Information technology by mobile communication for the notification of canine visceral leishmaniasis

ABSTRACT: Visceral leishmaniasis is the most severe form of a human and animal disease complex entitled leishmaniasis, which is endemic to 70 countries. It is imperative to develop and offer technologies capable of increasing the resolution ability of control programs of this zoonosis. In the search for technological innovations in health, especially in environmental surveillance, the objective is to develop a mobile application (App) for smartphones in order to facilitate and systematize the notification of positive cases of canine visceral leishmaniasis (CVL) by veterinarians working in clinics for assisting the municipal health surveillance in the management of this zoonosis. Thus, we developed an App, C7 LVC - Canine Visceral Leishmaniasis Notification System, with formatting based on the CR Campeiro 7® software. The technology created enables the filling of important gaps in information systems, facilitating the transmission of data and the use of this data by public management bodies to take CVL prevention and control actions.

RESUMO: A leishmaniose visceral é a forma mais grave de um complexo de doenças humanas e animais, denominado leishmaniose, endêmica em 70 países. É imprescindível desenvolver e oferecer tecnologias capazes de aumentar a capacidade de resolução dos programas de controle desta zoonose. Na busca por inovações tecnológicas em saúde, principalmente na vigilância ambiental, o objetivo é desenvolver um aplicativo móvel (App) para smartphones a fim de facilitar e sistematizar a notificação de casos positivos de leishmaniose visceral canina (LVC) por médicos veterinários que atuam em clínicas auxiliando a vigilância sanitária municipal, na gestão desta zoonose. Para tanto, foi desenvolvido um App, C7 LVC - Sistema de Notificação da Leishmaniose Visceral Canina, com formatação baseada no software CR Campeiro 7®. A tecnologia criada possibilita o preenchimento de lacunas importantes nos sistemas de informação, facilitando a transmissão de dados e a utilização desses dados pelos órgãos da gestão pública para a tomada de ações de prevenção e controle da LVC.

Differentials in the epidemiological profile of canine visceral leishmaniasis in the semi-arid region of Paraíba, Brazil

ABSTRACT: The objective of this study was to estimate the prevalence of canine visceral leishmaniasis (CVL) and to identify the differences in associated factors to its occurrence in urban area and countrysides in the municipality of Santa Luzia located in the semi-arid region of Paraíba. In the years 2015 and 2016, 779 blood samples from dogs were collected. The prevalence was determined by three serological techniques, ELISA-S7® Kit, DPP® Rapid Test and EIE-LVC® Kit, considering positive the samples that reacted in at least two assays. Associated factors were determined by univariate and multivariate analyzes of the guardians responses to the epidemiological questionnaire. The prevalence of anti-Leishmania infantum antibodies in the studied municipality was 15.00% (117/779), being higher in the urban area (15.20%) than in the countryside (13.60%). The neighborhood with the highest prevalence was Frei Damião with 26.40% (33/125), being considered a hotspot (OR 1.245, p=0.007). Other associated factors were the semi-domiciliary breeding (OR 1.798, p=0.025), in the urban area, and hunting dog (OR 18.505, p=0.016), contact with cattle (OR 17.298, p=0.022) and environment where the dog is raised (OR 4.802, p=0.024) in the countryside. In the municipality of Santa Luzia, the prevalence of canine visceral leishmaniasis is high and the disease is widely distributed. Epidemiological differences between urban area and the countryside could be observed demonstrating the need for more adequate control measures for each locality and proving the urbanization process.

RESUMO: O objetivo desta pesquisa foi estimar a prevalência da leishmaniose visceral canina (LVC) e identificar as diferenças nos fatores relacionados à sua ocorrência nas zonas urbana e rural do município de Santa Luzia, localizado no semiárido paraibano. Nos anos de 2015 e 2016, coletaram-se 779 amostras de sangue de cães. A prevalência foi determinada através de três técnicas sorológicas, Kit ELISA-S7®, teste rápido DPP® e Kit EIE-LVC®, considerando positivas as amostras que reagiram em, pelo menos, dois ensaios. Os fatores relacionados foram determinados por meio das análises estatísticas uni e multivariada das respostas dos tutores ao questionário epidemiológico. A prevalência de anticorpos anti-Leishmania infantum encontrada no município estudado foi de 15,00% (117/779), sendo maior na zona urbana (15,20%) do que na rural (13,60%). O bairro que apresentou maior prevalência foi o Frei Damião com 26,40% (33/125), sendo considerado um hotspot (OR 1,245; p=0,007). Outros fatores relacionados encontrados foram a criação semidomiciliar (OR 1,798; p=0,025), na zorna urbana, e cão de caça (OR 18,505; p=0,016), contato com bovinos (OR 17,298; p=0,022) e ambiente onde o cão é criado (OR 4,802; p=0,024), na zona rural. Verifica-se a elevada prevalência da leishmaniose visceral canina e a sua ampla distribuição no município de Santa Luzia. Diferenças epidemiológicas entre as zonas urbana e rural puderam ser observadas, demonstrando a necessidade de medidas de controle mais adequadas para cada localidade e comprovando o processo de urbanização.

Detection of Leishmania infantum amastigotes in neutrophil from peripheral blood in a naturally infected dog / Detecção de formas amastigotas de Leishmania infantum em neutrófilos do sangue periférico de cão naturalmente infectado

Abstract Canine visceral leishmaniasis (CVL) is a zoonotic disease of high lethality caused by Leishmania infantum in the Americas. In the infected dog, the amastigotes are scarce in blood, especially in the late phase of the disease. This study aimed to report a rare case of L. infantum amastigotes found in neutrophils from peripheral blood of a naturally infected dog in terminal phase of CVL, also describing its clinical status before and after treatment with miltefosine 2%. The dog, which presented as polysymptomatic and with classical signs and symptoms of CVL was submitted to the following tests: Dual Path Platform (DPP) rapid test, ELISA and parasitological examination of peripheral blood. Hematological and biochemical parameters were obtained before and after treatment. All diagnostic tests were positive for CVL. The identification of L. infantum amastigotes inside neutrophils from peripheral blood was confirmed through microscopy, and the species was confirmed by molecular analysis. At the end of the treatment, peripheral parasitemia was not detected, and improvements were observed in clinical and laboratorial parameters. Finally, this atypical finding can be used as example to raise discussions about the real immunological role of neutrophils in late phases of CVL and its clinical/therapeutic implications.

