Proposal of an iELISA for Mycoplasma bovis diagnosis in dairy cattle and associated risk factors / [Proposta de um iELISA para diagnóstico de Mycoplasma bovis em bovinos leiteiros e fatores de risco associados]

Mycoplasma bovis is a highly contagious agent associated with several pathologies in cattle. The detection of reactive antibodies to M. bovis by Indirect Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (iELISA) identifies if there was an exposure to the microorganism. The current study aimed to optimize an iELISA from M. bovis total cell antigen, applying it to bovine serum samples, and to evaluate risk factors. Serum samples were obtained from 400 cows from 17 herds from Southeast Brazil. In the optimization of iELISA, the following was established: 2 µg/mL of antigen, sera dilution 1:300, and conjugate dilution 1:15000. The frequency was 62.3% (249/400) of reactive animals and 100% (17/17) of reactive herds. Risk factors were: herds with more than 100 animals (OR= 3.1; CI= 95%); Holstein breed (OR= 72.5; CI= 95%); cows (OR= 29.7; CI= 95%); intensive breeding system (OR= 3.3; CI= 95%); associated small ruminant production (OR= 4.4; CI= 95%); milk production above 500L (OR= 2.9; CI= 95%); no quarantine (OR= 1.5; CI= 95%); mechanical milking (OR= 5.5; CI= 95%) and cases of mastitis (OR= 5.5; CI= 95%). The proposed iELISA was able to detect antibodies reactive to M. bovis in bovine serum. Knowledge of these risk factors can assist in the implementation of prophylactic measures.(AU)

Mycoplasma bovis é um agente altamente contagioso relacionado a várias patologias em bovinos. A detecção de anticorpos reativos a M. bovis por Ensaio de Imunoadsorção Enzimática Indireto (iELISA) identifica se houve exposição ao microrganismo. O presente estudo teve como objetivo otimizar um iELISA de antígeno celular total de M. bovis, aplicando-o a amostras de soro bovino, bem como avaliar fatores de risco. Amostras de soro foram obtidas de 400 vacas de 17 rebanhos da Região Sudeste do Brasil. Na otimização do iELISA foram obtidos: 2µg/mL de antígeno, diluição dos soros 1:300 e do conjugado 1:15000. A frequência de animais reativos foi de 62,3% (249/400) e de 100% (17/17) para os rebanhos. Os fatores de risco foram: rebanhos com mais de 100 animais (OR= 3,1; IC= 95%); raça Holandesa (OR= 72,5;IC= 95%); vacas (OR= 29,7;IC= 95%); sistema intensivo (OR= 3,3; C= 95%); produção de pequenos ruminantes (OR= 4,4;IC=95%); produção de leite acima de 500L (OR= 2,9;IC= 95%); sem quarentena (OR= 1,5;IC= 95%); ordenha mecânica (OR= 5,5;IC= 95%) e casos de mastite (OR= 5,5;IC= 95%). O iELISA proposto foi capaz de detectar anticorpos reativos a M. bovis no soro bovino. O conhecimento desses fatores de risco pode auxiliar na implementação de medidas profiláticas.(AU)

Genetic parameters between somatic cell score and production traits for Holstein cattle in Southern Brazil / Parámetros genéticos entre el conteo de células somáticas y las características productivas de bovinos Holstein del Sur de Brasil / Parâmetros genéticos entre escore de células somáticas e características produtivas em bovinos da raça Holandesa do Sul do Brasil

Abstract Background: Somatic cell score is an important parameter to predict milk quality and health of cows. However, in countries like Brazil, this trait is still not selected on a large scale, and no genetic parameters are reported in the literature. Objective: To estimate the variance components and genetic parameters for somatic cell score, milk yield, fat yield, protein yield, fat percentage, and protein percentage in Holstein cows. Methods: Records from 56,718 animals were used to estimate variance components, heritability, and genetic correlations using a multi-trait animal model by the REML method. Results: The heritability estimates were 0.19 for somatic cell score, 0.22 for milk yield, 0.26 for fat yield, 0.18 for protein yield, 0.61 for fat percentage, and 0.65 for protein percentage. The estimates of genetic correlations among analyzed traits ranged from -0.50 to 0.82. Conclusion: The low heritability observed for somatic cell score indicates that selection for this trait should result in benefits related to animal health and milk quality, but only in the long term. The low correlation between productive traits and somatic cell score indicates that inclusion of somatic cell score in animal breeding programs does not interfere negatively with the genetic selection for milk yield or solids.

