O papel de proteínas das vias WNT/ß-Catenina, TGF-ß/BMP4 e SHH na odontogênese e odontomas / The role of proteins from the WNT/ß-Catenin, TGF-ß/BMP4 and SHH pathways in odontogenesis and odontomas

O desenvolvimento do dente depende de uma série de interações sinalizadoras recíprocas entre o epitélio oral (EO) e o ectomesênquima derivado da crista neural, a via WNT com o TGF-ß e BMP4 tem sido implicada na tumorigênese. A via de sinalização tipo Wingless (Wnt) / ß-catenina é essencial para a ativação precoce da odontogênese e no desenvolvimento de tumores odontogênicos. O TGF-ß e as BMPs tem sido associadas aos processos de dentinogênese reacionária e reparadora. A sinalização de Shh pode regular a proliferação celular no ectomesênquima dentário, controlando assim a morfogênese dentária. O objetivo da pesquisa foi investigar a atuação de algumas proteínas das vias na odontogênese e na formação de odontomas e tumores odontogênicos mistos benignos, para isto, foi desenvolvido um estudo seccional restrospectivo e imuno-histoquímico contendo 23 odontomas compostos, 21 odontomas complexos, 17 germes dentários, 05 fibro-odontomas ameloblásticos e 01 fibroma ameloblástico. Os resultados encontrados demonstraram maiores imunoexpressões da via WNT/ß-catenina no epitélio dos germes dentários (p<0,001) e no fibroma ameloblástico, enquanto que, esteve no ectomesênquima dos odontomas (p<0,001) e fibro-odontomas ameloblásticos. A via WNT/ßcatenina correlacionou-se moderadamente e significativamente com a CK14 no epitélio (p = 0,007) dos odontomas. A BMP4 foi imunoexpressa, especialmente, no ectomesênquima dos odontomas complexos (mediana = 33,7; p<0,001). A via Shh foi mais imunoexpressa no epitélio dos germes dentários (p<0,001) e no ectomesênquima dos odontomas complexos (p=0,029). De forma similar, o TGFß apresentou maior imunoexpressão no epitélio dos germes dentários (p<0,001) e no ectomesênquima dos odontomas complexos (p = 0,002). O dente em desenvolvimento exibiu maiores concentrações para estas proteínas no epitélio odontogênico nas fases de botão e capuz e a expressão diferencial ocorreu, principalmente, no ectomesênquima dos tumores, o que indica que esse componente é de fato mais proliferativo (AU).

Tooth development depends on a series of reciprocal signaling interactions between oral epithelium (EO) and neural crest-derived ectomesenchyme, the WNT pathway with TGF-ß and BMP4 has been implicated in tumorigenesis. The Wingless (Wnt)/ß-catenin signaling pathway is essential for the early activation of odontogenesis and the development of odontogenic tumors. TGF-ß and BMPs have been associated with reactionary and reparative dentinogenesis processes. Shh signaling can regulate cell proliferation in dental ectomesenchyme, thus controlling dental morphogenesis. The objective of the research was to investigate the role of some proteins in the pathways in odontogenesis and in the formation of odontomas and benign mixed odontogenic tumors. tooth germs, 05 ameloblastic fibro-odontomas and 01 ameloblastic fibroma. The results found showed higher immunoexpressions of the WNT/ß-catenin pathway in the epithelium of tooth germs (p<0.001) and in ameloblastic fibroma, while it was in the ectomesenchyme of odontomas (p<0.001) and ameloblastic fibroodontomas. The WNT/ß-catenin pathway correlated moderately and significantly with CK14 in the epithelium (p = 0.007) of odontomas. BMP4 was immunoexpressed, especially in the ectomesenchyme of complex odontomas (median = 33.7; p<0.001). The Shh pathway was more immunoexpressed in the epithelium of tooth germs (p<0.001) and in the ectomesenchyme of complex odontomas (p=0.029). Similarly, TGF-ß showed higher immunoexpression in the epithelium of tooth germs (p<0.001) and in the ectomesenchyme of complex odontomas (p = 0.002). The developing tooth exhibited higher concentrations of these proteins in the odontogenic epithelium in the bud and cap phases and the differential expression occurred mainly in the ectomesenchyme of the tumors, which indicates that this component is in fact more proliferative (AU).

The overexpression of lncRNA H19 as a diagnostic marker for coronary artery disease

SUMMARY OBJECTIVE: Our study aimed to investigate the diagnostic value of lncRNA H19 for coronary artery disease (CAD) and to explore its possible mechanisms. Methods: A total of 30 CAD patients and 30 healthy individuals, as well as patients with different cardiovascular diseases, were included in this study. Blood was drawn from each participant to prepare serum samples, and the expression of lncRNA H19 was detected using qRT-PCR. The ROC curve analysis was used to analyze the diagnostic value of H19 for CAD. The effects of patients' basic information and lifestyle on H19 expression were analyzed. The plasma level of TGF-β1 was measured by ELISA. The H19 overexpression in the human primary coronary artery endothelial cell (HCAEC) line was constructed, and the effects of H19 overexpression on the TGF-β1 expression were analyzed using Western blot. The results of H19 expression were specifically upregulated in patients with CAD but not in healthy individuals and patients with other types of cardiovascular diseases. The ROC curve analysis showed that the H19 expression level could be used to predict CAD accurately. Gender, age, and patients' lifestyle had no significant effects on H19 expression, but H19 expression was higher in patients with a longer course of disease in comparison with the controls. H19 expression was positively correlated with the serum level of TGF-β1, and H19 overexpression significantly increased TGF-β1 protein level in HCAEC. Conclusion: H19 overexpression participates in the pathogenesis of CAD by increasing the expression level of TGF-β1, and H19 expression level may serve as a diagnostic marker for CAD.

