Efeito de soluções contendo hexametafosfato de sódio e quercetina, associados ou não ao fluoreto, sobre o desgaste erosivo dentinário in vitro / Effect of sodium hexametaphosphate and quercetin, associated or not with fluoride, on dentin erosion in vitro

O objetivo do presente estudo foi investigar o efeito de soluções contendo fluoreto (F), hexametafosfato de sódio (HMP) e quercetina (QC), sozinhos ou em associação, sobre a erosão dentinária e sobre a inibição de metaloproteinases da matriz (MMPs) -2 e -9, em protocolos in vitro. Blocos de dentina radicular bovina (4 × 4 × 2 mm; n = 96), selecionados por dureza superficial, foram aleatoriamente divididos em 8 grupos experimentais (n = 12/grupo) e tratados 2×/dia (um minuto) com as seguintes soluções: (1) água deionizada (controle negativo); (2) 1100 ppm F ("F"); (3) 1,0% HMP ("HMP"); (4) 0,03% QC ("QC"); (5) F+HMP; (6) F+QC; (7) HMP+QC; e (8) F+HMP+QC. Os blocos foram submetidos a desafios erosivos 4×/dia, por 5 dias (exposição dinâmica a ácido cítrico 50 mmol.l-1 , pH 3,2, 90 s). Em seguida, foram analisados quanto à perda dentinária (perfilometria) e à perda de dureza integrada em profundidade (área sob a curva, ∆KHN). O potencial antiproteolítico das soluções contendo F, HMP e/ou QC foi analisado por zimografia. Os dados de perda dentinária (log10) foram submetidos a ANOVA um critério, seguido do teste de Tukey. Os resultados de ∆KHN (dados brutos) foram submetidos a ANOVA dois critérios, medidas repetidas, seguido do teste HolmSidak (p< 0,05). O menor desgaste erosivo foi observado no grupo F+HMP+QC. Nas menores profundidades (5-30 µm), os blocos tratados com a solução contendo F+HMP+QC apresentaram os maiores valores de ∆KHN. A análise zimográfica mostrou que todos os tratamentos promoveram atividade antiproteolítica total da MMP-2, com exceção da QC administrada sozinha (inibição de 77%). Para MMP-9, todas as soluções contendo HMP e a associação de F+QC apresentaram atividade antiproteolítica total. Conclui-se que a adição de HMP e QC a soluções contendo F levou a uma maior proteção contra a erosão dentinária, tanto em superfície (perda dentinária) quanto em relação ao conteúdo mineral do tecido remanescente (∆KHN), além de promover uma completa inibição da atividade de MMPs -2 e -9 in vitro(AU)

The aim of the present study was to investigate the effect of solutions containing fluoride (F), sodium hexametaphosphate (HMP) and quercetin (QC), alone or in association, on dentin erosion and on the inhibition of matrix metalloproteinases (MMPs) - 2 and -9, using in vitro protocols. Bovine root dentin blocks (4 × 4 × 2 mm; n = 96), selected by surface hardness, were randomly divided into 8 experimental groups (n = 12/group) and treated 2×/day (one minute) with the following solutions: (1) deionized water (negative control); (2) 1100 ppm F ("F"); (3) 1.0% HMP ("HMP"); (4) 0.03% QC ("QC"); (5) F+HMP; (6) F+QC; (7) HMP+QC; and (8) F+HMP+QC. Blocks were submitted to erosive challenges 4×/day for 5 days (dynamic exposure to 50 mmol.l-1 citric acid, pH 3.2, 90 s). They were then analyzed for dentin loss (profilometry) and integrated hardness loss in depth (area under the curve, ∆KHN). The antiproteolytic potential of solutions containing F, HMP and/or QC was analyzed by zymography. Dentin loss results (log10 transformed) were submitted to one-way ANOVA, followed by Tukey's test. ∆KHN data (raw) were submitted to two-way, repeated-measures ANOVA, followed by the Holm-Sidak test (p< 0.05). The lowest dentin erosive wear was promoted by F+HMP+QC. At the lowest depths (5-30 µm), blocks treated with F+HMP+QC showed the highest values of ∆KHN. Zymography analysis showed that all treatments completely inhibited MMP-2 activity, except for QC administered alone (77% inhibition). For MMP-9, all the solutions containing HMP or the association of F+QC promoted total antiproteolytic activity. It was concluded that the addition of HMP and QC to F solutions led to greater protection against dentin erosion, both at the surface (dentin loss) and in relation to the mineral content of the remaining tissue (∆KHN), in addition to promoting a complete inhibition of MMPs -2 and -9 activity in vitro(AU)

