Listeriosis diseminada: a propósito de un caso

La listeriosis es una enfermedad infecto contagiosa, transmitida por los alimentos, prevenible, y potencialmente grave. Las formas clínicas de presentación pueden ser muy variadas, desde una gastroenterocolitis hasta sepsis grave y compromiso multisistémico. Se discute el caso de una mujer joven que se presenta con manifestaciones neuropsiquiátricas y sistémicas subagudas, en contexto febril en la que a través de hemocultivos se llega al diagnóstico de Listeriosis invasiva. Se destaca el compromiso profundo parenquimatoso a forma de abscesos múltiples, como presentación menos frecuente. Se realiza tratamiento médico, antibioticoterapia prolongada, con franca mejoría clínica imagenológica. El diagnóstico de esta enfermedad requiere un alto índice de sospecha, optimizar las herramientas diagnósticas para un correcto relevo bacteriológico y así poder instaurar precozmente la antibioticoterapia.

Listeriosis is an infectious, contagious, foodborne, preventable, and potentially serious disease. The clinical forms of presentation can be very varied, from gastroenterocolitis to severe sepsis and multisystem involvement. We discuss the case of a young woman with subacute neuropsychiatric and systemic manifestations, in a febrile context in which the diagnosis of invasive Listeriosis is reached through blood cultures. Deep parenchymal involvement in the form of multiple abscesses stands out as a less frequent presentation. Medical treatment, prolonged antibiotic therapy, with clear clinical imaging improvement is performed. The diagnosis of this disease requires a high index of suspicion, optimization of diagnostic tools for a correct bacteriological relief and thus early initiation of antibiotic therapy.

A listeriose é uma doença infecciosa, contagiosa, transmitida por alimentos, evitável e potencialmente grave. As formas clínicas de apresentação podem ser muito variadas, desde gastroenterocolite até sepse grave e envolvimento multissistêmico. Discutimos o caso de uma jovem que apresenta manifestações neuropsiquiátricas e sistêmicas subagudas, em um contexto febril em que o diagnóstico de Listeriose invasiva é alcançado por meio de hemoculturas. O envolvimento do parênquima profundo na forma de múltiplos abscessos destaca-se como uma apresentação menos frequente. Realiza-se tratamento médico, antibioticoterapia prolongada, com nítida melhora da imagem clínica. O diagnóstico desta doença requer um alto índice de suspeição, otimização das ferramentas diagnósticas para um correto alívio bacteriológico e, assim, início precoce da antibioticoterapia.

Listeriose em pacientes nefropatas imunossuprimidos - relato de dois casos / Listeriosis in patients immunosuppressed nephropaths - report of two cases

Contexto: A Listeria monocytogenes é um bacilo gram-positivo de baixa patogenicidade na população geral, mas importante causa de mortalidade por sepse e meningite em pacientes imunocomprometidos. Receptores de órgãos sólidos e candidatos em tratamento de dessensibilização são suscetíveis à infecção pela Listeria monocytogenes, embora sua apresentação clínica seja pouco reconhecida. Descrição dos casos: Paciente do sexo masculino, 43 anos, internado devido a rejeição aguda de enxerto pós-transplante renal, apresenta pico febril matutino e cefaleia. Paciente do sexo feminino, 59 anos, com doença renal crônica e em terapia de dessensibilização devido reatividade a painel antígeno leucocitário humano, busca pronto-socorro com febre, cefaleia e diarreia. A infecção por Listeria monocytogenes foi confirmada por hemocultura em ambos os casos. Discussão: A ocorrência de listeriose é esporádica e associada ao consumo de alimentos altamente contaminados, como laticínios, produtos frescos e carnes processadas. A redução da imunocompetência é o principal fator de risco para o desenvolvimento da doença em não gestantes, bem como para o aumento da mortalidade. O diagnóstico é estabelecido majoritariamente por hemocultura e o exame do líquido cefalorraquidiano é imprescindível para acessar o acometimento do sistema nervoso central, uma vez que os sinais meníngeos podem estar ausentes. O tratamento é realizado com beta-lactâmicos ou aminoglicosídeos. A ampicilina foi utilizada nos casos relatados e promoveu boa resposta clínica. Conclusão: Os profissionais devem atentar para a gravidade da infecção por Listeria monocytogenes e considerar sua ocorrência em pacientes imunocomprometidos, fornecendo orientações profiláticas a todos os candidatos a transplante de órgãos sólidos e tratamento empírico nos casos suspeitos.

Isolamento de Listeria monocytogenes em salsichas comercializadas no Distrito Federal / Isolation of Listeria monocytogenesin sausages commercialized in the Distrito Federal

A bactéria Listeria monocytogenes é o patógeno causador da listeriose, importante doença transmitida por alimentos que acomete humanos e animais podendo causar morte. Foram coletadas 100 amostras de salsicha de mercados do Distrito Federal. A metodologia usada para o isolamento foi a descrita na Instrução Normativa Nº 40 do Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento. As amostras que apresentaram motilidade característica de Listeria sp p. foram submetidas a técnica de PCR para confirmação da espécie L. monocytogenes. Os resultados positivos para Listeria sp p. foram vistos em 14 amostras e em 5 confirmou-se a presença de L. monocytogenes. Através dos resultados desse experimento conclui-se que salsichas podem estar contaminadas com bactérias do gênero Listeria sp p. e L. monocytogenes, oferecendo risco de listeriose aos consumidores.

Resistência antimicrobiana em isolados de Listeria monocytogenes provenientes de alimentos e ambientes de processamento de alimentos / Antimicrobial resistance in Listeria monocytogenes isolates from food and food processing environments

Diversos estudos relatam distintos níveis de resistência antimicrobiana entre os isolados de L. monocytogenes, o que pode ter implicações no tratamento de listeriose. Este estudo avaliou o perfil de resistência de 30 isolados de L. monocytogenes provenientes de alimentos e ambientes de processamento de alimentos do sul do Brasil. Todos os isolados apresentaram resistência ao ácido nalidíxico e a cefoxitina, além de ter sido observada alta ocorrência de isolados resistentes à clindamicina. Para alguns antimicrobianos (rifampicina, tetraciclina, eritromicina, estreptomicina, meropenem, trimetoprim-sulfametoxazol) foi detectado baixo percentual de resistência e, para os demais antimicrobianos testados, não foi observada resistência. Como conclusão, apesar de ter sido observado perfil de resistência para alguns antimicrobianos, os isolados foram suscetíveis aos antimicrobianos comumente utilizados no tratamento de listeriose.

