Immunohaematological and rheological parameters in canine visceral leishmaniasis / Parâmetros reológicos e imunohematológicos na leishmaniose visceral canina

Abstract The aim of this study was to find correlations between haematological and rheological parameters in canine visceral leishmaniasis (CLV). Enrolled dogs with CVL (n=31) had a confirmed diagnosis using the rapid test Dual Path Platform (TR DPP®) kit and Polymerase Chain Reaction (PCR) assay. A control group (n=31) comprised healthy dogs with negative results for the TR DPP® kit and PCR assay. Haematological parameters and total protein, albumin, globulin, and antibody were assessed. The rheological properties of the blood samples were also determined. Erythrocytes, haematocrit and platelet values of dogs in the CVL group were found to be lower than those of the control group. The total protein, globulin and IgG concentrations were higher in serum samples from the CVL group. The blood flow curve demonstrated increased shear rates in the CVL group. The viscosity of the blood from the infected animals was lower than in the healthy dogs. A positive correlation was found between erythrocyte numbers and blood viscosity. These data suggest that changes in the flow curve and viscosity of blood as well as the erythrocyte values may be a viable low-cost alternative for the monitoring of dogs with visceral leishmaniasis.

Resumo O objetivo deste estudo foi encontrar correlações entre parâmetros hematológicos e reológicos na leishmaniose visceral canina (LVC). Cães com LVC (n=31) tiveram diagnóstico confirmado de LVC pelo teste rápido imunocromatográfico (TR DPP®) e o ensaio de Reação em Cadeia da Polimerase (PCR). Cães saudáveis ​​ negativos para o TR DPP® e PCR foram alocados no grupo controle (n=31). Foram avaliados parâmetros hematológicos, proteínas totais, albumina, globulina, anticorpos e as propriedades reológicas do sangue. Os valores de eritrócitos, hematócrito e plaquetas de cães do grupo LVC foram menores do que os encontrados no grupo controle. As concentrações de proteína total, globulina e imunoglobulina G (IgG) foram maiores em amostras de soro do grupo LVC. A curva do fluxo sanguíneo apresentou maior taxa de cisalhamento no grupo LVC. A viscosidade sanguínea dos animais infectados foi menor do que a viscosidade do sangue dos animais do grupo controle. Uma correlação positiva foi encontrada entre o número de eritrócitos e a viscosidade do sangue. Esses dados sugerem que as mudanças na curva de fluxo e viscosidade do sangue, bem como os valores de eritrócitos, podem ser uma alternativa viável e de baixo custo para o monitoramento de cães com leishmaniose visceral.

Avaliação de IFN-γ e IL-10 em cães naturalmente infectados com Leishmania (Leishmania) chagasi com e sem manifestações clínicas / Evaluation of INF-γ and IL-10 in dogs naturally infected by Leishmania (Leishmania) chagasi with and without clinic events

As leishmanioses têm como agentes etiológicos parasitas intracelulares obrigatórios pertencentes ao gênero Leishmania capazes de infectar diferentes espécies de mamíferos e nestes se reproduzirem dentro do sistema fagocítico mononuclear. Os cães domésticos são os principais responsáveis pela manutenção da cadeia epidemiológica da doença, podendo apresentar uma grande variedade de perfis clínicos, desde aparentemente sadios a severamente acometidos. Avaliou-se a expressão das citocinas de cães naturalmente infectados com Leishmania (Leishmania) chagasi. Foram coletadas 50 amostras, sendo 20 de animais positivos e sintomáticos para Leishmaniose Visceral Canina (LVC), 20 de animais positivos e assintomáticos e 10 de animais sabidamente negativos para a LVC. As amostras foram analisadas pelo teste imunocromatográfico rápido Dual Path Platform (DPP/Biomanguinhos®) e pelo ELISA (EIE/Biomanguinhos®) indireto para detecção de anticorpos anti-Leishmania. Após as confirmações dos testes, foi realizado o ELISA de captura (R & D Systems) para quantificação das citocinas IL-10 e IFN-γ. Houve diferença estatística entre os grupos observando um aumento nos níveis de IFN-γ nos animais assintomáticos e um aumento de IL-10 nos sintomáticos.(AU)

Leishmaniasis has as obligatory intracellular parasitic etiological agents belonging to the genus Leishmania capable of infecting different species of mammals and reproducing them within the mononuclear phagocytic system. Domestic dogs are the main responsible for maintaining the epidemiological chain of the disease, presenting a wide variety of clinical profiles, from apparently healthy to severely affected. The expression of the cytokines from dogs naturally infected with Leishmania (Leishmania) chagasi was evaluated. Blood samples were collected from 50 animals, 20 from positive and symptomatic dogs for Leishmaniasis Canine (CVL), 20 from positive asymptomatic animals and 10 negative. Samples were analyzed by immunochromatographic test Dual Path Platform (DPP/Biomanguinhos®) and by indirect ELISA (EIE/Biomanguinhos®) for detection of anti-Leishmania antibodies. There was statistical difference between the groups observing an increase in IFN-γ levels in asymptomatic animals and an IL-10 increase in symptomatic.(AU)

Quantificação da IL-10 e do INF-γ em cães com ou sem sinais clínicos de infecção com Leishmania (Leishmania) chagasi / Quantification of IL-10 and IFN-γ in dogs with or without clinical signs of Leishmania (Leishmania) chagasi infection