Efeito do tratamento com antileucotrieno em contratura capsular: estudo experimental / Effect of antileukotriene treatment on capsular contracture: an experimental study

RESUMO Introdução: 40% dos pacientes submetidos à radioterapia após reconstrução de mama por implante de prótese de silicone podem desenvolver encapsulamento da prótese. Diversas estratégias já foram testadas para prevenir a contratura da cápsula com resultados insatisfatórios. Este estudo analisou o efeito do antileucotrieno (AL) tópico na formação de contratura capsular em ratos com implantes de silicone associados à irradiação. Métodos: Foram implantados blocos de silicone na região dorsal em 20 ratas fêmeas, espécie Wistar com peso variando de 200-250g. Os animais foram divididos em dois grupos: controle (injeção de solução fisiológica 0,9% no tecido ao redor do implante) e grupo intervenção (injeção de 10mg de AL no tecido ao redor do implante). Imediatamente após a cirurgia os animais foram irradiados com dose única de 10Gy. Após dois meses, coletamos amostras de cápsulas para análise histológica e análise da expressão gênica dos seguintes biomarcadores: iNOS, VEGF-a e MMP-9. Resultados: A densidade vascular foi menor no grupo AL quando comparado ao grupo controle (55,4±30,0 vs. 81,8±26,7, p=0,05, respectivamente). Da mesma forma, o VEGF-a teve o mesmo comportamento (grupo controle - 0,34±0,1 vs. grupo Al - 0,02±0,001, p=0,04). Conclusão: Este estudo sugeriu que o tratamento com AL diminui a angiogênese em animais submetidos a implantes de silicone e submetidos à radioterapia

ABSTRACT Introduction: 40% of patients undergoing radiotherapy after breast reconstruction by silicone prosthesis implant may develop prosthesis encapsulation. Several strategies have already been tested to prevent capsule contracture with unsatisfactory results. This study analyzed the effect of topical antileukotriene (AL) on capsular contracture formation in rats with silicone implants associated with irradiation. Methods: Silicone blocks were implanted in the dorsal region in 20 female rats Wistar with weights ranging from 200-250g. The animals were divided into two groups: control (injection of 0.9% saline solution into the tissue around the implant) and intervention group (injection of 10mg of AL into the tissue around the implant). Immediately after surgery, the animals were irradiated with a single dose of 10Gy. After two months, we collected capsule samples for histological analysis and gene expression analysis of the following biomarkers: iNOS, VEGF-a and MMP-9. Results: Vascular density was lower in the AL group when compared to the control group (55.4±30.0 vs. 81.8±26.7, p=0.05, respectively). Similarly, VEGF-a had the same behavior (control group - 0.34±0.1 vs. group Al - 0.02±0.001, p=0.04). Conclusion: This study suggested that treatment with AL decreases angiogenesis in animals submitted to silicone implants and underwent radiotherapy.

Planejamento, síntese, modelagem molecular e avaliação biológica de novos potenciais inibidores duais HDAC/ MMP não-hidroxamatos / Design, synthesis, molecular modeling and biological evaluation of novel potential non-hydroxamate dual HDAC/ MMP inhibitors

