RESUMO
Dentre as propriedades biológicas da própolis, a atividade antimicrobiana tem merecido destacada atenção. No presente trabalho, descreve-se a ação antiviral e virucida de três extratos hidroalcoólicos de própolis (marrom, verde e de abelhas jataí (Tetragonisca angustula), frente ao Herpesvírus Bovino tipo (BoHV-1) e ao Vírus da Diarreia Viral Bovina (BVDV). Os três extratos hidroalcoólicos foram obtidos de extração etanólica e são oriundos do sul do Brasil. A composição química dos extratos de própolis foi determinada pela cromatografia líquida de alta eficiência acoplada a espectrômetro de massas (UFLC-PDA-ESI-TOF/MS) que identificou e quantificou compostos como: ácido cafeico e ácido p-cumárico, ácido clorogênico, ácido ferúlico, além de flavonoides como a rutina. A toxicidade celular bem como a atividade antiviral dos extratos de própolis em monocamadas de células MDBK (Madin-Darby Bovine Kidney) foi avaliada através de observação microscópica e quantificada pelo teste de MTT (3-(4,5 dimetiltiazol-2yl)-2-5-difenil-2H tetrazolato de bromo). O extrato de própolis de abelhas jataí demonstrou ser menos citotóxico (1,57µg/mL), quando comparado aos extratos verde (0,78µg/mL) e marrom (0,39µg/mL). Quanto a atividade antiviral, a própolis verde demostrou maior eficácia em ambos os tratamentos celulares (pós e pré-exposição) frente ao BoHV-1 em relação aos outros extratos, ou seja, houve maior viabilidade celular quando comparada aos controles de células e vírus. Já a de jataí apresentou atividade frente aos dois vírus (BoHV-1 e BVDV) no método pré-infecção, enquanto a própolis marrom demonstrou ação apenas frente ao BoHV-1 também no método pré-infecção. Para determinação da atividade virucida foram utilizadas diferentes diluições dos vírus, bem como temperaturas e tempos distintos de incubação. A própolis verde a 37°C propiciou a maior redução no título viral (4,33log) em relação a marrom (log = 3,5log) e de jataí (log = 3,24log). No entanto, frente ao BVDV a própolis jataí apresentou os melhores resultados em ambas as temperaturas (22oC e 37oC). Portanto, os extratos avaliados apresentaram atividade antiviral e virucida frente ao BoHV-1 e BVDV, o que os torna alvo para o desenvolvimento de novos biofármacos como alternativa ao uso de antivirais comerciais em Medicina Veterinária.(AU)
Among the biological properties of propolis, the antimicrobial activity has received prominent attention. In this paper, we describe the antiviral and virucidal effect of three hydroalcoholic extracts of propolis (brown, green and jataí bees (Tetragonisca angustula), against bovine herpesvirus type-1 (BoHV-1) and bovine viral diarrhea Virus (BVDV). All hydroalcoholic extracts were obtained from ethanol extraction. The chemical composition of propolis extracts was determined by high-performance liquid chromatography coupled to mass spectrometer (UFLC-PDA-ESI-TOF/MS) to identify and quantify compounds such as caffeic acid and p-coumaric acid, chlorogenic acid, ferulic, and flavonoids such as rutin. Cell toxicity and antiviral activity of propolis extracts in monolayers of MDBK cells (Madin-Darby Bovine Kidney) were assessed by microscopic observation and quantified by the MTT assay (3- (4.5 dimethylthiazol-2yl) -2- 5-diphenyl-2H-tetrazolato bromine). Propolis extract from Jataí bees proved to be less cytotoxic (1.57mg / ml) when compared to green extracts (0.78mg / ml) and brown (0.39mg/mL). Regarding antiviral activity, propolis has shown greater efficacy in both cellular treatments (post and pre-exposure) against BoHV-1 when compared to other extracts, ie, there was increased cell viability compared to cell and virus controls. Extracts from Jataí showed activity against both viruses (BoHV-1 and BVDV) infection in the pre-test, whereas brown propolis demonstrated action only against the BoHV-1 in the pre-infection method. To determine the virucidal activity, it were used different dilutions of virus, as well as different temperatures and incubation times. The green propolis at 37°C led to a greater reduction in viral titer (4.33log) compared to brown (3.5log) and jataí (3.24log). Jataí propolis showed the best results in both temperatures (22oC and 37oC) when tested against BVDV. In summary, the evaluated extracts showed antiviral and virucidal activity against BoHV-1 and BVDV, and may be important targets for the development of new compounds as an alternative to commercial antivirals.(AU)
Assuntos
Animais , Bovinos , Antivirais/uso terapêutico , Própole/uso terapêutico , Infecções por Herpesviridae/terapia , Herpesvirus Bovino 1 , Vírus da Diarreia Viral Bovina Tipo 1 , Abelhas , Solução Hidroalcoólica , CitotoxinasRESUMO
Introducción: la aparición de cepas bacterianas resistentes a los antibióticos ha estimulado el desarrollo de nuevas líneas de investigación, basadas en las propiedades antibacterianas de plantas utilizadas en medicina popular. La medicina veterinaria ha estado tomando para sí los beneficios de la medicina tradicional, en un intento de sustituir el uso de antibióticos en el tratamiento y la prevención de la mastitis. Objetivo: evaluar la actividad antibacteriana de los extractos hidralcohólicos de Syzygium cumini (L.) Skeels, en comparación con las bacterias relacionadas en la mastitis bovina. Métodos: se obtuvieron extractos de hojas frescas con alcohol a 92,8° y de hojas secas con alcohol a 70°. La actividad antimicrobiana de plantas se evaluó utilizando la técnica de microdilución. Resultados: los extractos de hojas frescas mostraron una actividad mejor en comparación con los de hojas secas, con valores de concentración mínima inhibitoria de 1,5 a 50 %, en comparación con los diferentes microorganismos. Se destaca como más eficaz contra todo estudio el Streptococcus, con la concentración mínima inhibitoria igual a 3,1; 1,5 y 1,9 % para Streptococcus uberis, Streptococcus agalacteae y Streptococcus dysgalacteae, respectivamente. Conclusiones: estos resultados sugieren que el uso de hojas de esta especie de planta puede constituir una alternativa viable para la prevención y el tratamiento de la mastitis bovina.
