The modified method of luxol fast blue for paraffin-embedded myelin sheath staining / El método modificado de luxol fast blue para la tinción de mielina fijada en parafina

SUMMARY: Histological techniques are the study of animal and human tissues through staining and examining them under a microscope. To demonstrate the axonal degeneration and demyelination in histological studies, the Luxol Fast Blue staining is gold standard techniques. In this study, a new histochemical method based on modified Luxol Fast Blue for the staining of the myelin sheath in sciatic nerve tissues described. The sciatic nerves of rats were removed and then the sciatic nerve was immersed in 10 % formaldehyde for one week and embedded in paraffin block. Next, thin sections (5 µm) were cut, using a microtome and stained with conventional and modified Luxol Fast Blue. Our results showed that a new method of modified Luxol Fast Blue staining can accurately identify the myelin in the sciatic nerve fibers. The current study showed that the Luxol Fast Blue combination with Light Green has a good effect on myelin coloration, and the results of this study are comparable to LFB combination with Sirius red.

RESUMEN: Las técnicas histológicas son el estudio de tejidos animales y humanos mediante tinción y examen bajo un microscopio. Para demostrar la degeneración axonal y la desmielinización en estudios histológicos, la tinción Luxol Fast Blue es una técnica estándar de oro. En este estudio, se describe un nuevo método histoquímico basado en Luxol Fast Blue modificado para la tinción de mielina en los tejidos del nervio ciático. Se seccionaron los nervios ciáticos de ratas y luego el nervio ciático se sumergió en formaldehído al 10 % durante una semana y se fijó en bloque de parafina. Posteriormente, se cortaron secciones delgadas (5 µm) usando un microtomo y se tiñeron con Luxol Fast Blue convencional y modificado. Nuestros resultados mostraron que un nuevo método de tinción Luxol Fast Blue modificado puede identificar con precisión la mielina en las fibras del nervio ciático. El estudio actual mostró que la combinación Luxol Fast Blue con Light Green es un buen efecto sobre la coloración de mielina, y los resultados de este estudio son comparables a la combinación LFB con Sirius red.

Methods for glomerular quantification in dogs: a comparative study / Metodologias para quantificação glomerular em cães: um estudo comparativo

ABSTRACT: It was evaluated the different methodologies for glomerular enumeration described in the literature in a quantitative, double-blind study on the number of glomeruli present in kidney biopsy specimens obtained using a Tru-cut-type biopsy needle. Eighteen samples were taken (n=18) from various regions of canine kidneys harvested immediately after euthanasia. Sample collection was carried out using Tru-cut-type, semi-automated, 16 gauge needles. Reading and evaluation of the specimens were performed independently by four researchers by means of eye loupe inspection, light microscopy, light microscopy with a reduced condenser aperture, and dissection microscopy. Samples were also subjected to histopathological evaluation for comparison purposes. There was no inter-researcher variation for any of the tested methods. The glomerular counts obtained using light microscopy with reduced condenser aperture were similar to those reported in the histopathological evaluation (P=0.44);whereas, the other glomerular enumeration methods yielded significantly lower counts when compared to the histopathological analysis (eye loupe inspection: P<0.01; conventional light microscopy: P=0.02; dissection microscopy: P<0.01).Light microscope with lowering of the condenser lens delivers better results than conventional light microscopy and eye loupe inspection. Results obtained using dissection microscopy and eye loupe inspection did not correlate well with those provided by histopathological evaluation; consequently, these two methods should be avoided.

