribuições anormais, considerando significância ao nível de 5%. No ejaculado, maiores valores de defeitos morfológicos totais foram observados após 24 e 48 horas de refrigeração a 4°C (P<0,022) em comparação com refrigeração a -1°C, usando o teste de Friedman. Para quantificar a diminuição na qualidade espermática, as reduções dos parâmetros foram calculadas entre os pontos de tempo (F-24h/F-48h/24h-48h). Na EPD, uma maior redução na qualidade espermática foi detectada após 24 horas de refrigeração a 4°C, tanto na motilidade e na cinética espermática quanto nos índices de movimento e velocidade, em comparação com a refrigeração a -1°C. Com base nos resultados, pode concluir-se que a refrigeração dos espermatozoides felino a -1°C, até 48 horas, foi eficaz na manutenção da qualidade espermático colhidos por EEJ e EPD, e pode ser uma alternativa para a criopreservação de espermatozoides em felinos domésticos.(AU)

Use of the ACP® and BTS extenders for cooling at 15°C white-lipped peccary (Tayassu pecari) semen / Uso dos diluidores ACP® e BTS para refrigeração a 15°C de sêmen de queixada (Tayassu pecari)

Knowledge about reproduction of white-lipped peccary is of great importance to assist with the conservation of this species and enable its rational use in captivity. This study aimed to evaluate the effect of ACP-103®, ACP-116® and BTS semen extenders on sperm viability during cooling of Tayassu pecari semen. Five ejaculates from four adult males were chilled. The animals were submitted to the protocols of sedation and anesthesia for semen collection by the electroejaculation method. After collection, the semen was macro- and microscopically assessed and diluted to reach 35x106 spermatozoa/mL in each of the three different extenders tested. The fresh-extended semen was packed in a BotuFLEX® thermal box to keep samples at 15°C for 24 hours. After cooling, the following semen parameters were analyzed: sperm motility, functional and structural integrity of sperm membranes, mitochondrial activity, chromatin condensation, and the thermoresistance test was performed. The parameters sperm motility, structural and functional integrity of sperm membranes, mitochondrial activity, and chromatin condensation were preserved after use of the extenders tested, and were similar to those of in natura semen (p>0.05). Curvilinear velocity (VCL) (p<0.05) was the only parameter with reduced values after cooling regardless of the extender used. The percentage of sperm with normal morphology was greater in samples cooled using the BTS extender (p<0.05). The ACP-103®, ACP-116® and BTS extenders can be used for the cooling and preservation of white-lipped peccary semen at 15°C for 24 hours.(AU)

Para auxiliar na conservação da espécie e permitir o uso racional do queixada em cativeiro é de grande importância o conhecimento sobre a reprodução da espécie. Objetivou-se avaliar o efeito dos diluidores de sêmen ACP-103®, ACP-116® e BTS na viabilidade espermática durante a refrigeração do sêmen do Tayassu pecari. Foram refrigerados cinco ejaculados provenientes de quatro machos adultos. Os animais foram contidos com auxílio de puçá e submetidos ao protocolo de sedação e anestesia para realização da coleta de sêmen pelo método da eletroejaculação. Depois da coleta, o sêmen foi avaliado macro e microscopicamente e diluído para atingir 35x106 espermatozoides/mL em cada um dos três diferentes diluidores testados. O sêmen diluído foi acondicionado em caixa térmica BotuFLEX® para manter as amostras a 15°C por um período de 24 horas. Depois da refrigeração, os espermatozoides foram avaliados quanto aos parâmetros de movimento espermático, integridade funcional e estrutural das membranas espermáticas, atividade mitocondrial, condensação da cromatina e teste de termorresistência. Os diluidores testados preservaram as características cinéticas, a integridade estrutural e funcional das membranas espermáticas, a atividade mitocondrial e a condensação da cromatina semelhante ao sêmen in natura (P>0,05). O único parâmetro que reduziu com o processo de refrigeração independente do diluidor utilizado foi a Velocidade Curvilinear (VCL) (P<0,05). Foi observado aumento do percentual de espermatozoides morfologicamente normais nas amostras refrigeradas em BTS (P<0,05). Os diluidores ACP-103®, ACP-116® e BTS podem refrigerar e conservar o sêmen de queixada a 15°C por 24 horas.(AU)

Use of alternative extender added of fructose aiming the cryopreservation of boar semen / Utilização de diluente alternativo acrescido de frutose visando à criopreservação de sêmen suíno

This study aimed to analyze skimmed milk powder (SMP) and fructose in a new cooling curve to freeze boar semen. A total of 49 semen samples from seven boars were cryopreserved using the new curve with addition of glucose and fructose to the refrigerating diluents: Beltsville Thawing Solution (BTS + G; BTS + F) and Skimmed milk powder (SMP + G; SMP + F), totaling four experimental groups for analysis. To finish the curve, aliquots of semen were packaged in 0.5 ml straws and kept in liquid nitrogen. During the cooling curve, SMP mean spermatic vigor and motility were greater than the BTS (p < 0.05). After thawing, a decrease of spermatic force and motility in both extenders was observed, where the BTS presented spermatic vigor (2.1 ± 0.55) and motility (38 ± 21.8), presenting better results (p < 0.05). There was no statistical difference between sugars added to the BTS and SMP in spermatic force and motility (p > 0.05), although the use of fructose allowed an equalization of motility between the SMP and BTS (p > 0.05). Functionality of membrane was better preserved with the addition of fructose, in both extenders. The rate of sperm viability was significantly higher in extender containing glucose and SMP (71.8 ± 12.5). The percentage of intact acrosome was higher on the treatment containing glucose, independent of the extender (BTS + G: 81.8 ± 7.2, SMP + G: 81.4 ± 14.2). To conclude, the results suggest that the BTS is still the best option to cryopreserve and fructose could be used in boar semen cryopreservation in new cooling curve.(AU)