RESUMO OBJETIVO Nosso estudo teve como objetivo investigar o valor diagnóstico do lncRNA H19 para doença arterial coronariana (DAC) e explorar os possíveis mecanismos. Métodos Um total de 30 pacientes com DAC e 30 pessoas saudáveis, bem como pacientes com diferentes doenças cardiovasculares foram incluídos neste estudo. O sangue foi extraído de cada participante para preparar amostras de soro e a expressão de lncRNA H19 foi detectada por qRT-PCR. A análise da curva ROC foi utilizada para analisar o valor diagnóstico de H19 para DAC. Efeitos da informação básica dos pacientes e estilo de vida na expressão de H19 foram analisados. O nível plasmático de TGF-β1 foi medido por ELISA. A linha de células endoteliais da artéria coronária primária (HCAEC) humana de sobre-expressão de H19 foi construída e os efeitos da sobre-expressão de H19 na expressão de TGF-β1 foram analisados por Western blot. Resultados A expressão de H19 foi especificamente regulada positivamente em pacientes com DAC, mas não em pessoas saudáveis e em pacientes com outros tipos de doenças cardiovasculares. A análise da curva ROC mostrou que o nível de expressão de H19 pode ser usado para prever com precisão a DAC. Sexo, idade e estilo de vida dos pacientes não têm efeitos significativos sobre a expressão de H19, mas a expressão de H19 foi maior em pacientes com curso mais longo da doença em comparação com os controles. A expressão de H19 correlacionou-se positivamente com o nível sérico de TGF-β1 e a superexpressão de H19 aumentou significativamente o nível de proteína de TGF-β1 em HCAEC. Conclusão A superexpressão de H19 participa da patogênese da DAC aumentando o nível de expressão de TGF-β1 e o nível de expressão de H19 pode servir como marcador diagnóstico de DAC.

Comparison of the efficacy of losartan, hydrocortisone and acetylsalicylic acid (ASA) in preventing the development of fibrous scar tissue in skeletal muscle / Comparação da eficácia de losartana, hidrocortisona e ácido acetilsalicílico (AAS) na prevenção do desenvolvimento de tecido cicatricial fibroso nos músculos esqueléticos / Comparación de la eficacia de losartán, hidrocortisona y ácido acetilsalicílico (AAS) en la prevención del desarrollo de tejido cicatricial fibroso en los músculos esqueléticos

OBJECTIVE: To analyze fibrous scar tissue inhibition capacity with the use of losartan, hydrocortisone and acetylsalicylic acid. METHOD: The sample consisted of 120 male heterogeneic Wistar rats with a muscle laceration model. The rats were divided into four groups of 30 animals each: control group, losartan group, ASA group and hydrocortisone group. The animals were anesthetized and a 2.5 cm longitudinal incision was made in the left thoracolumbar paravertebral region. The muscles were subjected to a Grade III lesion caused by applying Kelly hemostatic forceps for 60 seconds, followed by sectioning with scissors. The skin was sutured with 3-0 nylon monofilament thread. The animals were placed in individual cages with plenty of food and water. The losartan group received losartan diluted in water at a dose of 0.1 mg/mL (10 mg/kg/day), the ASA Group received a 3 mg/mL ASA solution (300 mg/kg/day), and the hydrocortisone group received a 0.2 mg/mL hydrocortisone solution (20 mg/kg/day). RESULTS: The control, losartan, hydrocortisone and aspirin groups had a fibrotic area of 0.95 ± 0.35 mm, 0.55 ± 0.34 mm, 0.93 ± 0.33 mm, and 0.66 ± 0.36 mm, respectively. We observed a significantly smaller fibrotic area in the losartan group compared to the control (p=0.01) and hydrocortisone (p=0.01) groups. There were no significant differences among the other groups. CONCLUSION: The healing of striated skeletal muscle produced less fibrous scar tissue when exposed to losartan in comparison to the control group or the hydrocortisone group. Level of Evidence I; Randomized double-blind placebo-controlled study.