As leishmanioses compreendem um complexo de doenças causadas por parasitos intracelulares obrigatórios pertencentes ao gênero Leishmania. Consideradas como importante problema de saúde pública, sendo os cães domésticos os principais responsáveis pela manutenção da cadeia epidemiológica da doença, estima-se que mais da metade dos cães infectados não manifestam sinais clínicos da enfermidade. Avaliou-se o perfil de IL-10 e INF- γ de cães naturalmente infectados com Leishmania (Leishmania) chagasi no município de São Luís-MA. Foram coletadas 50 amostras, sendo 20 de animais positivos e sintomáticos para Leishmaniose Visceral Canina (LVC), 20 de animais positivos e assintomáticos e 10 de animais sabidamente negativos para a LVC. As amostras foram analisadas pelo teste imunocromatográfico rápido Dual Path Platform (DPP/Biomanguinhos®) e pelo ELISA (EIE/Biomanguinhos®) indireto para detecção de anticorpos anti-Leishmania. Após as confirmações dos testes, foi realizado o ELISA de captura para quantificação das citocinas IL-10 e INF-γ através do kit Milliplex MAP. Houve diferença estatística entre os grupos, observando um aumento de IL-10 em soros de cães sintomáticos para LVC, comparado com o grupo de animais assintomáticos, sugerindo que animais com essa expressão de IL-10 podem estar associados à susceptibilidade a doença. Assim como o aumento dos níveis de INF-γ observados em cães assintomáticos, comparado com o grupo de cães sintomáticos, poderiam estar relacionados à cronicidade da doença.(AU)

Leishmaniasis comprise a complex of diseases caused by intracellular mandatory parasites belonging to the genus Leishmania. Considered as an important public health problem, and domestic dogs are primarily responsible for maintaining the epidemiological chain of the disease, it is estimated that more than the half of the dogs infected do not show clinical signs of the disease. The profile of IL-10 and IFN-γ dogs naturally infected with Leishmania (Leishmania) chagasi in São Luís/MA was evaluated. Blood samples were collected from 50 animals, 20 from positive and symptomatic dogs for leishmaniasis canine (CVL), 20 from positive asymptomatic animals and 10 negative. Samples were analyzed by immunochromatographic test Dual Path Platform (DPP/Biomanguinhos®) and by indirect ELISA (EIE/Biomanguinhos®) for detection of anti-Leishmania antibodies. After the confirmation of the tests, the capture ELISA was performed for quantification of IL-10 and IFN-γ cytokines through the Milliplex MAP kit. There was a statistical difference between the groups, observing an increase of IL-10 in blood of symptomatic dogs for CVL, compared to the group of asymptomatic animals, suggesting that animals with this expression of IL-10 may be associated with susceptibility to disease. As well as the increase in IFN-γ levels in asymptomatic dogs, compared to the symptomatic dog group, could be related to chronicity of the disease.(AU)

Phenolic Composition and Leishmanicidal Activity of Red Propolis and Dalbergia ecastaphyllum (L.) Taub (Fabaceae) Extracts from Sergipe, Brazil

ABSTRACT Leishmaniasis is a parasitic disease caused by protozoa of the Leishmania genus. It may manifest in visceral and tegumentary forms, and pentavalent antimonials are the first choice drugs used for the treatment. Frequently these drugs show low efficiency and high toxicity to mammalian host. The present study describes the chemical profile and the in vitro leishmanicidal effects of red propolis and Dalbergia ecastaphyllum extracts from Sergipe, Brazil, in Leishmania chagasi and Leishmania amazonensis promastigotes. The phenolic composition of the extracts was evaluated by direct infusion electrospray ionization mass spectrometry (ESI-MS) fingerprinting. The leishmanicidal effect was evaluated by the Resazurin colorimetric method. Similar composition profiles have been found for D. ecastaphyllum and propolis samples. The isoflavones formononetin, biochanin A, daidzein and pinocembrin were identified in both extracts. Propolis extract showed leishmanicidal activity in both L. chagasi and L. amazonensis, with IC50 values of 21.54 and 9.73 µg/mL, respectively. The D. ecastaphyllum extract presented activity only in L. amazonensis, with IC50 of 53.42 µg/mL. These results suggest that red propolis extract from Sergipe has the leguminosae D. ecastaphyllum as botanical origin, and that it presents potential leishmanicidal activity, which may be associated with the presence of the phenolic compounds found in its composition.

Leishmaniose visceral canina: comparação de métodos sorológicos em cães de área indene do Rio Grande do Sul no Brasil / Canine visceral leishmaniasis: Comparison of serological methods in dogs of unsurveyed area of Rio Grande do Sul in Brazil

Neste estudo foi realizado um levantamento da presença de cães soropositivos em canis de 12municípios do Rio Grande do Sul, comparando-se métodos e protocolos de diagnóstico. Comisso, pode-se detectar precocemente uma possível disseminação da doença e, consequentemente,incentivar campanhas de controle e prevenção e evitar futuros surtos. Este estudo foi realizadoem uma área do RS sem diagnóstico de leishmaniose visceral canina (LVC), sendo avaliado umtotal de 165 cães. A pesquisa sorológica foi realizada por meio das técnicas de imunofluorescênciaindireta (IFI), ensaio imunoenzimático (ELISA) e Dual Plate Plataform (DPP). Constataram-setaxas de 33,9 por cento (56/165) na IFI, 6,7 por cento (11/165) no DPP, 3,0 por cento (5/165) na IFI e DPP e 6,1 por cento (10/165)no ELISA. Dentre os resultados confirmados no ELISA, cinco (5/10) foram reagentes na IFI, dosquais, desconsiderando-se os dois que foram soropositivos apenas no ELISA e IFI, resultaram trêscães (3/10) soropositivos no DPP e ELISA, conforme o protocolo atual preconizado pelo Ministérioda Saúde. Também foi feita a comparação entre os testes de diagnóstico para verificar acurácia evalor kappa. Ao considerar somente resultados positivos no DPP e IFI, a acurácia aumentou para94,6 por cento, com um valor Kappa=0,375, ou seja, com uma concordância considerável. Conclui-se quea pesquisa em áreas do RS sem diagnóstico de LVC revelou a presença de cães sororreagentes emquatro municípios do estado: Cachoeira do Sul (2), São Francisco de Assis (1), Dom Pedrito (1) eRio Grande (1)...