A inibição de alvos específicos como metaloproteinase de matriz (MMP) e histona desacetilase (HDAC) é amplamente estudada para impedir o progresso do câncer. Foi estabelecido que a inibição concomitante de MMP e HDAC é eficaz no combate de tumores sólidos e hematológicos. Ambos os alvos possuem um íon Zn2+ em seu sítio ativo, fundamental para a atividade destas enzimas. A alta afinidade dos inibidores conhecidos de MMP e de HDAC é conferida, principalmente, por um potente grupo ligante de zinco (ZBG). O ácido hidroxâmico é o ZBG mais potente conhecido atualmente, entretanto, este apresenta instabilidade farmacocinética, levando a ineficácia e genotoxicidade em testes clínicos. Frente a este contexto, o presente trabalho teve como objetivo o planejamento, síntese, modelagem molecular e avaliação biológica de novos inibidores duais MMP/HDAC não-hidroxamatos. Os compostos foram planejados utilizando estratégias de hibridação molecular, a partir de arcabouços provenientes inibidores de HDAC e MMP, gerando compostos arilsulfonamídicos com variações no tipo de ZBG inserido e na sua respectiva posição relativa na estrutura geral. Foram sintetizados sete análogos, em duas a três etapas reacionais, utilizando métodos de sulfonilação e acoplamento com agentes condensantes, partindo dos ésteres para e meta aminobenzoicos. Os rendimentos globais variaram de 25% a 55% e os produtos obtidos foram caracterizados por RMN 1H e 13C, LC/MS, CLAE e ponto de fusão. Os compostos tiveram sua atividade citotóxica avaliada em células HOG (oligodendroma) e T98G (glioblastoma), dentre os quais o 6a, que possui o ZBG 2-amino anilida, foi o mais promissor, apresentando atividade nas duas linhagens na casa de nM. Ensaios de coordenação com Fe2+ comprovaram a capacidade quelante dos análogos contendo ácido hidroxâmico e dos demais compostos citotóxicos, 4a e 4b (ZBG-2, salicilal-hidrazona), o que não foi observado para o composto 6a. Os estudos de ancoramento molecular permitiram sugerir um modo de interação para todos os ZBG propostos frente aos respectivos alvos (HDAC e MMP), sendo observado que o ZBG 4 (2-amino anilida) faria a interação de modo monodentado com a HDAC, enquanto não seria possível o encaixe no sítio catalítico da MMP. Conclui-se, portanto, que o planejamento proposto permitiu a obtenção de compostos promissores como antitumorais, e que a substituição do ácido hidroxâmico por outros ZBG fornece moléculas ativas frente a células tumorais. Entretanto, a avaliação biológica frente à MMP e HDAC é necessária para confirmar o mecanismo de ação proposto

Inhibition of specific targets such as matrix metalloproteinase (MMP) and histone deacetylase (HDAC) is extensively studied regarding arrest cancer growth. Particularly, concomitant inhibition of MMP and HDAC is effective against solid and hematologic tumors. Both targets have an ion Zn2+ at their catalytic site, which is essential for respective enzymatic activity. High affinity of known MMP and HDAC inhibitors is mainly provided by a potent zinc binding group (ZBG). Hydroxamic acid is the most potent ZBG currently known; however, it presents low pharmacokinetics stability, which results in its ineffectiveness and genotoxicity along clinical trial. So, the aim of this work comprised the design, synthesis, molecular modeling and biological evaluation of novel potential non-hydroxamate dual HDAC/ MMP inhibitors. Compounds were designed by molecular hybridation, employing scaffolds from HDAC and MMP inhibitors, which provided arylsulfonamides with variation about the ZBG type and its respective relative position in the general structure. Seven compounds were synthesized, in two to three reaction steps, through methods that comprise sulfonilation and coupling with condensing agents, using para and meta-aminobenzoic esters as starting material. Compounds showed global yields around 25-55 % and were characterized by 1H and 13C NMR, LC/MS, HPLC and melting point. Compounds were evaluated about their cytotoxicity against HOG (oligodendroma) and T98G (glioblastoma) cells, which 6a, with ZBG 2-aminobenzamide, was the most promising molecules, presenting activity against both cell lines at nM range. Coordination assays with Fe2+ proved the chelating capacity of hydroxamate analogues as well as the cytotoxic compounds, 4a and 4b (ZBG-2, salicylal-hydrazone), which was not observed about 6a. Molecular docking allowed to suggest an interaction model for all proposed ZBG with the respective targets (MMP and HDAC), showing that (ZBG-4) 2-aminobenzamide interacts with HDAC by monodentate way, but does not docks at MMP catalytic site. We conclude that the proposed design allowed obtaining promising compounds as antitumors agents, and the replacement of hydroxamic acid by other ZBG provide active molecules against tumor cells. However, biological evaluation against MMP and HDAC is necessary to confirm the proposed action mechanism