OBJETIVO: Analisar a capacidade de inibição de formação de tecido cicatricial fibroso com losartana, hidrocortisona e AAS. MÉTODOS: A amostra consistiu em 120 ratos Wistar heterogênicos machos com modelo de laceração muscular. Os ratos foram distribuídos em quatro grupos de 30 animais: grupo controle, grupo losartana, grupo AAS e grupo hidrocortisona. Os animais foram anestesiados e submetidos a uma incisão em sentido longitudinal de 2,5 cm de extensão na região paravertebral toracolombar esquerda, e os músculos sofreram uma lesão grau III com pinça hemostática de Kelly durante 60 segundos e posterior secção com tesoura. A pele foi suturada com nylon monofilamentar 3-0. Os animais foram colocados em gaiolas individuais, com água e alimento à vontade. O grupo losartana recebeu losartana diluída em água na dose de 0,1 mg/ml (10 mg/kg/dia), o grupo AAS recebeu solução de AAS 3 mg/ml (300 mg/kg/dia), o grupo hidrocortisona recebeu solução de hidrocortisona 0,2 mg/ml (20 mg/kg/ dia). RESULTADOS: Os grupos controle, losartana, hidrocortisona e AAS apresentaram área fibrótica de0,95 ± 0,35 mm, 0,55 ± 0,34 mm, 0,93 ± 0,33 mm, 0,66 ± 0,36 mm, respectivamente. Observou-se área fibrótica significativamente menor do grupo losartana em comparação com o grupo controle (p = 0,01) e hidrocortisona (p = 0,01). Nos demais grupos não houve diferença significativa. CONCLUSÃO: A cicatrização do músculo estriado esquelético produziu menos tecido cicatricial fibroso quando exposto à losartana do que quando comparado com o grupo controle ou o grupo hidrocortisona. Nível de Evidência I; Estudo duplo-cego randomizado controlado por placebo.

OBJETIVO: Analizar la capacidad de inhibición de formación de tejido cicatricial fibroso con losartán, hidrocortisona y AAS (ácido acetilsalicílico). MÉTODOS: La muestra consistió en 120 ratas Wistar heterogéneas machos con modelo de laceración muscular. Las ratas fueron distribuidas en cuatro grupos de 30 animales: grupo control; grupo losartán; grupo AAS y grupo hidrocortisona. Los animales fueron anestesiados y sometidos a una incisión longitudinal de 2,5 cm de extensión en la región paravertebral toracolumbar izquierda y los músculos sufrieron una lesión de grado III con pinza hemostática de Kelly durante 60 segundos y posterior sección con tijera. La piel se suturó con monofilamento de nylon 3-0. Los animales fueron dispuestos en jaulas individuales con abundante comida y agua. El grupo losartán recibió losartán diluido en agua a una dosis de 0,1 mg/ml (10 mg/kg/día), el grupo AAS recibió solución de AAS de 3 mg/ml (dosis 300 mg/kg/día), el grupo hidrocortisona recibió solución hidrocortisona de 0,2 mg/ml (20 mg/kg/día). RESULTADOS: Los grupos control, losartán, hidrocortisona y AAS mostraron área fibrótica de 0,95 ± 0,35 mm, 0,55 ± 0,34 mm, 0,93 ± 0,33 mm, 0,66 ± 0,36 mm, respectivamente. Se observó área fibrótica significativamente menor del grupo losartán en comparación con el grupo control (p = 0,01) e hidrocortisona (p = 0,01). En los demás grupos no hubo diferencias significativas. CONCLUSIÓN: La cicatrización del músculo estriado esquelético produjo menos tejido cicatricial fibroso cuando fue expuesto a losartán que cuando fue comparado con el grupo control o el grupo hidrocortisona. Nivel de Evidencia I; Estudio doble ciego aleatorio controlado por placebo.

Abordagem de cicatrizes por queimaduras com microagulhamento: revisão da literatura / Microneedling approach in burn scars: literature review / Abordaje con microagujas en la cicatrices por quemaduras: revisión de la literatura

Introdução: Queimaduras são feridas traumáticas causadas por agentes térmicos, químicos, elétricos ou radioativos. Há na literatura diversos estudos que discorrem sobre técnicas que amenizem as sequelas deixadas pelas queimaduras. Dentro dos tratamentos disponíveis, o microagulhamento tem se apresentado como estratégia de importantes resultados. O princípio do microagulhamento é proporcionar um estímulo na produção de colágeno, melhorar a qualidade da cicatriz e construção do tecido cicatricial ao nível da pele normal, preservando a epiderme e modulando os níveis de fatores de crescimento de transformação ß1 e 2, que são considerados pró-inflamatórios, e aumentando os níveis de TGFß 3, reorganizando as fibras colágenas e normalizando o aspecto do tecido, sugerindo uma melhora em cicatrizes fibróticas. Objetivo: Identificar, na literatura, a ação do microagulhamento no tratamento de cicatrizes de pacientes que sofreram queimaduras. Método: O método adotado para a pesquisa foi a revisão do tipo descritiva, com estratégia de busca elaborada, utilizando artigos indexados nas bases de dados LILACS, SciELO, PubMed e Medline no período de 2008 a 2016. Resultados: Foram encontrados sete estudos, sendo selecionados quatro que preencheram os critérios de inclusão. Dentre os selecionados, dois são estudos de caso, uma revisão bibliográfica sobre a técnica, porém não relacionada especificamente a cicatrizes por queimaduras, e um ensaio clínico randomizado. Conclusão: O microagulhamento se mostra como um promissor tratamento nas cicatrizes de queimadura, promovendo melhora do aspecto estético. Ainda há carência de estudos sobre a temática, especialmente os ensaios clínicos randomizados. Recomenda-se que mais estudos nesse padrão sejam realizados.