This study surveyed the presence of seropositive dogs in kennels of twelve municipalities of RioGrande do Sul (RS), comparing methods and diagnostic protocols. Using this approach we coulddetect a possible spread of the disease, consequently encouraging prevention and control campaigns,and preventing future outbreaks. This study was conducted in an undiagnosed area for caninevisceral leishmaniasis (CVL) of RS and a total of 165 dogs were evaluated. Serological analysiswas performed using the indirect immunofluorescence (IIF), enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA) and Dual Plate Platform (DPP). A rate of 33.9 percent (56/165) in the IIF, 6.7 percent (11/165) inDPP, 3.0 percent (5/165) in IIF and DPP and 6.1 percent (10/165) in ELISA was observed. Among the resultsconfirmed by ELISA, five (5/10) were positive by IIF, of which, disregarding two of these five thatwere seropositive only by ELISA and IIF, three dogs (3/10) were seropositive by DPP and ELISA,according to the current protocol recommended by the Ministry of Health. Comparisons betweenthe diagnostic tests to verify accuracy and kappa value were also made. When considering onlythe results positive in DPP and IIF, the accuracy increased to 94.6 percent, with a kappa value of 0.375,therefore, with considerable agreement. It is concluded that the research in undiagnosed areas of RSrevealed the presence of seropositive dogs in four municipalities of the State: Cachoeira do Sul (2),São Francisco de Assis (1) Dom Pedrito (1) and Rio Grande (1)...

Molecular detection of Leishmania spp. in road-killed wild mammals in the Central Western area of the State of São Paulo, Brazil

Road-killed wild animals have been classified as sentinels for detecting such zoonotic pathogens asLeishmania spp., offering new opportunities for epidemiological studies of this infection. This study aimed to evaluate the presence of Leishmania spp. and Leishmania chagasi DNA by PCR in tissue samples (lung, liver, spleen, kidney, heart, mesenteric lymph node and adrenal gland) from 70 road-killed wild animals.

Molecular detection of Leishmania spp. in road-killed wild mammals in the Central Western area of the State of São Paulo, Brazil

Road-killed wild animals have been classified as sentinels for detecting such zoonotic pathogens asLeishmania spp., offering new opportunities for epidemiological studies of this infection. This study aimed to evaluate the presence of Leishmania spp. and Leishmania chagasi DNA by PCR in tissue samples (lung, liver, spleen, kidney, heart, mesenteric lymph node and adrenal gland) from 70 road-killed wild animals.

Avaliação citopatológica da medula óssea e perfil hematológico de cães naturalmente infectados por Leishmania (Leishmania) chagasi / Cytopathologycal evaluation of bone marrow and hematological profile of dogs naturally infected by Leishmania (Leishmania) chagasi

Foram avaliados quarenta e um cães adultos, machos e fêmeas, sem raça definida, provenientes de inquéritos sorológicos para leishmaniose visceral canina realizados pela Secretaria Municipal de Saúde do Rio de Janeiro. O objetivo deste estudo foi descrever as alterações citopatológicas da medula óssea e o perfil hematológico de cães naturalmente infectados por Leishmania (Leishmania) chagasi. A avaliação citológica da medula óssea incluiu a análise qualitativa e quantitativa. O perfil hematológico foi avaliado através de contador automático de células e esfregaços sanguíneos. Adicionalmente, foram realizadas a imunofenotipagem de linfócitos medulares, pesquisa de formas amastigotas na medula óssea e avaliação dos estoques de ferro medular. De acordo com os resultados obtidos, cães naturalmente infectados por L. (L.) chagasi apresentaram hiperplasia das séries mieloide, linfoide e monocítica, onde frequentemente foram observadas formas amastigotas, anemia normocítica normocrômica e aumento dos estoques de ferro medularNão foram observadas diferenças estatisticamente significativas entre as populações de linfócitos T e linfócitos B medulares. Em conclusão, os cães naturalmente infectados por L. (L.) chagasi apresentaram alterações na medula óssea e no perfil hematológico independentemente da manifestação clínica apresentada pelo animal. Hiperplasia das linhagens hematopoiéticas, anemia, eritrofagocitose e aumento dos estoques de ferro medular possibilitaram uma melhor compreensão dos mecanismos fisiopatológicos envolvidos na doença e a pesquisa de formas amastigotas na medula óssea contribuiu como uma importante ferramenta diagnóstica da leishmaniose visceral canina...