Resumo A leishmaniose visceral canina (LVC) é uma doença zoonótica de alta letalidade causada por Leishmania infantum nas Américas. No cão infectado, as formas amastigotas são escassas no sangue, principalmente na fase tardia da doença. Este estudo teve como objetivo relatar um caso raro de amastigotas de L. infantum encontradas em neutrófilos do sangue periférico de um cão naturalmente infectado e terminal da LVC, descrevendo também seu estado clínico antes e após o tratamento com miltefosina a 2%. O cão, que se apresentou como polissintomático e com sinais e sintomas clássicos da LVC foi submetido aos seguintes testes: teste rápido Dual Path Platform (DPP), ELISA e exame parasitológico de sangue periférico. Os parâmetros hematológicos e bioquímicos foram obtidos antes e após o tratamento. Todos os testes diagnósticos foram positivos para LVC. A identificação de formas amastigotas de L. infantum, dentro de neutrófilos do sangue periférico foi confirmada por microscopia, e a espécie foi confirmada por análise molecular. Ao final do tratamento, não foi detectada parasitemia periférica, observando-se melhora dos parâmetros clínicos e laboratoriais. Por fim, esse achado atípico pode ser usado como exemplo para levantar discussões sobre o real papel imunológico dos neutrófilos nas fases tardias da LVC e suas implicações clínicas/terapêuticas.

Information technology by mobile communication for the notification of canine visceral leishmaniasis / Tecnologia da informação por comunicação móvel para notificação de leishmaniose visceral canina

Visceral leishmaniasis is the most severe form of a human and animal disease complex entitled leishmaniasis, which is endemic to 70 countries. It is imperative to develop and offer technologies capable of increasing the resolution ability of control programs of this zoonosis. In the search for technological innovations in health, especially in environmental surveillance, the objective is to develop a mobile application (App) for smartphones in order to facilitate and systematize the notification of positive cases of canine visceral leishmaniasis (CVL) by veterinarians working in clinics for assisting the municipal health surveillance in the management of this zoonosis. Thus, we developed an App, C7 LVC - Canine Visceral Leishmaniasis Notification System, with formatting based on the CR Campeiro 7® software. The technology created enables the filling of important gaps in information systems, facilitating the transmission of data and the use of this data by public management bodies to take CVL prevention and control actions.(AU)

A leishmaniose visceral é a forma mais grave de um complexo de doenças humanas e animais, denominado leishmaniose, endêmica em 70 países. É imprescindível desenvolver e oferecer tecnologias capazes de aumentar a capacidade de resolução dos programas de controle desta zoonose. Na busca por inovações tecnológicas em saúde, principalmente na vigilância ambiental, o objetivo é desenvolver um aplicativo móvel (App) para smartphones a fim de facilitar e sistematizar a notificação de casos positivos de leishmaniose visceral canina (LVC) por médicos veterinários que atuam em clínicas auxiliando a vigilância sanitária municipal, na gestão desta zoonose. Para tanto, foi desenvolvido um App, C7 LVC - Sistema de Notificação da Leishmaniose Visceral Canina, com formatação baseada no software CR Campeiro 7®. A tecnologia criada possibilita o preenchimento de lacunas importantes nos sistemas de informação, facilitando a transmissão de dados e a utilização desses dados pelos órgãos da gestão pública para a tomada de ações de prevenção e controle da LVC.(AU)

Differentials in the epidemiological profile of canine visceral leishmaniasis in the semi-arid region of Paraíba, Brazil / Diferenciais no perfil epidemiológico da leishmaniose visceral canina no semiárido da Paraíba, Brasil

The objective of this study was to estimate the prevalence of canine visceral leishmaniasis (CVL) and to identify the differences in associated factors to its occurrence in urban area and countrysides in the municipality of Santa Luzia located in the semi-arid region of Paraíba. In the years 2015 and 2016, 779 blood samples from dogs were collected. The prevalence was determined by three serological techniques, ELISA-S7® Kit, DPP® Rapid Test and EIE-LVC® Kit, considering positive the samples that reacted in at least two assays. Associated factors were determined by univariate and multivariate analyzes of the guardians' responses to the epidemiological questionnaire. The prevalence of anti-Leishmania infantum antibodies in the studied municipality was 15.00% (117/779), being higher in the urban area (15.20%) than in the countryside (13.60%). The neighborhood with the highest prevalence was Frei Damião with 26.40% (33/125), being considered a hotspot (OR 1.245, p=0.007). Other associated factors were the semi-domiciliary breeding (OR 1.798, p=0.025), in the urban area, and hunting dog (OR 18.505, p=0.016), contact with cattle (OR 17.298, p=0.022) and environment where the dog is raised (OR 4.802, p=0.024) in the countryside. In the municipality of Santa Luzia, the prevalence of canine visceral leishmaniasis is high and the disease is widely distributed. Epidemiological differences between urban area and the countryside could be observed demonstrating the need for more adequate control measures for each locality and proving the urbanization process.(AU)

O objetivo desta pesquisa foi estimar a prevalência da leishmaniose visceral canina (LVC) e identificar as diferenças nos fatores relacionados à sua ocorrência nas zonas urbana e rural do município de Santa Luzia, localizado no semiárido paraibano. Nos anos de 2015 e 2016, coletaram-se 779 amostras de sangue de cães. A prevalência foi determinada através de três técnicas sorológicas, Kit ELISA-S7®, teste rápido DPP® e Kit EIE-LVC®, considerando positivas as amostras que reagiram em, pelo menos, dois ensaios. Os fatores relacionados foram determinados por meio das análises estatísticas uni e multivariada das respostas dos tutores ao questionário epidemiológico. A prevalência de anticorpos anti-Leishmania infantum encontrada no município estudado foi de 15,00% (117/779), sendo maior na zona urbana (15,20%) do que na rural (13,60%). O bairro que apresentou maior prevalência foi o Frei Damião com 26,40% (33/125), sendo considerado um hotspot (OR 1,245; p=0,007). Outros fatores relacionados encontrados foram a criação semidomiciliar (OR 1,798; p=0,025), na zorna urbana, e cão de caça (OR 18,505; p=0,016), contato com bovinos (OR 17,298; p=0,022) e ambiente onde o cão é criado (OR 4,802; p=0,024), na zona rural. Verifica-se a elevada prevalência da leishmaniose visceral canina e a sua ampla distribuição no município de Santa Luzia. Diferenças epidemiológicas entre as zonas urbana e rural puderam ser observadas, demonstrando a necessidade de medidas de controle mais adequadas para cada localidade e comprovando o processo de urbanização.(AU)

Evaluation of the euthanasia of seropositive dogs for canine visceral leishmaniasis as the only method of controling the disease in the enzootic area in the Midwestern Minas Gerais / Avaliação da eutanásia de cães soro reagentes para leishmaniose visceral canina como único método de controle da doença em área enzoótica no Centro Oeste de Minas Gerais