Influência de agentes antiproteolíticos na resistência de união da interface dentina, adesivo e cimento resinoso / Influence of antiproteolytic agents on dentin, adhesive and luting cement interface

O objetivo deste trabalho, foi avaliar a influência de agentes antiproteolíticos, imediatamente e após 12 meses, na cimentação adesiva. Foram utilizadas as porções coronárias de 64 molares humanos hígidos. As amostras foram divididas aleatoriamente em 4 grupos, de acordo com o tratamento da dentina: CT (grupo controle); CXL (grupo clorexidina); EGCG (grupo epigalocatequina-3-galato); AT (grupo antocianina). Para a restauração, foram confeccionados cilindros em resina composta Filtek Z350 XT. Após o condicionamento ácido da dentina, as soluções antiproteolíticas foram aplicadas e mantidas sobre a superfície por 60 s, em seguida as restaurações foram cimentadas às amostras com o adesivo Adper Single Bond 2 + cimento resinoso Variolink II. Todos os grupos foram subdivididos de acordo com o tempo de armazenamento em água destilada para o ensaio mecânico: I (Imediato = após 24 h); A (Armazenado = após 12 meses). As amostras foram cortadas em palitos e submetidas ao teste de microtração. Os dados obtidos foram submetidos ao teste de ANOVA a 2 fatores, seguido do teste de Tukey (α=5%). Foram encontradas diferenças para os fatores Tratamento (p=0,03) e Armazenamento (p=0,00). Os valores em MPa de média e desvio padrão para interação entre os fatores Tratamento X Armazenamento, foram: CT.I: 42.56 (±7,60) A; EGCG.I: 39.6 (±8,99) A; CLX.I: 39.37 (±9,44) A; AT.I: 38.69 (±8,65) A; CT.A: 31.85 (±6,96) A; AT.A: 31.29 (±4,89) AB; EGCG.A: 30.94 (±9,91) AB; CLX.A: 18.68 (±4,53) B. Foram confeccionadas duas amostras adicionais de cada grupo para avaliação descritiva da microdureza knoop de subsuperfície e avaliação qualitativa da interface adesiva em MEV. Conclui-se que as soluções de EGCG e AT foram capazes de manter a estabilidade da resistência de união após 12 meses de armazenamento e que a solução de CLX afetou negativamente os valores de resistência de união comparado aos demais subgrupos(AU)

The aim of this study was to evaluate immediately and longitunally the antiproteolytic agent influence to adhesive cementation. Were used 64 coronary portion of sound human molars. The samples were divided into 4 groups according to the dentin treatment: CG (Control group); CLX (chlorhexidine group); EGCG (epigallocatechin-3- gallate group); AT (anthocyanin group). Cylindrical composite blocks were prepared using a resin composite Filtek Supreme for the restorations. The solutions were applied on the acid-etched dentin and were kept for 60 s. The resin composite blocks were cemented with the adhesive system Adper Single Bond 2 + resin cement Variolink II. All groups were subdivided according to the storage time in distilled water for mechanical testing: I (Immediate = after 24 h); S (Stored = after 12 months). Samples were cut into beams and tested in a universal testing machine at a crosshead speed of 0.5 mm/min until failure. The data were submitted to two-way ANOVA, followed by the Tukey test (α = 5%). Significant differences were found for the Treatment factor (p = 0.03) and Storage factor (p = 0.00). The mean values and standard deviation for interaction between the factors Treatment X Storage, were CG.I: 42.56 (± 7.60) A; EGCG.I: 39.6 (± 8.99) A; CLX.I: 39.37 (± 9.44) A; AT.I: 38.69 (± 8.65) A; CG.S: 31.85 (± 6.96) A; AT.S: 31.29 (± 4.89) AB; EGCG.S: 30.94 (± 9.91) AB; CLX.S: 18.68 (± 4.53) B. Two additional samples from each group were confectioned to descriptive analyses of microhardness knoop of dentin subjacent to the bonding interface and a qualitative interface evaluation with SEM (scanning electron microscope). It can be conclude that EGCG and AT solutions were able to maintain the bond strength stability after 12 months of storage and CLX solution adversely affect the bond strength values compared to other subgroups(AU)