Fourty one adult mongrel dogs from the VL serological surveys done by Secretaria Municipalde Saúde of Rio de Janeiro were studied. The purpose of this study was to evaluate theoccurrence of cytopathologycal changes of bone marrow and hematological changes in dogsnaturally infected by Leishmania (Leishmania) chagasi. Evaluation of bone marrow includedthe qualitative and quantitative analysis and complete blood count was performed with anautomated cell counter and blood smears. Additionally, immunophenotyping of lymphocytes,search of amastigotes and iron stores of bone marrow were performed. According to theresults, dogs naturally infected by L. (L.) chagasi showed hiperplasia of myeloid, lymphoideand monocytic series, that often showed amastigotes form, normocytic normochromic anemiaand increase iron stores of bone marrow. No significant difference was observed among the Tlymphocytes and B lymphocytes populations of bone marrow. In conclusion, dogs naturallyinfected by L. (L.) chagasi showed changes in bone marrow and blood profile regardless ofthe clinical manifestations. Hyperplasia of hematopoietic lineages, anemia,erythrophagocytosis and increase iron stores allowed a better understanding of thephysiopathological mechanisms involved in disease and the search of amastigotes in bonemarrow contributed as an important diagnostic tool of canine visceral leishmaniasis...

Visceral leishmaniasis in Brazil / Leishmaniose visceral no Brasil

Visceral leishmaniasis (VL) is among the most important vector-borne diseases that occur in Brazil, mainly due to its zoonotic nature. It is currently present in almost all Brazilian territory, and its control is a challenge both for veterinarians and for public health officials. The etiologic agent is Leishmania infantum (syn chagasi), and the main vector in Brazil is Lutzomyia longipalpis. Of all animals identified as reservoirs of VL, the dog is considered the most important domestic reservoir. Although the disease has already been identified in cats, the epidemiological role of this animal species is still unclear. This article presents a brief review of the epidemiological situation of the disease, its mode of transmission, clinical features in dogs and cats as well as possible risk factors associated with the occurrence of the disease in Brazil.

A leishmaniose visceral (LV) está entre as mais importantes doenças transmitidas por vetores que ocorrem no Brasil, principalmente devido ao seu caráter zoonótico. Atualmente, está presente em quase todo o território brasileiro, e seu controle é um desafio tanto para médicos veterinários como para agentes de saúde pública. O agente etiológico da doença é a Leishmania infantum (syn chagasi), e o principal vetor no Brasil é a Lutzomyia longipalpis. De todos os animais identificados como reservatórios da LV, o cão é considerado o reservatório doméstico mais importante. Apesar da doença já ter sido identificada em gatos, o papel epidemiológico desta espécie animal ainda é incerto. O presente artigo apresenta uma breve revisão sobre a situação epidemiológica da doença, a sua forma de transmissão, os aspectos clínicos nos cães e gatos, bem como possíveis fatores de risco associados à ocorrência da doença no Brasil.

Monitoramento sorológico de novos casos de leishmaniose visceral canina e avaliação da fauna flebotomínica na Ilha da Marambaia, município de Mangaratiba, RJ / Serological monitoring of new cases of canine visceral leishmaniasis and evaluation of sand flies in Marambaia Island, the city of Mangaratiba, RJ

A leishmaniose visceral americana (LVA) no Brasil é causada pelo protozoário Leishmania (Leishmania) chagasi. O principal vetor do parasito é o flebotomíneo Lutzomyia longipalpis, e o reservatório nos ambientes domiciliar e peridomiciliar é o cão, e ambos contribuem para a manutenção do ciclo da doença. Para o diagnóstico da leishmaniose deve ser considerada a associação entre dados clínicos, laboratoriais e epidemiológicos. A leishmaniose visceral canina (LVC) apresenta-se clinicamente de maneiras variadas. O diagnóstico laboratorial inclui métodos parasitológicos com identificação microscópica direta e isolamento do parasita, métodos moleculares, e testes sorológicos como a imunofluorescência indireta (IFI), o ensaio imunoenzimático (ELISA) e o teste imunocromatográfico rápido (DPP). Para o diagnóstico laboratorial da LVC, o Ministério da Saúde preconiza a técnica de ELISA para triagem e a IFI para a confirmação dos casos. O presente estudo teve como objetivo reavaliar a prevalência da LVC em 2012 e identificar a fauna flebotomínica, na Ilha da Marambaia, município de Mangaratiba, Estado do Rio de Janeiro, Brasil. Para a avaliação sorológica foram empregadas as técnicas IFI, ELISA e DPP. Para levantamento da fauna flebotomínica foram realizadas capturas por armadilhas tipo HP. O censo canino totalizou 116 cães, sendo identificados 17 cães positivos, uma prevalência de 14,65 por cento.

Um total de 2.524 espécimes foram capturados no período de abril a novembro de 2012. Foram encontradas nove espécies de flebotomíneos: Lutzomyia longipalpis, Nyssomyia intermédia, Migoneimyia migonei, Pintomyia fischeri, Evandromyia edwardsi, Micropygomyia capixaba, Pintomyia bianchigalatiae, Micropygomyia schreiberi e Bruptomyia sp.. A confirmação de 17 (14,65 por cento) cães soropositivos para LVC na Ilha da Marambaia no ano 2012, ao compararmos com a prevalência encontrada em 2009 que foi de 15 por cento, demonstra a manutenção da prevalência da infecção na região, mesmo com a remoção de grande parte dos cães sororreatores diagnosticados em 2009. Na avaliação da fauna flebotomínica foi encontrada uma baixa densidade de L. longipalpis na região, o que pode explicar o não encontro de casos humanos de LV. Os resultados nos mostraram que a prevalência da LVC não foi alterada.