Human Visceral Leishmaniasis (VL) is expanding, and it is distributed in the five geographic regions of Brazil, with the Northeast being the region that presents the most significant number of registered cases. The main urban reservoir of the etiological agent of VL is the domestic dog, and it is known that canine cases precede human cases. One of the control actions of VL, recommended by the Ministry of Health, is performing the euthanasia of seropositive dogs. In 2013, in the municipality of Iguatama/MG, the first canine serological survey was carried out in the city, with a prevalence of 8.3% of seropositive dogs for Leishmania infantum. Of the seropositive animals for Canine Visceral Leishmaniasis (CVL) in this survey, 84% were euthanized, and 16% died within two years after diagnosis. No other control measures for CVL were taken in the municipality. The objectives of the present study were to determine the current prevalence of seropositive dogs for CVL in the municipality of Iguatama and to observe the impact of euthanasia of seropositive dogs to VL as the only control measure performed in this municipality, which is considered an enzootic area of the disease. For this, a new canine epidemiological survey was carried out in the municipality of Iguatama, following the guidelines of the Manual of Surveillance and Control of Visceral Leishmaniasis. Blood samples were collected from 270 dogs and tested by DPP® immunochromatographic test and by Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA). The animals that presented inconclusive results had new blood samples collected and analyzed. The only animal that showed a positive result in DPP® and undetermined in the ELISA, in the first evaluation, became seropositive four months later, so this study reinforces the recommendation of the Ministry of Health to reassess dogs that present inconclusive results for CVL. From a total of 270 samples, 21 (7.8%) were reagents in both tests. Thus, the prevalence of seropositive dogs for CVL, in 2017, in the urban area of the municipality of Iguatama was 7.8%. The Polymerase Chain Reaction-Restriction Fragment Length Polymorphism (PCR-RFLP) molecular technique confirmed infection by L. infantum in the ten dogs sampled with CVL-positive serology. The comparison between the current prevalence (after euthanasia) with that found in 2013 (8.3%), there was no significant difference (p=0.764). The prevalence of CVL in the urban area of the municipality of Iguatama is still high, making it possible to presume that the euthanasia of seropositive dogs for CVL, and the absence of monitoring or other interventions measures, did not contribute to decrease the transmission of the parasite and was not sufficient for the control of CVL in the municipality of Iguatama, an area considered as non-endemic to CVL until 2013.(AU)

A Leishmaniose visceral humana (LV) está em franca expansão e distribuída nas cinco regiões geográficas do Brasil, o Nordeste sendo a região em que há o maior número de casos registrados. O principal reservatório urbano do agente etiológico da LV é o cão doméstico e sabe-se que casos caninos antecedem o aparecimento de casos humanos. Uma das ações de controle da LV, preconizada pelo Ministério da Saúde, é a eutanásia dos cães soro reagentes. Em 2013, no município de Iguatama/MG, foi realizado o primeiro inquérito sorológico canino na cidade, sendo constatada uma prevalência de 8,3% de cães soro reagentes para Leishmania infantum. Dos animais com sorologia positiva para Leishmaniose visceral canina (LVC), neste inquérito, 84% foram eutanasiados e 16% foram a óbito em, no máximo, dois anos após o diagnóstico. Nenhuma outra medida de controle para LVC foi realizada no município. Os objetivos deste estudo foram determinar a prevalência atual de cães soro reagentes para LVC no município de Iguatama e observar o impacto das eutanásias de cães soro reagentes para LV como única medida de controle realizada neste município, considerado área enzoótica para a doença. Para isso, foi realizado um novo inquérito epidemiológico canino no município de Iguatama, seguindo as normas do Manual de Vigilância e Controle da Leishmaniose Visceral. Foram colhidas amostras sanguíneas de 270 cães que foram examinadas pelo teste imunocromatográfico DPP® e pelo ensaio imunoenzimático (ELISA). Os animais que apresentaram resultados inconclusivos tiveram novas amostras de sangue coletadas e analisadas. O único animal que apresentou resultado positivo no DPP® e indeterminado no ELISA, na primeira avaliação, soro converteu quatro meses depois, o que reforça a recomendação do Ministério da Saúde de reavaliar os cães que apresentam resultado inconclusivo para LVC. Do total das 270 amostras, 21 foram reagentes nos dois testes. Portanto, a prevalência de cães soro reagentes para LVC, em 2017, na área urbana do município de Iguatama foi igual a 7,8%. A infecção pela espécie Leishmania infantum foi confirmada através da técnica molecular de PCR-RFLP em 10 cães amostrados com sorologia positiva para LVC. A comparação entre a prevalência atual (depois das eutanásias) com a encontrada em 2013 (8,3%), não mostrou diferença significativa (p=0,764). Uma vez que a soro prevalência de LVC na área urbana do município de Iguatama ainda é alta, pode-se supor que a eutanásia dos cães soro reagentes para LVC, somada à ausência de monitoramento e de outras medidas de intervenção, não contribuiu para a diminuição da transmissão do parasito, e não foi suficiente para o controle de LVC no município de Iguatama, uma área considerada, até 2013, indene para LVC.(AU)

Cytological and molecular detection of Leishmania spp. in different biological tissues of dogs in areas endemic for visceral leishmaniasis / Detecção citológica e molecular de Leishmania spp. em diferentes amostras biológicas de cães em áreas endêmicas para leishmaniose visceral

Devido à ampla distribuição da leishmaniose visceral (LV) no Brasil e à importância dos cães no ciclo de transmissão dessa zoonose, o presente estudo teve como objetivo avaliar a ocorrência de Leishmania spp. e caracterizar a espécie circulante em diferentes tecidos biológicos de cães da Baixada Cuiabana, Mato Grosso, Brasil. Amostras de sangue, linfonodo e medula óssea foram coletadas de 205 cães para realização de análise parasitológica por citologia e análise molecular por meio da nested PCR (nPCR) e do sequenciamento . Dos 205 cães estudados, 34 (16,58%) animais foram positivos pela nPCR, dos quais 12 possuíam formas amastigotas de Leishmania spp. na citologia. Amostras positivas na nPCR foram sequenciadas e caracterizadas como Leishmania (Leishmania) infantum. A sensibilidade da nPCR nas amostras de medula óssea, linfonodo e sangue foi de 94,87%, 91,8% e 98%, respectivamente, enquanto a especificidade foi de 100% para todas as amostras. O presente estudo relata a ocorrência de LV canina em 16,58% dos cães analisados, caracterizando a L. infantum como agente causador. Entre as amostras avaliadas, a medula óssea foi a única a apresentar concordância substancial entre as técnicas de nPCR e citologia (k = 0,643), sendo considerada a amostra mais adequada para o diagnóstico da doença. Os resultados ampliam o conhecimento de espécies de Leishmania infectando cães no Brasil, destacando a importância da identificação etiológica em áreas com escassos dados moleculares.(AU)

Molecular detection of Leishmania infantum DNA according to clinical stages of leishmaniasis in dog / Deteção molecular de DNA de Leishmania infantum em diferentes estágios clínicos da leishmaniose em cães