Introduction: Burns are traumatic wounds caused by thermal, chemical, electrical or radioactive agents. In the literature there are several studies that discuss techniques that mitigate the consequences left by the burns. Among the treatments available, the microneedling has emerged as important strategy results. The principle of microneedling is to provide a stimulation of collagen production, improving scar quality and construction of scar tissue at the level of the normal skin, preserving the epidermis modulating levels ß1 and 2, transforming growth factors that are considered pro-inflammatory, and increasing levels of TGFß 3 reorganizing collagen fibers, and normalizing the appearance of tissue, suggesting an improvement in fibrotic scars. Objective: To identify, in the literature, the action of microneedling in treating scars of patients who suffered burns. Method: The method adopted for the research was a review of descriptive, with elaborate search strategy using articles indexed in the databases LILACS, SciELO, PubMed and Medline from 2008 to 2016. Results: Seven studies were found, and selected four that met the inclusion criteria. Among the selected, two are case studies, a literature review on the technical but not specifically related to scarring from burns and a randomized clinical trial. Conclusion: Microneedling shown as a promising treatment in burn scars, promoting improved aesthetic appearance. There is still a lack of studies on the subject especially randomized clinical trials, so it is recommended that further studies in this standard are met.

Introducción: Las quemaduras son heridas traumáticas causadas por agentes térmicos, químicos, eléctricos o radioactivos. En la literatura varios estudios que tratan sobre las técnicas que mitiguen las consecuencias dejadas por las quemaduras. Entre los tratamientos disponibles, las microagujas han presentado una estrategia con resultados importantes. El principio de microagujas es proporcionar una estimulación de la producción de colágeno, mejorando la calidad de la cicatriz y la construcción de tejido de la cicatriz en el nivel de la piel normal, preservando la epidermis modulación de los niveles ß1e2 factores de crecimiento transformante que se consideran pro-inflamatoria, y aumentar niveles de TGF 3 reorganización de las fibras de colágeno normalizar la apariencia de tejido que sugiere una mejora de cicatrices fibróticas. Objetivo: Identificar, en la literatura, la acción de microagujas en el tratamiento de cicatrices de pacientes que sufrieron quemaduras. Método: El método adoptado para la investigación fue una revisión descriptiva, con estrategia de búsqueda elaborada, utilizando artículos indexados en las bases de datos LILACS, SciELO, PubMed y Medline desde 2008 hasta 2016. Resultados: Fueron encontrados siete artículos, entre los cuales se seleccionaron cuatro que cumplían los criterios de inclusión. Entre los seleccionados, dos son estudios de casos, una revisión de la literatura en la técnica, pero no específicamente relacionadas con la cicatrización de quemaduras y un ensayo clínico aleatorizado. Conclusión: Microagujas se muestra como un tratamiento prometedor en las cicatrices de quemaduras, promoviendo una mejor apariencia estética. Todavía hay una falta de estudios sobre el tema ensayos clínicos aleatorizados sobre todo, se recomienda que se cumplan otros estudios en esta norma.

Efeito da suplementação de colecalciferol nos RNA mensageiros urinários associados ao podócito em pacientes com doença renal crônica / Effect of cholecalciferol supplementation on urine podocyte-associated messenger RNAs in patients with chronic kidney disease

RESUMO Introdução: A vitamina D reduz a albuminúria em pacientes com doença renal crônica (DRC), mas o seu efeito sobre os podócitos glomerulares ainda não é claro. Objetivos: Avaliar se a suplementação de colecalciferol reduz os RNAm urinários associados ao podócito em pacientes com DRC. Métodos: Vinte e sete pacientes com DRC estágios 2 a 4 e níveis sub-ótimos de 25-hidroxi-vitamina D [25(OH)D] sérica foram tratados com colecalciferol por seis meses. Foram medidos antes e após a intervenção a 25(OH)D sérica e o RNAm urinário da nefrina, podocina, podocalixina, receptor transitório potencial do canal de cátions, subfamília C, membro 6 (TRPC6), fator A de crescimento do endotélio vascular (VEGF-A) e fator de crescimento transformador beta (TGF-β1). Resultados: A TFGe reduziu em média 4,71 mL/min/1,73 m2 (p = 0,010 vs. basal), sendo 28 ± 16 mL/min/1,73 m2 aos seis meses. Os RNAm dos produtos do podócito na urina não tiveram alteração significativa após o tratamento. Entretanto, pacientes que atingiram níveis de 25(OH)D ≥ 20 ng/mL aos 6 meses tiveram tendência de redução do RNAm da nefrina e da podocina na urina; nos pacientes em que a 25(OH)D permaneceu < 20 ng/mL houve aumento significativo da podocalixina, e tendência de maior expressão do RNAm da nefrina e da podocina. Conclusão: A reposição de colecalciferol por seis meses não teve efeito sobre os RNAm associados ao podócito nestes pacientes com DRC avançada. O efeito protetor da vitamina D ou seus análogos sobre o podócito glomerular deve ser investigado em estágios mais precoces da DRC e com maior tempo de tratamento.