Essential oil from leaves of Lantana camara: a potential source of medicine against leishmaniasis

Leishmaniasis is an infection of viscera or tegument caused by protozoa Leishmania sp. The extensive period required for the treatment, which involves the use of toxic medicines, leads patients to drop treatment increasing the development of resistant forms of Leishmania sp. Lantana camara L., Verbenaceae, is a tropical plant native from America. Folk uses have been described for treatment of tumors, tetanus, rheumatism and malaria. This study evaluates the leishmanicidal activity of the essential oil of leaves from L. camara on promastigote forms of Leishmania chagasi and L. amazonensis and its toxic effects on Artemia salina (brine shrimp test), macrophage cultures and BALB/c mice. The chemical composition was evaluated using the gas chromatography coupled with mass spectrometer (GC-MS). Thirty substances, mostly mono and sesquiterpenes were identified. The most representative constituents were: germacrene D (24.90%), farnesene derivatives (22%) and (E)-cariophylene (14.31%). Bioassays revealed a significant leishmanicidal activity of essential oil against L. amazonensis (IC50 0.25 µg/ mL) and a potential toxic effect on Brine shrimp (LC50 10 µg/mL) and macrophage assays (CC50 4 µg/mL), while there was no toxic manifestation on mice. The data show the relevant potential of L. camara as a source of medicine for leishmaniasis treatment.

In vitro efficacy of Coriandrum sativum, Lippia sidoides and Copaifera reticulata against Leishmania chagasi / Eficácia in vitro de Coriandrum sativum, Lippia sidoides e Copaifera reticulata sobre Leishmania chagasi

The increased incidence of visceral leishmaniasis (VL) in Brazil is due to a lack of effective disease control measures. In addition to that, no effective treatment exists for canine VL in response to synthetic drugs. Thus, the objective of this study was to evaluate the effect of the essential oils of Coriandrum sativum and Lippia sidoides, and oleoresin from Copaifera reticulata, on Leishmania chagasi promastigotes and amastigotes. We also examined the toxicity of these treatments on the murine monocyte cell line RAW 264.7. To determine the IC50 a MTT test (3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide) was performed on promastigotes, and an in situ ELISA assay was conducted on amastigotes. Here, we demonstrate that oleoresin from C. reticulata was effective against both promastigotes (IC50 of 7.88 µg.mL-1) and amastigotes (IC50 of 0.52 µg.mL-1), and neither of the two treatments differed significantly (p > 0.05) from pentamidine (IC50 of 2.149 µg.mL-1) and amphotericin B (IC50 of 9.754 µg.mL-1). Of the three plant oils tested, only oleoresin showed no toxicity toward monocyte, with 78.45% viability after treatment. Inhibition of promastigote and amastigote growth and the lack of cytotoxicity by C. reticulata demonstrate that oleoresin may be a viable option for analyzing the in vivo therapeutic effects of leishmanicidal plants.

O aumento na incidência da Leishmaníase Visceral (LV) no Brasil deve-se à ineficácia das medidas de controle da doença. Além disso, não há tratamento efetivo para LV canina com drogas sintéticas. Assim, o objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito dos óleos essenciais de Coriandrum sativum e de Lippia sidoides e do óleo-resina de Copaiferareticulata sobre promastigotas e amastigotas de Leishmania chagasi e analisar o grau de toxicidade sobre células monocíticas murinas RAW 264.7. Para determinar a CI50 sobre promastigotas foi usado teste MTT (brometo de 3-[4,5-dimetil-tiazol-2-il]-2,5-difeniltetrazólio) e sobre amastigotas foi realizado imunoensaio in situ pela técnica de ELISA. Os resultados obtidos comprovaram que o óleo-resina de C. reticulata foi o mais eficaz contra as formas promastigotas (CI50 de 7,88 µg.mL-1) e amastigotas (CI50 de 0,52 µg.mL-1) e em nenhum dos dois testes diferiu do controle pentamidina que obteve CI50 de 2,149 µg.mL-1, no teste sobre promastigotas, e anfotericina B que obteve CI50 de 9,754 µg.mL-1, nos testes com amastigotas (p > 0.05). Quanto à citotoxicidade apenas o óleo-resina não apresentou toxicidade com 78,45% de monócitos viáveis. Os resultados obtidos sobre promastigotas e amastigotas e a ausência de citotoxicidade do óleo-resina de C. reticulata evidenciam que este óleo-resina pode ser viável para a análise de seus efeitos terapêuticos em testes in vivo.

Leishmanicidal activity of carvacrol-rich essential oil from Lippia sidoides Cham

Leishamaniasis is a disease that affects more than 2 million people worldwide, whose causative agent is Leishmania spp. The current therapy for leishmaniasis is far from satisfactory. All available drugs, including pentavalent antimony, require parenteral administration and are potentially toxic. Moreover, an increase in clinical resistance to these drugs has been reported. In this scenario, plant essential oils used traditionally in folk medicine are emerging as alternative sources for chemotherapeutic compounds. In this study, in vitro leishmanicidal effects of a thymol- and a carvacrol-rich essential oil from leaves of Lippia sidoides Cham. were investigated. The essential oils were extracted and their constituents were characterized by gas chromatography coupled to mass spectrometry (GC/MS). Both essential oils showed significant activity against promastigote forms of Leishmania chagasi. However, we found that carvacrol-rich essential oil was more effective, with IC50/72 h of 54.8 μg/mL compared to 74.1 μg/mL for thymol-rich oil. Carvacrol also showed lower IC50 than thymol. Our data suggest that L. sidoides essential oils are indeed promising sources of leishmanicidal compounds.