Abstract The aim of this study was to compare molecular tests used to diagnose Leishmania spp. in dogs with different stages of infection. Blood and conjunctival swab (CS) samples from dogs classified in four clinical stages were subjected to different PCR protocols (13A/13B, MC1/MC2, LITSR/L5.8S and LEISH-1/LEISH-2 primers). To the study, 22.3% (48/215) of dogs were classified as without clinical signs, 67.5% (145/215) stage I (mild disease), 7.0% (15/215) stage II (moderate disease) and 3.2% (7/215) stage III (severe disease). The results showed that in blood samples, 13A/13B detected a significant higher number of positive dogs in stage I (25/145) and in total (42/215) (p≤0.05). However, when CS samples were tested, no difference was observed (p>0.05). On the other hand, in blood samples, MC1/MC2 detected significantly fewer positive dogs classified as without clinical signs (0/48), in stage I (0/145) and in total (1/215) (p≤0.05). Likewise, in CS samples, this primers showed also lower detection (1/215) (p≤0.05). So than, we can conclude that PCR on blood samples with 13A/13B primers has greater capacity to detect positive dogs, mainly at the initial of clinical disease than do other primers and MC1/MC2 are not a good choice to detect Leishmania infantum infection in dogs.

Resumo O objetivo deste estudo foi comparar testes moleculares usados para diagnosticar Leishmania spp., em cães apresentando diferentes estágios de infecção. Amostras de sangue e suabe conjuntival (SC) de cães classificados em quatro estágios clínicos foram submetidas a diferentes PCRs (primers 13A/13B, MC1/MC2, LITSR/L5.8S e LEISH-1/LEISH-2). Para o estudo, 22,3% (48/215) dos cães foram classificados como sem sinais clínicos, 67,5% (145/215) estágio I (doença leve), 7,0% (15/215) estágio II (doença moderada) e 3,2% (7/215) estágio III (doença grave). Os resultados mostraram que, em amostras de sangue, 13A/13B detectou número significativamente maior de cães positivos no estágio I (25/145) e no total (42/215) (p≤0,05). No entanto, quando as amostras de SC foram testadas, nenhuma diferença foi observada (p>0,05). Por outro lado, no sangue, MC1/MC2 detectou significativamente menos cães positivos sem sinais clínicos (0/48), em estágio I (0/145) e no total (1/215) (p≤0,05). Da mesma forma, em amostras de SC, MC1/MC2 também apresentou menor detecção (1/215) (p≤0,05). Assim, a PCR em amostras de sangue com 13A/13B tem maior capacidade de detectar cães positivos, principalmente no início da doença do que outros primers, e o par de primers MC1/MC2 não é uma boa escolha para detectar infecção por Leishmania infantum em cães.

Neutrophils, eosinophils, and mast cells in the intestinal wall of dogs naturally infected with Leishmania infantum / Neutrófilos, eosinófilos e mastócitos na parede intestinal de cães naturalmente infectados com Leishmania infantum

Abstract Visceral leishmaniasis (VL) is a disease caused by the protozoa Leishmania infantum and can cause an inflammatory reaction in the gastrointestinal tract, however the role of granulocytic cells (neutrophils, eosinophils, and mast cells) in the intestine of dogs infected is not fully understood. We performed a quantitative analysis these cells in the intestinal wall of dogs with canine visceral leishmaniasis (CVL). Twenty dogs were assigned to one of three groups: group 1 (G1, n=8), dogs with CVL and L. infantum amastigotes in the intestine; group 2 (G2, n=9), dogs with CVL but without intestinal amastigotes; and group 3 (G3, n=3), uninfected dogs (control group). Granulocytic cells were counted in the crypt-villus unit (mucosa), submucosa, and muscle layer of the intestinal mucosa. Cell counts were higher in the intestinal wall of dogs from G2 followed by G1 and G3 (p≤0.05). In G1, there was a low inverse correlation between parasite burden of the small intestine and granulocyte counts (r= -0.1, p≤0.01). However, in G2 dogs, mast cell and eosinophil numbers showed positive correlation (r=0.85, p≤0.01). The granulocytic cell hyperplasia observed in the intestine of L. infantum-infected dogs suggests that these cells may be involved in the cell-mediated immune response for parasite elimination.

Resumo A leishmaniose visceral (LV) é uma doença causada pelo protozoário Leishmania infantum e pode causar uma reação inflamatória no trato gastrointestinal, entretanto o papel das células granulocíticas (neutrófilos, eosinófilos e mastócitos) no intestino de cães infectados não é totalmente compreendido. Neste estudo realizamos uma análise quantitativa dessas células na parede intestinal de cães com LV. Vinte cães foram distribuídos em três grupos: grupo 1 (G1, n=8), cães com LV e amastigotas de L. infantum no intestino; grupo 2 (G2, n=9), cães com LV, mas sem amastigotas intestinais; e grupo 3 (G3, n=3), não infectados (grupo controle). Células granulocíticas foram contadas na unidade cripta-vilo (mucosa), submucosa e camada muscular da mucosa intestinal. Observamos hiperplasia dessas células na parede intestinal de cães do G2, seguidas das G1 em relação ao G3 (p≤0,05). No G1, houve uma correlação inversa baixa entre a carga parasitária do intestino delgado e a contagem de granulócitos (r= -0,1; p≤0,01). No entanto, nos cães do G2, os números de mastócitos e eosinófilos apresentaram correlação positiva (r=0,85; p≤0,01). A hiperplasia de células granulocíticas observada no intestino de cães infectados por L. infantum sugere que essas células podem estar envolvidas na resposta imune mediada por células para a eliminação do parasita.

Evaluation of the presence of Leishmania infantum in bone stored in glycerol or sterilized by autoclave for cortical bone grafting / Avaliação da presença de Leishmania infantum em ossos armazenados em glycerol ou esterilizados em autoclave para enxertia óssea cortical

This study was performed to evaluate the effects of autoclaving and storage in 85% glycerol on cortical bone from dogs infected with Leishmania sp. We used 42 cadavers with leishmaniasis. The dogs were evaluated for the presence of Leishmania sp. in culture of bone marrow and by culturing cortical bone. From the infected animals, we harvested 42 diaphysis of the right femur for culture of cortical bone before and after autoclaving or storage in glycerol. There was no significant difference in growth of the parasite in culture of bone marrow or cortical bone. There was no growth of Leishmania sp. in culture of samples after autoclaving or storage in glycerol. Both treatments were effective in preventing the growth of the parasite in vitro, so it was considered viable for grafting.(AU)