O presente trabalho analisou o emprego do leite em pó desnatado (LPD) adicionado de frutose em uma nova curva de resfriamento para criopreservação de sêmen suíno. Um total de 49 ejaculados, de sete varrões foram criopreservados utilizando a nova curva de resfriamento com glicose e frutose adicionada aos diluentes Beltsville Thawing Solution (BTS + D; BTS + F) e Leite em pó desnatado (LPD + D; LPD + F), totalizando quatro grupos experimentais para análises. Ao final da curva, as alíquotas de sêmen foram envasadas em palhetas de 0,5 mL e mantidas em nitrogênio líquido. Durante a curva de resfriamento, a média de vigor e motilidade espermática do LPD foi maior do que do BTS (p < 0.05). Após descongelação, observou-se queda do vigor e motilidade em ambos diluentes, com o BTS apresentando melhores resultados de vigor (2,1 ± 0,55) e de motilidade (38 ± 21,8) (p < 0,05). Entretanto, o uso da frutose permitiu equiparação dos valores da motilidade entre LPD e BTS (p > 0,05). A funcionalidade de membrana foi melhor preservada com adição da frutose, em ambos os diluentes. Os dados de vitalidade espermática foram significativamente maiores no diluente contendo glicose e LPD (71,8 ± 12,5). A porcentagem de acrossomas intactos foi maior no tratamento que continha glicose, independentemente do diluente utilizado (BTS + G: 81,8 ± 7,2, SMP + G: 81,4 ± 14,2). Os resultados obtidos indicaram que o BTS, ainda é a melhor opção de criopreservação e que a frutose pode ser utilizada para criopreservação de sêmen de varrão na nova curva de resfriamento.(AU)

Sperm cryopreservation of lane snapper Lutjanus synagris(Linnaeus, 1758) / Criopreservação do sêmen do ariocó Lutjanus synagris (Linnaeus, 1758)

AbstractThis study aims developing and evaluate a protocol of semen cryopreservation of the lane snapper Lutjanus synagris. Firstly, sperm motility rate, motility time, density and spermatocrit were appraised to characterize the sperm quality of the lane snapper. The effect of three extenders with distinct ionic compositions and pH values combined with seven concentrations of cryoprotector dimethylsulfoxide (0; 2.5; 5.0; 7.5; 10.0; 12.5 e 15.0%), five cooling rates (110, 90, 60, 45 e 30°C –min), nine equilibration time (1; 2,5; 5; 10; 15; 20; 25; 30 e 60 minutes) e five dilutions ratio (1:1; 1:3; 1:6; 1:10 e 1:20) on the sperm motility rate and motility time were analyzed. Fertilization test was accomplished to evaluate the viability of the cryopreserved sperm. The higher sperm motility rate and motility time (P<0.05) was achieved by combining extender with pH 8.2 with 10% concentration of dimethylsulfoxide and cooling rate 60°C –min, 1 minute of equilibration time and 1:3 (v/v) dilution ratio. The use of cryopreserved sperm presented fertilization rates >60% validating the present protocol for lane snapper. The cryoconserved sperm of lane snapper is a viable alternative, being possible to maintain appropriate sperm viability.

ResumoEste estudo teve a finalidade de desenvolver e avaliar um protocolo de crioconservação do sêmen do ariocó Lutjanus synagris. Para caracterizar o sêmen foram avaliados a taxa de motilidade, a duração da motilidade, a concentração espermática e o espermatócrito. Em seis experimentos foram analisados os efeitos de três diluentes, com distintas composições iônicas e valores de pH distintos, combinados com sete concentrações de dimetilsulfóxido (0; 2,5; 5,0; 7,5; 10,0; 12,5 e 15,0%), cinco velocidades de congelamento (–110, –90, –60, –45 e –30°C/min), nove tempos de equilíbrio (1; 2,5; 5; 10; 15; 20; 25; 30 e 60 minutos) e cinco proporções de sêmen:diluente (1:1; 1:3; 1:6; 1:10 e 1:20) sobre a taxa de motilidade e a duração da motilidade espermáticas. Posteriormente um teste de fertilização foi realizado para avaliar a viabilidade do sêmen crioconservado. O tratamento que propiciou maior taxa de motilidade e duração da motilidade espermáticas (P<0,05) foi aquele proporcionado pelo emprego do diluente com pH 8,2 com dimetilsulfóxido a 10%, em uma velocidade de congelamento de –60°C/min, com tempo de equilíbrio de 1 minuto e na proporção de 1:3 (v/v). O sêmen crioconservado apresentou taxa de fertilização superior a 69% validando o presente protocolo para o ariocó. A crioconservação do sêmen do ariocó é uma alternativa viável, sendo possível manter uma apropriada qualidade espermática.

