RESUMO
Introducción: Las bacterias ácido-lácticas se han estudiado por su capacidad de crecer en ambientes difíciles y generar antagonismos con otros microorganismos. La presente investigación buscó determinar los parámetros de la cinética de crecimiento de Lactobacillus lactis y su efecto probiótico sobre Escherichia coli, Salmonella typhimurium, Clostridium perfringens y Staphylococcus aureus. Materiales y Métodos: Se evaluó el crecimiento de la cepa láctica a concentraciones de 0,5, 1 y 2% de sales biliares; 1 y 1,5% de bilis; tres niveles de pH (2,5, 4,5 y 7) y dos de temperaturas (38 y 45ºC). También se evalúo la susceptibilidad de todas las cepas a los antibióticos Dicloxacilina, Cefepime, Cefalotina, Ciprofloxacina, Pentamicina y Penicilina con la técnica de Kirby-Bauer. Se determinó la inhibición de L. lactis y su sobrenadante en E. coli, S. typhimurium, C. perfringens y S. aureus y se estimaron los parámetros de: crecimiento, pH, consumo de azúcar, acidez y consumo de proteína durante la cinética de fermentación en medio MRS. Se determinaron péptidos presentes en el sobrenadante de L. lactis mediante HPLC. Resultados: Se obtuvo un crecimiento de 1,2 x 109 y 4,1 x 109 ufc/ml a 1,2% de bilis y a 0,5% de sales biliares; 1,1 x 1011, 2,1 x 1010 y 1,0 x 1010 ufc/ml para pH 2,5, 4,5 y 7 respectivamente; y 1,7 x 1013 y 1,4 x 1013 ufc/ml para 45 y 38ºC. La cepa láctica presentó resistencia a Dicloxacilina y Cefalotina; C. perfringens, a Dicloxacilina y Penicilina; S. typhimurium y E. coli, a Cefalotina; y S. aureus, a Dicloxacilina. L. lactis inhibió a E. coli y C. perfringens, y el sobrenadante incluyó a S. aureus. Conclusión: Se concluye que L. lactis presenta adecuados crecimientos en condiciones in vitro e inhibió a E. coli, C. perfringens y S. aureus pero no a S. typhimurium.
Introduction: Acid lactic bacteria have been studied for their ability to grow in harsh environments and generate antagonisms with other microorganisms. The present study sought to determine the kinetic parameters of growth of Lactobacillus lactis and its effect on Escherichia coli, Salmonella typhimurium, Clostridium perfringens and Staphylococcus aureus. Materials and Methods: The growth of the lactic strain was evaluated at concentrations of 0.5, 1 and 2% bile salts; 1 and 1.5% bile; three levels of pH (2.5, 4.5 and 7) and two temperatures (38 and 45ºC). Susceptibility of all strains to Dicloxacillin, Cefepime, Cephalothin, Ciprofloxacin, Gentamicin and Penicillin was also evaluated using Kirby-Bauer technique. Inhibition of L. lactis and its supernatant in E.coli, S. typhimurium, S. aureus and C. perfringens and the following parameters were determined and estimated: growth, pH, sugar consumption, acidity and protein consumption during the kinetic fermentation in MRS. Peptides present in the L. lactis supernatant through HPLC were determined. Results: Growth of 1.2x109 and 4.1x109 CFU/ml at 1.2% bile and 0.5% bile salt was obtained; 1.1x1011, 2.1x1010 and 1.0x1010 CFU/ml for 2.5, 4.5 and 7 pH respectively; and 1.7x1013 and 1.4x1013 CFU/ml for 45 and 38ºC. The lactic strain showed resistance to Cephalothin and Dicloxacilin; C. perfringens, to Penicillin and Dicloxacillin; S. typhimurium and E. coli to Cephalothin; and S. aureus, to Dicloxacillin. L. lactis inhibited E. coli and C. perfringens, and the supernatant included S. aureus. Conclusion: It is concluded that L. lactis present adequate growth in conditions in vitro and inhibited E. coli, C. perfringens and S. aureus but not S. typhimurium.
RESUMO
Se evaluó el proceso fermentativo e inhibición in vitro de L. lactis en Staphylococcus aureus y Staphylococcus epidermidis; así mismo, el crecimiento de L. lactis a tres pH (2,5, 4,5 y 7), sales biliares (0,5, 1 y 2 %), bilis bovina (1 y 1,2 %) y dos temperaturas (38 y 45 °C). Se determinaron péptidos y ácidos orgánicos en sobrenadante de L. lactis por HPLC. Se hizo cinética de fermentación en la que se evaluó: pH, azúcar total, proteína y ácido láctico. Se realizó antibiograma de dicloxacilina, cefepime, penicilina y cefalotina. Se definió la inhibición de L. lactis y su sobrenadante en cepas patógenas. El mejor crecimiento fue a pH de 2,5 (3 x 10(12) UFC/ml); de 1 x 10(10) y 4 x 10(9) UFC/ml para 0,5 % de sales biliares y 1,2 % de bilis bovina, respectivamente; de 3,5 x 10(13) y 3,4 x 10(13) UFC/ml para 38 y 45 °C, respectivamente. El HPLC determinó los péptidos VAR-TIR-VAR y ácido láctico (83,11 %). La cinética de fermentación determinó la fase exponencial a 14:24 h con un valor 77 x 10(10) UFC/ml, valores de pH de 4,284, azúcar 2,33 mg/ml, proteína 1,44 mg/ml y acidez de 0,79 %. Se encontró que S. aureus y S. epidermidis fueron sensibles a todos los antibióticos. Las bacterias patógenas fueron resistentes a la cepa láctica, pero S. epidermidis fue sensible al sobrenadante de L. lactis. Se concluye que Lactobacillus lactis mostró adecuada capacidad de crecimiento, buenos parámetros de fermentación y efecto inhibitorio en cepas de S. aureus y S. epidermidis en condiciones in vitro.