Nervous form of listeriosis in buffaloes / Listeriose nervosa em búfalos

ABSTRACT: Listeriosis is a disease that affects several animal species, including humans, and has three different forms of presentation: encephalic, reproductive, or septicemic. The nervous form is caused mainly by the bacterium Listeria monocytogenes. In Brazil, this disease has already been described in sheep, goats, and cattle. There are no reports of the disease in buffaloes in Brazil and worldwide. The objective of this study was to describe an outbreak of listeric meningoencephalitis in buffaloes in the state of Pará, Brazil. The outbreak occurred in a property located in the municipality of Bujaru, in the eastern Amazon, from May to July 2016. In a herd of 47 buffaloes, three animals (Cases 1, 2 and 3), aged <40 days, presented a neurological condition with locomotion difficulty characterized by paralysis of the four limbs, hypoesthesia, lateral recumbency, and death. Morbidity was 6.38% and lethality was 100%. At necropsy, no significant macroscopic lesions were found. Samples of the central nervous system were collected, fixed in 10% buffered formalin, and routinely processed for histopathological analysis. The main microscopic changes observed were unilateral microabscesses in the brainstem composed predominantly of mononuclear cells, with fewer polymorphonuclear cells, and perivascular cuffs composed mostly of mononuclear cells and few neutrophils. Samples of Cases 1 and 2 revealed Gram-positive bacteria in the areas of necrosis by the Gram's stain technique. Samples of Case 1 were positive in immunohistochemistry for L. monocytogenes. Diagnosis of the nervous form of listeriosis was based on epidemiological data, clinical profile, and immunostaining for Listeria monocytogenes. Results showed that listeriosis should be considered in the differential diagnosis in buffaloes with nervous signs.

RESUMO: A listeriose é uma doença que afeta várias espécies animais, incluindo o homem, e possui três formas diferentes de apresentação: nervosa, abortiva ou septicêmica. A forma nervosa é causada principalmente pela bactéria Listeria monocytogenes. No Brasil a doença já foi descrita em bovinos, ovinos e caprinos, mas não foram encontrados relatos desta doença em búfalos no Brasil e no mundo. O objetivo deste trabalho foi descrever um surto de listeriose nervosa em búfalos no estado do Pará, Brasil. O surto ocorreu de maio a julho de 2016, em uma propriedade localizada no município de Bujaru, na Amazônia Oriental. Três bubalinos de um total de 47 animais (Casos 1, 2 e 3), menores de 40 dias, apresentaram um quadro clínico neurológico caracterizado por dificuldade de locomoção, paralisia dos quatro membros, diminuição da sensibilidade cutânea, decúbito lateral e morte. A morbidade foi de 6,38% e a letalidade de 100%. Na necropsia não foram encontradas lesões macroscópicas significativas. Amostras do sistema nervoso central foram coletadas e fixadas em formalina tamponada a 10% e processadas rotineiramente para análise histopatológica. As principais alterações microscópicas observadas foram microabscessos unilaterais no tronco encefálico, compostos predominantemente por células mononucleares, com menor número de polimorfonucleares, e manguitos perivasculares compostos predominantemente por células mononucleares e poucos neutrófilos. Amostras dos Casos 1 e 2 revelaram bactérias Gram positivas nas áreas de necrose na técnica de Gram. Amostras do Caso 1 resultaram positivas na imuno-histoquímica para L. monocytogenes. O diagnóstico da forma nervosa da listeriose foi baseado nos dados epidemiológicos, no quadro clínico patológico e na imunomarcação para Listeria monocytogenes. Os resultados demostram que a listeriose deve ser considerada no diagnóstico diferencial em bubalinos com sinais nervosos.

Detection of Listeria spp. in cattle and environment of pasture-based dairy farms / Detecção de Listeria spp. em gados leiteiros no meio ambiente com base na pastagem

The aim of the study was to detect Listeria spp., particularly Listeria monocytogenes, in cattle and environment of pasture based dairy farms in Paysandú, Uruguay. A two-stage sampling was conducted, 10 farms were selected by probability proportional to size. A single visit was made to each farm. Samples from bovine faeces, feedstuffs, bulk tank milk, drinking water and soil from the entry and exit pens of the milking parlour were collected for bacteriological studies. PCR assays were used to confirm species and determine the serotype profile of L. monocytogenes isolates. AscI-pulsed-field gel electrophoresis was done to genetically compare them. Listeria spp. were isolated from eight of ten dairy farms, whereas L. monocytogenes in three of them. Serotype distribution in L. monocytogenes was as follows: 1/2a, three isolates; 4b, one isolate. L. monocytogenes or L. innocua excreted from clinically healthy milking cows was detected via faeces. In feedstuffs, only one L. monocytogenes 1/2a isolate from a pasture was obtained. The strain was identical by PFGE to an isolate 1/2a obtained from a pool of milking cow feces that grazed on this farm. No isolation of Listeria spp. was retrieved from the bulk tank milk or drinking water from any of the farms. Listeria innocua was detected in 13 feedstuffs and seven samples of soil from the entry and exit pens of the milking parlour. This is a first local study that confirms the presence of Listeria spp. including L. monocytogenes in healthy cattle and environment of pasture-based dairy farms. These results suggest the potential role that healthy cattle and their sub-products would play as a source of these agents for humans and/or others animals. More detailed studies that include genetic comparison of human and animal isolates are required in order to clearly establish the epidemiological relationship.(AU)

