Atividade antifúngica de nanofibras de policaprolactona/nistatina: estudo in vitro e in vivo / Antifungal activity of polycaprolactone/nystatin nanofibers: in vitro and in vivo study

Este estudo avaliou a eficácia in vitro e in vivo de mantas de nanofibras (NF) de policaprolactona (PCL) incorporadas com nistatina (NIS) no tratamento da estomatite protética (EP) em modelos animais. NF foram sintetizadas com diferentes concentrações de NIS, totalizando quatro soluções: PCL puro, PCL/NIS 0,045 g, PCL/NIS 0,090 g e PCL/NIS 0,225 g. A liberação da NIS foi analisada por espectroscopia Ultravioleta-Visível. A capacidade das mantas de inibirem o biofilme de Candida albicans, principal fator etiológico da EP, dividindo-se cinco grupos (N=5) compostos por um grupo com controle de células de C. albicans e com PCL puro, além das três concentrações de NIS. A seguir, foi analisada a viabilidade celular em queratinócitos humanos (HaCat) por meio do teste colorimétrico de resazurina. Cinco grupos foram divididos (N=10): controle celular, PCL puro e as três concentrações de NIS. Em modelos animais de ratos Wistar albinos (N=18), dispositivos palatinos (DP) de resina acrílica foram confeccionados simulando próteses totais e utilizados para a indução da EP. Para isso, DP contaminados com C. albicans foram cimentados na região molar da cavidade bucal dos animais e permaneceram em boca por 48 h. Após esse período, os DP foram removidos e os animais foram divididos em três grupos: (C) controle; (B1) com tratamento por mantas de PCL/NIS 0,045 g e (B2) PCL/NIS 0,225 g, com N=6. Então novos DP, livres de contaminação, foram cimentados na cavidade oral dos animais e permaneceu por mais 48 h. Após esse período, os animais foram eutanasiados, a contagem de UFC/ mL foi realizada e os palatos foram coletados para a análise histológica. A curva padrão de NIS obtida apresentou R2 de 0,99. As três concentrações de NF apresentaram liberação de NIS, com pico no tempo de 6 h e valores de 66,26 µg/ mL para PCL/NIS 0,045 g, de 333,87 µg/ mL para PCL/NIS 0,090 g e 436,51 µg/ mL para PCL/NIS 0,225 g, constantes até o fim do experimento. Os grupos com NIS reduziram em 2,5 log10 de crescimento do biofilme fúngico em relação aos grupos sem tratamento, Controle e PCL, sem diferença estatística significativa. Não foi observada citotoxicidade nas células HaCat, com viabilidade celular de 93,7% para PCL/NIS 0,045 g, 72,6% para PCL/NIS 0,090 g e 72,4% para PCL/NIS 0,225 g. A indução da EP nos três grupos foi possível e, porém, sem redução significativa na contagem de UFC/ mL de C. albicans nos grupos B1 e B2. Na análise histológica do grupo C pôde-se observar infiltração de hifas de Candida na camada queratinizada, presença de células inflamatórias formando micro abscessos e um discreto infiltrado inflamatório no tecido conjuntivo subjacente ao epitélio infectado. Nos grupos B1 e B2 não foram encontradas alterações epiteliais, concluindo-se que as NF demonstraram atividade antifúngica in vitro e foram efetivas na prevenção da penetração de hifas no tecido palatino de animais com DP (AU)

This study evaluated the in vitro and in vivo efficacy of nanofiber (NF) mats of polycaprolactone (PCL) incorporated with nystatin (NIS) in the treatment of denture stomatitis (DS) in animal models. NFs were synthesized with different concentrations of NIS, totaling four solutions: pure PCL, PCL/NIS 0.045 g, PCL/NIS 0.090 g, and PCL/NIS 0.225 g. The release of NIS was analyzed by Ultraviolet-Visible spectroscopy. The ability of the mats to inhibit Candida albicans biofilm, the main etiological factor of DS, was assessed by dividing five groups (N=5) composed of a group with C. albicans cell control and with pure PCL, in addition to the three concentrations of NIS. Next, cell viability in human keratinocytes (HaCat) was analyzed using the resazurin colorimetric test. Five groups were divided (N=10): cell control, pure PCL, and the three concentrations of NIS. In albino Wistar rat animal models (N=18), palatal devices (PD) made of acrylic resin were fabricated to simulate total prostheses and used to induce DS. For this, PD contaminated with C. albicans were cemented in the molar region of the animals' oral cavity and remained in the mouth for 48 hours. After this period, the PDs were removed, and the animals were divided into three groups: (C) control; (B1) treated with PCL/NIS 0.045 g mats, and (B2) PCL/NIS 0.225 g, with N=6. Then new, uncontaminated PDs were cemented in the animals' oral cavity and remained for another 48 hours. After this period, the animals were euthanized, UFC/ mL counts were performed, and the palates were collected for histological analysis. The standard NIS curve obtained showed an R2 of 0.99. The three concentrations of NF showed NIS release, with a peak at 6 h and values of 66.26 µg/ mL for PCL/NIS 0.045 g, 333.87 µg/ mL for PCL/NIS 0.090 g, and 436.51 µg/ mL for PCL/NIS 0.225 g, remaining constant until the end of the experiment. The groups with NIS reduced fungal biofilm growth by 2.5 log10 compared to the untreated groups, Control and PCL, with no significant statistical difference. No cytotoxicity was observed in HaCat cells, with cell viability of 93.7% for PCL/NIS 0.045 g, 72.6% for PCL/NIS 0.090 g, and 72.4% for PCL/NIS 0.225 g. Induction of DS in the three groups was possible; however, there was no significant reduction in UFC/ mL counts of C. albicans in groups B1 and B2. Histological analysis of group C revealed infiltration of Candida hyphae in the keratinized layer, presence of inflammatory cells forming micro abscesses, and a discreet inflammatory infiltrate in the connective tissue underlying the infected epithelium. No epithelial alterations were found in groups B1 and B2, concluding that NFs demonstrated in vitro antifungal activity and were effective in preventing hyphal penetration into palatal tissue in animals with PD.(AU)

Efficacy of copper sulphate on candida albicans on heat-polymerized acrylic resin / Eficacia del sulfato de cobre sobre candida albicans en resinas acrílicas de termocurado

The ageing of population is increasing, and a great percentage of these patients wear removable prostheses, and can suffer denture stomatitis, a condition that has been associated with candidiasis. Aims: To evaluate in vitro the effectiveness of Copper Sulfate against Candida albicans in samples of heat-polymerized acrylic resin, compared to nystatin, sodium hypochlorite and chlorhexidine. Materials and Methods: Initially, the minimum inhibitory concentration (MIC) of copper sulfate for Candida albicans was determined by microdilution. Then, 54 resin samples were divided into 6 treatment groups corresponding to Nystatin 100.000 UI, Sodium Hypochlorite 0.5%, chlorhexidine 0.12%, Copper Sulfate 4.7µg/ml, Copper Sulfate 9.4µg/ml and physiological saline solution, in which samples were submerged for 6 hours. Resin samples were then washed and cultured on solid media at 37°C for 72 hours. The number of colony-forming units was determined using a Quebec colony counter. The statistical analysis was performed using the Kruskal-Wallis test and the Mann-Whitney U test. Results: Copper sulfate at a concentration of 9.4µg/ml presented a similar effectiveness as the other control products regarding the reduction in the number of colonies of Candida albicans post-treatment. Conclusion: The effectiveness of copper sulfate against Candida albicans on acrylic resin was similar to that of nystatin, sodium hypochlorite and chlorhexidine.