ABSTRACT Introduction: Vitamin D reduces albuminuria in patients with chronic kidney disease (CKD) but its effects on glomerular podocytes are not entirely understood. Objective: To evaluate if cholecalciferol supplementation reduces the levels of podocyte-associated urine mRNAs in patients with CKD. Methods: A total of 27 patients with stages 2 to 4 CKD and suboptimal serum vitamin D [25(OH)D] levels were treated with cholecalciferol for 6 months. Serum 25(OH)D level, estimated glomerular filtration rate (eGFR), proteinuria, and urine mRNA of nephrin, podocin, podocalyxin, transient receptor potential cation channel 6, vascular endothelial growth factor A, and transforming growth factor beta were assessed before and after intervention. Results: eGFR declined at an average rate of -4.71 mL/min/1.73 m2 (p = 0.010 vs. baseline), being 28 ± 16 mL/min/1.73 m2 at six months. No changes in proteinuria or mineral and bone metabolism parameters were observed after cholecalciferol supplementation. Urinary podocyte-associated mRNAs did not change significantly after treatment. However, patients who achieved 25(OH)D level > 20 ng/mL at six months showed a trend of reduction of urinary nephrin and podocin mRNA levels; in patients with 25(OH)D that remained < 20 ng/mL there was a significant increase in urinary podocalyxin, and a trend of higher expression of urinary nephrin and podocin mRNA. Conclusion: Six months of cholecalciferol supplementation had no effect on urine podocyte-associated mRNA profile of patients with advanced CKD. The protective effect of vitamin D or its analogues on the glomerular podocyte should be investigated in early stages of CKD with a longer treatment period.

Preoperative tranilast as adjunctive therapy to primary pterygium surgery with a 1-year follow-up / Terapia auxiliar com o tranilast pré-operatório na cirurgia do pterígio primário com um ano de seguimento

Purpose: To determine the efficacy of tranilast as an adjunctive therapy in conjunctival autograft. Methods: Twenty-nine patients were randomly allocated to the Tranilast Group (n=15) or the Control Group (n=14). The Tranilast Group received a subconjunctival injection of 0.5% tranilast 30 days prior to surgery. Conjunctival autograft was performed in both groups using fibrin sealant and 0.02% subconjunctival mitomycin C at the end of the surgery. After the resection of the pterygium, immunohistochemistry was performed with 100 cells to identify epithelial cells positive for transforming growth factor-β (TGF-β). Subjective symptoms were evaluated using a 5-point scale, and the recurrence rate was assessed. Results: Both groups showed improvements in their symptoms and similar clinical results. Compared with the Control Group, the Tranilast Group failed to show a decreased recurrence rate (p=0.59). However, the number of epithelial cells expressing TGF-β was lower in the Tranilast Group (5 cells; 95% CI: 2.56-13.15; Control Group, 16 cells, 95% CI: 11.53-24.76; p=0.01). Minimal but reversible complications, including glaucoma secondary to corticosteroids and granuloma, occurred during the study. Conclusion: Tranilast was effective in decreasing the number of pterygium epithelial cells expressing TGF-β. .

Objetivo: Determinar a eficácia do tranilast, como terapia auxiliar no transplante autólogo de conjuntiva. Métodos: Vinte e nove pacientes foram randomizados em dois grupos: Grupo Tratado (15) e Grupo Controle (14). Trinta dias antes da cirurgia, o Grupo Tratado recebeu uma injeção subconjuntival de tranilast a 0,5%. O transplante autólogo de conjuntiva foi realizado em ambos os grupos, usando-se a cola de fibrina e a mitomicina 0,02% subconjuntival, ao final da cirurgia. Cada paciente foi examinado por 12 meses de acompanhamento. A imuno-histoquímica foi realizada, mediante um total de 100 células, a fim de que se contassem as células epiteliais positivas, para o fator de crescimento transformador beta (TGF-β), após a cirurgia do pterígio. Os sintomas subjetivos foram avaliados usando-se uma escala de cinco pontos, e a taxa de recorrência foi avaliada. Resultados: Os 2 grupos apresentaram melhora dos sintomas e com resultados clínicos similares. Quando comparado com o Grupo Controle, o Grupo Tratado falhou em mostrar uma diminuição da taxa de recorrência (p=0,59). Entretanto o número de células epiteliais expressando o TGF-β foi menor no Grupo Tratado (5 células; 95% CI=2,56-13,15; Grupo Controle, 16 células; 95% CI: 11,53-24,76, p=0,01). Complicações mínimas, mas reversíveis, ocorreram durante o estudo, incluindo glaucoma secundário ao uso de corticoide e granuloma. Conclusão: O tranilast foi efetivo em diminuir o número células epiteliais do pterígio expressando o TGF-β. .

Efeitos de TGF-1 em células-tronco pulpares / Effect of Transforming Growth Factor Beta 1(TGF-β 1) in stem cells derived from dental pulp