O objetivo deste trabalho foi detectar a presença de bactérias do gênero Listeria e particularmente Listeria monocytogenes, em bovinos leiteiros no ambiente de Paysandú, Uruguai. Foi realizada uma amostragem em duas etapas, dez estabelecimentos foram selecionados por probabilidade proporcional ao tamanho. Foi realizada uma única visita a cada propriedade. Foram coletadas amostras para cultura bacteriológica de matéria fecal bovina, além de alimentos, leite do tanque de resfriamento, água e solo na entrada e saída da sala de ordenha. Com os isolados de L. monocytogenes foi realizado PCR para a confirmação da espécie e determinação do perfil do serotipo. AscI-elctroforese em gel de campo pulsado foi realizado para compará-los geneticamente. Listeria spp. foram isoladas de oito de dez estabelecimentos, enquanto L. monocytogenes foram detectadas em três deles. A distribuição dos serotipos nos isolados de L. monocytogenes recuperados foi: 1/2a três isolados, 4b um isolado. Foram detectadas vacas leiteras clinicamente sadias ​​que excretaram L. monocytogenes ou L. innocua nas fezes. Dos alimentos do gado houve só um isolamento de L. monocytogenes 1/2a em uma pastagem. Esta estirpe foi idêntica no PFGE a um isolado 1/2a obtido de uma "piscina" de fezes de vacas leiteiras do mesmo estabelecimento. Não houve isolamento de Listeria no leite do tanque de resfriamento ou na água de nenhum dos estabelecimentos. Listeria innocua foi detectada em 13 alimentos para o gado e sete amostras de solo na entrada e saída da sala de ordenha. Este parece ser o primeiro estudo local que confirma a presença de Listeria spp. incluindo L. monocytogenes em vacas leiteiras sadias e no meio ambiente de propriedades leiteiras com base alimentícia na pastagem. Esses resultados sugerem o potencial de vacas sadias e seus subprodutos como possível fonte desses agentes para humanos e/ou outros animais. São necessários estudos mais detalhados que incluem a comparação genética de isolados humanos e de animais para estabelecer claramente seu relacionamento epidemiológico.(AU)

Suppurative infectious diseases of the central nervous system in domestic ruminants / Doenças infecciosas supurativas do sistema nervoso central de ruminantes domésticos

This study describes suppurative infectious diseases of the central nervous system (CNS) in domestic ruminants of southern Brazil. Reports from 3.274 cattle, 596 sheep and 391 goats were reviewed, of which 219 cattle, 21 sheep and 7 goats were diagnosed with central nervous system inflammatory diseases. Suppurative infectious diseases of the CNS corresponded to 54 cases (28 cattle, 19 sheep and 7 goats). The conditions observed consisted of listerial meningoencephalitis (8 sheep, 5 goats and 4 cattle), suppurative leptomeningitis and meningoencephalitis (14 cattle, 2 goats and 1 sheep), cerebral (6 cattle and 2 sheep), and spinal cord (7 sheep) abscesses, and basilar empyema (4 cattle and 1 sheep). Bacterial culture identified Listeria monocytogenes (9/54 cases), Escherichia coli (7/54 cases), Trueperella pyogenes (6/54 cases) and Proteus mirabilis (1/54 cases). All cases diagnosed as listeriosis through histopathology yielded positive immunostaining on immunohistochemistry, while 12/17 of the cases of suppurative leptomeningitis and meningoencephalitis presented positive immunostaining for Escherichia coli. Meningoencephalitis by L. monocytogenes was the main neurological disease in sheep and goats, followed by spinal cord abscesses in sheep. In cattle, leptomeningitis and suppurative meningoencephalitis was the most frequent neurological disease for the species, and E. coli was the main cause of these lesions. Basilar empyema, mainly diagnosed in cattle, is related to traumatic injuries, mainly in the nasal cavity, and the main etiologic agent was T. pyogenes.(AU)

Neste trabalho são descritas as doenças neurológicas infecciosas supurativas de ruminantes domésticos na Região Sul do Brasil. Foram avaliados laudos de 3.274 bovinos, 596 ovinos e 391 caprinos, dos quais 219 bovinos, 21 ovinos e sete caprinos foram diagnosticados como doenças inflamatórias no sistema nervoso central. As doenças neurológicas infecciosas supurativas corresponderam a 54 casos (28 bovinos, 19 ovinos e sete caprinos). As enfermidades observadas foram meningoencefalite por Listeria monocytogenes (oito ovinos, cinco caprinos e quatro bovinos), leptomeningite e meningoencefalite supurativa (14 bovinos, dois caprinos e um ovino), abscessos cerebrais (seis bovinos e dois ovinos) e medulares (sete ovinos); e empiema basilar (quatro bovinos e um ovino). Através do isolamento bacteriano foram identificados: L. monocytogenes (9/54 casos), Echerichia coli (7/54 casos), Trueperella pyogenes (6/54 casos) e Proteus mirabilis (1/54 casos). Todos os casos diagnosticados como listeriose por histologia foram positivos na imuno-histoquímica para L. monocytogenes, e 12/17 casos de leptomeningite e meningoencefalite supurativa foram positivos na imuno-histoquímica para E. coli. A meningoencefalite por L. monocytogenes representou a principal enfermidade neurológica em ovinos e caprinos, seguido dos abscessos medulares em ovinos. A leptomeningite e meningoencefalite supurativa foi a doença neurológica supurativa mais frequente em bovinos e o principal agente causador da lesão foi E. coli. O empiema basilar, frequentemente, diagnosticado em bovinos, foi relacionado com lesões traumáticas, principalmente, de cavidade nasal e o principal agente causador foi T. pyogenes.(AU)

An overview of Listeria monocytogenes contamination in ready to eat meat, dairy and fishery foods / Uma visão geral sobre contaminação por Listeria monocytogenes em alimentos cárneos, laticícios e pescado prontos para o consumo

ABSTRACT: Listeria monocytogenes is a relevant foodborne pathogen in public health, responsible for outbreaks of listeriosis often associated to the consumption of ready to eat meat, dairy and fishery products. Listeriosis is a serious disease that can lead to death and mainly affect children, the elderly and immunocompromised individuals. In pregnant women causes abortion or neonatal listeriosis. In Brazil, ready to eat food are appreciated and increasingly consumed by the population. Furthermore, products such as sausages, bologna, hams and cheeses have characteristics such as pH, Aw and sodium chloride content that favor the development of L. monocytogenes during their shelf life. The purpose of this paper was to present an overview of L. monocytogenes contamination in different meat, dairy and fishery products that are ready for consumption and thereby support the adoption of strategies to mitigate this risk, contributing to achieve the appropriate level protection for the consumers and thus strengthen Brazil's food safety system.