En las últimas décadas se ha observado un aumento de la población de adultos mayores, de los cuales un gran porcentaje es portador de prótesis removible, y dos tercios pueden sufrir estomatitis subprotésica, enfermedad que es asociada a infecciones como candidiasis. Objetivo: Evaluar la efectividad antimicótica in vitro del sulfato de cobre en placas de resinas acrílicas de termocurado inoculadas con Candida albicans, frente a Nistatina, Hipoclorito de Sodio y Clorhexidina. Material y Métodos: Inicialmente, y mediante microdilución del sulfato de cobre, se determinó la concentración mínima inhibitoria (CMI) para Candida albicans. En la fase experimental, 54 muestras de resina se dividieron en 6 grupos correspondientes a Nistatina 100.000 UI, Hipoclorito 0.5%, Clorhexidina 0.12%, Sulfato de Cu 4.7µg/ml, Sufato de Cu 9.4 µg/ml y suero fisiológico. Las muestras fueron sumergidas en estos agentes por 6 horas, para posteriormente ser lavadas y cultivada en medios solidos a 37°C por 72 horas. Luego se realizó el conteo de unidades formadoras de colonias mediante contador tipo Quebec. El análisis estadístico se realizó mediante la prueba de Kruskal-Wallis y la prueba U de Mann-Whitney. Resultado: El sulfato de cobre a una concentración de 9.4µg/ ml presentó una efectividad similar a los otros productos, en la reducción de colonias de Candida albicans. Conclusión: La efectividad del sulfato de cobre contra Candida albicans fue semejante a la de Nistatina, Hipoclorito y Clorhexidina.

Atividade antifúngica do a-terpinen sobre Candida albicans / Antifungal activity of a-terpinen on Candida albicans

Objetivo: avaliar a atividade antifúngica do a- terpinen sobre culturas planctonicas e biofilme de Candida albicans. Material e Métodos: Primeiramente, foi determinada a Concentração Inibitória Mínima (CIM) e a Concentração Fungicida Mínima (CFM) do a-terpinen sobre microrganismos planctônicos. A Nistatina foi utilizada como controle positivo. Biofilme de Candida albicans foi desenvolvido e, após o tratamento com diferentes concentrações de α-terpinen, foi quantificado em UFC/mL, além da atividade metabólica das células ser avaliada por XTT. Resultados: a menor concentração capaz de inibir o crescimento (CIM) foi 0,2 % para o a-terpinen e 4 µg/mL para a Nistatina. Na CIM, os resultados mostraram que a partir da concentração 0,05 % de α-terpinen e 2 µg/mL de Nistatina houve diminuição de C.albicans quando comparado ao controle. A CFM foi para a-terpinen 0,2 % e Nistatina 8 µg/mL. Na quantificação as concentrações eficazes foram de α-terpinen (0,1%) e Nistatina (128µg/mL), e no teste do XTT, observou-se que α -terpinen (0,1%) e Nistatina (256µg/mL) diminuem a viabilidade quando comparado com o controle. Conclusão: Assim, pode-se afirmar que α -terpineol pode ser uma alternativa para tratamento de infecções fúngicas.

Objective: to evaluate the antifungal activity of a-terpinen on planktonic cultures and biofilm of Candida albicans. Material and Methods: first, Minimum Inhibitory Concentration (MIC) and Minimum Fungicidal Concentration (CFM) of a-terpinen were determined. Nystatin was used as a positive control. Biofilm of Candida albicans was developed and, after treatment with different concentrations of a-terpinen, was quantified in CFU/mL, in addition to metabolic activity of the cells being evaluated by XTT. Results: the lowest concentration able to inhibit the growth (MIC) was 0.2% for a-terpinen and 4 µg / mL for Nystatin. Results showed that from the concentration 0.05% of α -terpinen and 2 µg / mL of Nystatin, there was a decrease of Candida albicans when compared to the control, in planktonic culture. CFM was 0.2% for α -terpinen and 8 µg / mL for Nystatin. Regarding the quantification, effective concentrations were α-terpinen (0.1%) and Nystatin (128 µg/mL), and in the XTT test, α-terpinen (0.1%) and Nystatin (256 µg/mL) decreased metabolic activity when compared to control. Conclusion: Thus, it can be stated that a-terpineol may be an alternative for the treatment of fungal infections.

Avaliação in vitro do potencial erosivo e cariogênico de antifúngicos tópicos / In vitro evaluation of erosive and cariogenic potential of topical antifungal agents

Introdução: a candidíase é uma infecção fúngica oportunista, causada pela proliferação e disseminação de espécies de Candida, que pode acometer a cavidade oral. Dentre os antifúngicos mais utilizados e de uso tópico, a nistatina é considerada o medicamento de primeira escolha. Objetivo: avaliar as propriedades físico-químicas de diferentes marcas de nistatina disponíveis no mercado, incluindo o pH, a acidez total titulável (ATT) e a determinação de sólidos solúveis totais (SST). Metodologia: trata-se de um estudo experimental in vitro, constituído por uma amostra de oito diferentes marcas de nistatina em suspensão oral de uso tópico. Foi analisado o potencial erosivo e cariogênico dessas soluções mediante a determinação de pH, ATT e SST (°Brix). Resultados: no tocante ao pH, verificou-se que a média obtida foi de 6,05 (± 0,66). Dois dos medicamentos analisados (marcas A e H) apresentaram pH abaixo do crítico para a dissolução do esmalte dental. Quanto à ATT das soluções, os valores variaram de 1,9 a 14,53 mL para atingir o pH neutro, indicando que as marcas B, C e E podem levar mais tempo para ser neutralizadas em razão da quantidade de solução necessária. A análise do °Brix revelou que a marca H apresentou o maior teor de açúcares em sua composição (44,9%). Conclusão: a formulação de nistatina da marca H apresentou pH endógeno mais crítico e percentual de sólidos solúveis totais elevado, sendo, portanto, a medicação com maior fator de risco para o desenvolvimento de cárie e erosão dentária, devendo ser consideradas as doses e frequências de uso, bem como os hábitos de higiene oral do paciente

Introduction: candidiasis is an opportunistic fungal infection caused by the proliferation and spread of Candida species that can affect the oral cavity. Among the most commonly used topical antifungal agents, nystatin is considered the first choice drug. Methodology: to evaluate the physical and chemical properties of different brands of nystatin available in the market, including pH, titratable acidity and determination of total soluble solids. Results: Regarding pH, it was verified that the mean obtained was 6.05 (± 0.66). Two of the analyzed drugs (A and H) presented pH below that considered critical for the dissolution of dental enamel. As for the titratable total acidity of the solutions, values ranged from 1.9 to 14.53 mL to reach neutral pH, indicating that the B, C and E marks may take longer to neutralize because of the amount of solution required. The analysis of ° Brix revealed that the H mark had the highest sugar content in its composition (44.9%). Conclusion: Nystatin brand H presented the worst indices in terms of endogenous pH and total sugar percentage, being therefore the medication with the highest risk factor for the development of caries and dental erosion.

Activity of the aqueous extract of Schinus terebinthifolius Raddi on strains of the Candida genus / Atividade do extrato aquoso de Schinus terebinthifolius Raddi sobre cepas do gênero Candida

ABSTRACT Objectives: To evaluate the antifungal susceptibility profile of the aqueous extract of the bark of Schinus terebinthifolius Raddi against the strains of the genus Candida. Methods: By using the disk diffusion method, 50 samples of the genus Candida (Candida albicans; Candida krusei; Candida glabrata; and Candida tropicalis), isolated from patients receiving treatment at Hospital Santa Casa de Misericórdia de São Paulo, and 1 American Type Culture Collection (ATCC) sample of each species were tested against: the isolated aqueous extract of the bark of Schinus terebinthifolius Raddi, isolated nystatin, and the association of nystatin and the aqueous extract of Schinus terebinthifolius Raddi. Results: There were no significant differences regarding the different strains of Candida tested. In the presence of the aqueous extract of Schinus terebinthifolius Raddi, no inhibition halo was visible. Isolated nystatin formed an inhibition halo measuring respectively 18.50 mm and 19.50 mm for the Candida albicans species and the others referred to as non-Candida albicans (Candida krusei; Candida glabrata; and Candida tropicalis). The association of nystatin and the aqueous extract of Schinus terebinthifolius Raddi resulted in inhibition halos measuring 14.25 mm and 16.50 mm respectively. The comparisons of these results are statistically significant (p < 0,001). Conclusion: The aqueous extract of Schinus terebinthifolius Raddi showed no antifun-gal activity in vitro against the strains tested, whereas the association of nystatin and the aqueous extract of Schinus terebinthifolius Raddi caused a decrease in the inhibition halo when compared with isolated nystatin.