Avaliação clínica e laboratorial de cães domésticos em Itaipuaçu – Maricá, Estado do Rio de Janeiro, área de ocorrência de casos de leishmaniose visceral canina / Clinical and laboratory evaluation of domestic dogs in Itaipuaçu - Marica, Rio de Janeiro state, area of occurrence of cases of canine visceral leishmaniasis

A leishmaniose visceral americana é uma zoonose que afeta os seres humanos e outras espécies de animais domésticos e silvestres. É causada pelo protozoário Leishmania (L.) chagasi e sua transmissão ocorre através de picadas do inseto Lutzomyia longipalpis. No Brasil, esta doença continua sendo um desafio importante em questões de Saúde Pública, uma vez que está em processo de expansão em várias regiões, ocorrendo casos humanos e caninos tanto na área rural quanto em áreas urbanas. A partir de um segundo caso de leishmaniose visceral canino (LVC), notificado no bairro de São Bento da Lagoa, Itaipuaçu, município de Maricá, Rio de Janeiro, foi realizado um inquérito epidemiológico, através de busca ativa, em 145 cães. Os cães foram submetidos ao exame clínico e sedados para coleta de sangue, de fragmentos cutâneos e punção de medula óssea. Para a realização dos exames sorológicos, foram utilizadas as técnicas de imunofluorescência indireta, ELISA e o teste imunocromatográfico rápido...

American visceral leishmaniasis is a zoonotic disease that affects humans and other species ofdomestic and wild animals. It is caused by the protozoan Leishmania (L.) chagasi and itstransmission occurs through bites of vector sandfly Lutzomyia longipalpis. In Brazil, thisdisease remains as a major challenge in public health issues, as it is in expanding process inseveral regions, leading to the occurrence of human and canine cases, both in rural and urbanareas. After the occurrence of the second case of canine visceral leishmaniasis (CVL), whichwas notified in the District of São Bento da Lagoa, Itaipuaçu, Municipality of Marica, Rio de Janeiro, an epidemiological survey was carried out on 145 dogs through active search sampling. The dogs were submitted to clinical examination and sedation for collection ofblood and tissue samples and bone marrow aspiration. Serological analysis was performed byusing the following techniques: immunofluorescence, ELISA and immunochromatographic test...

Ocorrência de leishmania chagasi e outros tripanosomatídeos em câes de Cuiabá, Mato Grosso: Avaliação clinica e uso de diferentes métodos de diagnóstico laboratorial / Occurrence of Leishmania chagasi in dogs and other trypanosomatids in Cuiabá, Mato Grosso: Clinical evaluation and use of different methods of laboratory diagnosis

Na cidade de Cuiabá, o conhecimento de aspectos da leishmaniose visceral canina (LVC) é ainda muito escasso, apesar de casos humanos serem relatados nessa cidade. Este estudo objetivou avaliar clinicamente e por diferentes métodos laboratoriais cães domésticos domiciliados em áreas urbana e rural, no município de Cuiabá, Mato Grosso. Os animais foram selecionados por meio de busca ativa em cinco bairros e por demanda espontânea durante atendimento no hospital veterinário da UFMT. Os cães foram avaliados por ferramentas sorológicas, parasitológicas e moleculares, empregando diferentes amostras biológicas. Dos 430 cães obtidos por busca ativa, 95 (22,1 por cento) foram reatores pela imunofluorescência indireta. Esse dado foi considerado para análise dos fatores de risco e, tanto aspectos relacionados ao hábito dos animais (livre acesso à rua e função de guarda), assim como do ambiente (rural e presença de plantações) foram considerados como fatores de risco importantes para a aquisição da infecção canina. A cultura parasitológica, utilizando amostras dos 430 cães oriundos do inquérito epidemiológico e 52 do atendimento no HOVET-UFMT, permitiu o isolamento de L. chagasi em 54 (11,2 por cento) cães...

A pele intacta foi a melhor amostra biológica de isolamento do parasito em cães sintomáticos, porém nos cães assintomáticos, a melhor amostra para isolamento foi a medula óssea. Por PCR, utilizando apenas os cães da busca ativa, DNA de L. chagasi foi detectada em diferentes amostras biológicas, diagnosticando 63 (14,6 por cento) dos cães. O aspirado de linfonodo foi a melhor amostra para diagnosticar leishmaniose, pela PCR, independente do status clínico dos animais. O protozoário Trypanosoma caninum foi isolado exclusivamente de pele integra em 14 cães, demonstrando a presença desta espécie pela primeira vez em Cuiabá. Nossos resultados sugerem que a infecção por esse parasito, possa ser transitória e curse sem sinais clínicos específicos. Além de T. caninum, a infecção por T. cruzi em um cão foi também descrita na cidade de Cuiabá. Os resultados apresentados neste estudo contribuem para o conhecimento de aspectos da LVC em Cuiabá. Esta cidade possui características propícias para a instalação da leishmaniose visceral, sendo necessária inclusão de ações educacionais e sanitárias. Com relação ao diagnóstico canino, enfatizamos que a utilização de diferentes amostras clínicas, associadas a diferentes técnicas laboratoriais, proporcionam um diagnóstico acurado da LVC e auxiliam o diagnóstico diferencial com outros agentes que estejam circulando nesses animais. A infecção por L. chagasi, T. caninum e T. cruzi diagnosticados em cães domiciliados em Cuiabá demonstram a sobreposição de tais agentes, constituindo dados importantes para a vigilância epidemiológica nessa região...