RESUMO: Listeria monocytogenesé um patógeno de importância em saúde pública por estar associado a surtos de listeriose, muitas vezes causados por produtos de origem animal prontos para o consumo. Listeriose é uma doença grave que pode levar ao óbito crianças, idosos e indivíduos imunocomprometidos. Em gestantes ocasiona aborto ou listeriose neonatal. No Brasil, os produtos de origem animal, prontos para consumo, são cada vez mais apreciados pela população. Eles, muitas vezes, podem ser ingeridos sem a necessidade de que o consumidor realize preparo prévio do alimento por meio de calor. Além disso, produtos como salsicha, mortadela, presunto e queijo possuem características como pH, Aw e teor de cloreto de sódio que favorecem o desenvolvimento de L. monocytogenes ao longo da vida de prateleira. Objetivou-se com este trabalho apresentar um panorama da contaminação por L. monocytogenes em produtos cárneos, lácteos e pescados prontos para consumo e, assim, auxiliar na adoção de estratégias para mitigar o risco, contribuindo para alcançar um nível adequado de proteção do consumidor e fortalecer o sistema de segurança alimentar brasileiro.

Caracterização molecular de Listeria monocytogenes oriundas de cortes cárneos bovinos e de abatedouros frigoríficos de bovinos localizados no Distrito Federal, Brasil / Molecular characterization of Listeria monocytogenes from beef samples and cattle slaughterhouses located in the Federal District, Brazil

Este trabalho teve como objetivo realizar a detecção de cepas de Listeria monocytogenes de cortes cárneos bovinos bem como no ambiente de abatedouros frigoríficos localizados no Distrito Federal, promover a sorotipificação pela reação em cadeia da polimerase (PCR), realizar antibiograma e submeter às cepas à eletroforese de campo pulsado (Pulsed-field gel electrophoresis - PFGE). Foram analisados um total de 125 cortes cárneos bovinos, 45 amostras de swabs de carcaças e 43 amostras de swabs em que foram detectados 13 cepas de Listeria monocytogenes, sendo 11 em cortes cárneos bovinos e 2 swabs de ambiente em um abatedouro frigorifico. Não foram isoladas cepas de swabs de carcaça. Dentre as 13 cepas de Listeria monocytogenes foram encontradas seis cepas do sorotipo 4b, cinco do sorotipo 1/2c e duas cepas do sorotipo 1/2a. Dentre as 11 cepas de L. monocytogenes encontradas em cortes cárneos bovino, uma (9,1%) cepa apresentou resistência a eritromicina, outra (9,1%) cepa a gentamicina e outra a ciprofloxacina (9,1%) e todas as cepas (100%) apresentaram resistência ao Ác. Nalidíxico. Das duas (2) cepas oriundas de ralos de abatedouro frigorífico, todas (100%) apresentaram resistência ao Ác. Nalidíxico e a sulfonamidas. A análise por eletroforese de campo pulsante (PFGE) demonstrou 13 diferentes pulsotipos, em que foram agrupados em 3 diferentes grupos clonais, que coincidentemente se correlacionavam com os 3 diferentes sorotipos encontrados sugerindo uma ampla disseminação desses perfis no Distrito Federal.(AU)

The aim of the study was the analysis of Listeria monocytogenes strains in beef samples as well as slaughterhouse environment, located in the Federal District, promote serotyping by polymerase chain reaction (PCR), perform antibiotic susceptibility and submit the strains to Pulsed-field gel electrophoresis (PFGE). A total of 125 beef samples were analyzed, 45 samples of carcasses swabs and 43 swab samples. It detected 13 strains of Listeria monocytogenes, 11 in beef samples. and 2 in slaughterhouse environment. No carcass swabs strains were isolated. Among the 13 strains of L. monocytogenes six strains of serotype 4b were found, five serotype 1/2c and two strains of serotype 1/2a. Among the 11 strains of L. monocytogenes found in beef, one (9.1%) strain showed resistance to erythromycin, one (9.1%) strain to gentamicin, one to ciprofloxacin (9.1%) and all strains (100%) were resistant to nalidixic acid. The two strains coming from the slaughterhouse drains, all (100%) were resistant to nalidixic acid and Sulfonamides. The analysis by pulsed field gel electrophoresis (PFGE) showed 13 different pulsotypes; they were grouped into three different clonal groups, coincidentally correlated with the three different serotypes found, what suggests a widespread dissemination of these profiles in the Federal District, Brazil.(AU)

Listeriosis neonatal en Colombia... ¿Igual que hace veinte años? / Neonatal Listeriosis in Colombia... Same as Twenty Years Ago? / Listeriose neonatal na Colômbia... É igual que há vinte anos?

Presentación del caso: Se incluyen los antecedentes maternos, los hallazgos clínicos y paraclínicos que llevaron al diagnóstico, el seguimiento paraclínico del cuadro infeccioso, el tratamiento instaurado y el desenlace de muerte neonatal. Se realiza una revisión de la literatura nacional e internacional acerca de las características infecciosas y epidemiológicas de la infección porL. monocytogenes, así como su presentación clínica y repercusiones durante el periodo gestacional y en la etapa neonatal. Discusión: la listeriosis neonatal es una patología con alta letalidad, cuya epidemiología no está claramente descrita en el ámbito nacional y regional, lo que dificulta la creación de estrategias de prevención en grupos de alto riesgo. Se sugiere hacer de esta infección un evento de notificación obligatoria para permitir la identificación de factores de riesgo, letalidad, desenlace y presentación usual de esta enfermedad infecciosa en Colombia.

Case: The case is presented including maternal history, clinical and laboratory findings that led to diagnosis, paraclinical monitoring of the infection, the established treatment and outcomes in neonatal death.A review of national and international literature on infectious and epidemiology characteristics of L.-monocytogenes infection, and its clinical presentation and implications during the gestational and the neonatal period was made. Discussion: Neonatal listeriosis is a high fatality disease whose epidemiology is not clearly described at the national and regional levels, hindering the development of prevention strategies in high-risk groups.We suggest this infection becomes a notifiable event to allow the identification of risk factors, lethality, usual presentation and outcome of this infectious disease in Colombia.

Apresentação de caso: Se include os antecedentes maternos, os achados clínicos e o tratamento instaurado e o desenlace de morte neonatal. Se realiza uma revisão da literatura nacional e internacional acerca das características infecciosas e epidemiológicas da infeção por L. monocytogenes assim como sua apresentação clínica e repercussões durante o período gestacional e na etapa neonatal. Discussão: a listeriose neonatal é uma patologia com alta letalidade cuja epidemiologia não está claramente descrita no âmbito nacional e regional o que dificulta a criação de estratégias de prevenção em grupos de alto risco. Se sugere fazer desta infeção um evento de notificação obrigatória para permitir a identificação de fatores de risco, letalidade, desenlace e apresentação usual desta doença infeciosa na Colômbia.