Este estudo teve por objetivo avaliar os efeitos da esterilização em autoclave e do armazenamento em glicerol a 85% no osso cortical de cães infectados por Leishmania sp. Foram utilizados 42 cadáveres de cães com leishmaniose. Os cães foram avaliados para a presença de Leishmania sp. em cultura de medula óssea e de osso cortical. Foram coletadas 42 diáfises do fêmur direito para cultura do osso cortical antes e após a esterilização e o armazenamento em glicerol. Não houve diferença significativa no crescimento do parasito em cultura utilizando-se medula óssea ou osso cortical. Não houve crescimento de Leishmania sp. em cultura de amostras de osso cortical após a autoclavagem ou o armazenamento em glicerol. Ambos os tratamentos foram eficazes na prevenção do crescimento do parasita in vitro, de modo que foram considerados viáveis para enxerto.(AU)

Addressing the recent dispersion of urban visceral leishmaniasis in the border of Argentina, Brazil, Paraguay + Uruguay + Bolivia – Project IDRC / Abordando a recente dispersão da leishmaniose visceral urbana nas fronteiras da Argentina, Brasil e Paraguai + Uruguai + Bolívia - Projeto IDRC

The territory located in the border of Argentina, Brazil and Paraguay is endemic for tegumentary leishmaniasis (TL). However, Lutzomyia longipalpis first report in the area was in 2010-Argentina, in 2012-Brazil, and no records in the Paraguayan border despite of reports of human visceral leishmaniasis (VL) cases. Therefore, we developed a research from 2014 to 2017 to study VL in the three-country border at locality level; Uruguay-2015, and Bolivia-2016 joined latter due to the alerts of VL in the Argentinean borders. The space-time distributions of vectors, infected dogs and environmental variables were recorded and associated at three progressive scales, while anthropological surveys were performed. Three scenarios were characterized based on canine VL prevalence, vector presence-abundance and the spatial distribution consistency between them: settled VL, incipient VL, and steady TL with imported canine VL. The vector abundance was clustered in ‘hot spots’ persistent in time that could act as ‘source populations’. The clustering distribution was associated with environmental variables at the different scales studied. Therefore, the vector distribution (proxy of human-dog exposure) could be modeled in recent southern scenarios to focus the surveillance and interventions on predicted ‘hot spots’, in order to increase the effectiveness and efficiency of program activities.

O território localizado na fronteira da Argentina, Brasil e Paraguai é endêmico para leishmaniose tegumentar (LT). Entretanto, o primeiro relato de Lutzomyia longipalpis na área foi em 2010-Argentina, em 2012-Brasil, sem registros na fronteira em Paraguai apesar dos casos de leishmaniose visceral humana (LV). Portanto, desenvolvemos uma pesquisa de 2014 a 2017 para estudar a LV na tríplice fronteira em nível de localidades; Uruguai-2015 e Bolívia-2016 aderiram mais tarde devido aos alertas de LV nas fronteiras argentinas. As distribuições espaço-temporais de vetores, cães infectados e as variáveis ambientais foram registradas e associadas em três escalas progressivas, enquanto se realizou o inquérito antropológico. Três cenários foram caracterizados com base na prevalência de LV canina, na abundância-presença de vetores, e a coerência da distribuição espacial entre eles: LV instalada, LV incipiente e LT estável com LV canina importada. A abundância de vetores foi agrupada em “pontos quentes” persistentes no tempo que poderiam atuar como “populações fonte”. A distribuição de agrupamento foi associada a variáveis ambientais nas diferentes escalas. Portanto, a distribuição vetorial (proxy da exposição humana a cães) poderia ser modelada em cenários recentes do sul para focar a vigilância e as intervenções nos “pontos quentes” previstos, a fim de aumentar a eficácia e a eficiência das atividades do programa.

Accuracy of quantitative polymerase chain reaction in samples of frozen and paraffin-embedded healthy skin for the diagnosis of canine visceral leishmaniasis / Acurácia da reação em cadeia da polimerase quantitativa em amostras de pele íntegra congelada e parafinada no diagnóstico da leishmaniose visceral canina

The purpose of the present work was to evaluate the accuracy of quantitative polymerase chain reaction (qPCR) performed on samples of fresh frozen tissue (FT) and formalin-fixed, paraffin-embedded (FFPE) healthy skin. This is a validation study conducted with samples from 46 dogs from an endemic area in Brazil. After sample collection, DNA extractions were conducted using commercial kits and qPCR was oriented to kinetoplast DNA (kDNA) targets of the Leishmania infantum species. The results obtained for the FFPE samples showed 63.6% sensitivity and 77.1% specificity, whereas those obtained for the FT samples showed 100% and 48.6%, respectively. Poor agreement was observed for the results of the qPCR technique with FT and FFPE samples. Our results suggest freezing as the most suitable conservation method for the formation of sample databases considering DNA recovery.(AU)

O objetivo deste trabalho foi avaliar a acurácia da PCR quantitativa (qPCR) realizada em amostras de pele íntegra congelada (FT) e parafinada (FFPE). Trata-se de um estudo de validação, com amostras provenientes de 46 cães de uma área endêmica no Brasil. Após as coletas de amostras, as extrações de DNA foram realizadas utilizando-se kits comerciais, e a qPCR foi orientada para alvos do kDNA da espécie Leishmania infantum. Os resultados obtidos para as amostras FFPE foram 63,6% de sensibilidade e 77,1% de especificidade; para as amostras FT, 100% e 48,6%, respectivamente. A concordância dos resultados da técnica de qPCR com amostras FT e FFPE foi pobre. Os resultados sugerem que o congelamento é o método mais adequado de conservação para banco de amostras para recuperação de DNA.(AU)

Autochthonous case of Canine Visceral Leishmaniasis in a non-endemic area in Minas Gerais, Brazil / Caso autóctone de Leishmaniose Visceral Canina em área indene em Minas Gerais

Visceral Leishmaniasis by Leishmania infantum chagasi is an endemic zoonosis present in many areas of Brazil. This parasite needs reservoirs for maintenance of the infection and the presence of dogs in urban areas is a key factor for the spread of canine visceral leishmaniasis (CVL). The aim of this study was to report the first autochthonous case of CVL in the municipality of Iguatama, in west central region of Minas Gerais State. Dog infection by Leishmania infantum chagasi was confirmed in the municipality, previously considered as non-endemic area to CVL. The canine infection by Leishmania was confirmed by three immunological tests for antibodies: indirect immunofluorescence assay (IFA), rapid Dual Path Platform (DPP®) CVL immunochromatographic test, enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), and microscopic demonstration of Leishmania amastigotes in imprints of spleen and bone marrow stained by Giemsa. The species Leishmania infantum chagasi was confirmed by molecular diagnosis (PCR). Studies are being carried out, aiming to describe the importance and the prevalence of this disease in the region and factors associated with its transmission.(AU)