RESUMO Objetivos: Avaliar o perfil de susceptibilidade antifúngica do extrato aquoso das cascas de Schinus terebinthifolius Raddi frente às cepas do gênero Candida. Métodos: Por meio do método de difusão em disco, 50 amostras do gênero Candida (Candida albicans, Candida krusei, Candida glabrata e Candida tropicalis) provenientes de pacientes do Hospital da Santa Casa de Misericórdia de São Paulo, e 1 amostra American Type Culture Collection (ATCC) de cada espécie foram testadas frente ao extrato aquoso das cascas de Schinus terebinthifolius Raddi isolado, nistatina isolada, e a associação da nistatina ao extrato aquoso de Schinus terebinthifolius Raddi. Resultados: Não houve diferenças significantes em relação às diferentes espécies de cepas de Candida testadas. O extrato aquoso de Schinus terebinthifolius Raddi não formou halo de inibição. A nistatina isolada formou halo de inibição de 18,50 mm e 19,50 mm respectivamente para as espécies Candida albicans e as demais nomeadas como não Candida albicans (Candida krusei, Candida glabrata e Candida tropicalis). A associação da nistatina ao extrato aquoso de Schinus terebinthifolius Raddi resultou no halo de inibição de 14,25 mm e 16,50 mm respectivamente, sendo que as comparações destes resultados são estatisticamente significantes (p < 0,001). Conclusão: O extrato aquoso de Schinus terebinthifolius Raddi não demonstrou propriedade antifúngica in vitro frente às cepas testadas, e a associação da nistatina ao extrato aquoso de Schinus terebinthifolius Raddi causou a diminuição do halo de inibição quando comparado à nistatina isolada.

Obtenção de gel mucoadesivo de nistatina para o tratamento da candidíase oral. Desenvolvimento e caracterização de dispersões sólidas de nistatina / Mucoadhesive gel obtaining nystatin for the treatment of oral candidiasis. Development and characterization of solid dispersions of nystatin

A nistatina (NYS) é o fármaco de primeira escolha no tratamento da candidíase oral, que frequentemente acomete mais os indivíduos imunocomprometidos e pacientes com outras desordens (diabetes não tratada, neoplasias, imunodeficiências). No mercado brasileiro, a NYS é encontrada na forma de suspensão oral aquosa, onde o procedimento para sua administração consiste em bochechar o medicamento. Apesar de haver a indicação de que se mantenha o contato direto entre fármaco e a mucosa oral, na qual se encontra a Candida spp., o que aumentaria expressivamente o sucesso terapêutico, a suspensão não apresenta tal propriedade. Assim, a NYS que é fármaco com ação efetiva contra a candidíase oral, é considerada pertencente à Classe IV do Sistema de Classificação Biofarmacêutica, ou seja, apresenta baixa solubilidade e baixa permeabilidade. A baixa solubilidade pode comprometer sua disponibilidade na cavidade oral, e consequentemente, sua ação farmacológica. Diante desse quadro, o objetivo do presente trabalho foi o desenvolvimento de dispersões sólidas de NYS para o tratamento da candidíase oral, e sua posterior incorporação em gel mucoadesivo oral, favorecendo a formulação no local de ação. As dispersões sólidas são sistemas farmacêuticos, onde um fármaco pouco solúvel em água encontra-se dispersado em um carreador, no estado sólido. Os carreadores normalmente são hidrofílicos, o que permite que esses sistemas sejam empregados para aumentar a solubilidade aquosa do fármaco. Assim, foram desenvolvidas as dispersões sólidas de NYS, pelo método de eliminação do solvente, empregando como carreadores, lactose, HPMC, poloxamer 407 e poloxamer 188. Essas foram submetidas à caracterização por análise térmica, usando os ensaios de calorimetria exploratória diferencial (DSC) e termogravimetria/termogravimetria derivada (TG/DTG). Dentre essas dispersões sólidas, aquelas que se mostraram com comportamento térmico sugerindo a formação de um novo "sistema", foram analisadas por meio de ensaio de solubilidade. Dessa forma, a formulação NYS DS G2 (49) se destacou, pois apresentou maior solubilidade em água (4,484 mg/mL); em pH 5,5 (4,249 mg/mL) e em pH 7,0 (4,293 mg/mL), ou seja, houve um aumento de 1,426 vezes em água; 4,227 vezes em pH 5,5; e 2,743 vezes em pH 7,0. Essa formulação foi, por fim avaliada por difração de raio-X e espectroscopia de infravermelho com transformada de Fourier, técnicas que corroboraram com a análise térmica quanto à indicação de formação da dispersão sólida. Por sua vez, essa dispersão sólida foi incorporada em 4 bases de géis mucoadesivos de carbopol ® 934 PNF, alterando apenas a concentração do polímero (0,5; 1,0; 1,5; 2,0 %p/p). Foi observado que a liberação de NYS DS G2 (49) foi superior, quando comparada à liberação de NYS MP a partir do gel, e através do ensaio de mucoadesão, percebeu-se que os géis desenvolvidos apresentaram propriedades mucoadesivas compatíveis com relatos na literatura, independentemente da quantidade de carbopol ® empregada. As características reológicas foram distintas, e foi observado que as formulações Gel A e Gel B, que possuem menor quantidade de polímero, tiverem um indicativo de comportamento de fluido newtoniano, diferente dos demais, o que pode não ser desejado para esse tipo de forma farmacêutica tópica e semi-sólida. Ao final desse trabalho, pode-se concluir que foi possível desenvolver um sistema farmacêutico na forma de dispersão sólida com maior solubilidade que a NYS pura, e sua incorporação em uma forma farmacêutica mucoadesiva, e que a liberação da NYS na forma DS foi muito superior que o fármaco na forma "convencional", o que permite que a NYS esteja mais disponível na cavidade oral, e também junto à mucosa bucal, o que levaria a efeito farmacológico mais efetivo do antifúngico

Nystatin (NYS) is the drug of first choice in the treatment of oral candidiasis that most often affect immunocompromised individuals, and patients with other disorders. In the Brazilian market, NYS is found in the form of aqueous oral suspension, a medication used in the form of mouthwash. Although there is an indication to maintain direct contact between the drug and the oral mucosa, where Candida spp. is found, as well as where therapeutic success would significantly be increased, the suspension has no such property. Thus, the NYS is an effective drug against oral candidiasis, and belongs to Class IV of the Biopharmaceutical Classification System, it has low solubility and low permeability. The low solubility can compromise its availability in the oral cavity, and consequently, its pharmacological action. Given this situation, the objective of this work was the development of solid dispersions of NYS for the treatment of oral candidiasis, and its subsequent incorporation into oral mucoadhesive gel, in order to facilitate its action. Solid dispersions are pharmaceutical systems, in which a solid drug poorly soluble in water is dispersed in a carrier. These carriers are usually hydrophilic, and this allows the systems to be employed in order to increase the aqueous solubility of the drug. Thus, the solid NYS dispersions were developed by the solvent evaporation method, employing lactose, HPMC, poloxamer 407 and poloxamer 188 as carrier. These samples were subjected to characterization by thermal analysis, using differential scanning calorimetry (DSC) and thermogravimetry / derivative thermogravimetry (TG / DTG). Among these solid dispersions, those samples which showed a specific thermal behavior suggesting the formation of new "system" were analyzed by solubility test. Thus, the NYS DS G2 formulation (49) stood out, once it showed greater solubility in water (4.484 mg/mL); at pH 5.5 (4.249 mg/mL) and pH 7.0 (4.293 mg/mL), in other words, an increase of 1,426 times in water; 4,227 times at pH 5.5; and 2,743 times at pH 7.0. This formulation was finally evaluated by X-ray diffraction, infrared spectroscopy with Fourier transform, techniques that corroborate the thermal analysis, indicating the formation of the solid dispersion. On the other hand, this solid dispersion was incorporated into 4 Carbopol ® 934 PNF mucoadhesive gels, with a variation of the polymer concentration. It was observed that NYS is improved of delivery from the gels, employing mucoadhesion test, and was also observed that the gels have mucoadhesive properties consistent with reports in the literature. However, the rheological characteristics are different, and it was observed that the Gel A and Gel B formulations, which has a lower amount of polymer behaved as a Newtonian fluid, which may not be desired for this type of topical gel. As conclusion, it was possible to develop a pharmaceutical system in the form of solid dispersion with greater solubility than the pure NYS, and their incorporation in a mucoadhesive dosage form and the release of NYS as DS was far superior wherein the drug in the "conventional" manner, which allows the NYS is longer available in the oral cavity, and also adjacent to the buccal mucosa, leading to more effective pharmacological effect of the antifungal agent