Suppurative intracranial processes in 15 domestic ruminants / Processos supurativos intracranianos em 15 ruminantes domésticos

In addition to listeriosis which is relatively common in ruminants, there are three other uncommon suppurative intracranial processes (SIP) identifiable in adult ungulates as brain abscess, basilar empyema and suppurative meningitis. The present paper reports the epidemiological, clinical, laboratorial, pathological and microbiological findings of 15 domestic ruminants with SIP. A total of 15 animals were selected (eight sheep, four cattle and three goats); with the definitive diagnoses of basilar empyema (n=3), brain abscess (n=1), listeriosis (n=5) and suppurative meningitis (n=6). Hematology revealed leukocytosis with inversion of the lymphocyte/ neutrophil ratio in 4 cases. In the majority of animals, cerebrospinal fluid (CSF) presented light yellow coloration and cloudy aspect due to neutrophilic pleocytosis (15 - 997 leukocytes/µL). Microbiological culture of CSF or central nervous system (CNS) fragments resulted on isolation of Trueperella (Arcanobacterium) pyogenes,Listeria monocytogenes,Escherichia coli and Stenotrophomonas sp. In a goat with thalamic abscess, microbiological assay was not performed, but Gram positive bacilli type bacteria were observed in histology. The diagnosis of these outbreaks was based on the association of epidemiological, clinical, pathological and bacteriological findings; reiterating that the infectious component remains an important cause of CNS disease in domestic ruminants and also shows the need for dissemination of information about the most effective preventive measures for the ranchers.

Além da listeriose, que é relativamente comum em ruminantes, existem outros três processos supurativos intracranianos (PSI) identificáveis em ungulados adultos, que não são comuns, como: abscesso cerebral, empiema basilar e meningite supurativa. O presente trabalho tem como objetivo relatar os achados epidemiológicos, clínicos, laboratoriais, patológicos e microbiológicos de 15 ruminantes domésticos com PSI. O total de 15 animais foi selecionado (oito ovinos, quatro bovinos e três caprinos), com o diagnóstico definitivo de empiema basilar (n=3), abscesso cerebral (n=1), listeriose (n=5) e meningite supurativa (n=6). A hematologia revelou leucocitose com inversão da relação linfócito/ neutrófilo em quatro animais. Na maioria dos animais, a análise do líquido cefalorraquidiano (LCR) revelou coloração amarelado clara e aspecto turvo devido à pleocitose neutrofílica (15 - 997 leucócitos/µL). A cultura microbiológica de LCR ou de fragmentos do sistema nervoso central (SNC), permitiu o isolamento de Trueperella (Arcanobacterium) pyogenes,Listeria monocytogenes, Escherichia coli e Stenotrophomonas sp. No caprino com abscesso de tálamo, a cultura microbiológica não foi realizada, mas bactérias Gram positivas tipo bacilos foram observadas na histologia. O diagnóstico desses surtos foi baseado na associação dos achados epidemiológicos, clínicos, patológicos e bacteriológicos; reiterando que o componente infeccioso continua sendo uma causa importante de doença do SNC em ruminantes domésticos e também mostra a necessidade de disseminação da informação sobre as medidas preventivas mais eficazes para os criadores.

Detecção de Salmonella spp e Listeria monocytogenes através de técnica de PCR / Detection of Salmonella spp and Listeria monocytogenes through PCR / Detección de Salmonella spp y Listeria monocytogenes a través de la técnica de PCR

A maioria dos casos de doenças transmitidas por alimentos é causada por bactérias como Salmonella spp, Listeria monocytogenes, Campylobacter spp e Escherichia coli, entre outros. A contaminação decorre do consumo de alimentos contaminados preparados sob condições impróprias de higiene, manipulação e conservação. Para a detecção dessas bactérias em alimentos, o método convencional de isolamento é o mais utilizado, porém a técnica é demorada e laboriosa. A Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) é um método rápido e sensível na detecção de agentes patogênicos e tem sido bastante estudada e gradativamente empregada nas indústrias de alimentos. O objetivo deste trabalho foi avaliar o limite de detecção da técnica de PCR, para Salmonella spp e L. monocytogenes. O limite para detecção das bactérias foram 2 e 5 UFC para Salmonella spp e L. monocytogenes, respectivamente, demonstrando uma boa sensibilidade da técnica de PCR...

Most cases of foodborne illnesses are caused by bacteria such as Salmonella spp, Listeria monocytogenes, Campylobacter spp, Escherichia coli, among others. Contamination stems from the consumption of contaminated food prepared under improper hygiene, handling and storage conditions. For the detection of bacteria in food, the conventional isolation method is the most commonly used, but the technique is labor-intensive and time consuming. The Polymerase Chain Reaction (PCR) is a rapid and sensitive method for the detection of pathogen agents, and has been extensively studied and gradually used in food industries. The objective of this study is to evaluate the sensitivity of the PCR method for the detection of Salmonella spp and L. monocytogenes. The threshold for the detection of bacteria was 2 and 5 CFU for Salmonella spp and L. monocytogenes, respectively, presenting a high sensitivity to PCR...

La mayoría de los casos de enfermedades transmitidas por alimentos es causada por bacterias como la Salmonella spp, Listeria monocytogenes, Campylobacter spp y Escherichia coli, entre otros. La contaminación se produce por el consumo de alimentos contaminados y preparados bajo condiciones inadecuadas de higiene, manipulación y conservación. Para la detección de esas bacterias en alimentos, el método convencional de aislamiento es el más utilizado, pero la técnica es laboriosa y consume mucho tiempo. La Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) es un método rápido y sensible para la detección de patógenos y ha sido ampliamente estudiado y gradualmente empleada en las industrias de alimentos. El objetivo de este estudio fue evaluar el límite de detección de la técnica de PCR, para L. monocytogenes y Salmonella spp. El límite para detección de las bacterias fueron 2 y 5 UFC para Salmonella spp y L. monocytogenes, respectivamente, demostrando buena sensibilidad a la técnica de PCR...

