Molecular detection of leptosipira in synanthropic and wild rodents from Villavicencio municipality, Colombia / Detección molecular de leptospiras en roedores del municipio de Villavicencio, Colombia

Introduction: Rodents are potential transmitters of Leptospira spp. In the municipality of Villavicencio, Colombia, leptospirosis is a disease that, although notifiable, is still underreported. In this region, rodent species that can host pathogenic leptospira remain unknown. Objective: To detect the presence of Leptospira spp. through molecular analysis in rodents (Rodentia) from peri-urban and rural areas belonging to the municipality of Villavicencio in Colombia. Methods: Peri-urban and rural areas of the townships belonging to Villavicencio municipality were selected for sampling. These areas presented similar ecological conditions: they were near water bodies and peridomiciliary areas, and some of them included fields of agricultural crops. Rodents´ kidneys were removed and frozen in liquid nitrogen. DNA was extracted using a commercial kit and subsequently amplified through conventional polymerase chain reaction. Results: The rodent species collected were: Rattus rattus, Mus musculus, Zygodontomys brevicauda, Oligoryzomys sp, Hylaeamys (formerly Oryzomys) and Proechimys cf. oconnelli. Leptospira DNA was amplified in six rodents and the purified amplicons were sent to Macrogen Inc. (Seoul, Korea) for sequencing. The alignment analysis of the sequenced products demonstrated 98.64 percent of coverage and identity with Leptospira interrogans. Conclusions: This is the first study carried out on wild and synanthropic rodents in the municipality of Villavicencio. The incidence of leptospirosis raises the alarm due to the important role of these small mammals in the transmission of this zoonosis, which is considered the second cause, after dengue, of undifferentiated febrile illness in Villavicencio(AU)

Introducción: Los roedores son potenciales transmisores de Leptospira spp. En el municipio de Villavicencio, Colombia, la leptospirosis es una enfermedad que, aunque debe notificarse obligatoriamente, sigue subreportada. En esta región, algunas especies de roedores pueden ser reservorios de leptospiras patógenas, situación que se desconoce. Objetivo: Detectar la presencia de Leptospira spp. a través del análisis molecular en roedores (Rodentia) de áreas periurbanas y rurales del municipio de Villavicencio, Colombia. Métodos: Para el trampeo se seleccionaron áreas periurbanas y rurales de las veredas pertenecientes al municipio de Villavicencio. Las áreas escogidas presentaban condiciones ecológicas similares: cerca de cuerpos de agua y áreas peridomiciliarias; algunas de ellas localizadas en campos de cultivos de la agricultura. Se extirparon los riñones de los roedores y se conservaron en nitrógeno líquido. Se extrajo el ADN usando un estuche comercial y posteriormente se amplificó mediante reacción en cadena de la polimerasa convencional. Resultados: Las especies de roedores colectadas fueron: Rattus rattus, Mus musculus, Zygodontomys brevicauda, Oligoryzomys sp., Hylaeamys (ahora Oryzomys) y Proechimys oconnelli. El ADN de leptospira se amplificó en seis roedores y los amplicones purificados se enviaron a Macrogen Inc. (Seoul, Korea) para secuenciación. El análisis de alineamiento de los productos secuenciados demostró un 98,64 por ciento de cobertura e identidad con Leptospira interrogans. Conclusiones: Este es el primer estudio llevado a cabo en roedores silvestres y sinantrópicos en el municipio de Villavicencio. La incidencia de la leptospirosis genera una alarma con respecto a la importancia del papel de esos pequeños mamíferos en la transmisión de esta zoonosis, la cual es la segunda causa de los síndromes febriles indiferenciados en Villavicencio, después del dengue(AU)

Detección de Leptospira spp. (Spirochaetales: Leptospiraceae) en muestras ambientales de regiones habitadas por poblaciones vulnerables del norte argentino / Leptospira spp. (Spirochaetales: Leptospiraceae) detection in environmental samples from geographical regions inhabited by vulnerable communities in northern Argentina

Resumen La leptospirosis continúa siendo hoy en día un problema para la salud pública, principalmente en poblaciones de bajos recursos socioeconómicos. En este trabajo se presenta la detección de leptospiras patógenas en muestras ambientales (aguas y barros) provenientes de regiones del norte argentino (provincias de Formosa, Salta, Santiago del Estero, Misiones y Chaco) con variadas características climatológicas habitadas por poblaciones vulnerables. De las 89 muestras analizadas, en el 24,7% fue posible detectar molecularmente la presencia de leptospiras patógenas. La prevalencia por tipo de muestra fue de 27,8% para las aguas y 11,8% para los barros. Todas las localidades muestreadas presentaron al menos una muestra positiva a alguna de las pruebas realizadas, por lo que el presente trabajo refleja la necesidad de profundizar los estudios de la leptospirosis en distintas regiones de la Argentina.

