Deteccion del virus del papiloma humano en biopsias de cancer de mama mediante PCR e inmunohistoquimica en el Hospital Santa Rosa durante el 2019 / Detection of human papilloma virus in breast cancer biopsies using PCR and immunohistochemistry at the Santa Rosa Hospital during 2019

El objetivo de este estudio fue determinar la presencia del Virus Papiloma Humano (VPH) tipo 16 y 18 en biopsias de tejido mamario parafinado de pacientes con diagnóstico clínico de cáncer de mama. Se analizaron 32 biopsias de cáncer de mama embebidas en parafina para detectar el ADN de VPH mediante PCR en tiempo real, los iniciadores estuvieron dirigidos al gen E6. Se evaluaron el tipo histológico, grado histológico y la sobreexpresión de C-erB2 y Ki-67 mediante inmunohistoquímica. El 84,38% (27) fueron positivos para VPH, el 25% (8) fueron positivos para VPH-16 y el 59,38% (19) para VPH-18. El 15,63% (5) de las muestras presentaron infección mixta. Se evidenció la sobrexpresión de C-erbB2 y Ki-67 en 6,25% (2) de las muestras positivas para VPH-16 y 15,63% (5) de las muestras positivas para VPH-18. Se detectó ADN de VPH-16 y VPH-18 en las muestras de biopsias analizadas mediante PCR en tiempo real.

The aim of this study was to determine the presence of Human Papillomavirus (HPV) type 16 and 18 in biopsies of paraffin-embedded breast tissue from patients with clinically diagnosed breast cancer. 32 paraffin-embedded breast cancer biopsies were analyzed in order to detect HPV DNA by real-time PCR, the primers were directed at the E6 gene. The histological type, histological grade and overexpression of C-erB2 and Ki-67 were evaluated by immunohistochemistry. 84.38% (27) of the samples were positive for HPV, 25% (8) were positive for HPV-16 and 59.38% (19) were positive for HPV-18. Mixed infection was found in 15.63% (5) of the samples. Overexpression of C-erbB2 and Ki-67 was seen in 6.25% (2) of the samples positive for HPV-16 and in 15.63% (5) samples positive for HPV-18. HPV-16 and HPV-18 DNA was detected in the biopsy samples analyzed by real-time PCR.

Abortos por Neosporacaninum em bovinos do sul de Minas Gerais / Neosporacaninum abortions in cattle in southern Minas Gerais, Brazil

Este estudo avaliou a participação de Neospora caninum em casos de abortos em bovinos provenientes de propriedades rurais da região sul de Minas Gerais por meio de análises histopatológicas, imuno-histoquímicas (IHQ) e pela reação em Cadeia de Polimerase (PCR). O material utilizado foi obtido de um estudo retrospectivo de casos de aborto recebidos pelo Setor de Patologia Veterinária da Universidade Federal de Lavras e de fetos necropsiados durante os anos de 2011 a 2013. De 60 fetos estudados, 30 (50%) tinham lesões microscópicas. Destes, 19 (63%) apresentaram lesões compatíveis com aborto por N. caninum, caracterizadas principalmente por encefalite não supurativa multifocal, necrose e gliose multifocal, assim como, miocardite e miosite não supurativa. Em 14 fetos chegou-se ao diagnóstico definitivo. Destes, cinco tiveram sua confirmação somente pela marcação IHQ e cinco foram positivos somente na PCR. Quatro fetos foram positivos tanto na IHQ quanto na PCR. Cinco fetos, provenientes do estudo retrospectivo apresentaram lesões compatíveis com N. caninum, mas a presença do protozoário não foi confirmada pela marcação IHQ. Os achados demonstram que o N. caninum é um importante agente associado ao aborto em bovinos na região sul de Minas Gerais. Para tanto, além das lesões microscópicas a associação entre a IHQ e a técnica de PCR foi essencial para a confirmação do diagnóstico.

The present study evaluates the participation of Neospora caninum in bovine abortions from farms in the southern region of Minas Gerais state, Brazil, through histopathological, immunohistochemical (IHQ) analysis and DNA detection by polymerase chain reaction (PCR). The material used in this study was obtained through retrospective study of bovine abortion cases received by the Setor de Patologia Veterinária da Universidade Federal de Lavras and by necropsies performed in fetuses from 2011 to 2013. From 60 fetuses studied, 30 (50%) had microscopic lesions; 19 (63%) of them had histologic lesions compatible with N. caninum abortion, characterized by multifocal non-suppurative encephalitis, necrosis and gliosis in the central nervous system and multifocal nonsuppurative myocarditis and myositis. From the 19 fetuses with protozoa lesions in 14 the final diagnosis was performed; five were confirmated only by IHQ staining and five were positive only by PCR. Four fetuses were positive in IHC and in PCR. In five fetuses from the retrospective study lesions compatible with N. caninum were seen, but the presence of the protozoan was not confirmed by IHQ labeling. The findings demonstrate that N. caninum is an important agent associated with abortion in cattle from Minas Gerais. Therefore, beyond the microscopic lesions association between IHC and PCR was essential to confirm the diagnosis.