Leishmaniose visceral causada por Leishmania infantum chagasi é uma zoonose endêmica em algumas regiões do Brasil. Este parasito necessita de reservatórios para a manutenção da infecção e a presença de cães em áreas urbanas é um fator importante para a manutenção e expansão da leishmaniose visceral canina (LVC). O objetivo deste estudo foi relatar o primeiro caso autóctone de LVC no município de Iguatama, na região Centro Oeste de Minas Gerais, cidade onde a LVC era tida como não existente. A infecção canina por Leishmania foi confirmada por três testes imunológicos para pesquisa de anticorpos: reação de imunofluorescência indireta (RIFI), teste rápido de imunocromatografia com plataforma dupla (DPP® LVC) e ensaio imunoenzimático (ELISA), e demonstração microscópica de amastigotas de Leishmania a partir de aposições de amostras de baço e de medula óssea corados pelo Giemsa. A espécie Leishmania infantum chagasi foi confirmada por diagnóstico molecular (PCR). Estudos estão sendo realizados com o objetivo de descrever a importância e a prevalência desta parasitose na região e os fatores associados com a transmissão.(AU)

T lymphocytes and macrophages in the intestinal tissues of dogs infected with Leishmania infantum / Linfócitos T e macrófagos nos tecidos intestinais de cães infectados com Leishmania infantum

Abstract This study was about a semi-quantitative analysis of T lymphocytes (CD4+ and CD8+, FoxP3+ regulatory T cells), and macrophages in the gut wall of dogs naturally infected with Leishmania infantum. Thirteen dogs were divided into three groups: group 1 (G1, n=5), dogs with canine visceral leishmaniasis (CVL) and infected with L. infantum amastigotes in the intestine; group 2 (G2, n=5), dogs with CVL but without intestinal amastigotes; and group 3 (G3, n=3), uninfected dogs (control group). There was no significant difference (p ≥ 0.05) on CD4+ and Treg cell numbers among the groups, whereas the levels of CD8+ T cells and macrophages were significantly higher in dogs from G1 group than in G2 and G3 (p ≤ 0.05), especially in intestinal segments with high parasite burden. Parasite burden correlated positively with levels of CD8+ T cells and macrophages (p ≤ 0.05), but was inversely correlated to levels of CD4+ T lymphocytes and FoxP3+ Treg cells. In conclusion, in the intestine of dogs with CVL, the increase of CD8+ T cells and macrophages population associated with high parasite burdens, but no changes of CD4+ T cells and FoxP3+ Treg cells suggest a possible immunoregulation by the parasite not dependent on Treg cells.

Resumo Este estudo foi uma análise semi-quantitativa de linfócitos T (CD4+, CD8+ e regulatórios - Treg FoxP3+) e macrófagos na parede intestinal de cães naturalmente infectados com Leishmania infantum. Treze cães foram divididos em três grupos: grupo 1 (G1, n=5) continha cães com leishmaniose visceral canina (LVC) e com amastigotas intestinais; grupo 2 (G2, n=5) continha cães com LVC, mas sem amastigotas intestinais e o grupo 3 (G3, n=3) continha cães não infectados (grupo controle). Verificou-se que não houve diferença significativa (p ≤ 0.05) no número de células CD4+ e de Treg entre os grupos, mas o número de células T CD8+ e macrófagos foi significativamente superior nos cães do grupo G1 em relação ao G2 e ao G3 (p ≤ 0,05), especialmente nos segmentos intestinais com altas cargas parasitárias. As altas cargas parasitarias correlacionaram positivamente com os números de CD8+ e macrófagos (p ≤ 0,05), mas negativamente com as células CD4+ e Treg. Em conclusão, no intestino dos cães com LVC, o aumento das populações de células T CD8+ e de macrófagos associado a altas cargas parasitárias, mas nenhuma alteração de células T CD4+ e células Treg FoxP3+ sugerem uma possível imunorregulação pelo parasita não dependente de células Treg.

Can vaccines against canine visceral leishmaniasis interfere with the serological diagnostics recommended by the Brazilian Ministry of Health? / Vacinas anti-leishmaniose visceral canina podem interferir no diagnóstico sorológico preconizado pelo Ministério da Saúde brasileiro?

ABSTRACT: The objective of the current research was to assess seroconversion in dogs immunized with Leishmune® and Leish Tec® vaccines using rapid chromatographic immunoassay DPP® (Dual Path Platform) (DPP CVL) and enzyme immunoassay (EIE) up to one year after the vaccination protocol. The study sample comprised 28 dogs divided into two groups, each group immunized with an anti-CVL vaccine and clinically monitored for one year through clinical evaluation and laboratory tests. 22 (78.5%) dog were monitored. During the evaluation time (T1-30 days, T2-6 months, and T3-1 year after vaccination) the results for all dogs were negative for CVL, except for one animal vaccinated with Leish tec® that seroconverted in the DPP CVL test at T2. Subsequent examinations of this dog were negative. Our results showed that in a non-endemic area, even at different evaluation times, dogs vaccinated against CVL with Leishmune® or Leish tec® did not seroconvert in the serological protocol used by the Brazilian Ministry of Health (DPP/EIE).

RESUMO: O objetivo deste trabalho foi avaliar a soroconversão em cães imunizados com as vacinas Leishmune® e Leish tec®, através do teste imunocromatográfico rápido DPP® (Dual Path Platform) (DPP LVC) e do ensaio imunoenzimático (EIE) durante um ano após o protocolo vacinal. Trata-se de um estudo onde 28 cães divididos em dois grupos foram imunizados cada um com uma vacina anti - LVC e acompanhados durante um ano através de avaliação clínica e exames laboratoriais. Foi possível acompanhar 22 (78.5%) cães. Nos exames dos tempos 1, 2 e 3 (respectivamente 30 dias, 6 messes e 1 ano após a vacinação) os resultados de todos os cães também foram negativos para LVC, exceto de um cão que recebeu a vacina Leish tec® e soroconverteu no DPP LVC no T2, após 6 meses a vacina. Os exames posteriores deste cão foram negativos. Os resultados do presente estudo demostraram que, em área não endêmica e mesmo em diferentes tempos de avaliação, cães vacinados contra LVC, independente da vacina utilizada, não foram capazes de soroconverter no protocolo utilizado pelo Ministério da Saúde brasileiro (DPP/EIE).