Infecção natural por Listeria monocytogenes em cobaios Cavia porcellus / Natural infection by Listeria monocytogenes in guinea pigs (Cavia porcellus)

Listeriose foi identificada em quatro porcos-da-índia (Cavia porcellus) enviados para diagnóstico postmortem. Dois cobaios (1 e 2), apresentaram especialmente nódulos esbranquiçados multifocais no fígado e ceco, alterações que corresponderam microscopicamente a múltiplos focos necróticos associados com estruturas bacterianas basofílicas, degeneração gordurosa difusa e infiltrado linfocitário periportal. Lesões similares estavam presentes no intestino delgado, ceco e baço desses dois cobaios. Os outros cobaios (3 e 4) apresentavam exclusivamente alterações pulmonares caracterizadas por coloração avermelhada difusa e áreas esbranquiçadas multifocais na superfície pleural associadas histologicamente com infiltrado neutrofílico multifocal acentuado nos lúmens alveolar e bronquiolar, além de edema interseptal e alveolar, trombos vasculares e numerosos macrófagos alveolares (pneumonia supurativa). Em seções histológicas coradas pelo Brown-Hopps, foram identificadas estruturas bacilares Gram-positivas. A avaliação imuno-histoquímica para anticorpos antiListeria monocytogenes revelou marcação fortemente positiva nos focos necróticos do fígado, ceco, baço, útero, estômago e linfonodos mesentéricos dos dois cobaios com listeriose sistêmica. Nos cobaios com pneumonia supurativa, observou-se intensa marcação nos lúmens alveolares. L. monocytogenes foi isolada de amostras de fígado e de casca de arroz utilizada como cama dos cobaios. Sugere-se que as lesões pulmonares foram consequentes à aspiração de partículas da cama de casca de arroz contaminada com L. monocytogenes.

Listeriosis was identified in four guinea pigs (Cavia porcellus) received for post mortem evaluation. Two animals showed multifocal white nodules in the liver and cecum. These changes corresponded microscopically to multiple necrotic foci associated with basophilic bacterial structures, diffuse lipid vacuolation, and periportal lymphocytic infiltrates. Similar lesions were seen in the small intestine, cecum, and spleen of these two guinea pigs. The other two guinea pigs showed almost exclusively pulmonary changes that were characterized by diffuse red coloration and multifocal whitish areas in the pleural surface, which were microscopically associated with multifocal marked neutrophilic infiltrate within the alveolar and bronchiolar lumens, besides of interseptal and alveolar edema, vascular thrombi, and increased numbers of alveolar macrophages (suppurative pneumonia). The basophilic bacterial structures were Gram-positive for the Brown-Hopps special stain. The immunostaining antiListeria monocytogenes showed strong positive reactions in the necrotic foci of the liver, cecum, spleen, uterus, stomach, and mesenteric lymph node in the two guinea pigs with systemic listeriosis. The two guinea pigs with suppurative bronchopneumonia showed positive intense antiListeria monocytogenes immunostaining within the alveolar lumens. L. monocytogenes was isolated from samples of liver and rice hulls used as bedding material in the cages of the guinea pigs. It is suggested that the pulmonary changes observed here were caused by aspiration of particles of the rice hulls bedding contaminated with L. monocytogenes.

Antimicrobial susceptibilities of Listeria monocytogenes human strains isolated from 1970 to 2008 in Brazil / Susceptibilidade antimicrobiana de cepas humanas de Listeria monocytogenes isoladas no período de 1970 a 2008 no Brasil

INTRODUCTION: Listeria monocytogenes is the causative agent of listeriosis, a foodborne illness that affects mainly pregnant women, the elderly and immunocompromised patients. The primary treatment is a combination of ampicillin with an aminoglycoside, in addition to a second-choice drug represented by chloramphenicol, erythromycin, tetracycline and rifampicin. The aim of this study was to analyze the antimicrobial susceptibility profile of strains isolated from human sources in the last four decades. METHODS: Sixty-eight strains were selected from the culture collection of the Laboratory of Bacterial Zoonoses/LABZOO/FIOCRUZ isolated in different regions of Brazil from 1970 to 2008 and primarily isolated from cerebrospinal fluid and blood culture. Susceptibility tests to antimicrobials drugs were evaluated using the criteria established by Soussy using the Kirby-Bauer method and E-Test strips were used to determine the minimum inhibitory concentration (MIC). RESULTS: Among the strains tested, serovar L4b (60.3 percent) was the most prevalent, followed by serovar 1/2a (20.6 percent), 1/2b (13.2 percent) and the more uncommon serovars 1/2c, 3b and 4ab (5.9 percent). All strains were susceptible to ampicillin, cephalothin, erythromycin, gentamicin, teicoplanin and vancomycin. Only one strain (1.5 percent) showed resistance to rifampin, and two (3 percent) were resistant to trimethoprim-sulfamethoxazole. MICs with values up to 2μg/ml reinforce the need for microbiological surveillance. CONCLUSIONS: The study demonstrated low prevalence of strains resistant to the antimicrobial drugs indicated in the treatment of human listeriosis. Monitoring antimicrobial resistance profile is still very important to determine adequate treatment, especially in immunocompromised patients.

INTRODUÇÃO: Listeria monocytogenes é o agente etiológico da listeriose, doença de origem alimentar que acomete principalmente grávidas, pacientes imunodeprimidos e idosos. O tratamento primário é a associação de ampicilina a um aminoglicosídeo além de outros, em segunda escolha, representados por cloranfenicol, eritromicina, tetraciclina e rifampicina. O presente estudo teve como objetivo analisar o perfil de susceptibilidade aos antimicrobianos de amostras de origem humana isoladas nas últimas quatro décadas. MÉTODOS: Foram selecionadas 68 cepas provenientes de casos clínicos humanos ocorridos em diferentes regiões do país no período de 1970-2008. A susceptibilidade aos antimicrobianos testados foi determinada através dos critérios estabelecidos por Soussy pelo método de Kirby-Bauer e a concentração mínima inibitória realizada através do E-Test. RESULTADOS: A amostragem constituiu-se de 68 cepas, isoladas principalmente de líquido cefalorraquidiano, e hemocultura no período, pertencentes ao Laboratório de Zoonoses Bacterianas/LABZOO/Fiocruz. O sorovar L4b (60,3 por cento) foi o mais prevalente, seguido do sorovar 1/2a (20,6 por cento), 1/2b (13,2 por cento) e aqueles mais raros representados por 1/2c, 3b e 4ab (5,9 por cento). Todas as cepas foram sensíveis à ampicilina, cefalotina, eritromicina, gentamicina, teicoplanina e vancomicina. Apenas uma cepa (1,5 por cento) apresentou resistência à rifampicina, enquanto duas (3 por cento) foram resistentes à associação de sulfametoxazol-trimetoprim. CONCLUSÕES: Apesar de o estudo ter demonstrado uma baixa prevalência de amostras resistentes aos antimicrobianos indicados na terapêutica da listeriose humana, o sistema de monitoramento do perfil de resistência antimicrobiana é de extrema importância para a orientação do tratamento adequado, principalmente nas infecções em pacientes imunocomprometidos.