Resumen Antecedentes: El conteo de células somáticas es un parámetro importante para predecir la calidad de la leche y la salud de las vacas. Sin embargo, en países como Brasil, esta característica aún no se selecciona a gran escala y no se reportan parámetros genéticos en la literatura. Objetivo: Estimar los componentes de varianza y parámetros genéticos para el conteo de células somáticas, producción de leche, producción de grasa, producción de proteína, porcentaje de grasa y porcentaje de proteína en vacas de la raza Holstein. Métodos: Se usaron registros de 56.718 animales para estimar los componentes de la varianza, heredabilidad y correlaciones genéticas usando un modelo animal multicaracterístico por medio del método REML. Resultados: Las estimaciones de heredabilidad fueron 0,19 para el conteo de células somáticas, 0,22 para la producción de leche, 0,26 para la producción de grasa, 0,18 para producción de proteína, 0,61 para el porcentaje de grasa y 0,65 para el porcentaje de proteína. Las estimaciones de correlación genética entre las características analizadas variaron entre -0,50 a 0,82. Conclusión: La baja heredabilidad encontrada para conteo de células somáticas demostró que la selección para esta característica podría resultar en beneficios para la salud animal y calidad de la leche, pero sólo a largo plazo. La baja correlación genética existente entre las características productivas y el conteo de células somáticas indica que la inclusión del conteo de células somáticas en programas de selección no interfiere negativamente en la selección genética para la producción de leche o sólidos.

Resumo Antecedentes: O escore de células somáticas é um parâmetro importante para a predição da qualidade do leite, bem como para a saúde das vacas. No entanto, em alguns países como o Brasil, essa característica não é selecionada em larga escala e não há parâmetros genéticos disponíveis na literatura. Objetivo: Estimar os componentes de variância e parâmetros genéticos para o escore de células somáticas, produção de leite, produção de gordura, produção de proteína, porcentagem de gordura e porcentagem de proteína em vacas da raça Holandesa. Métodos: Foi utilizado um total de 56.718 animais para estimar os componentes de variância, herdabilidade e correlações genéticas, considerando-se o modelo animal multicaracterística por meio do método REML. Resultados: As estimativas de herdabilidade foram de 0,19 para o escore de células somáticas, 0,22 para a produção de leite, 0,26 para a produção de gordura, 0,18 para produção de proteína, 0,61 para a porcentagem de gordura e 0,65 para a porcentagem de proteína. As estimativas de correlação genética entre as características analisadas variaram entre -0,50 a 0,82. Conclusão: A baixa herdabilidade encontrada para o escore de células somáticas demonstrou que a seleção para esta característica poderá resultar em benefícios para a saúde animal e qualidade do leite, porém, somente a longo prazo. A baixa correlação genética existente entre as características produtivas e o escore de células somáticas demonstrou que a inclusão do escore de células somáticas em programas de seleção não causa interferência negativa na seleção genética para a produção de leite ou sólidos.

Serological response against bovine herpesvirus and bovine viral diarrhea virus induced by commercial vaccines in Holstein heifers / Resposta sorológica contra herpesvírus bovino e vírus da diarreia viral bovina induzida por vacinas comerciais em novilhas Holandesas

Vaccination is a strategy to the prevention and control of reproductive diseases caused by bovine viral diarrhea virus (BVDV) and bovine herpesvirus type 1 (BoHV-1), however the various compositions of commercial vaccines should be evaluated for their ability to induce protection mediated by antibodies. The objective of this research was to evaluate the production of specific neutralizing Abs against BVDV-1 and 2, and BoHV-1 induced by commercial vaccines composed by different adjuvants. Holstein heifers were vaccinated and distributed in three experimental groups: Group I (G1) was vaccinated with a commercial vaccine containing inactivated BVDV-1, BVDV-2 and BoHV-1 diluted in alum hydroxide as adjuvant (n=9); Group II (G2) was vaccinated with an product containing inactivated strains of BVDV-1, BVDV-2, BoHV-1 and BoHV-5 diluted in oil emulsion as adjuvant (n=10); Group III (G3) was vaccinated with a commercial vaccine containing inactivated BVDV-1 and BVDV-2, besides live modified thermosensitive BoHV-1, diluted in Quil A, amphigen and cholesterol (n=10); A control, non-vaccinated group (n=6) was mock vaccinated with saline. Heifers received two subcutaneous doses of 5mL of each commercial vaccine on the right side of the neck, with 21 days interval. Humoral immune response was assessed by the virus neutralization test (VN) against BVDV-1 (NADL and Singer strains), BVDV-2 (SV253 strain) and BoHV-1 (Los Angeles strain) in serum samples collected on vaccination days zero (D0), 21 (D21) and 42 (D42; 21 days after boosting). Neutralizing Abs against BVDV-1 NADL was detected only in D42, regardless of the vaccine used. Similar geometric mean titers (GMT) for BVDV-1 NADL were observed between G1 (log2=5.1) and G3 (log2=5.1). The seroconversion rate (%) was higher in G1 (78%) when compared to G2 (10%) and G3 (40%). For BVDV-1 Singer, it was also possible to detect Abs production in G1 (log2=5.8, 100% seroconversion rate) and G3 (log2=3.5, seroconversion rate = 60%), only after the booster dose (D42). Neutralizing Abs to BVDV-2 (SV253) were detected only in G3, observing 90% seroconversion associated with high titers of Abs (log2=6.7) after the 2nd dose of vaccine (D42). Heifers from G1 and G3 responded to BoHV-1 after the first dose (D21): G1 (log2=2.5, seroconversion rate = 67%) and G3 (log2=0.7, seroconversion rate = 80%). In D42, a higher magnitude response was observed in the heifers from G3 (log2=6.1, 100%) compared with G1 (log2=4.3, 100%) and G2 (log2=2.7, 60%). Based on the data obtained, it can be concluded that the commercial vaccine contained aluminum hydroxide (G1) was most effective in the induction of antibodies against BVDV-1. On the other hand, this vaccine did not induce the production of neutralizing Abs against BVDV-2. Only the heifers from G3 (Quil A, amphigen and cholesterol) generated neutralizing Abs against BVDV-2. The animals that received commercial vaccine containing oil emulsion as adjuvant (G2) had a weak/undetectable response against BVDV-1 and BVDV-2. The best protective response against BoHV-1 was observed in heifers vaccinated with the live modified thermosensitive virus.(AU)