Obtenção de gel mucoadesivo de nistatina para o tratamento da candidíase oral. Desenvolvimento e caracterização de dispersões sólidas de nistatina / Mucoadhesive gel obtaining nystatin for the treatment of oral candidiasis. Development and characterization of solid dispersions of nystatin

A nistatina (NYS) é o fármaco de primeira escolha no tratamento da candidíase oral, que frequentemente acomete mais os indivíduos imunocomprometidos e pacientes com outras desordens (diabetes não tratada, neoplasias, imunodeficiências). No mercado brasileiro, a NYS é encontrada na forma de suspensão oral aquosa, onde o procedimento para sua administração consiste em bochechar o medicamento. Apesar de haver a indicação de que se mantenha o contato direto entre fármaco e a mucosa oral, na qual se encontra a Candida spp., o que aumentaria expressivamente o sucesso terapêutico, a suspensão não apresenta tal propriedade. Assim, a NYS que é fármaco com ação efetiva contra a candidíase oral, é considerada pertencente à Classe IV do Sistema de Classificação Biofarmacêutica, ou seja, apresenta baixa solubilidade e baixa permeabilidade. A baixa solubilidade pode comprometer sua disponibilidade na cavidade oral, e consequentemente, sua ação farmacológica. Diante desse quadro, o objetivo do presente trabalho foi o desenvolvimento de dispersões sólidas de NYS para o tratamento da candidíase oral, e sua posterior incorporação em gel mucoadesivo oral, favorecendo a formulação no local de ação. As dispersões sólidas são sistemas farmacêuticos, onde um fármaco pouco solúvel em água encontra-se dispersado em um carreador, no estado sólido. Os carreadores normalmente são hidrofílicos, o que permite que esses sistemas sejam empregados para aumentar a solubilidade aquosa do fármaco. Assim, foram desenvolvidas as dispersões sólidas de NYS, pelo método de eliminação do solvente, empregando como carreadores, lactose, HPMC, poloxamer 407 e poloxamer 188. Essas foram submetidas à caracterização por análise térmica, usando os ensaios de calorimetria exploratória diferencial (DSC) e termogravimetria/termogravimetria derivada (TG/DTG). Dentre essas dispersões sólidas, aquelas que se mostraram com comportamento térmico sugerindo a formação de um novo "sistema", foram analisadas por meio de ensaio de solubilidade. Dessa forma, a formulação NYS DS G2 (49) se destacou, pois apresentou maior solubilidade em água (4,484 mg/mL); em pH 5,5 (4,249 mg/mL) e em pH 7,0 (4,293 mg/mL), ou seja, houve um aumento de 1,426 vezes em água; 4,227 vezes em pH 5,5; e 2,743 vezes em pH 7,0. Essa formulação foi, por fim avaliada por difração de raio-X e espectroscopia de infravermelho com transformada de Fourier, técnicas que corroboraram com a análise térmica quanto à indicação de formação da dispersão sólida. Por sua vez, essa dispersão sólida foi incorporada em 4 bases de géis mucoadesivos de carbopol ® 934 PNF, alterando apenas a concentração do polímero (0,5; 1,0; 1,5; 2,0 %p/p). Foi observado que a liberação de NYS DS G2 (49) foi superior, quando comparada à liberação de NYS MP a partir do gel, e através do ensaio de mucoadesão, percebeu-se que os géis desenvolvidos apresentaram propriedades mucoadesivas compatíveis com relatos na literatura, independentemente da quantidade de carbopol ® empregada. As características reológicas foram distintas, e foi observado que as formulações Gel A e Gel B, que possuem menor quantidade de polímero, tiverem um indicativo de comportamento de fluido newtoniano, diferente dos demais, o que pode não ser desejado para esse tipo de forma farmacêutica tópica e semi-sólida. Ao final desse trabalho, pode-se concluir que foi possível desenvolver um sistema farmacêutico na forma de dispersão sólida com maior solubilidade que a NYS pura, e sua incorporação em uma forma farmacêutica mucoadesiva, e que a liberação da NYS na forma DS foi muito superior que o fármaco na forma "convencional", o que permite que a NYS esteja mais disponível na cavidade oral, e também junto à mucosa bucal, o que levaria a efeito farmacológico mais efetivo do antifúngico

Nystatin (NYS) is the drug of first choice in the treatment of oral candidiasis that most often affect immunocompromised individuals, and patients with other disorders. In the Brazilian market, NYS is found in the form of aqueous oral suspension, a medication used in the form of mouthwash. Although there is an indication to maintain direct contact between the drug and the oral mucosa, where Candida spp. is found, as well as where therapeutic success would significantly be increased, the suspension has no such property. Thus, the NYS is an effective drug against oral candidiasis, and belongs to Class IV of the Biopharmaceutical Classification System, it has low solubility and low permeability. The low solubility can compromise its availability in the oral cavity, and consequently, its pharmacological action. Given this situation, the objective of this work was the development of solid dispersions of NYS for the treatment of oral candidiasis, and its subsequent incorporation into oral mucoadhesive gel, in order to facilitate its action. Solid dispersions are pharmaceutical systems, in which a solid drug poorly soluble in water is dispersed in a carrier. These carriers are usually hydrophilic, and this allows the systems to be employed in order to increase the aqueous solubility of the drug. Thus, the solid NYS dispersions were developed by the solvent evaporation method, employing lactose, HPMC, poloxamer 407 and poloxamer 188 as carrier. These samples were subjected to characterization by thermal analysis, using differential scanning calorimetry (DSC) and thermogravimetry / derivative thermogravimetry (TG / DTG). Among these solid dispersions, those samples which showed a specific thermal behavior suggesting the formation of new "system" were analyzed by solubility test. Thus, the NYS DS G2 formulation (49) stood out, once it showed greater solubility in water (4.484 mg/mL); at pH 5.5 (4.249 mg/mL) and pH 7.0 (4.293 mg/mL), in other words, an increase of 1,426 times in water; 4,227 times at pH 5.5; and 2,743 times at pH 7.0. This formulation was finally evaluated by X-ray diffraction, infrared spectroscopy with Fourier transform, techniques that corroborate the thermal analysis, indicating the formation of the solid dispersion. On the other hand, this solid dispersion was incorporated into 4 Carbopol ® 934 PNF mucoadhesive gels, with a variation of the polymer concentration. It was observed that NYS is improved of delivery from the gels, employing mucoadhesion test, and was also observed that the gels have mucoadhesive properties consistent with reports in the literature. However, the rheological characteristics are different, and it was observed that the Gel A and Gel B formulations, which has a lower amount of polymer behaved as a Newtonian fluid, which may not be desired for this type of topical gel. As conclusion, it was possible to develop a pharmaceutical system in the form of solid dispersion with greater solubility than the pure NYS, and their incorporation in a mucoadhesive dosage form and the release of NYS as DS was far superior wherein the drug in the "conventional" manner, which allows the NYS is longer available in the oral cavity, and also adjacent to the buccal mucosa, leading to more effective pharmacological effect of the antifungal agent