Dois diluentes comerciais na criopreservação de espermatozoides do epidídimo de touros / Two commercial extenders for cryopreservation of epididymal bull sperm

A recuperação e a criopreservação de espermatozoides do epidídimo constituem alternativas viáveis para a preservação de material genético de animais valiosos. O objetivo deste estudo foi comparar o desempenho de dois diluentes comerciais Botu-Bov(r) (BB) e Bovimix(r) (BV), sobre a viabilidade pós-descongelação de espermatozoides do epidídimo de touros Tabapuã (Bos taurus indicus) pós-castração. Os espermatozoides foram colhidos da cauda de 20 epidídimos utilizando a técnica de fluxo retrógrado, centrifugados e diluídos com BB ou BV para posterior criopreservação a -196°C. Após a descongelação, as amostras foram avaliadas utilizando a análise computadorizada (CASA) e por análises microscópicas para a determinação da integridade de membranas plasmáticas, acrossomal e morfologia espermática. A avaliação estatística dos dados foi realizada pela análise de variância (ANOVA) com o pós-teste de comparações múltiplas de Tukey-Kramer, com nível de significância (P<0,05). Os resultados do movimento espermático avaliado pelo CASA, não diferiram para o diluente BB e BV. Também não foi observada diferença significativa entre os grupos no percentual de espermatozoides morfologicamente deformados, defeitos de acrossoma e espermatozoides com membrana plasmática íntegra após o descongelamento. Conclui-se que ambos os diluentes (BB e BV) são eficientes e podem ser utilizados na tecnologia do congelamento de espermatozoides colhidos da cauda do epidídimo de touros, não apresentando diferença na viabilidade espermática para os parâmetros estudados.

Recovery and cryopreservation of epididymal sperm is a viable alternative for preservation of genetically valuable animals. The aim of this study was to verify and to compare the effect of two commercial extenders for conventional semen on post-thawing viability of bovine epididymal sperm. For this purpose, the spermatozoa was recovered from the tail of 20 epididymis of Tabapuã bulls (Bos Taurus indicus) using retrograde flow method. After sperm recovery, the cells were centrifuged and divided for dilution with the diluents Botu-Bov(r) (BB) or Bovimix(r) (BV) for cryopreservation at -196°C. After thawing, all samples were evaluated using computer assisted sperm analysis (CASA), and by microscopic analysis for determination of integrity of plasma and acrossomal membrane and morphology. Statistical evaluation was performed by analysis of variance (ANOVA) with post-test for multiple comparisons, the Tukey-Kramer test, with significance level (P<0.05). The results of the sperm movement for diluent BB and BV evaluated with CASA, showed no difference for both (P>0.05). There was also no difference between the percentage of deformed sperm, acrosome defects and the sperm with intact plasma membrane after thawing with BB or BV. We conclude that both extenders (BB and BV) are efficient and can be used for freezing sperm collected from the epididymis of bulls, showing no difference for all the parameters studied.

CARACTERÍSTICAS SEMINALES DEL TITÍ GRIS (Saguinus leucopus) BAJO CONDICIONES DE CAUTIVERIO OBTENIDAS POR ESTIMULACIÓN VIBRATORIA DEL PENE (EVP) / SEMINAL CHARACTERISTICS OF WHITE-FOOTED TAMARIN (Saguinus leucopus) UNDER CAPTIVITY CONDITIONS OBTAINED BY PENILE VIBRATORY STIMULATION (PVS)

Se evaluó la eficacia de la técnica de estimulación vibratoria del pene (EVP) para obtener semen en quince especímenes de S. leucopus bajo condiciones de cautiverio, en cuatro diferentes sitios en Colombia. Adicionalmente, se estandarizó la técnica EVP y se determinaron algunas características seminales (color, viscosidad, volumen, pH, motilidad, morfología, viabilidad, concentración y morfometría espermática). Se empleó clorhidrato de ketamina a dosis entre 5 y 10 mg/kg I.M. para la sedación previa al muestreo a fin de disminuir el estrés de la captura y del procedimiento, ya que los especímenes no estaban acostumbrados o entrenados para procesos de obtención de muestras biológicas. En el uso de la técnica se logró un 52,6% de éxito en la combinación de 90 Hz de vibración y 1 mm de amplitud; el tiempo de eyaculación promedio fue de 12:35±6:42 minutos; el pH, 7,5±0,26; el volumen, 24±18,82 µl; la motilidad masal fue de 3,7/5,0±0,5; la motilidad individual progresiva, 97,1±45,4%; la concentración espermática fue de 87.617±21.327 x 10(4) spz/µl; la normalidad fue del 69,3±11,06% y la viabilidad del 93,7±4,9%. Las características seminales fueron similares a las reportadas en otras especies de callitríchidos y obtenidas por la misma técnica. Se empleó satisfactoriamente el diluyente Talp-Hepes y el cual no afectó las características antes descritas. La EVP es un método innovador, replicable, viable y seguro para la obtención de semen en S. leucopus y a otros callitríchidos bajo sedación con ketamina en condiciones de cautiverio.

The efficacy of the penile vibratory stimulation (PVS) for semen collection was evaluated in fifteen (15) specimens of white-footed tamarin (S. leucopus), held in captivity, at four different locations. Additionally the technique was standardized for semen collection in this species and seminal characteristics, color, viscosity, volume, pH, motility, morphology, viability, sperm concentration and morphometry were also evaluated. Ketamine hydrochloride was used at a dose between 5 to 10 mg/Kg for sedation and semen sampling. The technique was successful in 52.6% of the animals using the combination of 90 Hertz of vibration and 1 mm of amplitude; time of ejaculation was 12:3 ±6:42 minutes. Seminal characteristics were: pH of 7.5±0.26; volume of 24±18.82 µl; masal motility of 3.7/5.0±0.5; progressive motility of 97.1±45.4%; sperm concentration of 87,617±21,327 x 10(4)spz/µl; normal morphology 69.3±11.06% and viability of 93.7±4.9%. Talp-Hepes extender was satisfactorily used and it did not appear to affect seminal characteristics. The PVS is an innovating, replicable, viable and safe method for obtain semen in S. leucopus and perhaps in other callitrichids under ketamine sedation and in captivity.