A vacinação é utilizada como estratégia para a prevenção e controle das doenças reprodutivas, causadas pelos vírus da diarreia viral bovina (BVDV) e herpesvírus bovino tipo 1 (BoHV-1), entretanto, as diversas composições de vacinas comerciais devem ser avaliadas quanto a sua eficiência protetiva mediada por anticorpos (Acs). O objetivo desta pesquisa foi avaliar a produção Acs neutralizantes específicos para cepas de BVDV-1 e 2, e BoHV-1 induzida por vacinas comerciais contendo diferentes tipos de adjuvantes. Para tal, novilhas Holandesas foram vacinadas e distribuídas em três grupos experimentais: Grupo I (G1) foi vacinado com uma vacina comercial composta por cepas inativadas de BVDV-1, BVDV-2 e BoHV-1 diluídas em hidróxido de alumínio como adjuvante (n=9); Grupo II (G2) foi vacinado com produto contendo as cepas inativadas de BVDV-1, BVDV-2, BoHV-1 e BoHV-5 em uma emulsão oleosa como adjuvante (n=10); O Grupo III (G3) foi vacinado com uma vacina comercial contendo BVDV-1 e BVDV-2 inativado, além do BoHV-1 vivo modificado e termosensivel, diluídos em adjuvante contendo Quil A, Amphigem e colesterol (n=10); O Grupo Controle não vacinado (n=6) foi inoculado com solução salina. As novilhas receberam duas doses das respectivas vacinas ou solução salina (5mL), com intervalo de 21 dias, por via subcutânea, na tábua do pescoço do lado direito. A resposta imune humoral foi avaliada pelo teste de vírus neutralização (VN) contra o BVDV-1 (cepas NADL e Singer), BVDV-2 (cepa SV253) e BoHV-1 (cepa Los Angeles) em amostras de soro coletadas nos dias (D) de vacinação zero (D0), 21 dias após 1ª dose (D21)e 42 (D42; 21 dias após A 2ª dose). Os anticorpos neutralizantes contra o BVDV-1 NADL foram detectados apenas em D42, independentemente da vacina utilizada. Os títulos médios geométricos (GMT) de anticorpos foram semelhantes entre G1 (log2=5,1) e G3 (log2=5,1). A taxa de soroconversão foi maior no G1 (78%) quando comparado ao G2 (10%) e G3 (40%). Para o BVDV-1 Singer, somente após D42 foi observada a produção de Acs no G1 (log2=5,8; taxa de soroconversão de 100%) e G3 (log2=3,5; taxa de soroconversão = 60%). Os anticorpos contra BVDV-2 (SV253) foram detectados apenas nas novilhas do G3, observando-se taxa de soroconversão de 90% com altos títulos de anticorpos neutralizantes (log2=6,7) em D42. Novilhas G1 e G3 responderam ao BoHV-1 após a primeira dose (D21): G1 (log2=2,5; taxa de seroconversão = 67%) e G3 (log2=0,7; taxa de seroconversão = 80%). Em contrapartida, foi observada uma maior magnitude de resposta para as novilhas G3 (log2=6,1; 100%) em D42, em relação aos animais G1 (log2=4,3; 100%) e G2 (log2=2,7; 60%). Com base nos dados obtidos, foi possível concluir que a vacina composta por hidróxido de alumínio (G1) foi mais eficaz na produção de anticorpos contra o BVDV-1, em contrapartida esse produto não induziu anticorpos contra o BVDV-2. Apenas as novilhas do G3 (Quil A, amphigen e colesterol) geraram Acs neutralizantes contra o BVDV-2. Os animais que receberam a vacina em emulsão oleosa (G2) como adjuvante apresentaram uma resposta fraca/indetectável contra o BVDV-1 e BVDV-2. A melhor resposta protetiva contra o BoHV-1 foi observada nas novilhas vacinadas com a vacina viva modificada termosensível.(AU)