O objetivo deste trabalho foi avaliar, in vitro, os efeitos de diferentes concentrações do fator de crescimento transformador beta 1 (TGF-β1) em células-tronco derivadas da polpa de dentes decíduos esfoliados humanos (SHED), com relação à viabilidade, proliferação, migração e diferenciação celular. As SHED foram mantidas em meio de cultura MEMα + soro fetal bovino (FBS) 10% + penicilina e estreptomicina 1% e tratadas com TGF-β1 na concentração de 1,0; 5,0 e 10,0 ng/mL. Após 1, 3, 5 e 7 dias, foram avaliadas a viabilidade celular pelo método MTT e a proliferação pelo método SRB. Após 24 h de tratamento com TGF-β1, foi realizado um ensaio de migração celular por meio de insertos com poros de 8 μm. Para a avaliação da diferenciação celular de SHED em odontoblastos foram analisados por meio da RT-PCR os marcadores DSPP e DMP-1, após tratamento com TGF-β1 nas diferentes concentrações por 14 dias. Os resultados foram submetidos à ANOVA seguido do teste de Tukey. Em relação à viabilidade celular, as diferentes concentrações de TGF-β1 não tiveram efeito citotóxico sobre SHED. As células tratadas com diferentes concentrações de TGF-β1 apresentaram maiores taxas de proliferação que as do controle negativo (MEMα + 10% de FBS) a partir do 3o dia (p=0,000). Observou-se maiores taxas de migração em direção aos meios contendo TGF-β1, mas sem diferença estatisticamente significativa entre as diferentes concentrações utilizadas, entretanto, houve diferença estatisticamente significativa entre as diferentes concentrações de TGF-β1 com o controle positivo (p=0,000), controle negativo (p=0,000) e entre o controle positivo e negativo (p=0,002). A expressão de DMP-1 foi observada de forma crescente nas doses de 1,0 e 5,0 ng/mL de TGF-β1 ao longo do período (1, 7 e 14 dias) e na dose de 10,0 ng/mL a marcação foi mais intensa desde o primeiro dia do estímulo. Em relação à expressão de DSPP, o grupo tratado com 10,0 ng/mL apresentou marcação após 14 dias de tratamento...

The aim of this study was to evaluate, in vitro, the effect of transforming growth factor beta 1 (TGF-β1) in stem cells derived from the pulp of human exfoliated deciduous teeth (SHED) regarding to cell viability, proliferation, migration and differentiation. SHED were maintained in MEMα culture medium + 10% fetal bovine serum (FBS) + 1% penicillin and streptomycin, and treated with TGF-β1 at the following concentrations of 1.0; 5.0 and 10.0 ng/mL. After 1, 3, 5 and 7 days, cell viability was assessed by MTT assay and proliferation by the SRB method. After 24h of TGF-β1 treatment, cell migration assay was carried out using inserts of 8 μm pore size. To evaluate SHED differentiation into odontoblasts, DMP-1 and DSPP markers were analyzed by RT-PCR, after treatment at different concentrations of TGF-β1 for 14 days. The results were submitted by ANOVA and Tukey test. With respect to cell viability, the different TGF-β1 concentrations did not have cytotoxic effect on SHED. The cells treated by different TGF-β1 concentrations showed higher proliferation rates than those of the negative control (MEMα + 10% FBS) after the third day (p = 0.000). Higher rates of migration towards the media containing TGF-β1 were observed, but there were no statistically significant differences among the concentrations. All different TGF-β1 concentrations showed statistically significant differences with the positive control (p=0.000) and negative control (p=0.000). Statistically significant differences were observed between positive and negative control (p=0.002). DMP-1 expression was observed incrementally at TGF-β1 concentrations of 1.0 and 5.0 ng/mL at 1, 7, and 14 days and the concentration of 10.0 ng/mL was more intense from day one of the stimulus. DSPP expression was more intense after 14 days of treatment with the concentration of 10.0 ng/mL. Thus, this study concluded that different TGF-β1 concentrations stimulated cell proliferation and migration, without...

Alterações placentárias em resposta à exposição de ratas Wistar à poluição atmosférica / Placental alterations in response to exposure of Wistar rats to air pollution

Introdução: A exposição à poluição atmosférica durante a gestação provoca alterações nas características da placenta e pode resultar em restrição de crescimento intrauterino. Sabe-se que o transforming growth factor beta 1 (TGFbeta1), o sistema renina-angiotensina uteroplacentário (SRA) e os fatores angiogênicos, tais como vascular endothelial growth factor A (VEGF-A) participam do processo de placentação e regulação do fluxo sanguíneo uteroplacentário. Assim, o objetivo do presente estudo foi investigar o efeito da exposição à poluição do ar sobre a morfologia, função e SRA placentários. Métodos: Ratas Wistar fêmeas foram expostas ao ar filtrado (F) ou ao material particulado 2.5um (P) durante 15 dias. Depois o cruzamento, as ratas foram divididas em 4 grupos e novamente expostas a F ou P (FF, FP, PF, PP). No 19º dia de gestação, as porções maternas e fetais das placentas foram coletadas. Estrutura da placenta, TGFbeta1, VEGF-A e seus receptores e os componentes do SRA foram avaliados. Resultados: A exposição ao material particulado diminuiu massa, tamanho e área de superfície placentária, um indicativo da interação materno-fetal. As concentrações placentárias de TGF beta1, VEGF-A e Flk-1 e os componentes do SRA foram alterados e isso pode indicar um prejuízo na invasão do trofoblasto, angiogênese placentária e troca de nutrientes e gases entre mãe e fetos. Discussão: Os resultados indicam que a exposição a partículas compromete a interação materno-fetal e pode refletir sobre a nutrição e crescimento fetal.