Introduction: the emergence of bacterial strains resistant to antibiotics has stimulated the development of new lines of research based on the antibacterial properties of plants used in folk medicine. Veterinary medicine has been taking for itself the benefits of traditional medicine in an attempt to replace the use of antibiotics in the treatment and prevention of mastitis. Objective: this study is aimed to evaluate the antibacterial activity of hydroalcoholic extracts Syzygium cumini (L.) Skeels, compared to bacteria related to bovine mastitis. Methods: the extracts were obtained from fresh leaves with ethanol at 92.8° and leaves with ethanol at 70°. The antimicrobial activity of plants was evaluated using the microdilution technique. Results: the hydroalcoholic extracts fresh plant showed better activity compared with the hydroalcoholic extracts dry leaf, with minimal inhibitory concentration values ranging from 1.5 to 50 % compared to the different microorganisms; highlighting Streptococcus as more effective against all study, with minimal inhibitory concentration equal to 3.1, 1.5, and 1.9 % for Streptococcus uberis, Streptococcus agalacteae, and Streptococcus dysgalacteae, respectively. Conclusions: these results suggest that the use of leaves of this plant species may constitute a viable alternative for the prevention and treatment of bovine mastitis.
RESUMO
Introducción: la utilización de productos naturales y de bajo riesgo en la producción animal ha alcanzado elevada importancia en los últimos años. Objetivos: comparar la actividad antibacteriana de diferentes extractos hidroalcohólicos de 4 plantas (Baccharis trimera [Less] DC, Bidens pilosa L., Eucalyptus sp. y Tagetes minuta L.) frente a 2 microorganismos que causan mastitis (Staphylococcus aureus y Streptococcus agalactia). Métodos: se obtuvieron extractos de hojas frescas con alcohol a 92,8° y de hojas secas con alcohol a 70 y 50°. La actividad antibacteriana de cada extracto se midió por la capacidad de inactivación de 10(5)-10(6) UFC/mL de cada bacteria, en 3 tiempos de contacto, 30 s, 5 y 20 min. Los resultados obtenidos se hicieron por análisis de variación y comparación de las medias utilizando el ensayo de Turkey. Resultados: se obtuvo efecto antibacteriano con los extractos de todas las plantas. Para T. minuta, el extracto de hoja seca con alcohol de 70° fue el efecto mayor (p< 0,05), mientras que para Eucalyptus spp., se encontró que el extracto de hoja fresca resultó más eficaz, con diferencia significativa. Las otras 2 plantas no presentaron diferencia de efecto antibacteriano para las distintas formas de obtención de extracto. Conclusiones: hay mayor actividad antibacteriana, cuando el extracto de T. minuta es obtenido de hojas secas y en Eucalyptus spp. de hojas frescas.
Introduction: the use of low risk natural products in the animal production has acquired growing importance in the last few years. Objectives: to compare the antibacterial action of several hydroalcoholic extracts from 4 plants (Baccharis trimera [Less] DC, Bidens pilosa L., Eucalyptus sp. and Tagetes minuta L.) against 2 microorganisms causing mastitis (Staphylococcus aureus and Streptococcus agalactia). Methods: extracts from fresh leaves using 92.8°alcohol and from dry leaves using 70° and 50° alcohol were obtained. The antibacterial action of each extract was measured on the basis of the capacity of inactivating 10(5)-10(6) CFU/ml of each bacterium at 3 contacting times of 30 s, 5 min and 20 min. The Turkev´s assay-based variation and comparison analysis of the means provided the final outcomes. Results: all the extracts had some antibacterial effect. The extract from T. minuta dry leaves using 70° alcohol showed the biggest effect (p< 0,05) whereas the extract from Eucalyptus spp. fresh leaves proved to be more effective, being the difference significant. The other 2 plants did not show any difference in terms of antibacterial effect for the various forms of obtaining the extract. Conclusions: the antibacterial action is greater with dry leaf extract from T. minuta and fresh leaf extract from Eucalyptus spp.