The fermentative process and in vitro inhibition of L. lactis in Staphylococcus aureus and Staphylococcus epidermidis were assessed. The growth of L. lactis at three pH (2.5, 4.5 and 7), bile salts (0.5, 1 and 2 %), bovine bile (1 and 1.2 %) and two temperatures (38 and 45 °C) were evaluated. Peptides and organic acids in supernatant of L. lactis by HPLC were determined. Fermentation kinetics was carried out, evaluating: pH, total sugar, protein and lactic acid. An antibiogram of dicloxacilin, cefepime, penilicin and cefalotin was made. The inhibition of L. lactis and its supernatant were defined in pathogenic strains. The best growth was at a pH of 2.5 (3 x 10(12) UFC/ml); of 1 x 10(10) and 4 x 10(9) UFC/ml for 0.5 % of bile salts and 1.2 % of bovine bile, respectively; of 3.5 x 10(13) and 3.4 x 10(13) UFC/ml for 38 and 45 °C, respectively. The HPLC determined the peptides VAR-TIR-VAR and lactic acid (83.11 %). The fermentation kinetics determined the exponential phase at 14:24 h with a value of 77 x 10(10) UFC/ml, pH values of 4.284, 2.33 mg/ml sugar, 1.44 mg/ml protein and acidity of 0.79 %. It was found that S. aureus and S. epidermidis were sensitive to all antibiotics. The pathogenic bacteria were resistant to the lactic strain, but S. epidermidis was sensitive to the supernatant of L. lactis. The conclusion is that Lactobacillus lactis showed adequate growth capacity, good fermentation parameters and inhibitory effect in strains of S. aureus and S. epidermidis in in vitro conditions.
Avaliou-se o processo fermentativo e a inibição in vitro de L. lactis em Staphylococcus aureus e Staphylococcus epidermidis. Avaliou-se o crescimento de L. lactis a três pH (2,5, 4,5 e 7), sais biliares (0,5, 1 e 2 %), bílis bovina (1 e 1,2 %) e duas temperaturas (38 e 45 °C). Determinaram-se peptídeos e ácidos orgânicos em sobrenadante de L. lactis por HPLC. Fez-se cinética de fermentação, avaliando: pH, açúcar total, proteína e ácido láctico. Realizou-se antibiograma de dicloxacilina, cefepime, penicilina e cefalotina. Definiu-se a inibição de L. lactis e seu sobrenadante em cepas patógenas. o melhor crescimento foi a pH de 2,5 (3 x 10(12) UFC/ ml); de 1 x 10(10) e 4 x 10(9) UFC/ml para 0,5 % de sais biliares e 1,2 % de bílis bovina, respectivamente; de 3,5 x 10(13) e 3,4 x 10(13) UFC/ml para 38 e 45 °C, respectivamente. O HPLC determinou os peptídeos VAR-TIR-VAR e ácido láctico (83,11 %). A cinética de fermentação determinou a fase exponencial a 14h: 24m com um valor 77 x 10(10) UFC/ml, valores de pH de 4,284, açúcar 2,33 mg/ml, proteína 1,44 mg/ml e acidez de 0,79 %. Constatou-se que S. aureus e S. epidermidis foram sensíveis a todos os antibióticos. As bactérias patógenas foram resistentes à cepa láctica, mas S. epidermidis foi sensível ao sobrenadante de L. lactis. Conclui-se que Lactobacillus lactis mostrou uma adequada capacidade de crescimento, bons parâmetros de fermentação e efeito inibitório em cepas de S. aureus e S. epidermidis em condições in vitro.
RESUMO
The history of antibiotics begins with the first observations of Pasteur and Joubert about microbial antagonism at the end of the XIX century. Three types of antagonism were studied: bacterial killing by other bacteria, virus against bacteria and blockade of cellular receptors by bacterial filtrates. In the first type, the piocianase from Pseudomonas aeruginosaand the activity of Bacillus subtilisover Mycobacterium tuberculosiswere the better examples; in the second, the French D'Herelle was a pioneer using bacteriophages against Shigella dysenteriae;and another French, Besredka, headed the third line with his "antivirus thérapie" on Staphylococcus aureus.
La historia de los antibióticos comienza con las primeras observaciones de Pasteur y Joubert sobre el antagonismo entre bacterias, realizadas a fines del siglo XIX. Tres tipos de antagonismo fueron objeto de estudio: bacterias que mataban a otras bacterias, virus capaces de lisar bacterias y bloqueo de receptores celulares del huésped por filtrados bacterianos. En el primer tipo de antagonismo, los mejores ejemplos fueron la actividad de la piocianasa producida por Pseudomonas aeruginosay la acción de Bacillus subtilissobre Mycobacterium tuberculosis;en el segundo descuella el francés D'Herelle como pionero al emplear bacteriófagos contra Shigella dysenteriae,en tanto que el ucraniano-francés Besredka encabeza el tercer tipo con su "antivirusthérapie "en Syaphylococcus aureus.Con el tiempo, la primera línea triunfaría, con una ligera modificación, al enfrentar hongos contra bacterias.