Efecto antifúngico del aceite esencial del Origanum vulgare (orégano) y Cymbopogon citratus (hierba luisa), sobre cepas de Cándida albicans en comparación con la nistatina estudio in vitro / Antifungal effect of the essential oil of Origanum vulgare (oregano) and Cymbopogon citratus (hierba luisa), on strains of Candida albicans compared to the nystatin study in vitro

En búsqueda de tratamientos alternativos a base de plantas medicinales contra infecciones micóticas provocadas por "Cándida albicans" en cavidad oral, estudio que propone como objetivo principal evaluar la actividad antifúngica de los aceites esenciales de Orégano y Hierba Luisa sobre cepas de C. albicans tomando como medicamento control a la nistatina y así establecer su capacidad inhibitoria procedimiento: los aceites esenciales se obtuvo mediante técnica de arrastre a vapor de agua en diferentes consentrciones. Se llevó a cabo la activación de la cepa micológica y la preparación del inóculo con una turbidez de 0,5 en la escala Mc Farland, la siembra se realizó en 19 cajas Petri con el medio de cultivo Dextrosa Sabouraund a una temperatura de 37°C para luego proceder a la colocación de discos estériles impregnados de las diferentes concentraciones de aceites esenciales (25%.50%,75%,100%) nistatina control positivo y tween 80 control negativo. Se incubo el material durante 72 horas para la posterior medición de los halos de inhibición mediante una regla pie de rey. Concluyendo que existieron discrepancias significativas por grupo de estudio según la prueba de Kruswal.

Physical and chemical analysis of commercial nystatin / Análises físico-químicas da nistatina comercial

Nystatin (NYS) is a fermentation-produced antibiotic of the polyene group. Commercial NYS is a mixture of compounds named NIS A1, A2 and A3. Current analysis undertook physical and chemical analyses in two samples of commercial nystatin (NYS I and NYS II). Moisture (Karl Fischer), spectroscopic (IR, UV and fluorescence) and thermal analyses (TGA and DSC) were conducted. The moisture was respectively 9.2% and 8.8% for samples I and II. Absorption spectrum in the UV/VIS region had a vibronic structure with three max.. The mirror image rule was not complied with in the fluorimetric analysis. Spectroscopy analysis in the IV region indicated that samples showed spectra similar one to another, analogous to crystal type A. Thermal analyses by DSC provided a wide, single endothermal peak and, therefore, similarities among the samples. DTG shows that samples undergo decomposition at three phases within the temperature range under analysis. Results show that samples are impure and not polymorphic, constituted by a mixture of the compounds A1, A2 and A3.

A nistatina (NIS) é um antibiótico do grupo dos poliênicos produzido por fermentação. A NIS comercial consiste numa mistura de compostos denominados NIS A1, A2 e A3. O presente trabalho teve por objetivo realizar análises físico-químicas de duas amostras de nistatina comercial (NIS I e NIS II). Foram realizadas análises de umidade (Karl Fischer), espectroscópicas (IV, UV e fluorescência) e térmicas (TGA e DSC). A umidade encontrada foi de 9,2% e 8,8% para as amostras I e II, respectivamente. O espectro de absorção na região do UV/VIS apresentou estrutura vibrônica com três máxs.. Na análise fluorimétrica não se observou obediência à regra da imagem espelho. A análise por espectroscopia na região do IV mostrou que as amostras apresentam espectros semelhantes entre si, análogos ao cristal do tipo A. As análises térmicas por DSC apresentaram um pico endotérmico, largo, único, sugerindo semelhanças entre as amostras. O DTG indica que as amostras sofrem decomposição em três fases no intervalo de temperatura estudado. Dos resultados obtidos, concluiu-se que que as amostras são impuras e não polimorfas, constituindo-se de uma mistura dos compostos A1, A2 e A3.

Antifungal effect of plant extracts on Candida albicans biofilm on acrylic resin / Efeito antifúngico de extratos vegetais sobre biofilme de Candida albicans em resina acrílica

Objetivo: Avaliar potencial antifúngico dos extratos de Equisetum arvense L. (cavalinha), Glycyrrhiza glabra L. (alcaçuz), Punica granatum L. (romã) e Stryphnodendron barbati-mam Mart. (barbatimão) sobre biofilme de Candida albicans em resina acrílica. Material e métodos: Cepa-padrão de C. albicans foi cultivada em ágar Sabouraud-dextrose por 24 h a 37°C. Após padronização do inóculo (106 células/mL) em espectrofotômetro, foram mantidos em caldo Brain Heart Infusion suplementado comsacarose (5%) um disco de resina acrílica estéril com 100 μL do inóculo padronizado, por 5 dias a 37 °C. As amostras dos grupos tratados (n = 10) foram expostas separadamente à concentração de 50 mg/mL de cada extrato por 5 min e ao antifúngico nistatina (48.83 UI/mL). Para o grupo não tratado (controle, n = 10) foi utilizada solução fisiológica estéril (NaCl 0,9%). Os biofilmes foram desagregados dos discos de resina acrílica por homogeneizador ultrassônico por 30 s. Após diluições decimais, foram feitas semeaduras em placas de Sabouraud-dextrose e incubação por 48 h a 37 ºC. Posteriormente, foram contadas as UFC/mL e os valores foram convertidos em log10 e realizada análise estatística (ANOVA e Tukey Test; p ≤ 0,05). Resultados: Todos os extratos naturais e a nistatina proporcionaram reduções significativas (p < 0,01) do biofilme de C. albicans em comparação ao grupo controle (NaCl 0,9%), no entanto, não houve diferença estatística entre os extratos (p = 0,1567). Conclusões: Houve formação de biofilme de C. albicans em resina acrílica e todos os extratos vegetais foram efetivos para esta levedura, atuando semelhantemente à nistatina.

Objective: Evaluating the antifungal potential of Equisetum arvense L. (horsetail), Glycyrrhiza glabra L. (licorice), Punica granatum L. (pomegranate) and Stryphnodendron barbatimam Mart. (barbatimão) extracts, after Candida albicans biofilm formation on acrylic resin. Material and methods: C. albicans standard strain was cultured on Sabourauddextrose agar for 24 h at 37 °C. After standardized in a spectrophotometer, 100 μL of the inoculums (106 cells/mL) and a sterile acrylic resin disc were maintained in Brain Heart Infusion broth supplemented with sucrose (5%), for 5 days at 37ºC. The samples of the treated groups (n = 10) were separately exposed to a concentration of 50 mg/mL of each extract for 5 minutes or to nystatin (48.83 IU/mL). For the untreated group (control, n = 10), it was used sterile saline (0.9% NaCl). Biofilms were disaggregated from the acrylic resin discs by an ultrasonic homogenizer for 30 s. After decimal dilutions, sowings in Sabouraud-dextrose plates were made with incubation for 48 h at 37°C. Later, CFU/mL was verified and the values were converted to log10 and they had their statistical analysis done (ANOVA and Tukey Test, p ≤ 0.05). Results: It was found that all plant extracts and nystatin resulted in significant reduction of C. albicans biofilm (p < 0.01) compared to the control group (0.9% NaCl). However, all of them showed similar reductions to each other (p = 0.1567). Conclusion: There was biofilm formation of C. albicans on acrylic resin and all plant extracts were effective against this yeast, acting similarly to nystatin.