Introduction: Exposure to air pollution during pregnancy causes alterations in placental characteristics and may result in intrauterine growth restriction. It was suggested that transforming growth factor beta 1 (TGFbeta1), the uteroplacental renin-angiotensin system (RAS) and angiogenic factors, such as vascular endothelial growth factor A (VEGF-A) participates of the placentation process and regulation of the uteroplacental blood flow. Thus, the aim of the present study was to investigate the effect of exposure to air pollution on the placental morphology, function and placental RAS. Methods: Female Wistar rats were exposed to filtrated air (F) or to concentrated particulate matter 2.5um (P) for 15 days. After mating, rats were divided in 4 groups and again exposed to F or P (FF, FP, PF, PP). At 19th day of pregnancy, maternal and fetal portions of placenta were collected. Placental structure, TGFbeta1, VEGF-A and its receptors and RAS components were evaluated. Results: Exposure to particulate matter decreased placental mass, size and surface area, an indicative of maternal-fetal interaction. Placental TGFbeta1, RAS components and VEGF-A and receptors Flk-1 concentrations were altered and this may indicate a prejudice in the trophoblast invasion, placental angiogenesis and maternal-fetal nutrients and gases exchange. Discussion: These findings indicate that exposure to particulate matter compromises the maternal-fetal interaction and may reflect on fetal nutrition and growth.

Avaliação dos valores séricos e urinários de CA 19-9 e TGFbeta1 na obstrução parcial e completa de ureteres em ratos / Seric and urinary evaluation of CA 19-9 and TGF beta1 in a rat model of partial or complete ureteral obstruction

Introdução: A alteração dos níveis normais de marcadores séricos e urinários ocorre na presença de dano renal associado à uropatia obstrutiva. Valores séricos e e urinários de TGF beta1 e CA 19-9 ainda não foram avaliados em modelo experimental de uropatia obstrutiva. Material e Métodos: Ratos foram divididos em sete grupos: referência, sham operation, nefrectomia unilateral, ligadura completa de ureter unilateral, obstrução parcial de ureter unilateral, obstrução parcial de ambos ureteres, nefrectomia unilateral associada à obstrução parcial do ureter contralateral. Morfometria renal e ureteral, concentrações séricas e urinárias de TGF beta1 e CA 19-9 e expressão tecidual renal de CA 19-9 foram analisadas. A correlação destes marcadores com os grupos submetidos a obstrução completa, obstrução parcial ou sem obstrução foi realizada. Resultados: Achados anatomopatológicos correlacionaram-se positivamente à intensidade da obstrução ureteral e negativamente aos níveis urinários de CA 19-9. Subexpressão acentuada do CA 19-9 foi observada em unidades renais com obstrução completa. Não foram encontradas diferenças estatisticamente significativas para os marcadores TGF beta1 urinário, TGF beta1 sérico e para o CA 19-9 sérico Conclusões: O CA 19-9 urinário correlacionou-se negativamente com o grau de obstrução ureteral. A análise imuno-histoquímica demonstrou a expressão do CA 19-9 no citoplasma das células epiteliais tubulares, sugerindo produção renal do marcador. O TGF beta1 sérico e urinário não apresentaram modificações de acordo com o grau de severidade e tempo de obstrução, o que pode estar relacionado a remodelamento renal menos intenso em resposta à uropatia obstrutiva nestes ratos

Introduction: Abnormal levels of serum and urinary markers occur in the presence of renal damage associated to obstructive uropathy. Urinary and serum TGFbeta1 and CA 19- 9 have not yet been evaluated in an experimental model of obstructive uropathy. Material and Methods: Rats were divided into seven groups: reference, sham operation, unilateral nephrectomy, complete unilateral ureteral obstruction, partial unilateral ureteral obstruction, partial bilateral ureteral obstruction, and unilateral nephrectomy with contralateral partial ureteral obstruction. Kidney and ureter morphometry, TGFbeta1 and CA 19-9 serum and urinary concentrations and CA 19-9 renal tissue expression were analysed. Correlation of these markers to complete, partial obstruction or unobstructed groups was performed. Results: Pathological findings correlated positively with the degree of ureteral obstruction, but negatively with urinary CA 19-9 levels. Marked underexpression of CA 19-9 was observed in kidneys with complete ureteral obstruction. No statistically significant differences were found for urinary and serum TGFbeta1 and also for serum CA 19-9. Conclusions: Urinary CA 19-9 correlated negatively with ureteral obstruction grade. Immunohistochemistry depicted CA 19-9 expression on epithelial tubular cells cytoplasm, suggesting renal origin. Serum and urinary TGFbeta1 did not show alterations in response to severity and length of urinary obstruction, which might be associated with less intense renal remodeling

Relationship between serum transforming growth factor ß1 and liver collagen content in rats treated with carbon tetrachloride / Relação entre fator transformador de crescimento β1 e conteúdo hepático de colágeno em ratos tratados com tetracloreto de carbono

CONTEXT: Transforming Growth Factor ß1 (TGFß1) plays a fundamental role in fibrogenesis, although its importance as a biomarker of liver disease is still matter of debate. OBJECTIVE: Quantify serum TGFß1 and its association to liver collagen content in rats exposed to Carbon Tetrachloride (CCl4). METHODS: Rats were submitted to a fibrosis model using CCl4 and sacrificed after 6, 10, 12 and 16 weeks of treatment. Serum levels of TGFß1 were measured by ELISA and collagen content was defined by morphometric analysis. RESULTS: Serum levels of TGFß1 increased between 6 and 10 weeks, whereas collagen density increased between 12 and 16 weeks. A negative correlation was observed between liver collagen deposition and serum levels of TGFß1 (r = -0. 48; P<0. 05). CONCLUSION: Serum levels of TGFß1 were inversely proportional to collagen intensity in cirrhotic livers of rats exposed to CCl4, thus suggesting a limited use as biomarker in advanced liver disease.