Initiation and s uppression of sperm motility is osmolality dependent in two South American fish species: streaked prochilod (Prochilodus lineatus) and piracanjuba(Brycon orbignyanus)

Solutions to induce or suppress the initiation of sperm motility in fish ha ve been used to improve reproductive success during artificial fertilization and preservation techniques . The aim of the present study was to evaluate the effects of three solutions (NaCl, glucose , and BTS™) - each prepared with 10 different osmolalities - on the initiation and suppression of fresh sperm motility in Prochilodus lineat us and Brycon orbignyanus . Sperm was diluted in each of the 30 solution s and immediately observed under a light microscope to determine which solution s trigger ed or suppress ed the initiation of sperm motility. When present, motility rate ( % motile sperm ) w as determined at 0, 30 , and 120 s post - activation and the motility quality score ranging from 0 ( no movement ) to 5 ( rapidly swimming sperm) was determined at 0 and 30 s post - activation . Osmolality , but not solution composition , significantly affected both motility rate and quality score . Solutions at osmolali ties up to 270 mOsm/kg in P. lineatus and up to 180 mOsm/kg in B. orbignyanus induced motility in at least 60% of sperm , with a minimum quality score of 3.0 , and were therefore classified as activating agents. The greatest motility at 0 , 30 , and 120 s post - activation was observed with solutions ranging from 135 to 225 mOsm/kg for P. lineatus and at 135 mOsm/kg for B. orbignyanus . On the other hand, solutions ranging from 360 to 450 mOsm/kg in P. lineatus and 270 to 450 mOsm/kg in B. orbignyanus suppressed motility in at least 95% of sperm and were classified as immobilizing media . The osmolality of the surrounding medium is the key factor in the initiation or suppression of sperm motility in P. lineatus a nd B. orbignyanu.

Efeito da utilização de diferentes diluidores para a produção in vitro de embriões bovinos / Effect of different bovine semen extenders on in vitro development of bovine embryos

Objetivou-se avaliar as características morfológica e funcional do sêmen bovino congelado comparando-se a eficácia de dois diferentes diluidores. O ejaculado de quatro touros foi dividido em duas partes iguais, uma submetida ao diluidor Tris e gema de ovo (A) e outra ao diluidor à base de lecitina de soja (Andromed®) (B). No experimento I, cinco palhetas dos diluidores A e B de cada touro foram descongeladas e avaliadas quanto à motilidade, vigor, concentração, morfologia espermática e teste de termor-resistência lento. Foram feitas, ainda, avaliação da integridade de membranas, por meio da associação das sondas iodeto de propídio, isotiocionato de fluoresceína - Pisum sativum e carbocianina catiônica lipofílica, e avaliação funcional da membrana plasmática com teste hiposmótico. A avaliação da integridade da cromatina foi realizada pelo método de coloração com laranja de acridina. No experimento II, o sêmen com os diferentes diluidores foi utilizado na fecundação in vitro, sendo observadas taxas de clivagem e desenvolvimento embrionário in vitro. Em relação aos resultados obtidos, apenas a porcentagem de espermatozoides no sêmen congelado foi discretamente maior com o diluidor A, concluindo-se que o diluidor composto por lecitina de soja pode substituir o composto por Tris e gema de ovo, respeitando-se as variações individuais de cada touro utilizado no presente experimento.

The goal of this study was to evaluate the protective effect of egg yolk compared with a soybean lecithin-based extender on morphologic and functional characteristics of frozen bovine semen. The ejaculate of four bulls was divided into two equal parts, one diluted with egg-yolk-Tris extender (A) and the other with a soy-lecithin based extender (Andromed®) (B). In experiment I, five straws of extender A and B from each bull were thawed and assessed regarding motility (subjective and computerized analysis), vigor, concentration, sperm morphology and slow thermoresistance (STR), evaluation of membrane integrity through association of propidium iodite probes (PI), fluorescein isotiocianate - Pisum sativum (FITC-PSA) and lipophilic cationic carbocyanine (JC-1) and functional evaluation of the plasmatic membrane through Hyposmotic Swelling Test (HOST). An evaluation of chromatin integrity was performed with the acridine orange staining procedure. In experiment II, the frozen semen with different extenders was used for in vitro fertilization (IVF), analyzing cleavage rates and in vitro embryo development. No statistical difference between extenders was identified, suggesting that the soy lecithin extender may substitute egg-yolk-Tris extender, considering the individual variations of each bull used in this experiment.

Avaliação de espermatozoides caprinos congelados em meio à base de água de coco em pó (ACP-101®) ou TRIS / Evaluation of goat spermatozoa frozen in media based on powder coconut water media based (ACP-101®) or TRIS

Compararam-se as características cinéticas e morfológicas de espermatozoides caprinos congelados nos meios à base de ACP-101® e TRIS. Os diluentes utilizados foram: ACP-101® (+ 2,5 por cento gema ovo + 7 por cento glicerol) e TRIS (+ 20 por cento gema ovo + 6,8 por cento glicerol). Quarenta e oito ejaculados de quatro bodes foram coletados, avaliados, divididos em duas alíquotas e diluídos nos meios ACP-101® e TRIS, respectivamente, posteriormente congelados e, após 30 dias, descongelados. A avaliação da motilidade espermática por computador foi realizada aos 5, 60 e 120 minutos pós-descongelação. As características de motilidade espermática analisadas foram: motilidade total (MT) ( por cento) e progressiva (MP) ( por cento), velocidades média do trajeto do espermatozoide (VAP) (µm/s) e linear (VSL) (µm/s) e população de espermatozoides rápidos (ER) ( por cento). As avaliações de morfologia espermática quantificaram a porcentagem de espermatozoides normais (N) e as alterações da cabeça (AC), da peça intermediária (API) e do flagelo (AF), aos cinco e 120 minutos pós-descongelação. O diluente TRIS apresentou resultados cinéticos mais elevados que o ACP-101® aos 60 e 120 minutos pós-descongelação. As AC aos 120 minutos pós-descongelação foram mais altas nos espermatozoides congelados em ACP-101®. Conclui-se que o diluente TRIS promoveu maior viabilidade in vitro dos espermatozoides caprinos pós-descongelação.