Listeria monocytogenes: ocorrência em produtos lácteos e suas implicações em saúde pública / Listeria monocytogenes: occurrence in dairy products and its implications in public health

Listeria monocytogenes é o agente causador da listeriose, uma grave doença de origem alimentar que causa severas infecções em humanos com altas taxas de mortalidade. O leite e seus derivados estão entre os produtos alimentícios mais frequentemente envolvidos na transmissão de L. monocytogenes. A listeriose acomete, sobretudo, indivíduos imunodeprimidos, grávidas, recémnascidos e idosos, o que ressalta o caráter oportunista deste micro-organismo e sua importância para a saúde pública. No presente trabalho, faz-se uma revisão narrativa crítica sobre o risco à saúde humana decorrente da ingestão de leite e derivados contaminados por L. monocytogenes, bem como se discutem os fatores que determinam a contaminação por L. monocytogenes na cadeia de produção e distribuição de leite e derivados. São apresentados e avaliados os dados de ocorrência de L. monocytogenes em leite cru e em produtos lácteos no Brasil, tendo em vista seu potencial de envolvimento em casos de listeriose humana. Adicionalmente, são indicadas as principais áreas de pesquisa e atuação para prevenir a contaminação de L. monocytogenes em produtos lácteos.

Listeria monocytogenes is the causative agent of listeriosis, a serious foodborne disease that promotes severe human infections with high mortality rates. Milk and byproducts are among the food products most often involved in the transmission of L. monocytogenes. Listeriosis mainly affects immunodepressed individuals, pregnant women, neonates and the elderly, thus emphasizing its opportunistic character and importance to public health. The present article presents a narrative and critical review concerning the risk to human health from the consumption of dairy products contaminated with L. monocytogenes. Also, a discussion is made on the factors that determine the contamination by L. monocytogenes in the production and distribution chain of milk and dairy products. The available data on the occurrence of L. monocytogenes in raw milk and dairy products in Brazil are also presented and evaluated, taking into consideration its potential for involvement in human listeriosis outbreaks. Additionally, this review indicates the main research and work areas needed for the prevention of L. monocytogenes contamination in dairy products.

Listeriose na gravidez / Listeriosis in pregnancy

Relata-se o caso de uma gestante apresentando febre de origem indeterminada. O resultado da hemocultura identificou Listeria monocytogenes. Fez-se revisão da literaturareferente ao tema.

A case of pregnant patient with undetermined fever of origin is described. The result of blood culture demonstrated Lysteria monocytogenes. A review of the literature was made.

Listeriose como diagnóstico de febre de origem desconhecida em gestantes / Listeriosis as a diagnosis of unknown fever in pregnant women

Listeriose é a denominação de um grupo geral de desordens de transmissão alimentar causadas pela Listeria monocytogenes. Pode simular diversas situações clínicas, dificultando a conduta do médico. Na gestação é pouco considerada, mas relevante enquanto etiologia de perdas gestacionais e posterior acometimento fetal. Geralmente é assintomática, mas pode-se levantar suspeita da doença em gestante febril com sintomas gripais e gastrointestinais, sendo que o diagnóstico definitivo somente é realizado através da cultura sanguínea. Este trabalho tem por objetivo apresentar um caso de listeriose gestacional destacando os principais aspectos desta infecção e orientando quanto ao diagnóstico e tratamento precoces, uma vez que a terapêutica antimicrobiana pode evitar perdas ou sequelas fetais

Listeriosis is the name of a general group of disorders caused by foodborne Listeria monocytogenes. It can simulate various clinical situations, hindering the conduct of the physician. During pregnancy listeriosis is little considered, but it is significant as the etiology of miscarriage and subsequent fetal disease. It is usually asymptomatic, but it can be suspected in pregnant woman with fever and gastrointestinal and flu symptoms, and a definitive diagnosis can only be made by blood culture. This paper aims to present a case of gestational listeriosis highlighting the main aspects of this infection and guiding to early diagnosis and treatment, since antimicrobial therapy may prevent fetal loss or fetal sequelae

Meningoencefalite por Listeria monocytogenes em ovinos / Meningoencephalitis in sheep caused by Listeria monocytogenes

São descritos sete casos de doença neurológica em ovinos por Listeria monocytogenes no Rio Grande do Sul e Paraná entre 2000 e 2007. Foram afetados ovinos com idades entre 12-24 meses. Os casos ocorreram no verão e início da primavera e os índices gerais de morbidade e letalidade foram de 3,15 por cento e 100 por cento, respectivamente. Quando essa informação estava disponível, nenhum dos ovinos afetados era alimentado com silagem. Em três propriedades havia contato próximo dos ovinos afetados com outras espécies. A evolução do quadro clínico foi de 12 horas a três dias e os sinais clínicos foram caracterizados por decúbito (7/7), desvio da cabeça (4/7), incoordenação (3/7), depressão (3/7), andar em círculos (2/7), cegueira unilateral, emagrecimento progressivo, febre, midríase, movimentos de pedalagem, nistagmo lateral, opistótono, paralisia flácida dos membros pélvicos ou dos quatro membros, salivação excessiva e tremores (1/7 cada). Histologicamente observou-se encefalite com microabscessos, predominantemente unilateral com variáveis graus de gliose e alterações degenerativas como esferóides axonais e infiltração de células Gitter. As lesões se estendiam desde a medula oblonga até o mesencéfalo. Antígenos de Listeria monocytogenes foram detectados por imuno-histoquímica em seções de tronco encefálico de todos os ovinos afetados. O diagnóstico foi realizado com base nos achados epidemiológicos e clinico-patológicos, e confirmado pela imuno-histoquímica (IHQ) utilizando anticorpo policlonal anti-L. monocytogenes.