Hepatozoon canis and Leishmania spp. coinfection in dogs diagnosed with visceral leishmaniasis / Coinfecção com Hepatozoon canis e Leishmania spp. em cães diagnosticados com leishmaniose visceral

Abstract This study describes the occurrence of dogs naturally co-infected with Hepatozoon canis and two Leishmania species: L. infantum or L. braziliensis. Four dogs serologically diagnosed with Visceral Leishmaniasis were euthanized. Liver and spleen samples were collected for histopathological analysis and DNA isolation. H. canis meronts were observed in tissues from all four dogs. H. canis infection was confirmed by PCR followed by sequencing of a fragment of 18S rRNA gene. Leishmania detection and typing was confirmed by ITS1' PCR-RFLP and parasite burden was calculated using ssrRNA quantitative qPCR. A DPP - Dual Path platform test was performed. One out (Dog #2) of four animals was asymptomatic. Dogs #1 and #4 were infected by L. infantum and were DPP test positive. Dogs #2 and #3 were infected by L. braziliensis and were DPP test negative. Furthermore, visceral dissemination was observed in Dogs #2 and #3, since L. braziliensis was detected in liver and spleen samples. The visceral dissemination of L. braziliensis associated with systemic signs suggested that this co-infection could influence the parasite burden and disease progression.

Resumo O presente estudo descreve a ocorrência de coinfecção com Hepatozoon canis e duas espécies de Leishmania (L. infantum ou L. braziliensis) em cães. Quatro cães sorologicamente diagnosticados com leishmaniose visceral foram eutanasiados. Amostras do baço e fígado foram submetidas à histopatologia e extração de DNA. Merontes de H. canis foram observados nos quatro cães. A infecção por H. canis foi confirmada por PCR e sequenciamento de um fragmento do gene 18S rRNA. A infecção por Leishmania e tipagem foram realizadas por PCR-RFLP do região intergênica ITS1. A carga parasitária foi calculada pela qPCR quantitativa baseada no gene ssrRNA. O teste DPP - Dual Path platform foi realizado. Apenas o Cão #2 era assintomático. Os cães #1 e #4 estavam infectados com L. infantum e foram positivos no DPP. Os cães #2 e #3 estavam infectados com L. braziliensis e foram negativos no DPP. Além disso, visceralização foi observada nos cães #2 e #3, nos quais L. braziliensis foi detectada em amostras de baço e fígado. A visceralização da L. braziliensis associada a sinais clínicos sistêmicos sugerem que esta coinfecção pode ter influenciado na carga parasitária e progressão da doença.

Correlation between chronic inflammation, immunostaining and parasite load in the genital system of female dogs naturally infected with Leishmania infantum / Correlação entre inflamação crônica, imunomarcação e carga parasitária no sistema genital de cadelas naturalmente infectadas com Leishmania infantum

ABSTRACT: The aim of the present study was to investigate the correlations among chronic inflammatory reaction, immunostaining and parasite load in the genital system of female dogs naturally infected with Leishmania infantum . Animals (n = 10) used in this study were from the Department of Vector Control and Animal Surveillance of the municipality of Caruaru, state of Pernambuco, Brazil. Fragments of the vulva, vagina, cervix, uterine body, uterine horns and ovaries were submitted to histopathological analysis, immunohistochemistry (IHC) and DNA detection of amastigotes by qPCR. Correlations were found between the IHC findings and chronic inflammatory infiltrate related to L. Infantum only in the vulva and vagina; whereas, the same inflammatory reactions without immunostaining were observed in all organs, except the ovaries. L. Infantum DNA was detected in all organs of genital system, with no difference in parasite load observed among the different organs. No correlation was reported between parasite load and inflammatory lesions in the organs evaluated, except for the uterine body, in which an inverse correlation was detected. In conclusion, the vulva and vagina were the major sites of lesions and immunostaining for L. Infantum amastigotes in the genital system of female dogs. Moreover, parasite load exerted no influence on the intensity of the lesions in the organs evaluated.

RESUMO: Considerando a falta de estudos sobre lesões nos órgãos genitais de cadelas naturalmente infectadas por Leishmania infantum , o objetivo do presente estudo foi investigar a correlação entre reação inflamatória crônica, imunomarcação e carga parasitária, no sistema genital. Dez animais foram fornecidos pelo Departamento de Controle de Vetores e Vigilância Animal do município de Caruaru, Estado de Pernambuco, Brasil. Fragmentos de vulva, vagina, cérvix, corpo do útero, corno do útero e ovários foram avaliados por descrição histopatológica, imuno-histoquímica (IHQ) e detecção de DNA de formas amastigotas por qPCR. A relação entre IHQ e infiltrado inflamatório crônico relacionado com L. infantum foi observada apenas na vulva e vagina, enquanto as mesmas reações sem imunomarcação foram observadas em todos os órgãos, exceto nos ovários. DNA de L. infantum foi detectado em todos os órgãos do sistema genital, porém, sem diferença de carga parasitária entre eles. Não houve correlação entre a carga parasitária e lesões inflamatórias nos órgãos avaliados, com exceção do corpo do útero, em que foi encontrada uma correlação inversa. Em conclusão, a vulva e a vagina foram os principais locais de lesões e imunomarcação para formas amastigotas L. infantum no sistema genital de cadelas. A carga parasitária não influenciou a intensidade das lesões nos órgãos avaliados.

Aspectos epidemiológicos da leishmaniose visceral canina na zona rural do semiárido paraibano e análise de técnicas de diagnóstico / Epidemiological aspects of canine visceral leishmaniasis in the semi-arid region of Paraiba and analysis of diagnostic techniques

No Brasil, a leishmaniose visceral é causada pela Leishmania infantum. É uma zoonose crônica e, frequentemente, fatal, sendo considerada um grave problema de saúde pública no mundo e reconhecida pela Organização Mundial de Saúde como uma das dezessete "Doenças Tropicais Negligenciadas". O presente estudo foi realizado em 2012, na zona rural do município de Patos, semiárido paraibano, com o objetivo de estimar a prevalência, os fatores de risco da leishmaniose visceral canina (LVC) na região e avaliar os testes de diagnóstico sorológico. Foram coletadas 362 amostras de sangue e a prevalência da infecção foi determinada através de três técnicas sorológicas (ELISA, RIFI e Teste Imunocromatográfico DPP - Dual Path Plataform), sendo consideradas positivas as amostras que apresentaram pelo menos dois testes reagentes. As amostras positivas na sorologia foram testadas na PCR e qPCR. Aplicou-se um questionário epidemiológico aos proprietários para identificação dos possíveis fatores de risco. A taxa de prevalência foi de 11,33% (41/362). Considerou-se o ELISA como padrão ouro, já que é o teste confirmatório para a LVC pelo Ministério da Saúde. O DPP (Dual Path Plataform) apresentou sensibilidade de 58% (95% CI: 0,43-0,72) e especificidade de 96% (95% CI: 0,93-0,98), com índice Kappa de 0,57. A RIFI apresentou sensibilidade de 85% (95% CI: 0,72-0,94), especificidade de 99% (95% CI: 0,98-1) e valor Kappa de 0,88. O fator de risco identificado na análise multivariada por regressão logística múltipla foi o sexo (OR=2,15 [1,09-4,21]) e os cães machos apresentaram 2,15 vezes mais chances de serem infectados, que pode ser justificado por serem mais utilizados para a caça e como cão de guarda, dois fatores que aumentam a exposição do animal ao flebótomo. Em função da taxa de prevalência encontrada, indica-se a aplicação de medidas de controle no município. Os resultados da comparação dos ensaios sorológicos demonstraram que o DPP (Dual Path Plataform) não é a melhor técnica para triagem dos animais positivos em função da baixa sensibilidade do método, sugerindo que o mesmo seja substituído pelo ELISA.(AU)