CONTEXTO: A citocina TGFß1 (Fator Transformador de Crescimento, TGFß1) desempenha um papel fundamental na fibrogênese, mas sua importância como biomarcador da doença hepática ainda tem sido debatida. OBJETIVO: Quantificar o TGFß1 sérico e estudar a sua associação com o conteúdo de colágeno no tecido hepático em ratos expostos ao Tetracloreto de Carbono (CCl4). MÉTODOS: Ratos foram submetidos ao modelo de fibrose por CCl4 e sacrificados após 6, 10, 12 e 16 semanas de tratamento. Os níveis séricos de TGFß1 foram quantificados por ELISA e a densidade de colágeno foi definida por morfometria. RESULTADOS: Os níveis séricos de TGFß1 aumentaram entre 6 e 10 semanas, enquanto a densidade de colágeno aumentou entre 12 e 16 semanas. Foi detectada uma correlação negativa entre a deposição hepática de colágeno e a concentração sérica de TGFß1 (r = -0,48; P<0,05). CONCLUSÃO: O nível sérico de TGFß1 foi inversamente proporcional à intensidade do colágeno no fígado de ratos com cirrose por CCl4, o que indica que seu uso como biomarcador em estágios avançados da doença pode ter utilidade limitada.

Relação dos polimorfismos funcionais -509C>t e 869T>C no gene do TGFß1 com a retinopatia e nefropatia diabéticas em pacientes com diabetes mellitus tipo 2 / Relationship of functional polymorphisms -509C>T and 869T>C in the TGFß1 gene with diabetic retinopathy and nephropathy in patients with type 2 diabetes mellitus

Introdução: O fator de crescimento transformante beta-1 (TGFß1) é uma citocina multifuncional que regula a proliferação, a diferenciação e a formação da matriz extracelular de vários tipos de células. Existem evidências de que os polimorfismos -509C>T e 869T>C no gene do TGFß1 alteram a sua expressão gênica e podem estar envolvidos na patogênese das complicações crônicas do diabetes mellitus tipo 2 (DM2). O objetivo deste estudo foi analisar o papel dos polimorfismos funcionais -509C>T e 869T>C no gene do TGFß1 na patogênese da retinopatia (RD) e da nefropatia (ND) diabéticas, em pacientes com DM2. Métodos: Foi realizado um estudo de caso-controle aninhado a um estudo transversal. Foram selecionados pacientes caucasoides com DM2 que realizaram exames clínicos, laboratoriais e uma entrevista com questionário padronizado. A genotipagem dos polimorfismos foi realizada por meio de PCR. Resultados: As frequências genotípicas e alélicas obtidas para o polimorfismo -509C>T nos pacientes com RD ou ND não diferiram daquelas observadas nos pacientes sem estas complicações. Mas quando a gravidade das complicações foi analisada, observou-se que o alelo C foi menos frequente entre os pacientes com insuficiência renal crônica não tratada com diálise, assim como a frequência de homozigotos para o alelo C foi maior nos pacientes dialíticos. Conclusão: Após a análise multivariada, o genótipo CC permaneceu como um fator de risco associado com a progressão da ND (RC = 2,68, IC 95% 1,08-6,68). Assim, os resultados sugerem que o polimorfismo 869T>C no gene do TGFß1 está associado com a progressão da ND em pacientes com DM2 (AU)

Introduction: The transforming growth factor-beta 1 (TGFß1) is a multifunctional cytokine that regulates proliferation, differentiation and extracellular matrix formation of multiple cell types. There is evidence that polymorphisms -509C> T and 869T> C in the TGFß1 gene alter its gene expression and may be involved in the pathogenesis of chronic complications of diabetes mellitus type 2 (DM2). The aim of this study was to analyze the role of functional polymorphisms -509C> T and 869T> C in the TGFß1 gene in the pathogenesis of diabetic retinopathy (DR) and diabetic nephropathy (DN) in patients with DM2. Methods: We conducted a case-control study nested in a cross-sectional study. We selected Caucasian patients with DM2 who underwent clinical and laboratory tests and an interview with a standardized questionnaire. Polymorphism genotyping was performed by PCR. Results: The allele and genotype frequencies obtained for polymorphism -509C> T in patients with DR or DN did not differ from those observed in patients without these complications. But when the severity of complications was analyzed, the C allele was found to be less frequent among patients with chronic renal failure untreated with dialysis, and the frequency of homozygous for the C allele was higher in dialysis patients. Conclusion: After multivariate analysis, the CC genotype remained a risk factor associated with progression of DN (OR = 2.68, 95% CI 1.08 to 6.68). Thus, the results suggest that polymorphism 869T> C in THE TGFß1 gene is associated with progression of DN in patients with DM2 (AU)