Susceptibilidad a la nistatina de aislamientos bucales de Candida y su correlación con la respuesta al tratamiento / Susceptibility to nystatin of oral Candida isolates and its correlation with the response to treatment

INTRODUCCIÓN: la candidiasis bucofaríngea es un marcador precoz de progresión a sida en los pacientes seropositivos al VIH sin tratamiento antirretroviral, así como un indicador de no adherencia al tratamiento antirretroviral o su posible fracaso. OBJETIVO: determinar la susceptibilidad frente a nistatina de las cepas de Candida aisladas de la cavidad bucal de pacientes seropositivos al VIH, y correlacionar los resultados con la respuesta al tratamiento. MÉTODOS: se realizó un estudio de susceptibilidad in vitro frente a nistatina para 104 cepas aisladas de lesiones de candidiasis bucofaríngea de 97 pacientes VIH/sida que habían participado, como voluntarios, en un ensayo clínico para evaluar la respuesta a cuatro drogas. De los 104 aislamientos, 58 fueron obtenidos antes de iniciar los esquemas de tratamientos y 46 una vez finalizado estos. Se procedió según el micrométodo el documento M27-A3 del Clinical and Laboratory Standards Institute. RESULTADOS: todas las cepas se comportaron como sensibles a la nistatina, con valores de concentración mínima inhibitoria (CMI) menores que 16 µg/mL, independientemente del momento de su aislamiento y de la droga administrada a los pacientes. En el grupo de pacientes tratados con nistatina, los rangos de CMI80 (1-2 µg/mL), las medias geométricas y los valores acumulativos de la droga frente a los aislamientos de Candida albicans obtenidos antes de iniciar el tratamiento, resultaron similares a los obtenidos frente a las cepas recobradas al finalizar este. De todas las especies identificadas, C. lusitaniae fue la que alcanzó el valor absoluto de CMI más elevado, 4 µg/mL. CONCLUSIONES: la correlación entre la evolución clínica de los pacientes y los resultados de los estudios de susceptibilidad de sus aislamientos in vitro, fue buena para los pacientes con evolución favorable, pero no para predecir posibles fracasos terapéuticos.

INTRODUCTION: oropharyngeal candidiasis is an early marker of progression to AIDS in HIV-positive patients and an indicator of non-adherence of treatment or possible failure in patients undergoing anti-retroviral therapy. OBJECTIVE: to determine the in vitro susceptibility to nystatin in Candida strains isolated from the oral cavity of HIV-positive patients, and to correlate the results with the response to treatment. METHODS: a study of in vitro susceptibility to nystatin was conducted in 104 oral isolates from 97 HIV/AIDS patients, who participated as volunteers in a clinical trial to evaluate the response to four antifungal drugs. Fifty-eight of the 104 isolates were obtained before starting treatment and the remaining 46 at the end of therapy. Broth microdilution method was performed according to the document M27-A3 of the Clinical and Laboratory Standards Institute. RESULTS: one hundred percent of the strains were susceptible to nystatin, with minimum inhibitory concentration (MIC) values of <16 µg/mL, regardless of the time of isolation and of the drug administered to patients. In the group of patients treated with nystatin, the MIC80 ranges (1-2 µg/mL), geometric mean and cumulative values of the drug against Candida albicans isolates before starting treatment were similar to those obtained against strains recovered at the end. Among the identified species, C. lusitaniae reached the highest absolute MIC value (4 µg/mL). CONCLUSIONS: the correlation between the clinical evolution and the results of in vitro susceptibility tests was good in patients with a favorable outcome; however, it did not allow predicting possible treatment failure.

Development and validation of an HPLC method for stability evaluation of nystatin

A liquid chromatography method for evaluating the stability of Nystatin (Nys) in an ointment was developed and validated, since the traditional pharmacopeial microbiological methods are unable to indicate stability. The stress experiments showed that Nys was found to significantly degrade in alkaline and acidic conditions and also under oxidative stress. Lower levels of degradation were detected under heat and with the sample exposed to Xenon light. Resolutions higher than 2 for Nys and degradation products (DP) chromatographic peaks were achieved by using an Inerstil ODS-3 column, isocratic elution with methanol:water and UV detection at 305 nm. The system was found to be linear over a range of 102 to 310 IU mL-1 and proved precise, since the RSD( percent) was 0.24 percent for the six replicates tested. The method also exhibited good levels of recovery (from 98.24 percent to 100.74 percent). Therefore, the validation fulfilled pharmacopeial requirements and the procedure was found to be reliable, precise, accurate and selective for determination of Nys and its degradation products.

Um método indicador de estabilidade por cromatografia líquida foi desenvolvido e validado para a análise de Nistatina (Nys) em uma pomada, uma vez que os métodos microbiológicos tradicionais não têm a habilidade de serem indicadores de estabilidade. A nistatina degradou significativamente em condições alcalinas e ácidas e também em meio oxidante. Quando a amostra foi exposta a luz de xenônio, foram observados menores níveis de degradação. A resolução entre os picos cromatográficos de Nys e seus produtos de degradação (PD) foi maior que 2, utilizando-se uma coluna Inerstil ODS-3, eluição isocrática com metanol: água e detecção no UV em 305 nm. O sistema foi linear entre a faixa de 102 a 310 UI mL-1 e preciso uma vez que o DPR( por cento) foi de 0,24 por cento entre as seis replicatas testadas. Além disso, o método exibiu bons níveis de recuperação (de 98,24 por cento a 100,74 por cento). Consequentemente, considera-se que a validação atendeu a todos os requisitos farmacopêicos e o método pode ser considerado confiável, preciso, exato e seletivo para determinação de Nys e seus produtos de degradação.

Atividade antifúngica in vitro de enxaguatórios bucais sobre Candida spp / In vitro antifungal activity of mouthwashes against Candida spp

Este estudo objetivou avaliar a atividade antifúngica de enxaguatórios bucais disponíveis no comércio brasileiro sobre as cepas de Candida tropicalis (ATCC 13803) e de Candida krusei (ATCC 6538). Avaliaram-se cinco diferentes enxaguatórios, a saber: Oral-B®, Colgate Plax Overnight®, Equate®, Cepacol® e Periogard®. Foi adotada a Nistatina® como controle positivo. Para determinação da atividade antifúngica, foi utilizado o método de difusão em meio sólido (Ágar Sabouraud Dextrose), de modo que foram inseridos 50 µL de cada solução pronta para uso nos poços confeccionados no meio de cultura. As placas foram incubadas em estufa bacteriológica por 48 horas a 37 °C. A análise dos dados foi feita por meio da mensuração dos halos com uma escala milimétrica, sendo estes considerados quando iguais ou superiores a 10 mm de diâmetro. Os dados obtidos foram analisados estatisticamente pelo teste de ANOVA e pós-teste de Tukey, com nível de signifcância de 5%, utilizando-se o software GraPhad Prism 4.0. Foram observadas diferenças signifcativas na atividade antifúngica do Oral-B® (p < 0,001), Colgate Plax® (p < 0,01) e Cepacol® (p < 0,01) sobre Candida tropicalis, quando comparada com a apresentada pela nistatina. Sobre C. krusei, não foi observada atividade antifúngica da Nistatina®, evidenciando-se, assim, uma cepa resistente. Porém, todos os enxaguatórios foram capazes de inibir o crescimento da levedura avaliada, não havendo diferenças estatísticas entre Oral-B® e Periogard®/Cepacol®/Equate® (p > 0,05), Colgate plax® e Cepacol® (p > 0,05), Periogard® e Equate®/Cepacol® (p > 0,05), bem como entre Equate® e Cepacol® (p > 0,05). Os resultados sugerem que o cloreto de cetilpiridínio e o gluconato de clorexidina, principais compostos ativos dos enxaguatórios bucais, constituem importantes agentes que são, possivelmente, responsáveis pela atividade antifúngica sobre as cepas utilizadas neste estudo.