Seven cases of neurological disease in sheep caused by Listeria monocytogenes in Rio Grande do Sul and Paraná state, southern Brazil are described. The cases occurred between 2000 and 2007 and 12-24-month-old sheep were affected. Overall morbidity and lethality rates were 3.15 percent and 100 percent, respectively. Cases occurred in the summer and early spring. When this information was available, affected sheep had not been fed with silage. In three farms there were close contact among affected sheep and other species. Clinical signs were characterized by recumbency (7/7), head tilt (4/7), incoordination (3/7), depression (3/7), circling (2/7), unilateral blindness, wasting, fever, midriasis, paddling, opisthotonus, hind or hind and fore limb paralysis, drooling, and muscle tremors (1/7 each). Clinical evolution varied from 12 hours to three days. Histological findings consisted of predominantly unilateral, microabscedative encephalitis with variable degrees of gliosis and degenerative lesions characterized by axonal spheroids and infiltration by Gitter cells. These lesions were observed extending from medulla oblongata to mesencephalon. Listeria monocytogenes antigen was showed by imunohistochemistry in routinely processed sections of brainstem from all seven affected sheep. The diagnostic was based on epidemiological, clinical, and pathological findings and confirmed by immunohistochemistry (IHQ) using polyclonal anti-L. monocytogenes antibody.

Efecto de tiempo y temperatura de cocción en chorizo inoculados artificialmente con Listeria monocytogenes / Effect of cooking time and temperature on sausages artificially inoculated with Listeria monocytogenes / Efeito do tempo e temperatura de cozimento em lingüiças inoculadas artificialmente com Listeria monocytogenes

Objetivo. Determinar si los tiempos utilizados por los consumidores para la cocción de chorizos son suficientes para la inactivación de Listeria monocytogenes inoculada artificialmente en este producto. Materiales y métodos. Se realizó una encuesta a 50 amas de casa para preguntar sobre los hábitos de preparación de los chorizos. Se analizaron 60 muestras de chorizos a las que se les inocularon concentraciones de 10³ UFC g-1 de un pool de 5 cepas de L. monocytogenes, se aplicaron los procedimientos de cocción indicados por la encuesta y se hizo recuento inmediatamente. Adicionalmente, se realizó una prueba complementaria donde se inocularon 20 muestras de chorizos con poblaciones de 10³ UFC g-1 y se sometieron a 72 y 73°C durante 30 segundos. Resultados. Mediante la encuesta se logró establecer que 15 minutos de cocción y 5 minutos de fritura es la forma más frecuente de preparación por parte de los consumidores, se logró establecer que el tiempo y las condiciones utilizadas en este ensayo tuvieron un efecto estadísticamente significativo (0,016) sobre la población inoculada. En el ensayo complementario los datos estadísticos (p: 0,0001) indicaron que temperaturas internas de 73°C son suficientes para la inactivación de este patógeno a nivel industrial. Conclusión. Tiempos de 15 minutos de cocción y 5 minutos de fritura son suficientes para inactivar concentraciones de 10³ g-1 de Listeria monocytogenes inoculadas artificialmente en chorizos.

Objective. To find whether the cooking times traditionally used by consumers are enough to inactivate Listeria monocytogenes artificially inoculated into sausages. Materials and methods. A survey asking about sausage cooking habits was completed with 50 housewives. We analyzed 60 samples of sausages previously inoculated with 10³ CFU g-1 from a pool of 5 strains of L. monocytogenes, then the cooking procedures described in the survey were applied to the samples, and counting was done immediately after. Additionally, a complementary test was carried out by inoculating 20 samples of sausages with 10³ CFU g-1 and exposing them to 72°C and 73°C for 30 seg. Results. The survey showed that 15 minute boiling and 5 minute frying are the most frequent ways of preparing sausages by consumers. We established that the time and cooking conditions used in our assay had a statistically significant effect (p: 0.016) on the inoculated samples. In the complementary assay, statistical data (p: 0.0001) indicated that internal temperatures of 73°C are enough to inactivate the pathogen at an industrial scale. Conclusion. Cooking by 15 minute boiling and 5 minute frying are enough to inactive concentrations of 10³ g-1 of Listeria monocytogenes artificially inoculated into sausages.

Objetivo. Determinar se o tempo utilizado pelos consumidores para cozinhar lingüiças são suficientes para a inativação de Listeria monocytogenes inoculada artificialmente neste produto. Materiais e métodos. Foram realizadas entrevistas a 50 donas de casa para perguntar sobre os hábitos de preparação das lingüiças. Foram analisadas 60 amostras de lingüiças para as quais foram inoculadas concentrações de 10³ UFC g-1 de um pool de 5 cepas de L. monocytogenes, foram utilizados procedimentos de cozimento indicados pelas entrevistas e foi feita uma contagem imediatamente. Além disso, foi realizada uma prova complementaria inoculando 20 amostras de lingüiças com populações de 10³ UFC g-1 e submetidas a 72 e 73°C por 30 segundos. Resultados. Através das entrevistas foi estabelecido que 15 minutos de cozimento e 5 minutos de fritura é a forma mais freqüente de preparação por parte dos consumidores, foi estabelecido que o tempo e as condições utilizadas neste estudo foi estatisticamente significativa (0,016) sobre a população inoculada. Na prova complementaria os dados estatísticos (p = 0,0001) indicaram que temperaturas internas de 73°C são suficientes para a inativação deste patógeno ao nível da indústria. Conclusão. Tempo de 15 minutos de cozimento e 5 minutos de fritura são suficientes para desativar as concentrações de 10³ g-1 de Listeria monocytogenes inoculadas artificialmente em lingüiças.

Occurrence of Listeria monocytogenes in silages assessed by fluorescent in situ hybridization / Ocorrência de Listeria monocytogenes em silagens avaliadas por meio da hibridação in situ fluorescente

Avaliou-se a qualidade microbiológica da silagem produzida em Portugal e otimizaram-se alguns aspectos relacionados com a eficácia de detecção de Listeria monocytogenes mediante protocolo baseado na técnica de hibridação in situ fluorescente (FISH) para detecção directa desse microrganismo em amostras de silagens. O protocolo foi aplicado a 74 amostras, em simultâneo com o método bacteriológico convencional. Este último permitiu a detecção de L. monocytogenes em 11 silos (15 por cento). Por meio do protocolo FISH, observou-se que 22 silos (29,7 por cento) se encontravam contaminados. O método FISH apresentou precisão (77,0 por cento), especificidade (92,5 por cento) e sensibilidade (72,7 por cento) elevadas, sendo adequado para a análise microbiológica presuntiva de silagens, uma vez que é um método rápido, fácl de realizar, sensível, reprodutível e pouco dispendioso.