Esferocitosis hereditaria: experiencia clínica y diagnóstica en Argentina / Hereditary spherocytosis: clinical and diagnostic experience in Argentina / Esferocitose hereditária: experiência clínica e diagnóstica na Argentina

Los objetivos del presente estudio fueron: a) Analizar las características demográficas y clínicas de nuestra población al diagnóstico; b) Evaluar si las pruebas más recientes presentan ventajas sobre las tradicionales; c) Confirmar la frecuencia de las distintas deficiencias de proteínas de membrana; d) Establecer la relación entre severidad y resultado de las pruebas o tipo de deficiencia. Se analizaron 359 individuos estudiados desde 2007, cuando se incorporaron criohemólisis hipertónica (CH), citometría de flujo con eosina-5'- maleimida (5'EMA-CF), FOE por citometría de flujo (FOE-CF) y electroforesis de proteínas de membrana (SDS-PAGE) al estudio de laboratorio clásico, fragilidad osmótica eritrocitaria (FOE) y autohemólisis (AH). Criterios diagnósticos para Esferocitosis Hereditaria (ESH): esferocitos en frotis y dos pruebas positivas. Se identificaron 174 pacientes con ESH y 22 portadores sanos. El 74,9% eran menores de 12 años. La transmisión fue dominante en el 83,1% de los casos. Tuvieron manifestaciones neonatales 89,1%. Las pruebas con mayor sensibilidad fueron CH (92,0%), FOE diferida (91,1%) y 5'EMA-CF (88,5%). En los 125 pacientes en quienes se realizaron CH, 5'EMA-CF y FOE-CF se observó que todos tenían al menos una prueba positiva; 122 (97,6%) tuvieron dos o tres positivas. Las deficiencias más frecuentes fueron ankirina y espectrina. No hubo diferencia en el resultado de las pruebas entre los subgrupos de severidad. Se concluye que las deficiencias más frecuentes en Argentina son ankirina y espectrina, coincidiendo con otras poblaciones latinoamericanas. El uso simultáneo de CH, 5'EMA-CF y FOE-CF permite diagnosticar más del 97% de los casos. La incidencia de manifestaciones neonatales es elevada.

The aims of this study were (a) to assess demographic and clinical aspects of our population at diagnosis; (b) to evaluate diagnostic accuracy of hypertonic cryohemolysis (HC), eosin-5'-maleimide flow cytometry (EMA-FC) and flow cytometric osmotic fragility (OF-FC) in relation to standard screening tests osmotic fragility (OF) and autohemolysis (AH); (c) to confirm the previously reported prevalence of membrane proteins defects; and (d) to assess the relationship between severity of anemia and results of confirmatory tests. Since 2007, the following tests were available in our laboratory: OF, AH, HC, EMA-FC, OF-FC and SDS-PAGE of membrane proteins. Diagnostic criteria for hereditary spherocytosis were spherocytes in blood smear plus ≥2 positive tests. Data from 359 individuals were analyzed: 174 HS patients and 22 silent carriers were detected; 74.9% of patients were less than 12 years old; 83.1% of them showed a dominant inheritance pattern; antecedent of neonatal jaundice/anemia was registered in 89.1%. Tests with higher sensitivity were: HC (92.0%), incubated OF (91.1%), and EMA-FC (88.5%). HC, EMA-FC and OF-FC were simultaneously performed on 125 patients: each of them had at least 1 positive test; 122 (97.6%) had 2 or 3 positive tests. Ankyrin and spectrin were the most frequently found protein deficiencies. Comparison of test results in relation to severity of anemia showed no difference between groups. It can be concluded that compared toother Latin American countries, ankyrin and spectrin were the most frequent protein deficiencies. Simultaneous performing of HC, EMA-FC and OF-FC enabled diagnosing HS in more than 97% of patients. A high incidence of neonatal jaundice/anemia was observed.

Os objetivos do presente estudo foram: a) analisar as características demográficas e clínicas de nossa população ao diagnóstico; b) Avaliar se as provas mais recentes apresentam vantagens sobre as tradicionais; c) Confirmar a frequência das diversas deficiências de proteínas de membrana; d) Establecer a relação entre severidade e resultado das provas ou tipo de deficiência. Foram analisados 359 indivíduos estudados desde 2007, quando se incorporaram crio-hemólise hipertônica (CH), citometria de fluxo com eosina-5'-maleimida (5'EMA-CF), FOE por citometria de fluxo (FOE-CF) e eletroforese de proteínas de membrana (SDS-PAGE) ao estudo de laboratório clássico - fragilidade osmótica eritrocitária (FOE) e auto-hemólise (AH). Critérios diagnósticos para ESH: esferócitos em esfregaço e duas provas positivas. Foram identificados 174 pacientes com ESH e 22 portadores sadios. 74,9% eram menores de 12 anos. A transmissão foi dominante em 83,1%. Tiveram manifestações neonatais 89,1%. As provas com maior sensibilidade foram CH (92,0%), FOE diferida (91,1%) e 5'EMA-CF (88,5%). Nos 125 pacientes aos quais lhes realizaram CH, 5'EMA-CF e FOE-CF se observou que todos tinham no mínimo uma prova positiva; 122 (97,6%) tiveram duas ou três positivas. As deficiências mais frequentes foram anquirina e espectrina. Não houve diferença no resultado das provas entre os subgrupos de severidade. Conclui-se que as deficiências mais frequentes na Argentina são anquirina e espectrina, as quais coincidem com outras populações latinoamericanas. O uso simultâneo de CH, 5'EMA-CF e FOE-CF permite diagnosticar mais de 97% dos casos. A incidência de manifestações neonatais é elevada.