The aim of the work was to compare kinetic and morphologic characteristics of goat sperm frozen in diluent media based on ACP-101® and TRIS. The employed diluents were: ACP-101® (+ 2.5 percent egg yolk + 7 percent glycerol) and TRIS (+ 20 percent egg yolk + 6.8 percent glycerol). Forty eight ejaculates from four bucks were collected, assessed and divided into two aliquots and diluted into the experimental treatments ACP-101® and TRIS. The samples were frozen and after 30 days, thawed. The computer assisted spermatic motility evaluations were placed into 5, 60 and 120 minutes post-thawing. The motion parameters assessed were: total motility (MT) ( percent), progressive motility (MP) ( percent), average path velocity (VAP) (µm/s), straight linear velocity (VSL) (µm/s), and population of rapid spermatozoa (ER) ( percent). The morphologic parameters: normal spermatozoa (N), head alteration (AC), intermediary piece alteration (API), tail alteration (AF) were evaluated at 5 and 120 min post-thawing. The media based on TRIS showed kinetic results significantly superior to ACP-101® at 60 and 120min. After 120min post-thawing the AC was higher in frozen sperm in media based on ACP-101®. The TRIS media promoted better goat spermatozoa in vitro viability post-thawing.

Efeitos do diluidor na viabilidade espermática pós-criopreservação em tourinhos da raça Gir Leiteiro aos 25 meses de idade, pré-selecionados pela classificação andrológica por pontos / Effects of the extender in the semen post - thaw viability in young dairy Gyr bulls (Bos taurus indicus), pre - selected by breeding soundness evaluation

Procedeu-se à criopreservação do sêmen de oito tourinhos Gir Leiteiro, com idade média de 25 meses, pré-selecionados para elevada pontuação (média 84,4±5,6) na classificação andrológica por pontos (CAP), em dois diferentes diluidores: um à base de lactose-gema-glicerol e outro à base de lecitina de soja. As curvas de resfriamento e congelação foram padronizadas com o auxílio da máquina CRYOGEN®. Os parâmetros pós-congelação avaliados no sêmen submetido aos dois diluidores - motilidade, vigor, defeitos maiores, menores e totais, defeitos de acrossoma, cauda dobrada, reação ao teste hiposmótico (Thos) e células normais - foram comparados aos do sêmen fresco, exceto para Thos e entre eles. O sêmen de todos os animais foi congelado com êxito no diluidor lactose-gema-glicerol. Houve diferença (P<0,05) em todas as variáveis analisadas no sêmen fresco e pós-congelado, exceto para defeitos maiores. Entre diluidores, houve diferença (P<0,05) para motilidade, vigor, cauda dobrada e Thos. Estes resultados indicam que a seleção pelo CAP médio >80 é um bom índice para selecionar touros com maior taxa de espermatozoides viáveis pós-congelação.

Semen cryopreservation from eight young dairy Gyr bulls was performed using two different semen extenders. Bulls aging 25 months old and pre-selected for a high average score (84.4±5.6 in a 0-100 scale) in Zebu breeding soundness evaluation (BSE) composed the experimental group. Extenders were based on lactosis-egg yolk-glycerol and soya lecithin. Chilling and freezing curves were standardized by CRYOGEN® machine. Post-thaw features evaluated in semen frost in both extenders - motility, vigor, major, minor and total deffects, morphological alteration in acrossome, bent tail, reative cells to hyposmotic sweeling test (Thos), and normal cells - were compared to the ones in the fresh ejaculate (except Thos) and among them. It was possible to freeze semen from all animals in the lactosis-egg yolk-glycerol extender. There were difference (P<0.05) in all analyzed features between fresh and cryopreserved semen, except for major deffects. Between extenders, there were differences (P<0.05) in motility, vigor, bent tail, and Thos. All bulls had successfull semen freezability. These results sustain that pre-selection for high BSE values (average >80 points) is a good index to identify bulls with good post semen - thaw features. However, the choice of the extender is critical for obtaining acceptable results.

The First Clinical Trial of Beta-Calcium Pyrophosphate as a Novel Bone Graft Extender in Instrumented Posterolateral Lumbar Fusion

BACKGROUND: Porous beta-calcium pyrophosphate (beta-CPP) was developed to improve the fusion success of posterolateral lumbar fusion (PLF). The possibility of accomplishing PLF using a mixture of porous beta-CPP and iliac bone was studied. This paper reports the radiologic results of PLF using the beta-CPP plus autograft for lumbar degenerative disease as a bone graft extender. METHODS: A prospective, case-matched, radiographic study evaluating the results of short segment lumbar fusion using a beta-CPP plus autograft was performed to compare the efficacy of beta-CPP plus autograft with that of an autograft alone for short segment lumbar fusion. Thirty one consecutive patients (46 levels) underwent posterolateral fusion with pedicle screw fixation and additional posterior lumbar interbody fusion. In all patients, 3 mL of beta-CPP plus 3 mL of autogenous bone graft was placed randomly in one side of a posterolateral gutter, and 6 mL of autogenous iliac bone graft was placed on the other. The fusion rates, volumes of fusion masses, and bone absorption percentage were evaluated postoperatively using simple radiographs and 3 dimensional computed tomography (3D-CT) scans. RESULTS: The control sides treated with an autograft showed significantly better Lenke scores than the study sides treated with beta-CPP at 3 and 6 months postoperatively, but there was no difference between the two sides at 12 months. The fusion rates (confirmed by 3D-CT) were 87.0% in the beta-CPP group and 89.1% in the autograft group, which were not significantly different. The fusion mass volumes and bone absorption percentage at 12 months postoperatively were 2.49 mL (58.4%) and 1.89 mL (69.5%) for the beta-CPP and autograft groups, respectively, and mean fusion mass volume was significantly higher in the beta-CPP group. CONCLUSIONS: beta-CPP combined with an autograft is as effective as autologous bone for grafting during instrumented posterolateral spinal fusion. These findings suggest that beta-CPP bone chips can be used as a novel bone graft extender for short-segment posterolateral spinal fusion.