Abstract Leptospirosis remains as a major public health problem nowadays, mainly affecting vulnerable communities with low socioeconomic resources. In this study, the molecular detection of pathogenic leptospires from environmental samples (water and mud) from northern Argentina (Formosa, Salta, Santiago del Estero, Misiones and Chaco provinces) is described. Samples were obtained from regions with varied climatological features, all inhabited by vulnerable communities. From the 89 samples that were analyzed, 24.7% showed molecular evidence of the presence of pathogenic leptospires. Prevalence by sample type was: 27.8% in water samples and 11.8% in mud samples. All the sampled regions showed at least one positive sample. This result highlights the need of further research regarding leptospirosis in different regions of Argentina.

High prevalence of porcine circovirus 2, porcine parvovirus, and pathogenic leptospires in mummified swine fetuses in Southern Brazil / Alta prevalência de parvovírus suíno, circovírus suíno 2 e leptospiras patogênicas em fetos suínos mumificados na região Sul do Brasil

ABSTRACT: Modern swine production employs a high degree of technology and is organized in various production stages, in which reproduction is one of the most significant. However, reproductive losses associated to fetal death are still high. Fetal losses, including fetal mummification, may occur at a rate below 1.5% in a sound herd. The causes of fetal death can be very diverse, and include various infectious agents. Therefore, investigating the causes of fetal losses is important in the decision-making process related to the control and prophylaxis of the herd. The goal of this study was to carry out a molecular survey, analyzing porcine circovirus 2 (PCV2), porcine parvovirus (PPV), and pathogenic Leptospira as potential agents related to fetal death in swine farms in Southern Brazil. We collected samples from three farms with a mummified index ≥ 2.5%. Fragments of brain, lung, kidney, liver, and heart were sampled for PCR analysis. Out of 100 samples examined, 87, 68, and 22 were positive for PCV2, PPV, and Leptospira spp., respectively. Moreover, we also identified coinfections with two and three pathogens in the same sample. Our findings contribute to the spreading of scientific knowledge related to infectious causes (PPV, PCV2, and pathogenic leptospires) of fetal losses in swine, as evidenced by the high frequencies of the investigated agents.

RESUMO: A produção moderna de suínos emprega um alto grau de tecnologia e é organizada em várias etapas de produção, nas quais a reprodução é uma das mais importantes. No entanto, as perdas reprodutivas associadas à morte fetal ainda são altas. Perdas fetais, incluindo mumificação, podem ocorrer em taxa abaixo de 1,5% em rebanhos sadios. As causas da morte fetal podem ser diversas, incluindo causas infecciosas. Portanto, a investigação de causas relacionadas à ocorrência de perdas fetais é importante no processo relacionado ao controle e profilaxia do rebanho. O objetivo deste estudo foi realizar um levantamento molecular, incluindo circovírus suíno 2 (PCV2), parvovírus suíno (PPV), e leptospiras patogênicas como potenciais agentes relacionados à morte fetal em suínos no sul do Brasil. Foram coletadas amostras de três granjas com índice de fetos mumificados ≥ 2,5%. Fragmentos de cérebro, pulmão, rim, fígado e coração foram amostrados para análise por PCR. Das 100 amostras examinadas, 87 foram positivas para PCV2, 68 foram positivas para PPV e 22 foram positivas para Leptospira spp. Além disso, também identificamos co-infecções com dois e três patógenos em uma mesma amostra. Os resultados encontrados contribuem para a disseminação do conhecimento científico relacionado às causas infecciosas (PCV2, PPV e Leptospiras patogênicas) relacionadas às perdas fetais em suínos, assim como evidenciam a alta frequência dos agentes pesquisados.