Detección inmunohistoquímica del receptor del factor de crecimiento epidérmico: revisión de algunos aspectos técnicos relacionados / Immunohistochemical detection of the epidermal growth factor receptor: review of some related technical aspects

Introducción: En los últimos años la inmunohistoquímica (IHQ) se ha convertido en el método más usado en la determinación de la expresión del receptor del factor de crecimiento epidérmico (REGF). La falta de control de algunos aspectos técnicos durante su determinación en muestras de tejidos fijados en formol e incluidos en parafina, como por ejemplo, la fijación tisular y el procesamiento de las muestras, la elección de un método adecuado de reanimación antigénica, el empleo de diferentes anticuerpos anti-REGF y sistemas de detección, a llegado a tal punto que la confiabilidad y reproducibilidad de la detección inmunohistoquímica de la sobreexpresión del REGF está siendo fuertemente cuestionada. Objetivo: La estandarización de estos procedimientos constituye una de las metas más perseguidas actualmente, con el objetivo de continuar empleando la sobreexpresión del REGF por IHQ como criterio de elección y predictor de la respuesta al tratamiento, sin necesidad de recurrir a técnicas más complejas para su detección, disminuyendo en gran medida a la variabilidad intra e interlaboratorios. Métodos: Revisión y determinación de la pertinencia en el control de la técnica investigativa y viabilidad de la misma. Conclusiones: La determinación de la sobreexpresión del REGF por IHQ continúa siendo el método más empleado actualmente como predictor de la respuesta a la terapia contra el receptor. La heterogeneidad de las muestras, la falta de estandarización de los procedimientos inmunohistoquímicos empleados, la existencia de numerosos protocolos con un mismo fin, así como otras fuentes de variabilidad, han conducido a la obtención de resultados poco confiables y reproducibles

Background: In recent years, immunohistochemistry (IHC) has become the most widely used method in determining the expression of epidermal growth factor receptor (EGFR). The lack of control of some technical aspects during their determination in formaldehyde fixed and paraffin embedded tissue such as tissue fixation and sample processing, the choice of a suitable antigen retrieval method, the use of different anti-EGFR antibodies and the detection systems have come to the point that the reliability and reproducibility of the imunohistochemical analysis of EGFR overexpression is being seriously questioned. Objective: The standardization of these procedures is one of most pursued goals at present, with the aim to continue using EGFR overexpression by IHC as selection criteria and predictor of treatment response, without resorting to most complex techniques for its detection, greatly diminishing the intra and inter laboratory variation. Methods: A review and determination of the relevance in the control of the investigative technique and its feasibility was made. Conclusions: The determination of EGFR overexpression by IHC continues being the most used method at present as predictor of the response to the therapy against the receptor. The heterogeneity of the samples, the lack of standardization of the most used immunohistochemical procedures, the existence of several protocols with the same goal, as well as other sources of variability have led to obtaining hardly reliable and reproducible results

Imunocitoquímica e imunohistoquímica para o diagnóstico laboratorial da leishmaniose tegumentar / Immunocytochemistry and immunohistochemistry for laboratorial diagnosis of cutaneous leishmaniasis

0 aumento significativo do número de casos notificados da Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA) e a expansão geográfica da endemia tem motivado o desenvolvimento de novas tecnologias para auxiliar no diagnóstico das leishmanioses, visando minimizar as restrições apresentadas pelos testes diagnósticos disponíveis nos serviços de saúde. 0 presente trabalho empregou imunocitoquimica e imunohistoquímica (ICQ/IHQ) como métodos diagnósticos laboratoriais para LTA. Amostras de culturas de Leishmania in vitro e cortes histológicos de lesões em animais infectados experimentalmente foram submetidos a ICQ/IHQ, utilizando anticorpos policlonais desenvolvidos para este estudo e o complexo avidina-biotina modificado (Ultra Streptavidin®). Em comparação com outras técnicas empregadas para o diagnóstico da LTA, nos casos avaliados, a IHQ apresentou resultados semelhantes aos da histopatologia com coloração HE, com sensibilidade de 33,3% para formas amastigotas. Quando considerada a presenva de antígenos de Leishmania no padrão celular, a IHQ apresentou uma sensibilidade de 83,3%, significativamente maior que na histopatologia e compatível com metodos padrão ouro de cultura e PCR. As metodologias de ICQ/IHQ desenvolvidas neste trabalho foram capazes de demonstrar em biópsias de lesões, a presença de formas amastigotas e antígenos de Leishmania, oferecendo contribuição adicional ao diagnóstico da LTA, sendo de facil aplicação e podendo ser utilizada no sistema público de saúde.