Viabilidade in vitro de células espermáticas ovinas submetidas a diferentes diluentes e a refrigeração / In vitro viability of ovine sperm cells submitted to different diluents and refrigeration

Avaliou-se a viabilidade in vitro de células espermáticas após a adição de três diluentes comerciais, que foram comparados com o diluente tradicional Tris-gema, utilizados no processo de refrigeração do sêmen ovino, em até 48h de armazenamento. Foram utilizados nove ejaculados diários, obtidos de três reprodutores Dorper, com vagina artificial, em três repetições com intervalo de três dias. O sêmen foi mantido a 30ºC, e foram avaliadas suas características macro e microscópicas. Após formação do pool, repetiram-se as avaliações acrescidas da concentração espermática e da integridade do DNA e do acrossoma. Dividiu-se o pool em cinco tratamento, cada um constituído de uma parte de sêmen para três partes dos respectivos diluentes: Equimix (DI), Laiciphos Green Ovine (DII), FR 4 (DIII), Equimix-Gema- Equimix com gema de ovo (DIV) e Tris-Gema (DV). O material obtido em cada tratamento foi subdividido em quadruplicata, refrigerado e mantido a 4ºC até as avaliações da motilidade individual progressiva (MIP), do vigor e da integridade do DNA e do acrossoma, correspondendo a zero, 12, 24, 36 e 48h. Nas avaliações do sêmen, com o DI ocorreu a maior queda de MIP às 12h em relação aos demais grupos (P<0,05). Às 24h, os tratamentos DII, DIV e DV apresentaram a melhor MIP (P<0,05), que não divergiram (P>0,05) entre si; às 48h, o DII e o DV foram melhores (P<0,05) que os demais. Com relação ao vigor, os tratamentos DII e DV apresentaram valores mais elevados (P<0,05) em relação ao DI e DIII, a partir das 12h, e ao DIV, a partir das 24h (P<0,05). Concluiu-se que o diluente Laiciphos Green Ovine, da mesma forma que o Tris-gema, pode ser utilizado na conservação do sêmen a 4ºC por 48h, enquanto o Equimix, acrescido de 20 por cento de gema de ovo, pode ser seja utilizado no armazenamento do sêmen (4ºC) por até 24h.

The in vitro viability of sperm cells following the addition of three commercial diluents was evaluated and compared with the traditional Tris-yolk diluent for the refrigeration of ovine sperm up to 48h of storage. Nine daily ejaculates were obtained from three Dorper breeders using an artificial vagina; three repetitions were performed in a three-day interval. The semen was kept at 30ºC and macro and microscopic characteristics were evaluated. The samples were pooled and the evaluations were repeated, along with assessments of sperm concentration, DNA integrity, and acrosome integrity. The pool was distributed into five treatments, each with one part of semen to three parts of the following diluents: Equimix (DI), Laiciphos Green Ovine (DII), FR 4 (DIII), Equimix-Yolk-Equimix with egg yolk (DIV), and Tris-Yolk (DV). The material of each treatment was aliquoted in quadruplicate, refrigerated, and maintained at 4ºC until the evaluations of the individual progressive motility (IPM), vigor, DNA integrity, and acrosome integrity, corresponding to 0, 12, 24, 36, and 48h. The highest decrease of IPM occurred with DI (at 12h) in comparison to the other diluent groups (P<0.05). At 24h, DII, DIV and DV had the best IPM (P<0.05) and did not diverge from one another (P>0.05). At 48h, DII and DV had the highest values (P<0.05). Regarding vigor, DII and DV had higher values (P<0.05) than DI and DIII at 12h and higher values than DIV at 24h (P<0.05). From the results, like Tris-Yolk, and Laiciphos Green Ovine can be used for the conservation of semen at 4ºC for 48h, whereas Equimix plus 20 percent egg yolk may be used for the storage of semen at 4ºC for up to 24h.

Sensibilidade dos espermatozoides de dourado (Salminus brasiliensis) a diferentes soluções crioprotetoras / Sensitivity of dourado (Salminus brasiliensis) spermatozoa to different cryoprotectant solutions

Em três experimentos, avaliou-se a sensibilidade dos espermatozoides de dourado (Salminus brasiliensis) a diferentes soluções crioprotetoras. No experimento 1, o sêmen foi diluído, 1:10, em 12 soluções (quatro diluidores x três crioprotetores - dimetilsulfóxido (DMSO), metilglicol ou glicerol). Metade de cada amostra foi resfriada por uma hora e a outra, criopreservada. A motilidade espermática foi avaliada imediatamente após a diluição e após o resfriamento em todas as amostras e, após o descongelamento, apenas nas amostras criopreservadas em DMSO. No experimento 2, o sêmen foi diluído, 1:5, em cinco soluções contendo DMSO e resfriado, criopreservado e avaliado como no experimento 1. No experimento 3, o sêmen foi diluído, 1:5, em quatro soluções contendo DMSO e criopreservado e avaliado quanto à motilidade e à fertilidade. Quando o sêmen foi diluído 1:10, observou-se motilidade acima de 58 por cento em todas as amostras resfriadas em DMSO e em NaCl-tris-metilglicol. Baixa motilidade foi observada nas amostras resfriadas nas outras combinações com metilglicol (5-32 por cento) ou glicerol (0-8 por cento) e naquelas criopreservadas (16-20 por cento). Todas as amostras diluídas 1:5 apresentaram motilidade de 65-72 por cento após o resfriamento e de 45-66 por cento após o descongelamento (experimentos 2 e 3). As taxas de eclosão produzidas com sêmen criopreservado, entretanto, foram baixas (17-23 por cento) em relação ao sêmen fresco (60 por cento).