Risk factors for Leishmania chagasi infection in an endemic area in Raposa, State of Maranhão, Brazil / Fatores associados à infecção por Leishmania chagasi em uma área endêmica em Raposa, Estado do Maranhão, Brasil

INTRODUCTION: Infection with Leishmania chagasi is the most common clinical presentation for visceral leishmaniaisis in endemic areas. The municipality of Raposa is an endemic area in State of Maranhão, Brazil, and have had registration cases of visceral leishmaniasis disease. For this reason, a cross- sectional study was conducted to evaluate the risk factors for infection with L. chagasi detected by Montenegro skin test. METHODS: The sample comprised 96 percent of the inhabitants of the villages of Maresia, Pantoja, and Marisol located in the municipality of Raposa, corresponding to 1,359 subjects. Data were collected using a questionnaire. Univariate and multivariate logistic regression models were applied to evaluate the association between the variables studied and infection of L. chagasi. RESULTS: The variables associated with infection upon nonadjusted analysis were a straw roof, mud walls, floors of beaten earth, presence of sand flies inside or outside of the dwelling, and bathing outdoors. Adjusted analysis showed that the presence of sand flies inside/outside the dwelling was a risk factor, and age younger than 10 years was a protective factor against asymptomatic infection. CONCLUSIONS: The results highlight the extent to which precarious living conditions of the population strengthen the epidemiological chain of visceral leishmaniasis.

INTRODUÇÃO: A infecção por Leishmania chagasi é a apresentação clínica mais comum de laishmaniose visceral em áreas endêmicas. O município de Raposa é área endêmica no Estado do Maranhão, tendo registrado casos da doença. Por isso, realizou-se um estudo transversal, com o objetivo de estudar os fatores de risco para infecção por L. chagasi detectada pelo teste intradérmico de Montenegro. MÉTODOS: O estudo envolveu 96 por cento dos moradores das localidades de Maresia, Pantoja e Marisol do município da Raposa, totalizando 1.359 indivíduos. O levantamento dos dados foi realizado utilizando um questionário. Para verificar a associação entre as variáveis estudadas e a infecção por L. chagasi, foram utilizados os modelos de regressão logística uni e multivariada. RESULTADOS: Na análise não ajustada, as variáveis associadas à infecção foram: cobertura da casa de palha, paredes de taipa, piso de chão batido, a presença de flebotomíneos dentro ou fora do domicílio e o local do banho fora de casa. Na análise ajustada, a presença de flebotomíneos dentro ou fora do domicílio foi considerada fator de risco e a idade menor que 10 anos revelou-se como fator de proteção para a infecção assintomática. CONCLUSÕES: Evidenciou-se também, o quanto a precariedade das condições de vida da população contribui para o fortalecimento da cadeia epidemiológica da doença.

Evaluation of Leishmania (Leishmania) chagasi strains isolated from dogs originating from two visceral leishmaniasis-endemic areas in Brazil using multilocus enzyme electrophoresis / Avaliação de amostras de Leishmania (Leishmania) chagasi isoladas de cães oriundos de duas áreas endêmicas de leishmaniose visceral no Brasil através da eletroforese de isoenzimas

INTRODUCTION: Domestic dogs are the most important reservoir in the peridomestic transmission cycle of Leishmania (Leishmania) chagasi. The genetic variability of subpopulations of this parasite circulating in dogs has not been thoroughly analyzed in Brazil, even though this knowledge has important implications in the clinical-epidemiological context. METHODS: The objective of this study was to evaluate and compare the phenotypic variability of 153 L. chagasi strains isolated from dogs originating from the municipalities of Rio de Janeiro (n = 57) and Belo Horizonte (n = 96), where the disease is endemic. Strains isolated only from intact skin were selected and analyzed by multilocus enzyme electrophoresis using nine enzyme systems (6PG, GPI, NH1 and NH2, G6P, PGM, MDH, ME, and IDHNADP). RESULTS: The electrophoretic profile was identical for all isolates analyzed and was the same as that of the L. chagasi reference strain (MHOM/BR/74/PP75). Phenetic analysis showed a similarity index of one for all strains, with the isolates sharing 100 percent of the characteristics analyzed. CONCLUSIONS: The results demonstrate that the L. chagasi populations circulating in dogs from Rio de Janeiro and Belo Horizonte belong to a single zymodeme.

INTRODUÇÃO: Cães domésticos são considerados os reservatórios mais importantes no ciclo peridoméstico de transmissão de Leishmania (Leishmania) chagasi. No entanto, a variabilidade genética de sub-populações que circulam neste hospedeiro é ainda pouco explorada no Brasil, sendo tal conhecimento de grande importância no contexto clínico-epidemiológico. MÉTODOS: O objetivo deste estudo foi avaliar e comparar a variabilidade fenotípica de 153 amostras de L. chagasi isoladas de cães oriundos dos municípios do Rio de Janeiro (n = 57) e Belo Horizonte (n = 96), onde a doença é endêmica. Foram selecionadas somente amostras isoladas de pele íntegra e analisadas por eletroforese de isoenzimas (MLEE) empregando nove sistemas enzimáticos (6PG, GPI, NH1 e NH2, G6P, PGM, MDH, ME, IDHNADP). RESULTADOS: Todas as amostras analisadas apresentaram perfil eletroforético idêntico entre si e com a amostra de L. chagasi utilizada como referência neste estudo (MHOM/BR/74/PP75). A análise fenética demonstrou índice de similaridade igual a um para todas as amostras, revelando um compartilhamento de 100 por cento dos caracteres avaliados. CONCLUSÕES: A partir desses resultados, podemos inferir que as populações de L. chagasi que estão circulando nos cães do Rio de Janeiro e Belo Horizonte podem ser agrupadas em um único zimodema.