RESUMO: Avaliou-se as diferentes metodologias de quantificação glomerular descritas na literatura em um estudo quantitativo, duplo-cego, sobre o número de glomérulos presentes em amostras de biópsias renais obtidas com agulha de biópsia tipo Tru-cut. Dezoito amostras foram coletadas (n=18) de várias regiões de rins caninos colhidos imediatamente após a eutanásia. A coleta das amostras foi realizada com agulhas semi-automáticas de calibre 16, tipo Tru-cut. A leitura e avaliação das amostras foram realizadas de forma independente por quatro pesquisadores por meio de inspeção visual, microscopia de luz, microscopia de luz com redução da lente condensadora e microscopia de dissecção. As amostras também foram submetidas à avaliação histopatológica para fins de comparação e variação do pesquisador para qualquer um dos métodos testados. As contagens glomerulares obtidas por microscopia de luz com redução da lente condensadora foram semelhantes àquelas encontradas na avaliação histopatológica (P=0.44), enquanto que os outros métodos de quantificação glomerular produziram contagens significativamente mais baixas a análise histopatológica (inspeção da lupa dos olhos: P<0.01; microscopia de luz convencional: P=0.02; microscopia dissecação: P<0.01). Microscópio de luz com abaixamento da lente condensadora fornece melhores resultados do que microscopia de luz convencional e inspeção da lupa. As contagens obtidas usando microscopia de dissecção e inspeção de lupa de olho não se correlacionaram bem com aqueles fornecidos pela avaliação histopatológica; consequentemente, estes dois métodos devem ser evitados.

Light microscopy and surface topography of Urotrema scabridum and Renschetrema indicum (Digenea) from Rhinopoma hardwickii (Chiroptera): first report in Egypt / Microscopia de luz e topografia superficial de Urotrema scabridum e Renschetrema indicum (Digenea) de Rhinopoma hardwickii (Chiroptera): primeiro relato no Egito

Abstract This report introduced the description of two different species of digenean parasites isolated from the intestine of Rhinopoma hardwickii with new host and locality records in Egypt. The recovered helminthes were studied morphologically and morphometrically by light microscopy and the surface topography of the two species was elucidated by scanning electron microscopy (SEM). Urotrema scabridum had an elongated body, testes were tandem, ovaries were pretesticular, and vitelline follicles were observed in 2 lateral fields. SEM showed that the anterior half was covered with random and backwardly directed tegument spines. The lumen of the oral sucker was as a longitudinal slit encircled with type I dome-shaped papillae. The ventral sucker was wrinkled and covered by tongue-shaped tegument spines and several scattered papillae. Renschetrema indicum had a fusiform body with minute spines densely distributed in the anterior part of the body; testes sub-triangular, ovary fusiform; vitellaria were randomly distributed around the ceca and genital organs. SEM showed that the fore-body was ventrally concave and surrounded by cytoplasmic ridges equipped with numerous closely packed claw-shaped spines. The oral sucker was externally surrounded by two circles of papillae while the lip of the ventral sucker was rounded and surrounded by three papillae located in its upper end and anterolaterally.

Resumo O trabalho descreve duas espécies diferentes de parasitas digêneos isolados do intestino de Rhinopoma hardwickii, com novos registros de hospedeiros e localidade no Egito. Os helmintos recuperados foram estudados morfologicamente e morfometricamente por microscopia óptica, e a topografia superficial das duas espécies foi verificada por microscopia eletrônica de varredura (MEV). Urotrema scabridum apresenta um corpo alongado, testículos em tandem, ovários localizados pré-testiculares e os folículos vitelinos foram observados em 2 campos laterais. A microscopia eletrônica (ME) mostrou que a metade anterior do tegumento estava coberta com espinhos aleatoriamente e voltados para trás. O lúmen da ventosa oral apresentava-se como uma fenda longitudinal cercada de papilas em forma de cúpula tipo I. A ventosa ventral estava enrrugada e coberta por espinhos no tegumento em forma de língua e com várias papilas dispersas. Renschetrema indicum tinha um corpo fusiforme com espinhos diminutos densamente distribuídos na parte anterior do corpo; testículos sub-triangulares, ovários fusiformes; as glândulas vitelínicas estavam distribuídas aleatoriamente em torno do ceco e dos órgãos genitais. À ME a região anterior mostrou-se ventralmente côncava e cercada por cristas citoplasmáticas equipadas com numerosos espinhos em forma de unhas muito próximos. A ventosa oral apresentou-se externamente cercada por duas fileiras de papilas, enquanto a borda da ventosa ventral mostrou-se arredondada e cercada por três papilas localizadas na sua extremidade superior e antero-lateralmente.