Biochemical profile in dairy cows with artificial induction of lactation / Perfil bioquímico de vacas leiteiras submetidas a indução artificial de lactação

The objective of this study was to determine the biochemical profile of dairy cows with induced lactation. For comparison, another group of normally calved cows was used as control. Lactation was induced in multiparous Holstein cows (n=10) with two norgestomet implants (3mg each implant) on day 1. The testing continued with intramuscular norgestomet (3mg/animal) on days 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13 and 15. On days 1, 9, 16 to 18 and then every 14 days, bSTr (500mg/animal) was added. On day 16, the intravaginal implant was removed and intramuscular prostaglandin F2α (0.530mg/animal) and intramuscular estradiol benzoate (5mg/animal) were added. On days 16 to 18 dexamethasone (10mg/animal) was added, and from days 18 to 20 intramuscular metoclopramide (100mg/animal) was added. Milking began on day 19 of the induction. Blood was collected for a biochemical profile after 21 days in milk. It was found that urea and triglyceride concentrations were significantly higher in the induced cows (P<0.05). Therefore, it was concluded that the animals that had lactation induced did not present disorders related to the biochemical profile indicating that the hepatic function, renal function and lipidogram of the animals were not affected by the use of the drugs to induce lactation.(AU)

O objetivo deste estudo foi determinar o perfil bioquímico de vacas leiteiras com submetidas a indução de lactação. Para comparação, outro grupo de vacas que apresentaram parto normal foi usado como controle. A lactação foi induzida em vacas Holandesas (n=10) utilizando dois implantes de norgestomet (3mg cada implante) no dia 1. O protocolo continuou com a aplicação de norgestomet intramuscular (3mg / animal) nos dias 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13 e 15. Nos dias 1, 9, 16 a 18 e depois a cada 14 dias, foi adicionado bSTr (500mg / animal). No dia 16, o implante intravaginal foi removido e adicionou-se prostaglandina F2a intramuscular (0,530 mg / animal) e benzoato de estradiol intramuscular (5mg / animal). Nos dias 16 a 18 foi adicionada dexametasona (10mg / animal) e dos dias 18 a 20 foi adicionada metoclopramida intramuscular (100 mg / animal). A ordenha começou no dia 19 da indução. O sangue foi coletado para mensuração do perfil bioquímico após 21 em leite. Verificou-se que as concentrações de ureia e triglicérides foram significativamente maiores nas vacas induzidas (P<0,05). Portanto, concluiu-se que os animais que tiveram a lactação induzida não apresentaram distúrbios relacionados ao perfil bioquímico, indicando que a função hepática, a função renal e o lipidograma dos animais não foram afetados pelo uso das drogas para induzir a lactação.(AU)

Microorganismos aislados en cultivo bacteriológico de muestras de leche de vacas holstein clínicamente sanas / Microorganisms isolated in bacteriological culture from milk samples from clinically healthy holstein cows / Microrganismos isolados em cultivo bacteriológico de amostras do leite de vacas holandesas clinicamente saudáveis

Resumen El objetivo del presente estudio fue determinar la frecuencia de aislamiento de microorganismos de tipo infeccioso y ambiental en leche de un grupo vacas clínicamente sanas en dos diferentes tipos de ordeño. Para ello se utilizaron muestras de leche de 289 vacas ubicadas en hatos de cuatro municipios del Norte del departamento de Antioquia en diferentes sistemas de ordeño (manual y mecánico), a cada muestra de leche se le hizo cultivo bacteriológico para determinar la presencia de microorganismos. De 289 muestras de leche evaluadas, 193 (66,78%) fueron positivas para aislamiento de cualquier tipo de patógeno (ocho diferentes patógenosaislados), de las cuales 81 (28,02%) muestras provenían de ordeño manual y 112 (38,75%) pertenecían a ordeño mecánico, encontrando un mayor porcentaje de aislamiento de patógenos bacterianos en muestras de leche provenientes de sistema de ordeño mecánico (p=0,0236). El patógeno de mayor aislamiento fue el Arcanobacterium haemolyticum (antes clasificado como Corinebacterium sp), microorganismo que hace parte de la flora saprófita del animal, con presencia de manera individual en el 20,14% de las muestras analizadas y en confección con otros patógenos en 0,7% de las muestras. El microorganismo que siempre se reporta como mayor productor de mastitis subclínica en bovinos es el Streptococcus agalactiae, un patógeno infeccioso, que en el presente estudio se aisló del 12,50% de las muestras de leche. Se determinó el Odds ratio (OR), entre aislamiento de Streptococcus agalactiae y Score de Células somáticas (SCS) que fue estadísticamente significativo, indicando que cuando está presente este patógeno el SCS aumenta y los animales son más susceptibles a padecer mastitis.