Visceral leishmaniasis is caused by Leishmania infantum in Brazil. It is a chronic disease and often a fatal zoonosis and considered as a serious worldwide public health problem and recognized by the World Health Organization as one of seventeen "Neglected Tropical Diseases". This study was conducted in 2012 in the county of Patos, in Paraíba State semiarid region. The main purposes were to estimate the prevalence and the risk factors of canine visceral leishmaniasis (CVL), and to evaluate the performance of serological tests. Serological prevalence was determined using three techniques (ELISA, IFA and DPP chromatographic immunoassay - Dual Path Platform). ELISA was the golden standard, since it is the confirmatory test for CVL as established by the Brazilian Ministry of Health. In total, 362 blood samples were collected and were considered positive if positive by two serological assays. Positive samples were tested by PCR and qPCR. An epidemiological questionnaire was applied to the dog owner to identify risk factors associated with CVL. The seroprevalence was 11.33% (41/362). Chromatographic immunoassay - DPP showed a sensitivity of 58% (95%, CI: 0.43 to 0.72) and specificity of 96% (95%, CI: 0.93-0.98) , with a Kappa index of 0.5. The IFA had a sensitivity of 85% (95%, CI: 0.72 to 0.94), specificity of 99% (95%, CI: 0.98 to 1) and Kappa value of 0.8. The risk factor identified in the multivariate analysis was gender (OR=2.15 [1.09 to 4.21]), male dogs having 2.15 times more chance of being infected. The increased likelihood can possibly be explained by the use of male dogs for hunting and as guard dogs, two factors that increase dog contact to infected sandflies. Due to the prevalence rates, it should be recommended control measures against canine visceral leishmaniasis. The results demonstrated that the Chromatographic immunoassay (DPP-Dual Path Platform) is not the best technique for screening positive animals due to its low sensitivity, suggesting its replacement by ELISA.(AU)

Histopathological evaluation and parasite quantification (qPCR) in the male dog's genital system after natural infection with Leishmania infantum / Avaliação histopatológica e quantificação parasitária (qPCR) no sistema genital de cães machos após infecção natural com Leishmania infantum

ABSTRACT: Canine visceral leishmaniasisis an important disease caused by the protozoon Leishmania infantum which affects several organs and systems, including the genital tract. The L. infantum tropism to the male genital system and correlation among parasite load, immunohistochemistry detection and structural changes in these organs is controversy. Therefore, the aim of this study was to evaluate this correlation in the genital organs of the male dogs naturally infected with L. infantum. Samples from testicles, epididymis, prostate, glans penis, prepuce and scrotum were collected from 19 positive adult dogs. Structural changes were observed in the testicles (5.2%), epididymis (2.6%), prepuce (5.2%) and scrotum (5.2%) of the samples positive at immunohistochemistry examination. Conversely, similar structural changes were observed in all tissues negative at immunohistochemistry analysis. Moreover, L. infantum DNA was detected in all organs with the highest parasite load found in testicles, epididymis, and prostate gland. , Testicles had the highest parasite load but the lowest number of inflammatory lesions. These inflammatory lesions were observed in all organs of reproductive system of dogs; however, no correlation was observed between the parasite load and inflammatory lesions of dogs naturally infected with L. infantum.

RESUMO: A Leishmaniose Visceral Canina é uma importante enfermidade causada pelo protozoário Leishmania infantum que afeta diversos órgãos e sistemas, incluindo o trato genital. No entanto, o tropismo da L. infantum pelo sistema genital masculino e a correlação entre carga parasitária, detecção imunohistoquímica e alterações estruturais nesses órgãos ainda é uma questão controversa. Sendo assim, o objetivo deste estudo foi avaliar essa correlação em órgãos genitais de cães naturalmente infectados por L. infantum. Para tal, amostras de testículos, epidídimos, próstata, glande, prepúcio e escroto foram coletadas de 19 cães adultos positivos. Lesões microscópicas associadas com imunomarcação de formas amastigotas do parasito foram observadas nos testículos (5,2%), epidídimos (2,6%), prepúcio (5,2%) e escroto (5,2%). Por outro lado, alterações estruturais sem imunomarcação foram observadas em todos os órgãos. Além disso, o DNA de L. infantum foi encontrado em todos os órgãos com maior carga parasitária nos testículos, epidídimos e próstata. Curiosamente, os testículos apresentaram a maior carga parasitária, porém apresentaram o menor grau de lesões inflamatórias. Essas lesões inflamatórias foram observadas em todos os órgãos do sistema reprodutor de cães com L. infantum. Entretanto, não houve correlação entre carga parasitária e lesões inflamatórias nestes órgãos.

Adesão leucocitária e MDA sérico em cães naturalmente infectados por Leishmania infantum

O presente estudo avaliou o estresse oxidativo e a adesão de leucócitos (AL) em cães naturalmente infectados por Leishmania infantum. Foram utilizados cães saudáveis (CN = 10) e cães acometidos por leishmaniose visceral na forma sintomática (CS = 10), submetidos previamente a exames de imunofluorescência indireta (IFI), ensaio imunoenzimático (ELISA) e pesquisa do parasito em aspirados de medula óssea. Soro foi utilizado para avaliação de malondialdeído (MDA) no ensaio para espécies reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS) e AL foi determinada pelo método da coluna de nylon em sangue em EDTA, heparina e citrato. Os dados de AL foram expressos em porcentagem e MDA em média ± desvio padrão, submetidos ao teste T de student não pareado (p 0,05). Amostras em heparina apresentaram níveis mais elevados de AL no grupo CS (55,62%, p 0,05) quando comparadas com EDTA e citrato (10,46% e 5,28%). Citrato e EDTA inibiram AL em cães doentes e saudáveis, enquanto a heparina preservou a AL. A proporção neutrofílica se apresentou reduzida nas amostras em heparina (85% para 67%, p 0,05) quando comparadas com citrato e EDTA, que por sua vez mantiveram-se estáveis (83% para 80%). Os níveis de MDA apresentaram-se mais elevados em CS (0,0117µM ± 0,002) quando comparado com CN (0,0057µM ± 0,001) (p 0,05). Estes dados dão suporte à conclusão de que na LVC ocorre elevação do estress