The sensitivity of dourado (Salminus brasiliensis) spermatozoa to different cryoprotectant solutions was evaluated in three experiments. In experiment 1, semen was diluted, 1:10, in 12 solutions (four extenders x three cryoprotectants - dimethylsulphoxide (DMSO), methyglycol, or glycerol). Half of each sample was refrigerated for one hour while the other half was cryopreserved. Sperm motility was immediately assessed after dilution and after refrigeration in all samples, and after thawing in those cryopreserved in DMSO. In experiment 2, semen was diluted, 1:5, in five solutions containing DMSO, refrigerated, cryopreserved, and analyzed as in experiment 1. In experiment 3, semen was diluted, 1:5, in five solutions containing DMSO, cryopreserved and evaluated for motility and fertility. When semen was diluted 1:10, motility higher than 58 percent was observed in all samples refrigerated in DMSO and in NaCl-tris-methylglycol. Low motility was observed in samples refrigerated in the other combinations of methylglycol (5-32 percent) or glycerol (0-8 percent) and in those cryopreserved (16-20 percent). All samples diluted 1:5 yielded motility of 65-72 percent after refrigeration, and 45-66 percent after thawing (experiments 2 and 3). The hatching rates produced with cryopreserved semen, however, were lower (17-23 percent) compared to fresh semen (60 percent).

Taxa de concepção de cabras inseminadas com sêmen caprino resfriado a 5ºC, por 12 ou 24 horas, em meio diluidor à base de gema de ovo / Conception rate of goats inseminated with semen cooled in egg yolk diluent at 5ºC, for 12 or 24 hours

Avaliou-se a capacidade fecundante do sêmen caprino resfriado a 5ºC, por 12 (TI) ou 24 horas (TII), em container especial. Para tanto, utilizaram-se 62 fêmeas e dois reprodutores (B1 e B2) da raça Toggenburg, distribuídos em um esquema fatorial 2x2 (dois reprodutores e dois períodos de estocagem do sêmen). Após a coleta, o sêmen foi diluído em Tris-frutose-gema de ovo a 2,5 por cento, envasado em palhetas de 0,25mL, com 150x10(6) espermatozoides móveis e resfriado a 5ºC. As fêmeas receberam duas doses de 22,5µg de PGF2α, em intervalos de 10 dias para a sincronização do estro. A partir da primeira aplicação de PGF2α, as fêmeas foram monitoradas para ocorrência de estro, três vezes ao dia. Realizou-se uma única inseminação, pela técnica de fixação da cérvice, 12 horas após o início do estro. A motilidade e o vigor, após 12 ou 24 horas de resfriamento, foram de 66,14±0,11 por cento e 62,50±0,05 por cento, e 3,46±0,61 e 3,27±0,50, respectivamente. Não houve influência (P>0,05) do reprodutor, nem do período de armazenamento do sêmen sobre a taxa de concepção das cabras, que foi de 49,1 por cento.

The fertilizing capacity of goat semen cooled in egg yolk diluent at 5ºC, for 12 or 24 hours was evaluated. Sixty-two Toggenburg does and two sexually mature Toggenburg bucks were used in a fatorial treatment combination (two bucks and two storage periods). The semen was diluted in 2.5 percent Tris-frutose-egg yolk; envased in 0.25mL plastic straws, with 150x10(6) mobile spermatozoa; and cooled at 5ºC for 12 or 24 hours. The females received two doses of 22.5µg of prostaglandine F2α, at each 10-day intervals in order to synchronize the estrous. From the first PGF2α injection, estrous occurrence was monitored three times per day. Only one insemination was used, using the cervix fixation method, 12 hours after the estrous onset. The means of motility and strength, 12 (TI) and 24 hours (TII) after semen cooling at 5ºC, were 66.14±0.11 percent and 62.50±0.05 percent, and 3.46±0.61 and 3.27±0.50, respectively. Neither the sire nor the period of semen influenced (P>0.05) the conception rate of the does, which was 49.1 percent.

Utilização de diferentes meios de ressuspensão para o sêmen do varrão após descongelação / Use of differents means of the boar semen dilution after thawing

A pesquisa brasileira com sêmen congelado em suínos é recente e apesar de bons níveis de eficiência, ainda não conseguiu obter resultados economicamente viáveis. Este trabalho teve por objetivo testar diferentes diluentes para a ressuspensão do sêmen após descongelação. Três machos foram coletados, em recipiente de 500 mL coberto por gaze para separação da parte gelatinosa e protegido por envoltório térmico. Cada amostra continha 112 x106 sptz/mL para as análises in vitro. A técnica de Paquignon foi utilizada para a congelação do sêmen. Após a descongelação, a 37oC durante 30 segundos, o conteúdo de cada palheta foi ressuspenso: 1) Beltsville Thawing Solution (BTS – controle); 2) BTS + ácido 3-indol acético (IAA = 10 ng/mL); 3) Androhep (ADH) e 4) Água de coco (COCO) + antibiótico. Foram avaliadas em microscopia óptica a motilidade e vigor espermático após cinco minutos e duas horas de incubação a 37oC. Foram feitos esfregaços de sêmen aos 5 minutos de incubação para avaliação da morfológia do acrossoma, de acordo com a seguinte classificação: normal (NAR); em processo de perda (PAR); sem acrossoma (SAR); com defeito (DAR); com edema (EAR). Foi utilizado o teste de Mann Whitney através do General Linear Models do programa Statistical Analysis System (SAS 6.03, 1988) a 5% (p<0,05). Os diluentes BTS e IAA obtiveram os melhores resultados de vigor (2,2 e 2,1, respectivamente) e motilidade espermática (41,9 e 6,5%, respectivamente). As análises morfológicas indicaram o ADHP e o IAA com os melhores resultados de NAR (65,7 e 59,5%, respectivamente).