Abstract A microbiological analysis was performed to determine the frequency of isolation of microorganisms of infectious and environmental type in milk from a group of clinically healthy cows in two different types of milking (manual and mechanical). To each sample of milk was made bacteriological culture to determine the presence of microorganisms. Of 289 milk samples evaluated, 193 (66.78%) were positive for isolation of any type of pathogen, of which 81 (28.02%) samples came from manual milking and 112 (38.75%) belonged to mechanical milking, finding a higher percentage of isolation of bacterial pathogens in milks coming from mechanical milking system (p = 0.0236). The most isolated pathogen was the Arcanobacterium haemolyticum, A microorganism that forms part of the saprophytic flora of the animal, with an individual presence in 20.14% and in coinfection with other pathogens in 0.7% of the samples. The most common microorganism of subclinical mastitis in cattle is Streptococcus agalactiae, which in the present study was isolated from 12.50% of milk samples. The odds ratio (OR) between the isolation of Streptococcus agalactiae and the Somatic Cell Score (SCS) was determined, which was statistically significant, indicating that when this pathogen is present the SCS increases and the animals are more susceptible to mastitis.

Resumo O objetivo deste estudo foi determinar a frequência de isoLamento de microorganismos de tipo infecciosos e ambientaL no Leite de um grupo de vacas cLinicamente saudáveL em dois diferentes tipos de ordenha. Para este fim utiLizaram-se amostras do Leite de 289 vacas LocaLizadas em rebanhos de quatro municipaLidades do Norte de Antioquia com dois tipos diferentes de ordenha (manuaL e mecânica), a cada amostra do Leite foi feito um cuLtivo bacterioLógico para determinar a presença de microorganismos. De 289 amostras do Leite avaLiadas, 193 (66,78%) foram positivas para o isoLamento de quaLquer tipo de agente patogênico (oito diferentes agentes patogênicos isoLados), das quais 81 (28,02%) amostras eram de ordenha manuaL e 112 (38, 75%) foram de ordenha mecânica, encontrando uma maior percentagem de isoLamento dos agentes patogênicos bacterianos nos Leites provenientes do sistema de ordenha mecânica (p = 0,0236). O agente patogênico mais isoLado foi Arcanobacterium haemolyticum (Corinebacterium sp), microrganismo que faz parte da flora saprófita do animaL, presentes individuaLmente em 20,14% das amostras anaLisadas, e em reLação com outros agentes patogênicos o 0,7% das amostras. O microrganismo que sempre se reporta como o maior produtor de mastite subcLínica em gado é o Streptococcus agalactiae, um agente patogênico infeccioso, que neste estudo foi isoLado no 12,50% das amostras do Leite. Foi determinado o Odds ratio (OR) entre o isoLamento de Streptococcus agalactiae e Pontuação das céLuLas somáticas (SCS), e foi estatisticamente significativo, indicando que quando o agente patogênico está presente, o SCS aumenta e os animais são mais susceptíveis à mastite.

Isolation, culture, characterization and cryopreservation of stem cells derived from amniotic mesenchymal layer and umbilical cord tissue of bovine fetuses / Isolamento, cultura, caracterização e criopreservação de células tronco derivadas de camada amniótica mesenquimal e de tecido do cordão umbilical de fetuses bovinos

Stem cells are undifferentiated cells with a high proliferation potential. These cells can be characterized by their in vivo ability to self-renew and to differentiate into specialized cell lines. The most used stem cell types, in both human and veterinary fields, are the mesenchymal stem cells (MSC) derived from bone marrow and adipose tissue. Nowadays, there is a great interest in using stem cells derived from fetal tissues, such as amniotic membrane (AM) and umbilical cord tissue (UCT), which can be obtained non-invasively at delivery time. Due to the scarcity of studies in bovine species, the aim of this study was to isolate, characterize, differentiate and cryopreserve MSC derived from the mesenchymal layer of amniotic membrane (AM), for the first time, and umbilical cord tissue (UCT) of dairy cow neonates after assisted delivery (AD) and from fetus at initial third of pregnancy (IT) obtained in slaughterhouse. Cells were isolated by enzymatic digestion of the tissue fragments with 0.1% collagenase solution. Six samples of AM and UCT at delivery time and six samples of AM and UCT at first trimester of pregnancy were subjected to morphology evaluation, imunophenotype characterization, in vitro osteogenic, adipogenic and chondrogenic differentiation and viability analysis after cryopreservation. All samples showed adherence to plastic and fibroblast-like morphology. Immunocytochemistry revealed expression of CD 44, NANOG and OCT-4 and lack of expression of MHC II in MSC from all samples. Flow cytometry demonstrated that cells from all samples expressed CD 44, did not or low expressed CD 34 (AM: IT-0.3%a, AD-3.4%b; UCT: 0.4%, 1.4%) and MHC II (AM: IT-1.05%a, AD-9.7%b; UCT: IT-0.7%a, AD-5.7%b). They were also capable of trilineage mesenchymal differentiation and showed 80% viability after cryopreservation. According to the results, bovine AM and UCT-derived cells, either obtained at delivery time or from slaughterhouse, are a painless and non-invasive source of MSC and can be used for stem cell banking.(AU)