The aim of this study was to evaluate the antifungal activity of mouthwashes available in Brazil on Candida tropicalis (ATCC 13803) and Candida krusei (ATCC 6538) strains. Five different brands of mouthwashes were assessed: Oral-B®, Colgate Plax Overnight®, Equate®, Cepacol® and Periogard®. Nystatin® was used as a positive control. The antifungal activity was evaluated by the agar diffusion method (Agar Sabouraud Dextrose). Fifty microliters of each ready-to-use solution were poured into wells made in the solid culture medium. The plates were incubated in bacteriologic incubators at 37 °C for 48 hours. The results were obtained by measuring the zones of microbial growth inhibition (in mm) and only those with a diameter of 10 mm or more were considered. The data were analyzed by ANOVA and Tukey's post-test, with a 5% signifcance level. Statistically signifcant differences were observed in the antifungal activity of Oral-B® (p < 0.001), Colgate Plax® (p < 0.01) and Cepacol® (p < 0.01) against Candida tropicalis, as compared to nystatin. Nystatin did not show antifungal activity against C. krusei, which appears as a resistant strain. However, all the mouthwashes were able to inhibit the growth of the evaluated yeast, showing no differences between Oral-B® and Periogard®/Cepacol®/Equate® (p > 0.05), Colgate Plax® and Cepacol® (p > 0.05), Periogard® and Equate®/Cepacol® (p > 0.05), or between Equate® and Cepacol® (p > 0.05). These results suggest that cetylpyridinium chloride and chlorhexidine gluconate, which are the most important active components of the mouthwashes, are important agents that are possibly responsible for the antifungal activity against the strains used in this study.

Viabilidade da utilização da terapia fotodinâmica no tratamento da estomatite protética: estudos in vitro / Viability of photodynamic therapy on the treatment of denture stomatitis: in vivo studies

Estes estudos in vivo tiveram como objetivos: 1 – avaliar a efetividade da terapia fotodinâmica (PDT) na inativação de Candida albicans em um modelo murino de candidose bucal; 2 – comparar a eficácia clínica e microbiológica da PDT com a da terapia antifúngica tópica (nistatina suspensão oral) no tratamento da estomatite protética, assim como identificar e determinar a prevalência das espécies de Candida dessa patologia. Na primeira investigação, camundongos foram imunossuprimidos com injeções subcutâneas de prednisolona. Tetraciclina foi fornecida na água de beber para promover alteração da microbiota bucal dos camundongos. Os animais foram sedados com injeção de cloridrato de clorpromazina e um swab oral embebido em uma suspensão de C. albicans (107 UFC/mL) foi esfregado na cavidade bucal dos animais. Quatro dias após a inoculação, a PDT foi realizada no dorso lingual utilizando administração tópica de Photogem® a 400, 500 ou 1000 mg/L e, após 30 minutos, iluminação com 305 J/cm² de luz de LED a 455 ou 630 nm. Posteriormente, a quantidade de fungos viáveis foi determinada (UFC/mL) e analisada pelos testes de ANOVA e Holm- Sidak (P < 0,05). Os camundongos foram sacrificados, e as línguas foram removidas e processadas para avaliação histológica de presença de fungos e reação inflamatória. No estudo clínico, pacientes (n = 40) foram aleatoriamente atribuídos a um dos seguintes grupos de 20 indivíduos cada; grupo NYS: pacientes receberam tratamento tópico com nistatina (100.000 UI) quatro vezes ao dia por 15 dias e; grupo PDT: prótese total superior e o palato dos pacientes foram borrifados pelo Photogem® a 500 mg/L e, após 30 minutos de incubação, iluminado por luz de LED a 455 nm (37,5 e 122 J/cm2, respectivamente) três vezes por semana durante 15 dias. Culturas micológicas de amostras das próteses e das mucosas palatinas e fotografias...

These in vivo studies evaluated 1 – the effectiveness of photodynamic therapy (PDT) on the inactivation of Candida albicans in a murine model of oral candidosis; 2 – compared the clinical and mycological efficacy of PDT with that of topical antifungal therapy (nystatin oral suspension) for the treatment of denture stomatitis (DS) as well as to identify and determine the prevalence of Candida species in DS. In the first investigation, mice were immunosupressed with subcutaneous injections of prednisolone. Tetracycline hydrochloride on drinking water was managed to change the oral microflora. They were kept in a sedative state after injection of chlorpromazine chloride and a suspension of C. albicans (107 CFU/mL) was swabbed in the oral cavity. Four days after oral infection, PDT was performed on the dorsum of the tongue using a topical administration of Photogem® at 400, 500 or 1000 mg/L and, after 30 minutes, illumination with 305 J/cm² of LED light at 455 or 630 nm. Then, the number of surviving yeast was determined (CFU/mL) and analyzed by ANOVA and Holm- Sidak tests (P < 0.05). Animals were sacrificed, the tongues surgically removed and processed for histological evaluation of yeast presence and inflammatory reaction. In the clinical trial, patients (n = 40) were randomly assigned to one of two groups of 20 subjects each; NYS group: patients received topical treatment with nystatin (100,000 IU) four times daily for 15 days; PDT group: maxillary denture and palate of patients were sprayed with 500 mg/L of Photogem® and, after 30 min of incubation, illuminated by LED light at 455 nm (37.5 and 122 J/cm2, respectively) three times a week for 15 days. Mycological cultures taken from dentures and palates and standard photographs of the palates were performed at baseline (day 0), at the end of the treatment (day 15) and at the follow-up (days 30, 60 and 90 after the beginning...

Desenvolvimento e validação de método analítico para nistatina creme vaginal por cromatografia líquida de alta eficiência / Development and validation of an analytical method for nystatin vaginal cream by high performance liquid chromatography

A nistatina é um antibiótico poliênico, com características fungistáticas e fungicidas, que age desestruturando a membrana celular de fungos e leveduras. O creme vaginal de nistatina é usado para o tratamento da candidíase vaginal. Até recentemente, os compêndios oficiais preconizavam o ensaio microbiológico para doseamento deste antibiótico, método este considerado inviável na rotina de centros de controle de qualidade, devido ao tempo excessivo para liberação dos resultados. Visando obter um método alternativo para o doseamento do creme vaginal de nistatina, procurou-se desenvolver e validar um método cromatográfico (CLAE). O método desenvolvido utilizou como fase estacionária uma coluna de fase reversa, C18, 3,9 x 150 mm, 4 mm, à temperatura de 30 ºC. A fase móvel foi constituída por tampão fosfato de sódio 0,25 mM e EDTA 0,025 mM, pH 6,00, metanol e acetonitrila (40:30:30), vazão de 1,0 mL/minuto e comprimento de onda 305 nm. O método validado revelou-se exato, preciso, robusto, linear e específico, além de rápido e prático, podendo ser utilizado para o doseamento analítico de creme vaginal de nistatina.

Nystatin is a polyenic antibiotic with fungistatic and fungicide characteristics that acts by de-structuring the cellular membrane of fungi and yeast. The nystatin vaginal cream is used for the treatment of vaginal candidiasis. Until recently, the official compendia professed the microbiological trial for dosing this antibiotic, method considered as non-feasible in the routine of quality control centers due to the excessive time for release of results. Aiming at obtaining an alternative method for dosing nystatin vaginal cream, a chromatographic method (HPLC) was developed and validated. The method developed used a reversible phase column of C18, 3.9 x 150 mm, 4 mm, at 30 ºC. The mobile phase was made up of a 0.25 mM sodium phosphate buffer and 0.025 mM EDTA, pH 6.00, methanol and acetonitrile (40:30:30), rate of 1.0 mL/minute and wavelength of 305 nm. The validated method showed to be accurate, precise, robust, linear and specific, in addition to being fast and practical, able to be used for analytic dosing of nystatin vaginal cream.