Esferocitosis hereditaria: Revisión. Parte I. Historia, demografía, etiopatogenia y diagnóstico / Hereditary spherocytosis. Review. Part I. History, demographics, pathogenesis, and diagnosis

La esferocitosis hereditaria es la anemia hereditaria más frecuente en nuestro país luego de la talasemia menor. En este artículo, se revisan aspectos históricos, demográficos, genéticos y etiopatogénicos de la enfermedad, y se describen las pruebas de laboratorio para su diagnóstico. Se remarca el comportamiento de la enfermedad en nuestra población y se detallan las deficiencias proteicas predominantes en nuestro país. Se enfatiza sobre las nuevas técnicas de laboratorio actualmente disponibles, con alta sensibilidad y especificidad, que permiten realizar un diagnóstico más temprano con volúmenes de muestra mucho menores que los necesarios para las pruebas convencionales.

Hereditary spherocytosis is the most frequent hereditary anemia excluding beta thalassemia in Argentina. Historical, demographic, genetic and pathogenic aspects of the disease are reviewed, and confirmatory laboratory tests are described. Special characteristics on the outcome of the disease in our population and prevalent protein deficiencies in our country are described. Emphasis is given on new available laboratory tests, which allow an earlier diagnosis using volume of blood samples significantly smaller than required for conventional tests.

Variaciones de la Fragilidad Osmótica Eritrocitaria en Bovinos a Pastoreo sobre praderas con bajo contenido de Selinio y Suplementados o no con Selenio / Variations of the Erythrocyte Osmotic Fragility in Cattle Grazing on Pastures with Low Selenium Content with or Without Supplement with Selenium

El selenio es constituyente de la enzima antioxidante glutatión peroxidasa (GSH-Px; E.C.1.11.1.9). La deficiencia de selenio en bovinos disminuye la actividad sanguínea de GSH-Px, predisponiendo a las membranas celulares a sufrir un daño oxidativo. La susceptibilidad de los eritrocitos bovinos al estrés oxidativo puede estimarse mediante la prueba de fragilidad osmótica eritrocitaria (FOE). Con el propósito de evaluar la FOE en bovinos a pastoreo sobre praderas con bajo contenido en selenio, en diferentes periodos del año, se emplearon dos grupos de 16 vaquillas, que pastoreaban praderas con un contenido de selenio inferior a 0,04 ppm. En el mes de marzo, un grupo (Se+) fue suplementado con selenio (Deposel®) y el otro grupo (Se-) se mantuvo sin suplementación. Muestras de sangre fueron obtenidas de cada vaquilla previo a la suplementación y luego mensualmente en 10 ocasiones. La FOE se determinó utilizando la técnica descrita por Schalm. La actividad de GSH-Px se midió usando un reactivo comercial (Ransel®). La suplementación con selenio incrementó la actividad de GSH-Px a valores considerados adecuados (> 130 U/g Hb). En el grupo Se-, la actividad de GSH-Px fluctuó entre 60-100 U/g Hb. La FOE no registró diferencias entre grupos a la concentración de NaCl 0,55%; sin embargo, ambos grupos mostraron una disminución de la FOE, es decir un aumento en la resistencia de las membranas, desde septiembre, coincidente con el periodo de primavera en el hemisferio sur. Al parecer la pradera en este periodo favorece el aporte de nutrientes antioxidantes relevantes en la protección de las membranas.

Selenium is a part of antioxidant enzyme glutathione peroxidase (GSH-Px; E.C.1.11.1.9). In cattle, the selenium deficiency has been associated with decreased activity of glutathione peroxidase leading to an increase in oxidative damage of cells. The oxidative stress in erythrocytes from cows can be estimated by erythrocyte osmotic fragility test (EOF). To assess EOF as biomarker of oxidative stress in cattle grazing on pastures with low selenium content during different seasons of the year, two groups of sixteen heifers each were used. They were grazed on pastures with 0.04 ppm selenium content. In March one group (Se+) was supplemented with selenium (Deposel®) and another (Se-) was maintained unsupplemented. Blood samples were obtained from each heifer prior to supplementation and then one time each month for ten months. The EOF was determined using a technique described by Schalm. The GSH-Px activity was measured using a commercial kit (Ransel®). The GSH-Px activity was increased by selenium supplementation to adequate levels (> 130 U/g Hb). The GSH-Px activity in Se- group was 60-100 U/g Hb. No differences between groups were detected in the EOF values, at 0.55% NaCl concentration; however, both groups showed decreased EOF values after September, coincident with the spring season in the southern hemisphere. Seemingly in this period, the more rapidly growing pasture grass increased in levels of some others factors that lead to increased protection against oxidative damage to erythrocytes.