As células tronco mesenquimais (CTMs) estão presentes na maioria dos tecidos adultos e possuem grande capacidade de multiplicação. Quando cultivadas in vitro são capazes de se auto renovar e dar origem a novos tipos celulares. As células tronco mais utilizadas, tanto na medicina humana como na medicina veterinária são as células tronco mesenquimais derivadas da medula óssea e do tecido adiposo. Atualmente, uma grande tendência para a utilização de CTMs obtidas de tecidos fetais, como a membrana amniótica (MA), matriz extravascular do cordão umbilical (TCU) e sangue do cordão umbilical (SCU) pode ser observada, já que estas fontes podem ser colhidas no momento do parto por uma técnica não invasiva. Dessa forma, o objetivo deste estudo foi isolar, caracterizar, diferenciar e criopreservar CTMs obtidas de MA e TCU de fetos bovinos colhidos no momento do parto e de fetos do terço inicial da gestação em abatedouro-frigorífico. As células foram recuperadas por meio de digestão enzimática tecidual, realizada com solução de colagenase 0,1%. Foram colhidas amostras de MA e TCU no momento do parto (n=6) e de MA e TCU no terço inicial de gestação (n=6), as quais foram submetidas às análises morfológicas, imunofenotípica por imunocitoquímica e citometria de fluxo, diferenciações in vitro nas linhagens osteogênica, adipogênica e condrogênica e ainda, avaliação da viabilidade após a criopreservação por citometria de fluxo. Todas as amostras dos diferentes grupos demonstraram adesão ao plástico e morfologia fibroblastóide. No ensaio imunocitoquímico todas as amostras foram imunomarcadas para CD44, NANOG e Oct-4, com ausência de marcação para MHC II. Na análise imunofenotipica por citometria de fluxo, todas as amostras apresentaram marcação para CD44, ausência de marcação para ou baixíssima expressão de CD34 (MA: TI-0,3%a, PA-3.4%b; TCU: TI-0,4%, PA-1.4%) e nula ou baixa expressão de MHC II (MA: TI-1.5%a, PA-9.7%b; UCT: TI-0.7%a, PA-5.7%b. Apresentaram também capacidade de diferenciação in vitro nas três linhagens mesodermais e quando analisadas pós criopreservação por citometria de fluxo, todas as amostras apresentaram viabilidade de 80%. Estes resultados indicam que MA e TCU, obtidos tanto no momento de parto como em abatedouro, de fetos bovinos podem ser utilizados como fonte não invasiva e indolor de CTMs e possibilitam a formação de bancos de armazenamento de células.(AU)

Avaliação ultrassonográfica de componentes umbilicais inflamados em bezerros da raça Holandesa com até 30 dias de vida / Ultrassonographic avaliation of the inflamed umbilical structures in Holstein calves during their first 30 days of life

As afecções umbilicais merecem destaque entre as enfermidades que acometem bezerros no primeiro mês de vida, pela alta incidência durante essa fase da vida dos neonatos e pelas relevantes perdas econômicas, decorrentes da mortalidade, custos de tratamento e atendimento veterinário, além de sequelas que poderão determinar menores ganho de peso e produção leiteira. O diagnóstico dessas enfermidades muitas vezes é prejudicado pela dificuldade em se detectar os acometimentos das estruturas intra-abdominais do umbigo, o que afetará negativamente a escolha do tratamento mais adequado e o estabelecimento do real prognóstico para cada animal. No presente estudo, realizou-se a análise ultrassonográfica dos animais com inflamação/infecção dos componentes umbilicais sendo possível observar algumas características em relação a mensurações e ecogenicidade, presentes nos componentes umbilicais acometidos. A partir dessas avaliações concluiu-se que a medida mais adequada para identificar animais com possíveis processos inflamatórios nos componentes umbilicais é a espessura da parede dos vasos umbilicais quando comparada ao diâmetro dos mesmos. Ainda, o estudo possibilitou verificar algumas particularidades do comportamento dos componentes do cordão umbilical em bezerros sadios da raça Holandesa, bem como determinar que os vasos umbilicais intra-abdominais iniciam uma involução em porção mais interna e progridem para as extremidades próximas ao anel umbilical com o evoluir da idade. Destaca-se que o confronto desses resultados com aqueles poucos descritos na literatura disponível mostrou-se com notáveis diferenças.(AU)