The brazilian research with swine frozen semen is recent and in spite of a good efficiency levels, it didn’t still get the results economically viables. This work had for objective to test differents extenders for the semen dilution after descongelation. Three males were collected, in recipient with 500 mL covered by filter for separation of the gelatinous part and protected by thermal wrapper. Each sample contained 112 x106 sptz/mL for the in vitro analyses. The Paquignon technique was used for the semen freezing. After the descongelation at 37oC during 30 seconds, the content of each slat was diluted: 1) Beltsville Thawing Solution (BTS – control); 2) BTS + acid 3-indol acetic (IAA = 10 ng/mL); 3) Androhep (ADH) and 4) Coconut Water (COCO) + antibiotic. They were analysed in optical microscopy the spermatic motility and vigour after five minutes and two hours of incubation at 37oC. For the acrossome morphologic evaluation, they were made the semen scrub after five minutes of incubation, in agreement with the following classification: normal (NAR); in loss process (PAR); without acrossome (SAR); with defect (DAR); with edema (EAR). The Mann Whitney’s test was used with the Lineal General Models in the Statistical Analysis System Program (HEALTHY 6.03, 1988) at 5% (p <0,05). The BTS and IAA extenders obtained the best vigour (2.2 and 2.1, respectively) and spermatic motility results (41.9 and 6.5%, respectively). The morphologic analyses indicated the ADHP and IAA extender with the best results of NAR (65.7 and 59.5%, respectively).

Efeito de um quelante de cálcio, um detergente e da lecitina de soja sobre a qualidade do sêmen caprino congelado-descongelado / Effects of a calcium chelator, a detergent and the soybean lecithin on the quality of the frozen-thawed goat semen

Nove amostras de sêmen de dois caprinos adultos, colhidas com a utilização de vagina artificial, foram submetidas a criopreservação, com o objetivo de verificar o efeito do Equex STM Paste e do EDTA, adicionados a um diluidor a base de Tris-gema de ovo, sobre a viabilidade espermática pós-descongelação. Também foi objetivo desse trabalho, avaliar a utilização de um diluidor comercial, a base de lecitina de soja (Bioexcell® - IMV, L'Aigle, França), para a congelação do sêmen caprino. Assim, foram formados cinco grupos experimentais: TRIS; TRIS+EDTA; TRIS+EQUEX; TRIS+EQUEX+EDTA e Bioexcell. Logo depois da avaliação, o sêmen foi diluído nos diferentes meios e envasado em palhetas de 0,25 mL, com dose inseminante de 100 x 10 elevado a 6 espermatozóides. As amostras foram submetidas ao resfriamento, com uma curva média de 0,46°C/min, até atingirem a temperatura de 5°C, mantidas por mais 75min em tempo de equilíbrio e, posteriormente, congeladas em nitrogênio líquido. A descongelação foi realizada em banho-maria a 37°C por 50s. Não houve diferença (P>0,05) entre as médias de motilidade total e progressiva, em relação aos grupos TRIS, TRIS+EQUEX e TRIS+EQUEX+EDTA. O grupo Bioexcell obteve o menor (P<0,05) percentual de espermatozóides com motilidade total e progressiva após a descongelação. Após o teste de termoresistência, as melhores (P<0,05) taxas de motilidade total e progressiva foram observadas para os grupos com Equex STM (TRIS+EQUEX e TRIS+EQUEX+EDTA). Assim, pode-se afirmar que a adição do Equex promove uma maior manutenção das taxas de viabilidade espermática após a descongelação, quando comparado com os diluidores que não o continham.

The aim of this paper was verifying the effect of the Equex STM Paste and EDTA addition to a Tris-egg yolk extender, on the post-thaw goat sperm viability. Nine semen samples of two adult goats were collected by artificial vagina and cryopreserved. It was also objective of this study, to evaluate the utilization of a soybean lecithin based commercial extender (Bioexcell® - IMV, L'Aigle, French) for the goat semen freezing. They were formed five experimental groups: TRIS; TRIS+EDTA; TRIS+EQUEX; TRIS+EDTA+EQUEX e Bioexcell. After evaluation, the semen was diluted in the five extenders and packed in 0.25mL straws with 100 million of motile spermatozoa. The samples were cooled at 0,46°C/min to 5°C, submitted at 75min of equilibration time and frozen in liquid nitrogen vapour. The thawing was accomplished in 37°C water bath for 50s. There were no differences (P>0,05) on the means of post-thaw total and progressive sperm motility among the groups TRIS, TRIS+EQUEX and TRIS+EQUEX+EDTA. The Bioexcell group obtained the least (P<0,05) percentage of post-thawing total and progressive sperm motility. After the thermotolerance test, it was observed the greatest (P<0,05) rates of total and progressive sperm motility in the Equex STM groups (TRIS+EQUEX and TRIS+EQUEX+EDTA). Thus, it can be affirmed that the Equex addition promotes better maintenance rates in the pos-thaw sperm viability, when compared with the extenders that did not contain it.