Avances de laboratorio sobre la leptospirosis humana en Cuba, 1989-2016 / Laboratory advances about human leptospirosis in Cuba, 1989-2016

La leptospirosis humana es una enfermedad que tiene en Cuba un comportamiento endemo-epidémico con un carácter cíclico estacional. El avance tecnológico introducido en el país ha permitido tener un mejor conocimiento del agente causal en las provincias cubanas, así como realizar intervenciones en los brotes epidémicos ocurridos durante años, y brindar informaciones que fortalezcan al Programa Nacional de Prevención y Control y a los ensayos clínicos de la vacuna cubana vaxSPIRAL®. En este trabajo se resumen aspectos de interés relacionados con la vigilancia de laboratorio y los resultados de algunas de las investigaciones realizadas en el periodo 1989-2016(AU)

In Cuba human leptospirosis is a condition of an endemic-epidemic, cyclic-seasonal nature. Technological advances introduced into the country have made it possible to expand knowledge about the causal agent in Cuban provinces, carry out interventions in the epidemic outbreaks which have occurred during years, and offer information strengthening the National Prevention and Control Program and the clinical assays for the Cuban vaccine vaxSPIRAL®. The paper summarizes aspects of interest related to laboratory surveillance, as well as the results of some of the studies conducted in the period 1989-2016(AU)

Occurrence of antibodies against Leptospira spp in dogs from Teresina, Piauí, Brazil / Ocorrência de anticorpos contra Leptospira spp em cães de Teresina, Piauí, Brasil

Leptospirosis is a systemic disease caused by the species of bacteria Leptospira spp., which affects human beings, domestic and wild animals. The present study searched the presence of antibodies against Leptospira spp. in the canine population of the city Teresina, Piauí, and the most common serovars. Blood samples from 425 stray dogs were collected in the local zoonosis center in Teresina from July 2010 to January 2012 and submitted to the Microscopic Seroagglutination Test (MAT). This study found an average infection rate of 17.41% (IC 95%; 13,8 ­ 21,0) by 11 different serovars; the four most frequent were Canicola (18.9%), Autumnalis (16.2%), Icterohaemorrhagiae (12.1%), and Butembo (12.1%). The questions raised in this study indicated the occurrence of Leptospira spp infection in dogs of Terezina- Piaui, Brazil.(AU)

A leptospirose é uma doença sistêmica causada por bactéria Leptospira spp. que afeta seres humanos, animais domésticos e selvagens. O presente trabalho investigou a presença de anticorpos anti-Leptospira spp. na população canina da cidade de Teresina-Piauí, e os respectivos sorovares predominantes. Amostras de sangue de 425 cães foram coletadas no Centro de Controle de Zoonoses de Teresina, no período de julho de 2010 a janeiro de 2012, e submetidas à prova de Soroaglutinação Microscópica (SAM). Este estudo encontrou uma taxa de infecção média com 17,41% (IC 95%; 13,8 ­ 21,0) e 11 sorovares reagentes, sendo os prevalentes Canicola (18,9%), Autumnalis (16,2%), Icterohaemorrhagiae (12,1%) e Butembo (12,1%). As questões levantadas neste estudo indicam a ocorrência de infecção por Leptospira spp em cães da cidade de Teresina-Piauí, Brasil.(AU)

Avaliação do controle de leptospirose por vacinação em bovinos de propriedade leiteira no estado do Piauí / Evaluation of leptospirosis control through vaccination in a cattle dairy farm in the state of Piauí

Neste estudo foram colhidos soros de 255 vacas e 2 touros no período de 2004 a 2009, em intervalos de seis meses, em uma fazenda de gado leiteiro no município de Buriti dos Lopes, Piauí. Pela técnica de soroaglutinação microscópica (SAM), os sorovares de leptospiras encontrados foram Hardjobovis, Hardjoprajitno (Norma), Hardjoprajitno (OMS). Para o controle da leptospirose, foi testada uma vacina contendo os mesmos sorovares encontrados infectando o rebanho. Os resultados mostraram que em bovinos leiteiros na bacia de Parnaíba, no Piauí, ocorre leptospirose, com predominância do sorovar Hardjobovis. A utilização de uma vacina contendo as sorovariedades mais prevalentes no rebanho, aplicada semestralmente ao longo de cinco anos, foi importante para a redução dos títulos de anticorpos, além de reduzir os problemas reprodutivos no rebanho.(AU)