Umbilical disorders deserve mention among the illnesses affecting calves in the first month of life. The high incidence during this phase of life of newborns and relevant economic losses arising from mortality, cost of treatment and veterinary care, beyond sequelae may determine lower weight gain and milk production. The diagnosis of these diseases is often hampered by the difficulty to detect the involvement of intra-abdominal umbilical structures, which negatively affect the choice of the most appropriate treatment and the actual outcome for each calf. In the present study, we performed ultrasound examinations of calves with inflammation/infection in the umbilical components and observed some characteristics related with measurements and echogenicity present in umbilical affected components. From these evaluation it was concluded that the wall thickness of the umbilical vessels is the more reliable standard to determine changes in these components, as compared with that of the diameter of the umbilical vessels. Furthermore, from this study we observed some peculiarities of involution of the intra-abdominal umbilical cord components in healthy Holstein calves used for the control group to characterize the behavior of the umbilical structures during the progress of the age in the newborns. It is noteworthy that the comparison of these results with those found in the rare literature available showed notable differences.(AU)

Breed and season influence on milk quality parameters and in mastitis occurrence / Influência da raça e estação em aspectos de qualidade do leite e na ocorrência de mastites

The aims of the present study were to evaluate the performance of Jersey and Holstein cows under different rainfall conditions (dry and rainy seasons) by monitoring aspects related to subclinical mastitis (somatic cell count, microbiological isolation, type of isolated pathogen), milk quality (lactose, protein, fat, total solids) and production (mean milk production) of both breeds. The study was carried out in a dairy farm located in the state of São Paulo, Brazil. Eight visitations were done to the farm, four in a period of high rainfall and four in a period of low rainfall. Milk samples were collected from 79 Holstein cows and 37 Jersey cows for electronic somatic cell count and determination of the main milk components (protein, fat, total solids, lactose). Milk fat, protein, total solids and production were influenced by breed and the season, with similar tendencies for both breeds in both seasons. Somatic cell count (SCC) showed similar results for both breeds. Holstein cows with intramammary infections (IMI) presented a higher increase in SCC when compared to Jersey cows (P<0.001). In the dry season, 53 animals had IMI in at least one month during the study, which 32 were Holstein and 21 were Jersey cows. In the rainy season, 65 animals had intramammary infection, being 43 Holstein and 22 Jersey cows. The frequency of IMI cases was larger in the rainy season than in the dry season. Jersey cows had a lower chance of showing IMI signs and symptoms than Holstein cows in the rainy season (odds ratio=0.52). The larger number of IMI cases in the rainy season may have led to a lower milk lactose rate for both breeds, thus milk lactose rate can be considered an indicator of IMI status. There was prevalence of contagious pathogens overall in the study. The applied model showed that environmental pathogens were more frequently isolated from the breed Jersey, regardless of the study season. There seems to be differences in the immune response of Jersey and Holstein breeds.

Os objetivos do presente estudo foram avaliar a performance das raças Jersey e Holandesa em diferentes condições de pluviosidade (estações seca e chuvosa) através do monitoramento de aspectos relacionados com a mastite subclínica (contagem de células somáticas, isolamento microbiológico, tipo de patógeno isolado), qualidade do leite (lactose, proteína, gordura e sólidos totais) e produção (media da produção de leite) de ambas as raças. O estudo foi conduzido em propriedade leiteira localizada no estado de São Paulo, Brasil. Oito visitas foram realizadas a propriedade, quatro em período de alta pluviosidade e outro em período de baixa pluviosidade. Amostras de leite foram colhidas de todos os animais para contagem eletrônica de células somáticas e determinação dos principais componentes do leite (proteína, gordura, sólidos totais, lactose). Gordura, proteína, sólidos totais e produção leiteira foram influenciadas tanto pela raça como pela estação, apresentando tendências similares para ambas raças em ambas estações. A contagem de células somáticas (CCS) apresentou resultados similares para ambas as raças. Vacas holandesas com infecção intramamária (IIM) apresentaram um maior aumento na CCS quando comparadas as vacas Jersey (P<0.001). Na estação seca, 53 animais tiveram IIM em pelo menos um mês do estudo. Destes, 32 eram da raça Holandesa e 21 da raça Jersey. Na estação chuvosa, 65 animais possuíram infecção intramamária, dos quais 43 eram da raça Holandesa e 22 da raça Jersey. A frequência de casos de IIM foi maior na estação chuvosa em comparação à estação seca. Vacas Jersey apresentaram uma menor chance de desenvolver sinais e sintomas de IIM em relação às vacas holandesas na estação chuvosa (razão de chances=0.52). O maior numero de casos de IIM na estação chuvosa pode ter contribuído para uma menor taxa de lactose no leite para ambas as raças, sendo que esta pode ser considerada como um indicador do status de IIM. Existiu uma prevalência de patógenos contagiosos durante todo o experimento. O modelo estatístico aplicado mostrou que patógenos ambientais foram mais frequentemente isolados da raça Jersey, independentemente do período do estudo. Aparentemente existem diferenças na resposta imune das raças Jersey e Holandesa.