The significant increase in cutaneous leishmaniasis (CL) notified cases and the geographic expansion of this endemy has motivated the development of new techniques to help in leishmaniasis diagnosis, seeking the minimization of the restrictions imposed by the diagnostic tests available at the health services. The current study applied immunocytochemistry and immunohystochemistry methods (ICC/IHC) for laboratory diagnosis of CL. Imprints and histological sections from tissue infected with Leishmania were submitted to ICC/IHC methods using polyclonal antibodies developed for this study and a modified avidin-biotin complex (Ultra Streptavidin®). The samples also were submitted for routinely stained hematoxylin and eosin (H&E) specimens and gold standard methods (culture and PCR). Compared with other useful techniques for the CL diagnosis, ICC/IHC showed the same sensitivity results (33%) as H&E stain for amastigotes recognition. When the presence of Leishmania antigens was evaluated, ICC/IHC presented 83,3% sensitivity, i.e., higher than that detected by histopathology and equivalent with gold standard methods (culture and PCR). The ICC/IHC techniques developed in the current study were able to recognize amastigote forms and also Leishmania antigens in lesion biopsies, offering an additional help to CL diagnosis and it can be easily applied in the public health system.

Detecção de invasão vascular em biópsia por agulha grossa de carcinoma de mama por meio da técnica IHQ com duplo marcador CD34 e pancitoqueratina AE1/AE3 / Detection of blood vessel invasion in breast cancer core-biopsy through immunohistocheminal analysis with double staining CD34 and pan cytokeratin AE1/AE3

Objetivos: Detectar a presença de invasão vascular nas biópsias por agulha grossa de carcinoma demama por meio da técnica IHQ (IHQ) com duplo marcador (CD34-pancitoqueratina AE1/AE3);analisar a sensibilidade, a especificidade, o valor preditivo positivo (VPP) e o valor preditivo negativo(VPN) com essa técnica e comparar a acurácia do duplo marcador com a técnica da hematoxilinaeosina(H&E). Métodos: Cortes histológicos de 74 casos de biópsias por agulha grossa de pacientescom câncer de mama foram submetidos à coloração por IHQ com duplo marcador e coloração porH&E. Como grupo-controle, utilizou-se os resultados anatomopatológicos das cirurgias. Resultados:Invasão vascular ocorreu em 34 casos (45,9%). O teste H&E demonstrou valores superiores à IHQquanto a sensibilidade, especificidade, VPP e VPN. Apenas em casos sem metástases axilares, a especificidadefoi superior no teste com IHQ. Conclusão: O teste com maior acurácia para a detecção deinvasão vascular nas biópsias foi o da coloração por H&E. Nos casos sem metástases axilares, o duplomarcador mostrou-se superior somente quanto à especificidade. Por causa da escassez de material dasbiópsias, a principal suposição é que, no material proveniente das cirurgias, que é mais representativo,ou em biópsias com maior número de fragmentos, o duplo marcador tenha melhores resultados.

Purposes: To detect blood vessel invasion in breast cancer core-biopsies through the immunohistochemicaldouble staining technique (CD34 and pancytokeratin AE1/AE3); to analyze the sensitivity, specificity, positivepredictive value and negative predictive value of this technique and to compare the accuracy of double stainingwith the hematoxylin-eosin technique. Methods: 74 specimens of breast cancer core-biopsies were analyzed.Core-biopsy specimens were stained with immunohistochemical (IHC) double staining and with hematoxylineosin(H&E) in different slides for blood vessel invasion research. For the control group, we used anatomopathologicalresults from previous surgeries. Results: 34 patients (45.9%) presented blood vessel invasion. The H&Etest showed better results of sensitivity, specificity, positive predictive value (PPV) and negative predictive value(NPV). Only in cases without metastatic axillary lymph node, specificity was higher in the ICH test. Conclusion:The H&E is the most accurate method to the detection of blood invasion in core-biopsies breast cancer. Incases without metastatic axillary lymph node, IHC double staining proved to be superior regarding specificity.Considering the low density of core-biopsy specimens, our hypothesis is that IHC double staining would be thebest choice when used in specimens of surgeries or in core-biopsy with abundant sample of tissue.