Estomatitis subprótesis: estudio clínico y microbiológico de candida / Denture stomatitis: clinical and microbiological study of candida

La estomatitis subprótesis es una patología asociada al uso de prótesis dentales removibles. Su diagnóstico es fundamentalmente clínico y se basa en el reconocimiento de sus lesiones, siendo una de la clasificación de Newton una de las más aceptadas. Además, el diagnóstico debe ser confirmado por la observación microscópica de Candida en las muestras orales. El objetivo de este estudio fue determinar las especies de Candida más frecuentes en la mucosa del paladar y determinar la susceptibilidad in vitro de estas cepas a Nistatina y a Fluconazol. Se examinaron un total de 100 pacientes portadores de prótesis removibles determinando la presencia o ausencia de ES según la clasificación de Newton. A cada paciente se le tomó una muestra de la zona palatina y se le realizó el examen microbiológico. El 75 por ciento de los pacientes presentó alteraciones en la mucosa palatina compatibles con ES (33 por ciento presentó ES tipo I, 42,7 por ciento tipo II y 24 por ciento tipo III; mientras que un 25 por ciento presentó una mucosa sana. EL 53,3 por ciento de los pacientes con ES presentó cultivo positivo para Candida, mientras que un16 por ciento en la mucosa normal. Las especies de Candida albicans fueron las más frecuentemente aislada (75 por ciento), seguida por la C. tropicallis (15 por ciento) y en el resto de los cultivos se presentaron ambas especies (10 por ciento). El 100 por ciento de las cepas estudiadas fueron sensibles a Nistatina y Fluconazol, lo que se evidenció por la formación de un halo de inhibición amplio entre las levaduras. Existe una correlación positiva entre la ES y la presencia del género Candida, siendo la especie C. albicans quien se aisló conmayor frecuencia desde la mucosa palatina de pacientes con ES y sin ella. Todas las levaduras encontradas fueron susceptibles a Nistatina y Fluconazol in vitro, demostrando su efectividad fungicida ante especies del género Candida.

Denture stomatitis (DS) is a condition associated with the use of removable dentures. Its diagnosis is mainly clinical and based in recognition of their injuries, being the Newton’s one of the most accepted classifications. It stresses that the diagnosis should be confirmed by microscopic observation of Candida in oral samples. The aim of this study was to determine the species of Candida more frequent in the palatal mucosa and determine in vitro susceptibility to Nystatin and Fluconazole of these isolated strains. A total of 100 patients were examined by identifying the removable prosthesis presence or absence of DS according to the classification of Newton. Each patient had a complete sample of the area and palate was carried out microbiological examination. 75 percent of patients had abnormalities in the palate mucosa compatible with DS (33 percent presented DS type I, type II 42.7 percent and 24 percent Type III), while 25 percent filed a healthy mucosa. In 53.3 percent of patients with DS presented positive culture for Candida, only 16% had positive culture in the normal mucosa. The species of Candida albicans were the most frequently isolated (75 percent ), followed by C. tropicallis (15 percent ) and the rest of the crops were presented both species (10 percent ). 100 percent of the strains were sensitive to Nistatina and Fluconazole, which was evidenced by the formation of inhibition area in yeast. There is a positive correlation between the DS and the presence of Candida, being C. albicans the kind who was isolated most frequently from the mucosa of patients with DS palate and healthy patients. All yeast were found susceptible to Nystatin and Fluconazole in vitro, demonstrating its effectiveness in Candida.

Susceptibilidad in vitro de aislamientos vaginales de Candida frente a clotrimazol y nistatina

Se determinó la susceptibilidad in vitro frente a clotrimazol y nistatina de 123 aislamientos de Candida, obtenidos mediante exudados vaginales de 404 mujeres que asistieron al Hospital Ginecoobstétrico "Ramón González Coro" de Ciudad de La Habana. De acuerdo con el número de colonias obtenidas en el aislamiento primario, las cepas fueron separadas en 2 categorías: colonización e infección. Para cada cepa se determinó la concentración mínima inhibitoria (CMI) de cada antifúngico, mediante un método de microdilución en caldo casitona. Las medias geométricas de los valores de CMI fueron mayores frente a nistatina (1,08 mg/mL) que frente a clotrimazol (0,22 mg/mL), aunque los rangos fueron similares (£ 0,125-16 mg/mL). Para Candida albicans, que fue la especie aislada con mayor frecuencia (54,5 %); las medias geométricas de los valores de la CMI fueron de 0,17 y 0,16 mg/mL para clotrimazol y de 0,71 y 0,92 mg/mL para nistatina, en ambas categorías. C. glabrata mostró el valor de CMI más elevado (16 mg/mL) frente a ambos antifúngicos. Solo los aislamientos de C. lusitaniae mostraron diferencia significativa (p < 0,01) entre los valores de CMI de nistatina de acuerdo con el número de colonias en el aislamiento primario. En aislamientos procedentes de mujeres tratadas con clotrimazol y/o nistatina en episodios anteriores de candidiasis, se observaron valores más elevados de las medias de CMI frente a nistatina que frente a clotrimazol; aunque esta diferencia no fue estadísticamente significativa.

The susceptibility in vitro of 123 isolates of Candida against clotrimazole and nystatin was determined. The isolates were obtained by vaginal smears from 404 women that attended "Ramón Gonzalez Coro" Gynecoobstetric Hospital, in Havana City According to the number of colonies obtained in the primary isolation, the strains were separated into 2 categories: colonization and infection. The inhibitory minimum concentration was determined for each antigunfal by a method of microdilution in casitone broth. The geometrical means of the IMC values were higher against nystatin (1.08 mg/mL) than against clotrimazole (0.22 mg/mL), eventhough the features were similar ( £ 0.125 -16 mg/mL) For Candida albicans, that was the most frequently isolated species (54.5 %), the geometrical means of the IMC values were 0.17 and 0.16 mg/mL for clotrimazole and 0.71 and 0.92 for nystatin, in both categories. C. glabrata showed the highest IMC values (16 mg/mL) against antifungals. Only the isolates of C. lusitaniae showed a significant difference (p < 0.001) between the IMC values of nystatin according to the number of colonies in the primary isolation. In isolates from women treated with clotrimazole and/or nystatin in previous episodes of candidiasis, there were observed more elevated values of the means of IMC against nystatin than against clotrimazole, although this difference was not statistically remarkable.

Efectividad del oleozón en el tratamiento de la estomatitis subprótesis

Se evaluó la efectividad del aceite ozonizado en el tratamiento de la estomatitis subprótesis grados I y II. Se seleccionaron 64 pacientes del Servicio de Prótesis Estomatológica de la Facultad de Estomatología, que requerían nuevo tratamiento protésico y presentaban estomatitis subprótesis. A 32 pacientes se les aplicó el oleozón y otros 32 se tomaron como grupo control, a los cuales se les aplicó la nistatina en crema. Ambos grupos (estudio y control) se subdividieron en 2 subgrupos, según el grado de estomatitis I y II, con 16 pacientes en cada uno. Se confeccionaron tablas que muestran los resultados generales alcanzados según el número de aplicaciones diarias. Según los resultados obtenidos podemos inferir que el tratamiento con ambos medicamentos ha sido efectivo, pero con la aplicación del oleozón los resultados alcanzados en la curva de la estomatitis subprótesis fueron más rápidos y se necesitó un menor número de aplicaciones.

The effectivenes of ozonized oil in the treatment of degree I and II denture stomatitis was evaluated. 64 patients patients from the Dental Prosthesis Service of the Faculty of Stomatology that required new prosthetic treatment and had denture stomatitis were selected. Oleozón was applied to 32 patients, whereas nystatin cream was used in the other 32 considered as controls. Both groups (study and control) were subdivided into 2 subgroups, according to degree I and II stomatitis, with 16 patients each. Tables showing the general results attained in accordance with the number of daily applications were included. We can conclude that the treatment with both drugs has been effective, but with the application of oleozón the results obtained in the curve of denture stomatitis were faster and less applications were needed.