Analysis of the expression of toll-like receptors 2 and 4 and cytokine production during experimental Leishmania chagasi infection

Toll-like receptors (TLRs) recognise pathogen-derived molecules and influence immunity to control parasite infections. This study aimed to evaluate the mRNA expression of TLRs 2 and 4, the expression and production of the cytokines interleukin (IL)-12, interferon (IFN)-γ, tumor necrosis factor (TNF)-α, IL-17, IL-10 and transforming growth factor (TGF)-β and the production of nitric oxide (NO) in the spleen of mice infected with Leishmania chagasi. It also aimed to evaluate any correlations between mRNA expression TLR2 and 4 and cytokines and NO production. Infection resulted in increased TLR2-4, IL-17, TNF-α and TGF-β mRNA expression during early infection, with decreased expression during late infection correlating with parasite load. IFN-γ and IL-12 mRNA expression decreased at the peak of parasitism. IL-10 mRNA expression increased throughout the entire time period analysed. Although TGF-β, TNF-α and IL-17 were highly produced during the initial phase of infection, IFN-γ and IL-12 exhibited high production during the final phase of infection. IL-10 and NO showed increased production throughout the evaluated time period. In the acute phase of infection, there was a positive correlation between TLR2-4, TNF-α, IL-17, NO, IL-10 and TGF-β expression and parasite load. During the chronic phase of infection, there was a positive correlation between TLR2-4, TNF-α, IL-17 and TGF-β expression and parasite load. Our data suggest that infection by L. chagasi resulted in modulation of TLRs 2 and 4 and cytokines.

Dynamics of immunosuppression in hamsters with experimental visceral leishmaniasis

Immunosuppression has been reported to occur during active visceral leishmaniasis and some factors such as the cytokine profile may be involved in this process. In the mouse model of cutaneous leishmaniasis using Leishmania (Leishmania) major, the Th1 response is related to protection while the Th2 response is related to disease progression. However, in hamsters, which are considered to be an excellent model for the study of visceral leishmaniasis, this dichotomy is not observed. Using outbred 45- to 60-day-old (140 to 150 g) male hamsters infected intraperitoneally with 2 x 10(7) L. (L.) chagasi amastigotes, we evaluated the immune response of spleen cells and the production of cytokines. We used 3 to 7 hamsters per group evaluated. We detected a preserved response to concanavalin A measured by index of proliferation during all periods of infection studied, while a proliferative response to Leishmania antigen was detected only at 48 and 72 h post-infection. Messenger RNA from cytokines type 1 (IL-2, TNF-α, IFN-γ) and type 2 (IL-4, IL-10 and TGF-β) detected by reverse transcriptase polymerase chain reaction and produced by spleen cells showed no qualitative difference between control non-infected hamsters and infected hamsters during any period of infection evaluated. Cytokines were measured by the DNA band intensity on agarose gel using the Image Lab 1D L340 software with no differences observed. In conclusion, the present results showed an antigen-dependent immunosuppression in hamsters with active visceral leishmaniasis that was not related to the cytokine profile.

Occurrence of anti-Neospora caninum and anti-Toxoplasma gondii antibodies in dogs with visceral leishmaniasis / Ocorrência de anticorpos anti-Neospora caninum e anti-Toxoplasma gondii em cães com leishmaniose visceral

Uninfected dogs and those naturally infected with Leishmania chagasi exhibiting different clinical forms of disease were evaluated for the presence of anti-Neospora caninum and anti-Toxoplasma gondii antibodies. Blood samples were collected from 110 mongrel dogs. Sera were tested using the indirect fluorescent antibody test (IFAT), and the animals with visceral leishmaniasis (VL) (n=60) were classified clinically. Out of the 110 sera investigated, 5 (4.5 percent) were positive for N. caninum (IFAT>50) and 36 (32.7 percent) for T. gondii (IFAT>16). Anti-L. chagasi antibody titers in asymptomatic dogs (n=10) were found to be significantly lower (P<0.05) than those in oligosymptomatic ones (n=22), which were in turn significantly lower (P<0.05) than those in symptomatic ones (n=28). No association between Leishmania and N. caninum infections was observed. Among dogs infected with L. chagasi, a tendency (P=0.053) towards an association between the infection with T. gondii and the appearance of VL symptoms was observed, suggesting that the clinical manifestation of VL in dogs may enhance their susceptibility to T. gondii. The possible influence of the immunosuppressive status of canine leishmaniasis in the different clinical forms of the disease is discussed.

A presença de anticorpos anti-Neospora caninum e anti-Toxoplasma gondii foi avaliada em cães não infectados e naturalmente infectados com Leishmania chagasi manifestando diferentes formas clínicas da enfermidade. Amostras de sangue foram coletadas de 110 cães sem raça definida. Os soros foram avaliados por meio da reação de imunofluorescência indireta (RIFI) e os animais com leishmaniose visceral (LV) (n=60) foram classificados clinicamente. Dos 110 soros analisados, 5 (4,5 por cento) foram reativos para N. caninum (RIFI>50) e 36 (32,7 por cento) para T. gondii (RIFI>16). Os títulos de anticorpos anti-L. chagasi em cães assintomáticos (n=10) foram significativamente (P<0,05) mais baixos que aqueles verificados em oligossintomáticos (n=22), que por sua vez foram significativamente menores (P<0,05) que em cães sintomáticos (n=28). Não foi observada associação entre infecções por Leishmania e N. caninum. Entre os cães infectados com L. chagasi, verificou-se uma tendência de associação (P=0.053) entre infecção com T. gondii e aparecimento de sinais clínicos da LV, o que sugere que a manifestação clínica da LV em cães pode aumentar sua susceptibilidade ao T. gondii. A provável influência do quadro de imunossupressão em diferentes formas clínicas da leishmaniose canina é abordada.