Influência da gestação e do puerpério no lipidograma de bovinos da raça Holandesa / Influence of gestation and puerperium on the lipid profile of Holstein cattle

Avaliou-se a influência da gestação e do puerpério no lipidograma de bovinos da raça Holandesa por meio da determinação de colesterol, triglicérides, ácidos graxos não esterificados (AGNE), β-hidroxibutirato (β-HBO) e glicose em 80 amostras de soro e plasma sangüíneo. Os animais foram distribuídos em cinco grupos (G) experimentais: G1 - constituído por 16 fêmeas não prenhes; G2 -18 fêmeas na fase inicial da gestação (com até três meses); G3 - 15 fêmeas prenhes, entre três e seis meses de gestação; G4 - 15 fêmeas na fase final da gestação (entre seis e nove meses); G5 - 16 fêmeas recém-paridas, com até 30 dias de puerpério. Houve influência da gestação sobre o lipidograma, pois os teores séricos de AGNE foram mais altos no terço final da gestação, enquanto os teores séricos de β - HBO foram mais elevados durante o terço inicial de gestação. O puerpério influenciou os constituintes do lipidograma, pois, nos primeiros 30 dias após a parição, os teores séricos de AGNE e β - HBO foram mais altos, enquanto os de triglicérides foram mais baixos nos animais no puerpério em relação aos que estavam em gestação.

In order to establish the influence of gestation and puerperium on the lipid profile of Holstein cattle, the concentrations of cholesterol, triglycerides, nonesterified fatty acids (NEFA), β-hydroxibutyrate (β-HBO), and glucose were determined in samples of serum and plasma from 80 animals distributed into five experimental groups (G): G1 - 16 non pregnant females; G2 - 18 females in the initial phase of gestation, up to three months; G3 -15 pregnant females, with gestation from three to six months; G4 - 15 females in the last stage of gestation, from six to nine months; G5 - 16 females soon after delivering, up to 30 days in puerperium. The lipid profile of healthy Holstein cows was influenced by gestation. The concentration of NEFA was higher in the last trimester of gestation while the serum concentration of β-HBO was higher in the first trimester of gestation. In the first 30 days after delivering, the concentrations of NEFA and β-HBO were higher, while those of triglycerides were lower when compared to those of cows during gestation.

Fatores que afetam a produção de leite e o período de lactação em um rebanho das raças Flamenga e Holandesa no Planalto Catarinense / Factors affecting milk yield and lactation period in a Flemish and Holstein herd in upland of Santa Catarina State - Brazil

Estudaram-se dados referentes à produção de leite em até 305 dias de lactação e ao período de lactação em 217 lactações de 104 vacas das raças Flamenga e Holandesa, oriundas do rebanho da Estação Experimental de Lages, pertencente à Empresa de Pesquisa Agropecuária e Extensão Rural de Santa Catarina (EPAGRI). As médias e erros-padrão da produção de leite em até 305 dias de lactação e seus respectivos coeficientes de variação foram 4.179,48 ± 89,65kg e 22,33% e, 205,17 ±4,91 dias e 15,16%, respectivamente. O desempenho da raça Flamenga foi inferior à raça Holandesa em 24,5% para produção de leite (4763 vs. 395 9kg) e em 8% para duração da lactação (317,9 vs. 292,4 dias). A estação de parto afetou somente o período de lactação, sendo as lactações iniciadas no verão mais longas que as iniciadas na primavera. A idade da vaca ao parto influenciou quadraticamente a produção de leite, sendo a idade de 69 e 96 meses a de máxima produção para as raças Holandesa e Flamenga, respectivamente. O ano de parto não afetou as características estudadas.

Data on milk yield in 305 days of lactation and lactation period of 217 lactations of 104 Flemish and Holstein cows from the Experimental Station of Lages, Empresa de Pesquisa Agropecuária e Extensão Rural de Santa Catarina (EPAGRI) were analysed. Means, standard errors and coefficients of variation from milk yield in 305 days of lactation and lactation period were 4.179.48 ± 89.65kg and 22.33% and. 305.17 ± 4.91 days and 15.16%, respectively. Performances of the Flemish cows were poorer than the Holstein cows in 24.5% for milk yield ( 4763 vs. 3959kg) and in 8% for lactation period (317.9 vs. 292.4 days). Calving season affected only the lactation period. Lactations started in summer were longer than those started in spring. Calving age showed a quadratic effect on milk yield. The age of the top production were 69 and 96 months for Holstein and Flemish cows. Year of parturition did not affect milk yield and lactation period.