For this study, we collected sera from 255 cows and 2 bulls in the period from 2004 to 2009, with six-month intervals, a dairy cattle farm in the municipality of Buriti dos Lopes, in the state of Piauí. By the microscopic agglutination test (MAT), we found the following serovars of leptospira: Hardjobovis, Hardjoprajitno (Norma), Hardjoprajitno (WHO). For the control of leptospirosis, a vaccine containing the same serovars that were found infecting the herd was tested. The results showed that in dairy cattle in the basin of Parnaiba, state of Piauí, leptospirosis occurs with a predominance of serovar Hardjobovis. The use of a vaccine containing the most prevalent serovars in the herd applied every six months during the course of five years was important to reduce antibody titers and reproductive problems in cattle.(AU)

EMJH medium with 5-fluorouracil and nalidixic acid associated with serial dilution technique used to recover Leptospira spp from experimentally contaminated bovine semen / Meio de EMJH com 5-fluorouracil e ácido nalidíxico associado a técnica das diluições seriadas usados para recuperar Leptospira spp do sêmen bovino experimentalmente contaminado

Bovine semen experimentally contaminated with Leptospira santarosai serovar Guaricura was submitted tothe modified EMJH medium with 5-fluorouracil (300mg/L) and nalidixic acid (20mg/L), named as ôselectivemediumõ and using the serial dilution technique, in order to evaluate the percentage of recovery of the addedmicroorganism. The selective EMJH medium was found with higher percentage of recovery of leptospirasand minor losses of samples due to contamination with opportunistic microorganisms than the non-selectiveEMJH medium: 151/376 (40.0%) of positive growth; and 38/376 (10.0%) contamination and 58/376 (15%) and129/376 (34.0%), respectively. These results were statistically significant (p<0. 0001; Fisher). Differences werefound when the frequencies of positive leptospires recovery have been compared in the serial dilution technique (10-1 to 10-4) between the selective and non-selective media at different dilution factors. At 1/10th dilution the percentages found were (0%, 0/80) and (38%, 30/80), at 1/100th dilution, (3%, 2/80) and (49%, 39/ 80) and at 1/1,000th dilution, (25%, 20/80) and (50%, 40/80), respectively. The percentage of recovery of leptospires was found to be directly proportional to the dilution used. The methodology of the serial dilution technique (setting at least three dilutions) and the use of selective EMJH medium have been found to be efficient for the isolation of leptospires from the bovine semen samples.

Sêmen bovino experimentalmente contaminado com a estirpe Leptospira santarosai Sorovar Guaricura foi utilizado para verificar a porcentagem de recuperação de leptospiras, utilizandoo meio de EMJH com 5-fluorouracil (300 mg/L) e ácido nalidíxico (20 mg/L), denominado ômeio seletivoõ, associado à técnica das diluições seriadas. O meio seletivo EMJH foi encontrado comporcentagem de recuperação mais elevada e com menos perda de amostras devido à contaminação com microorganismos oportunistas quando comparado com o meio EMJH não seletivo, que foram encontrados, respectivamente, com 151/376 (40.0%) de crescimento positivo e 38/376 (10.0%) de contaminação, 58/376 (15%) e 129/376 (34.0%). Estes resultados foram estatíticamente significantes (p<0, 0001; Fisher). Diferenças foram encontradas quando as freqüências de leptospiras recuperadas foram comparadas com a técnica de diluição seriada (10-1 a 10-4) e entre os meios seletivo e não-seletivo, em diferentes níveis de diluição. À diluição de 1/10, as porcentagens encontradas foram (0%, 0/80) e (38%, 30/80); à diluição 1/100, (3%, 2/80) e (49%, 39/80); e à diluição 1/1000, (25%, 20/80) e (50%, 40/80), respectivamente. A porcentagem de recuperação de leptospiras foi diretamente proporcional às diluições empregadas. A metodologia das diluições seriadas (estabelecendo pelo menos três diluições) e o uso de meio EMJH seletivo mostraram ser eficientes no isolamento de leptospiras presentes nas amostras de sêmen bovino.